质谱测试分析共15页
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第七讲质谱分析(共58张PPT)
EI 与 ESI
质谱计的主要技术指标
质量范围： 指质谱计所检测的单电荷离子的质核比范围
分辨率（R）：分辨率是质谱计分开相邻两离子质量的能力。
R = m /m
m为质谱计可分辨的相邻两峰的质量差 m为可分辨的相邻两峰的平均质量
分辨率（ R ）是两峰间的峰谷为峰高的10%时的测定值，即 两峰各以5%的高度重叠。
◆质谱是分子离子及碎片离子的质量与其相对 强度的谱, 谱图与分子结构有关
◆质谱法进样量少, 灵敏度高, 分析速度快
◆质谱是唯一可以给出分子量, 确定分子式的方 法, 而分子式的确定对化合物的结构鉴定是至关 重要的。
质谱计框图
真空系统
加速区
Output
计算机数据 处理系统
Sample
进样系统
inlet
射方向不同的离
子会聚；
S1
分辨率不高
B
离子源
磁场
R
S2 收集器
双聚焦分析器
方向聚焦：
相同质荷比，入射 方向不同的离子会聚；
能量聚焦：
相同质荷比，速 度(能量)不同的离子 会聚；
电场
+ -
S1 离子源
磁场
S2 收集器
质量相同，能量不同的离子通过电场和磁场时，均产生能量 色散；两种作用大小相等，方向相反时互补实现双聚焦；
第七讲质谱分析
Spectrometry NOT Spectroscopy
Spectroscopy n. 光谱学, 波谱学, 光谱仪 Spectrometry n. 质谱术，质谱计
Spectrometry : Spectrometer Abbreviated to: Mass spec. or MS
第六章质谱分析PPT模板.pptx
Modern
Instrumental Analysis
四级杆质谱原理
too small
too big
Modern
Instrumental Analysis
（5）离子检测器
常以电子倍增器（electron multiplier）检测离子 流。电子倍增器种类很多，其工作原理如下图所示。一 定能量的离子轰击阴极导致电子发射，电子在电场的作 用下，依次轰击下一级电极而被放大，电子倍增器的放 大倍数一般在105～108。电子倍增器中电子通过的时 间很短，利用电子倍增器可以实现高灵敏、快速测定。 但电子倍增器存在质量歧视效应，且随使用时间增加，
Modern
Instrumental Analysis
Modern
Instrumental Analysis
质谱仪工作过程及基本原理
（1）将样品由贮存器送入电离室。
（2）样品被高能量（70～100ev）的电子流冲击。通常， 首先被打掉一个电子形成分子离子（母离子），若干分 子离子在电子流的冲击下，可进一步裂解成较小的子离 子及中性碎片，其中正离子被安装在电离室的正电压装 置排斥进入加速室。（只要正离子的寿命在10−5～ 10−6s）。
合并上述两式消去υ，可得 m / z = H2R2/2U
称为磁分析器质谱方程，是设计质谱仪的主要依据。 式中R为一定值（因仪器条件限制），如再固定加速电 压U，则m/z仅与外加磁场强度H有关。实际工作中通 过调节磁场强度H，使其由小到大逐渐变化，则m/z不 同的正离子也依次由小到大通过分离管进入离子检测器， 产生的信号经放大后，被记录下来得到质谱图。
Modern
Instrumental Analysis
质谱仪主要性能指标
质谱分析法 ppt课件
PPT课件 46
化合物中含有Cl或Br时，可以利用M与M+2比例 来确定分子离子峰。 对卤素有机物，F、I单一同位素 35Cl, 37Cl 3:1 79Br, 81Br 1:1 对于多个Cl、Br化合物，有非常强的M+2，M+4， M+6同位素 离子峰，使用（a+b）n. a:轻质同位素丰度 b： 重质同位素丰度 n:同种卤原子的个数 n=3 （a+b）3=a3+3a2b+3ab2+b3 a=3 b=1 =33+3× 32 × 1 + 3× 3 × 1 2+1 =27+27+9+1 M: M+2: M+4: M+6, 27: 27: 9: 1
PPT课件 8
2）同位素离子峰
PPT课件
9
PPT课件
10
3)碎片离子峰
在高能量电子源轰击情况下，分子离 子处于激发状态，原子间的一些键进一 步断裂，产生质量数较低的碎片，获取 分子结构的相关信息。
4）亚稳离子峰
离子离开电离室到达收集器之前的过程 中，发生分解而形成低质量的离子所产生的 峰。
PPT课件 11
PPT课件
30
2．照相板
曝光量则由时间或电量控制。利用谱线的 位置与黑度，对元素进行定性和定量分析。 主要用于火花源双聚焦质谱仪中，不需 要记录离子流强度和电子设备，灵敏度高， 但精度低，要先抽真空。
PPT课件
31
3．电子倍增器
工作原理与光电倍增管相似。 多用于气相与有机质谱中。优点：灵敏度 高，测定速度快 但：增益会逐渐下降。
PPT课件
34
PPT课件
35
PPT课件
化合物中含有Cl或Br时，可以利用M与M+2比例 来确定分子离子峰。 对卤素有机物，F、I单一同位素 35Cl, 37Cl 3:1 79Br, 81Br 1:1 对于多个Cl、Br化合物，有非常强的M+2，M+4， M+6同位素 离子峰，使用（a+b）n. a:轻质同位素丰度 b： 重质同位素丰度 n:同种卤原子的个数 n=3 （a+b）3=a3+3a2b+3ab2+b3 a=3 b=1 =33+3× 32 × 1 + 3× 3 × 1 2+1 =27+27+9+1 M: M+2: M+4: M+6, 27: 27: 9: 1
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2）同位素离子峰
PPT课件
9
PPT课件
10
3)碎片离子峰
在高能量电子源轰击情况下，分子离 子处于激发状态，原子间的一些键进一 步断裂，产生质量数较低的碎片，获取 分子结构的相关信息。
4）亚稳离子峰
离子离开电离室到达收集器之前的过程 中，发生分解而形成低质量的离子所产生的 峰。
PPT课件 11
PPT课件
30
2．照相板
曝光量则由时间或电量控制。利用谱线的 位置与黑度，对元素进行定性和定量分析。 主要用于火花源双聚焦质谱仪中，不需 要记录离子流强度和电子设备，灵敏度高， 但精度低，要先抽真空。
PPT课件
31
3．电子倍增器
工作原理与光电倍增管相似。 多用于气相与有机质谱中。优点：灵敏度 高，测定速度快 但：增益会逐渐下降。
PPT课件
34
PPT课件
35
PPT课件
第九章质谱分析法(共156张PPT)
MW: 165
[M-58]
[M-17]
3 快原子轰击(fast atom bombardment FAB)
原理：快原子(Ar或Xe）轰击样品产生离子 特点：
1. 适用于极性强，难汽化，分子量大的化合物分析
2. 得准分子离子，如（M+H)+ （M+Na)+ 碎片离子很少
3. FAB一般用作磁式质谱的离子源
结构:
四根棒状电极，形成四极场 1，3棒： (Vdc +Vrf) 2，4棒：- (Vdc+ Vrf ) 原理：在一定的Vdc Vrf 下 ， 只有一定质量的离子可通过四极场， 到达检测器，其他质量的离子碰到四极杆被吸收，在另外的 Vdc Vrf 下可接收到另外质量的离子。在一定的Vdc/Vrf)下，连续改 变Vrf或Vdc可实现质量扫描. 特点：扫描速度快，灵敏度高.
检测器（detecter）
真空系统（Vacuum system）
9.2.1 有机质谱仪的构成
GC LC 直接进样探头
进样系统
四极质量分析器 Quadrupole 四极离子阱 IT 扇形场质谱量分析器 Sector 飞行时间质谱仪 TOF-MS 离子回旋共振质谱仪 ICR-MS
离子源
质量分析器
离子检测器
某化合物的组成式为C8H8O2，其质谱图如图，确定化合物结构式。
m* 亚稳离子
它们的存在从质谱图中很容易判别。
酯可以发生α-裂解丢失 或OR自由基产生m/z59＋n×14和29＋n×14的离子.
根据精密质量就可以将这些物质区别开来
1960年代：研究GC-MS联用技术
分子离子一般指由天然丰度最高的同位素组合的离子，相应的有相同元素的其他同位素组成的离子称为同位素离子，在质谱中称为同位素峰.
[M-58]
[M-17]
3 快原子轰击(fast atom bombardment FAB)
原理：快原子(Ar或Xe）轰击样品产生离子 特点：
1. 适用于极性强，难汽化，分子量大的化合物分析
2. 得准分子离子，如（M+H)+ （M+Na)+ 碎片离子很少
3. FAB一般用作磁式质谱的离子源
结构:
四根棒状电极，形成四极场 1，3棒： (Vdc +Vrf) 2，4棒：- (Vdc+ Vrf ) 原理：在一定的Vdc Vrf 下 ， 只有一定质量的离子可通过四极场， 到达检测器，其他质量的离子碰到四极杆被吸收，在另外的 Vdc Vrf 下可接收到另外质量的离子。在一定的Vdc/Vrf)下，连续改 变Vrf或Vdc可实现质量扫描. 特点：扫描速度快，灵敏度高.
检测器（detecter）
真空系统（Vacuum system）
9.2.1 有机质谱仪的构成
GC LC 直接进样探头
进样系统
四极质量分析器 Quadrupole 四极离子阱 IT 扇形场质谱量分析器 Sector 飞行时间质谱仪 TOF-MS 离子回旋共振质谱仪 ICR-MS
离子源
质量分析器
离子检测器
某化合物的组成式为C8H8O2，其质谱图如图，确定化合物结构式。
m* 亚稳离子
它们的存在从质谱图中很容易判别。
酯可以发生α-裂解丢失 或OR自由基产生m/z59＋n×14和29＋n×14的离子.
根据精密质量就可以将这些物质区别开来
1960年代：研究GC-MS联用技术
分子离子一般指由天然丰度最高的同位素组合的离子，相应的有相同元素的其他同位素组成的离子称为同位素离子，在质谱中称为同位素峰.
质谱分析完整版.ppt
质谱分析
Mass Spectrometry，MS
Company
LOGO
分子
质谱分析
1
质谱发展史
2
质谱分析的过程与原理
3
质谱分析仪的操作
4
质谱分析的应用与分类
质谱发展史
• 质谱仪的发展史 • 1912年: 世界第一台质谱装置 • 40年代: 质谱仪用于同位素测定 • 50年代： 分析石油 • 60年代： 研究GC-MS联用技术 • 70年代： 计算机引入
量约70eV），撞击使分子电离形成正离子； • M —— M+ + e
• 或与电子结合，形成负离子 • M + e —— M—
电子电离源(electron ionization EI) 化学电离源(chemical ionization CI) 快原子轰击(fast atom bombardment FAB) 电喷雾源(electronspray ionization ESI) 大气压化学电离（atmospheric pressure chemical ionization APCI) 基质辅助激光解吸电离（matrix assisted laser Desorption ionization MALDI)
鸣谢！！
Company
LOGO
过程与原理
质谱法是一种按照离子的质核比（m/z）大 小对离子进行分离和测定的方法。
过程与原理
进样系统
离子源 质量分析器
检测器
过程与原理
1、进样 化合物通过汽化引入离子化室；
气体——直接导入或用气相色 谱进样
液体——加热汽化或雾化进样 固体——用直接进样探头
过程与原理
• 2、离子化 • 在离子化室，组分分子被一束加速电子碰撞（能
Mass Spectrometry，MS
Company
LOGO
分子
质谱分析
1
质谱发展史
2
质谱分析的过程与原理
3
质谱分析仪的操作
4
质谱分析的应用与分类
质谱发展史
• 质谱仪的发展史 • 1912年: 世界第一台质谱装置 • 40年代: 质谱仪用于同位素测定 • 50年代： 分析石油 • 60年代： 研究GC-MS联用技术 • 70年代： 计算机引入
量约70eV），撞击使分子电离形成正离子； • M —— M+ + e
• 或与电子结合，形成负离子 • M + e —— M—
电子电离源(electron ionization EI) 化学电离源(chemical ionization CI) 快原子轰击(fast atom bombardment FAB) 电喷雾源(electronspray ionization ESI) 大气压化学电离（atmospheric pressure chemical ionization APCI) 基质辅助激光解吸电离（matrix assisted laser Desorption ionization MALDI)
鸣谢！！
Company
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过程与原理
质谱法是一种按照离子的质核比（m/z）大 小对离子进行分离和测定的方法。
过程与原理
进样系统
离子源 质量分析器
检测器
过程与原理
1、进样 化合物通过汽化引入离子化室；
气体——直接导入或用气相色 谱进样
液体——加热汽化或雾化进样 固体——用直接进样探头
过程与原理
• 2、离子化 • 在离子化室，组分分子被一束加速电子碰撞（能
第五章质谱分析法ppt课件
内容
第一节、质谱法的基本原理 第二节、质谱仪（自学） 第三节、质谱及主要离子峰的类型 第四节、质谱法的应用
1
第一节、质谱法的基本原理
一、概述
• 质谱分析法是在高真空系统中测定样品的分子离子及碎片离 子质量，以确定样品相对分子质量及分子结构的方法。
• 化合物分子受到电子流冲击后，形成的带正电荷分子离子及
静电分析器将具有相同 速度（或能量）的离子 分成一类；进入磁分析 器后，再将具有相同质 荷比而能量不同的离子 进行分离。 分辨率高，但体积大。
28
3. 四极滤质器（四极杆质量分析器）
特点： • 结构简单、体积小，分析速度快，适合与色谱联用 • 分辨率较高（比磁分析器略低） • 准确度和精密度低于磁偏转分析器，对质量较高的
醛，乙基取代物 伯胺 醇，甲酯类 乙酰基，丙基取代物 烷烃 结构中有芳环
CH3COOH+· C6H5CH2+ C6H5CO+
羧酸，乙酸酯，甲酯 苄基 苯甲酰基
36
·OCH3, CH3NH2
37
对于一般有机物电子失去的程度：
n电子 > 电子 > 电子
O
失去一个n电子形成的分子离子：
-e R C R'
质谱仪按用途分： 同位素质谱仪（测定同位素）、无机质谱仪（测定无机化合物）、
有机质谱仪（测定有机化合物）等。 根据质量分析器的工作原理分：
静态仪器：采用稳定磁场，按空间位置区分不同质荷比的离子 单聚焦和双聚焦质谱仪
动态仪器：采用变化的电磁场，按时空来区分不同质荷比的离子 飞行时间和四极滤质器式质谱仪
在电子轰击下，甲烷首先被电离： CH4+ →CH4+＋CH3+＋CH2+＋CH+＋C+＋H+
第一节、质谱法的基本原理 第二节、质谱仪（自学） 第三节、质谱及主要离子峰的类型 第四节、质谱法的应用
1
第一节、质谱法的基本原理
一、概述
• 质谱分析法是在高真空系统中测定样品的分子离子及碎片离 子质量，以确定样品相对分子质量及分子结构的方法。
• 化合物分子受到电子流冲击后，形成的带正电荷分子离子及
静电分析器将具有相同 速度（或能量）的离子 分成一类；进入磁分析 器后，再将具有相同质 荷比而能量不同的离子 进行分离。 分辨率高，但体积大。
28
3. 四极滤质器（四极杆质量分析器）
特点： • 结构简单、体积小，分析速度快，适合与色谱联用 • 分辨率较高（比磁分析器略低） • 准确度和精密度低于磁偏转分析器，对质量较高的
醛，乙基取代物 伯胺 醇，甲酯类 乙酰基，丙基取代物 烷烃 结构中有芳环
CH3COOH+· C6H5CH2+ C6H5CO+
羧酸，乙酸酯，甲酯 苄基 苯甲酰基
36
·OCH3, CH3NH2
37
对于一般有机物电子失去的程度：
n电子 > 电子 > 电子
O
失去一个n电子形成的分子离子：
-e R C R'
质谱仪按用途分： 同位素质谱仪（测定同位素）、无机质谱仪（测定无机化合物）、
有机质谱仪（测定有机化合物）等。 根据质量分析器的工作原理分：
静态仪器：采用稳定磁场，按空间位置区分不同质荷比的离子 单聚焦和双聚焦质谱仪
动态仪器：采用变化的电磁场，按时空来区分不同质荷比的离子 飞行时间和四极滤质器式质谱仪
在电子轰击下，甲烷首先被电离： CH4+ →CH4+＋CH3+＋CH2+＋CH+＋C+＋H+
质谱分析法PPT课件
离子的类型及开裂规律 两节课时间太紧张
离子的类型 1．分子离子峰：
在电子轰击下,有机物分子电离一个电子形成 的离子,叫分子离子 分子离子的质量就是化合物的相对分子量。
分子离子足够稳定，质谱中位于质荷比最高 位置的峰就是分子离子峰。
1
辨认分子离子峰的方法
1. 分子离子峰一定是质谱中质量数最大的峰，应处在质 谱图的最右端。
正相反。苯甲醇中M-1峰很强，是因为生成了稳定的羟基 离子 m/z107；苄醇也有M-2 ，M-3的峰，强度较弱，苯酚的M-1是弱峰。 酚的裂解如下：
H O┐ rH
┐
O H H
m/z 94
m/z 94
H
CHO
┐
或
H
┐
H
m/z 66
m/z 65
41
苯甲醇和酚的特征裂解都有经过H转移丢失CO产生M-28 的峰，还有丢失 CHO基团的M-29的峰。苯甲醇有M（CHO），即m/z79的峰是基峰。酚有M-28（m/z66）和 M-29（m/z65）的弱峰。
同部分碎片峰，可粗略推测化合物的大致结构。 • 以所有可能方式把各部分结构单元连接起来，再利
用质谱数据，将造成的结构中不合理的结构排除掉。
45
质谱图解析 —— 例1 (P266)
46
47
质谱图解析 —— 例2
48
49
GC和MS联用的优点
• GC：善于分离，不善于定性 • MS：善于定性，不善于分离 • GC-MS：分离，定性同时进行
10
离子开裂的几种类型
单纯开裂— 断一个键，脱离一个游离基 重排开裂— 有两个键断裂，一个氢原子发生转移，
脱去一个中性分子 复杂开裂— 几个键开裂，并有氢原子的转移 双重重排— 有两个氢的转移
离子的类型 1．分子离子峰：
在电子轰击下,有机物分子电离一个电子形成 的离子,叫分子离子 分子离子的质量就是化合物的相对分子量。
分子离子足够稳定，质谱中位于质荷比最高 位置的峰就是分子离子峰。
1
辨认分子离子峰的方法
1. 分子离子峰一定是质谱中质量数最大的峰，应处在质 谱图的最右端。
正相反。苯甲醇中M-1峰很强，是因为生成了稳定的羟基 离子 m/z107；苄醇也有M-2 ，M-3的峰，强度较弱，苯酚的M-1是弱峰。 酚的裂解如下：
H O┐ rH
┐
O H H
m/z 94
m/z 94
H
CHO
┐
或
H
┐
H
m/z 66
m/z 65
41
苯甲醇和酚的特征裂解都有经过H转移丢失CO产生M-28 的峰，还有丢失 CHO基团的M-29的峰。苯甲醇有M（CHO），即m/z79的峰是基峰。酚有M-28（m/z66）和 M-29（m/z65）的弱峰。
同部分碎片峰，可粗略推测化合物的大致结构。 • 以所有可能方式把各部分结构单元连接起来，再利
用质谱数据，将造成的结构中不合理的结构排除掉。
45
质谱图解析 —— 例1 (P266)
46
47
质谱图解析 —— 例2
48
49
GC和MS联用的优点
• GC：善于分离，不善于定性 • MS：善于定性，不善于分离 • GC-MS：分离，定性同时进行
10
离子开裂的几种类型
单纯开裂— 断一个键，脱离一个游离基 重排开裂— 有两个键断裂，一个氢原子发生转移，
脱去一个中性分子 复杂开裂— 几个键开裂，并有氢原子的转移 双重重排— 有两个氢的转移
(完整版)质谱分析图谱解析全
■ 含硫的样品 32S : 33S : 34S = 100 : 0.8 :4.4
RI(M+1) / RI(M) ×100 = 1.1x + 0.37z+ 0.8S RI(M+2) / RI(M) ×100 = （1.1x）2 / 200 + 0.2w +4.4S
■ 含Si的化合物 28 Si : 29Si : 30Si = 100 : 5.1 : 3.4
9 24 22 8 1
即 M: (M+2): (M+4): (M+6): (M+8)＝9: 24: 22: 8: 1
如果两个离子分别含有1个溴和3个氯，虽然(M+2)峰的相对强 度差不多，但是(M+4)峰却有差别。在考虑(M+2)峰的相对强 度时，还必须考虑(M+1)峰对它的贡献。
DBE（或UN）的计算
同位素峰簇及其相对丰度
■ 对于C, H, N, O组成的化合物， 其通式：CxHyNzOw RI(M+1) / RI(M) ×100 = 1.1x + 0.37z ( 2H 0.016, 17O 0.04忽略 ) RI(M+2) / RI(M) ×100 = (1.1x）2 / 200 + 0.2w
设x = 5, w=1,
则 y =9, 可能的分子式 C5H9OBr, Ω =1 也合理
由碎片离子 可判断其为
C6H13Br
例 设 m/z 154为分子离子峰, 154-139=15, 合理 m/z 154 155 156 157 RI 100 9.8 5.1 0.5
分子中含有1个s x = (9.80.8)/1.18
例：化合物中含有2个氯和2个溴原子
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蛋白质质谱鉴定流程
样品
酶解
酶解片断
序列数据库
PMF 肽指纹图谱
一级质谱
成功鉴定
PSMs及后筛选
对库 检索
串联质谱
未知蛋白
De-novo 序列分析
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胰蛋白酶酶解
采用含乙腈的脱色液脱色至胶块变为白色 真空干燥仪中冷冻干燥 蛋白质组学级胰蛋白酶酶解过夜 采用含TFA和乙腈的溶液溶进行肽提取 真空干燥 采用含TFA和乙腈的溶液溶解样品并点样进
行质谱测试
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质谱分析
ABI MALDI-TOF/TOF 4800 质谱仪 先用MS反射模式得到一级图谱 一级质谱激光总shots: 800次 选择5-10个母离子做MS/MS分析 二级MS/MS激光总shots: 2000次，碰撞能量1KV,
CID on
蛋白的选择
一般以protein score C.I.%大于95或者单个肽段的 Total Ion C.I.%大于95作为蛋白成功的标准
对于一个样品点鉴定得到多个成功鉴定的结果， 以蛋白得分（ protein score ）最高的最为可信
一般而言，多个成功鉴定的不同蛋白之间相似性 也是非常高的，也可以通过这个特点来判定结果 的可靠性
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数据库检索
采用GPS Explore (V3.6 ，ABI) 软件进行分析 使用MASCOT（V2.1, Matrix Science, London, U.K）
Hale Waihona Puke 搜库软件对本地数据库进行检索 检索数据库为NCBInr，切割的酶为trypsin ，允许最
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串联质谱结果
——质谱图
二级质谱图
一级质谱图
从一级质谱图里 选出部分峰做二
级质谱
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蛋白点编号
串联质谱结果
——报告单
蛋白名称 蛋白GI号
理论分子量
蛋白得分
串联质谱离 子得分
串联质谱匹 配的序列
理论等电点 可信度
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一般采用MALDI-TOF进行鉴定。因为MALDI质谱 图中的离子一般只带一个电荷，比较容易计算
其原理就是利用了蛋白序列数据库中的多肽质量的 信息与实际测得的质量信息进行对比而实现鉴定
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优点与缺点
优点： 是用一级质谱鉴定蛋白质的经典方法，算法简单，
速度快 缺点： 质量相近的多肽增加匹配难度 无法实现混合蛋白的鉴定
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二级质谱鉴定
质谱仪选择一级质谱中的一个峰，让这些峰所代 表的离子高速撞击质谱仪中的惰性气体，使其肽 键断裂，并对库搜索鉴定蛋白质
常用MALDI-TOF／TOF仪器进行
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优点与缺点
优点： 鉴定准确度更高，可以得到蛋白的序列 可以实现多个蛋白的鉴定 缺点： 增加了一步操作 算法更复杂，而且需要更多的操作经验
大的未被酶切位点数为1, 可变修饰为半胱氨酸乙酰 胺化和甲硫氨酸氧化，没有固定修饰，母离子质量 容差为50 ppm，片段离子质量容差为0.25Da
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肽指纹图谱（PMF）鉴定
PMF（Peptide Mass Fingerprinting）是根据一级质谱 （MS）所测酶解片段的精确分子质量鉴定蛋白质的 一种方法
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蛋白信息查询
首先根据蛋白名称可以了解该蛋白的大致功能 使用该蛋白的GI号码可以到NCBI数据库进一
步查询该蛋白的信息 对于未知蛋白，可以采用BLAST或者其它功能
预测软件预测该蛋白的功能
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样品
酶解
酶解片断
序列数据库
PMF 肽指纹图谱
一级质谱
成功鉴定
PSMs及后筛选
对库 检索
串联质谱
未知蛋白
De-novo 序列分析
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胰蛋白酶酶解
采用含乙腈的脱色液脱色至胶块变为白色 真空干燥仪中冷冻干燥 蛋白质组学级胰蛋白酶酶解过夜 采用含TFA和乙腈的溶液溶进行肽提取 真空干燥 采用含TFA和乙腈的溶液溶解样品并点样进
行质谱测试
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质谱分析
ABI MALDI-TOF/TOF 4800 质谱仪 先用MS反射模式得到一级图谱 一级质谱激光总shots: 800次 选择5-10个母离子做MS/MS分析 二级MS/MS激光总shots: 2000次，碰撞能量1KV,
CID on
蛋白的选择
一般以protein score C.I.%大于95或者单个肽段的 Total Ion C.I.%大于95作为蛋白成功的标准
对于一个样品点鉴定得到多个成功鉴定的结果， 以蛋白得分（ protein score ）最高的最为可信
一般而言，多个成功鉴定的不同蛋白之间相似性 也是非常高的，也可以通过这个特点来判定结果 的可靠性
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数据库检索
采用GPS Explore (V3.6 ，ABI) 软件进行分析 使用MASCOT（V2.1, Matrix Science, London, U.K）
Hale Waihona Puke 搜库软件对本地数据库进行检索 检索数据库为NCBInr，切割的酶为trypsin ，允许最
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串联质谱结果
——质谱图
二级质谱图
一级质谱图
从一级质谱图里 选出部分峰做二
级质谱
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蛋白点编号
串联质谱结果
——报告单
蛋白名称 蛋白GI号
理论分子量
蛋白得分
串联质谱离 子得分
串联质谱匹 配的序列
理论等电点 可信度
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一般采用MALDI-TOF进行鉴定。因为MALDI质谱 图中的离子一般只带一个电荷，比较容易计算
其原理就是利用了蛋白序列数据库中的多肽质量的 信息与实际测得的质量信息进行对比而实现鉴定
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优点与缺点
优点： 是用一级质谱鉴定蛋白质的经典方法，算法简单，
速度快 缺点： 质量相近的多肽增加匹配难度 无法实现混合蛋白的鉴定
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二级质谱鉴定
质谱仪选择一级质谱中的一个峰，让这些峰所代 表的离子高速撞击质谱仪中的惰性气体，使其肽 键断裂，并对库搜索鉴定蛋白质
常用MALDI-TOF／TOF仪器进行
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优点与缺点
优点： 鉴定准确度更高，可以得到蛋白的序列 可以实现多个蛋白的鉴定 缺点： 增加了一步操作 算法更复杂，而且需要更多的操作经验
大的未被酶切位点数为1, 可变修饰为半胱氨酸乙酰 胺化和甲硫氨酸氧化，没有固定修饰，母离子质量 容差为50 ppm，片段离子质量容差为0.25Da
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肽指纹图谱（PMF）鉴定
PMF（Peptide Mass Fingerprinting）是根据一级质谱 （MS）所测酶解片段的精确分子质量鉴定蛋白质的 一种方法
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蛋白信息查询
首先根据蛋白名称可以了解该蛋白的大致功能 使用该蛋白的GI号码可以到NCBI数据库进一
步查询该蛋白的信息 对于未知蛋白，可以采用BLAST或者其它功能
预测软件预测该蛋白的功能
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