Lenti-X HTX 慢病毒包装系统操作流程(clontech)

Lenti-X™ HTX 高效慢病毒包装系统

操作一览PT5135-2

目录

重要 (1)

存储&处理 (1)

转染操作 (2)

重要：

以下操作是针对Lenti-X 载体，Lenti-X HTX 高效包装系统和Lenti-X 293T 细胞系(Cat. No. 632180)的优化操作。

转染操作需在100 mm 培养板中进行，转染培养基和收集病毒的培养基中需使用Tet System Approved FBS (无四环素污染)。

以下所有操作需在无菌环境下进行，需要使用生物安全等级为2的仪器设备进行病毒操作并做好自身的防护措施。

存储&处理：

●使用前，室温解冻Xfect™ Polymer (100 μg/μl)。解冻后，将Xfect Polymer 置于4°C保存，最多12 months。

●使用前，室温解冻Xfect Reaction Buffe。解冻后摇匀，将Xfect Polymer 置于4°C保存，最多12 months。

●使用完Xfect Polymer后，盖紧管盖，放回带有干燥剂的锡箔袋。

Figure 1. Lenti-X 293T细胞最优转染密度（左图）和转染后细胞检测时间（右图），转染筛选标记是ZsGreen 绿色荧光蛋白。

转染操作（100 mm板）：

1.转染前约24 hr，以4–5 x 10e6Lenti-X 293T细胞/100 mm板的密度接种10 ml细胞，37°C、

5% CO2 培养过夜。转染时的细胞融合度应该为80–90%。

2. 漩涡混匀fect Polymer。

3. 对于每个转染样本，准备2个离心管，按照以下顺序混匀试剂：

注意 Xfect Polymer预混液室温放置不要超过30min。

4. 漩涡混匀各管混合物。

5. 将Xfect Polymer预混液和DNA预混液以适中的速度漩涡10sec。

6. 室温孵育10 min，以形成便Xfect/DNA复合物。

7. 将1200ul 纳米复合物逐滴加入细胞培养基中，然后前后摇晃混匀。

注意: 无需去除培养基中的血清，当纳米复合物加入培养基后，培养基的颜色会有些改变，这是

正常的。

8. 37℃孵育培养板。

9. 4 hr 后，吸走培养基，然后加入10ml新鲜培养基(含Tet System Approved FBS)，将培

养板放回37℃培养箱继续培养24-48 hr。一般来说，在转染后48hr时病毒滴度最高。

警示:含有病毒的培养基需经过处理。

10. 收获病毒上清。警示:上清中包含传染性的病毒。短暂瞬时离心(500 x g，10 min)或

使用0.45 μm过滤器过滤来去除细胞碎片。

注意: 过滤器使用醋酸纤维素膜或多聚磺酸纤维素膜(蛋白结合能力低)，切勿使用硝酸纤维素膜，以防硝酸纤维素膜结合的蛋白破坏病毒。

11. 使用Lenti-X GoStix™检测病毒产量，鉴定病毒滴度。使用合适滴度的病毒进行感染靶细胞，或置于–80°C保存。

注意: 每次冻融病毒后，病毒滴度会降低2-4倍。