GUS组织化学染色方法

gus染色原理

gus染色原理Gus染色原理Gus染色原理是一种常用的分子生物学实验技术，用于检测和观察基因的表达情况。

它基于酶反应原理，通过染色剂Gus的添加和酶反应的发生，使得目标基因在组织或细胞中显示出特定颜色，从而可以直观地观察基因的表达水平和组织分布情况。

Gus染色原理的基本步骤如下：1. 样品处理：首先需要获取待检测的组织样品或细胞，可以是植物组织、动物组织或细菌等。

样品需要经过一系列处理步骤，如固定、脱水、透明化等，以保证染色的准确性和可靠性。

2. Gus染色液制备：Gus染色液通常由染色底物、缓冲液和酶反应辅助物质组成。

常用的染色底物有X-β-Glucuronide，它是一种无色底物，在酶反应中会被酶催化分解为产生特定颜色的产物。

缓冲液的选择要根据实验的需要，可以是酸性缓冲液或碱性缓冲液。

3. Gus染色反应：将处理好的样品与Gus染色液进行充分混合，使得染色底物与目标基因的酶发生反应。

在反应过程中，底物被酶催化分解，产生特定颜色的产物。

染色的时间和温度需要根据实验要求进行控制，以保证染色效果的准确性和可靠性。

4. 观察结果：染色反应完成后，观察样品的颜色变化。

正常情况下，目标基因的表达区域会显示出特定颜色，可以是蓝色、紫色等，而未表达的区域则没有颜色变化。

观察结果可以使用显微镜或肉眼进行观察和记录。

Gus染色原理的优点在于其操作简单、成本低廉，可以在大量样品中快速进行检测。

同时，由于染色结果直观明了，可以用肉眼观察和记录，无需复杂的仪器设备。

因此，Gus染色在基因表达研究、遗传工程和植物学等领域得到广泛应用。

然而，Gus染色原理也存在一些限制和注意事项。

首先，染色结果的可视化程度受样品的固定和处理等步骤的影响，不同的样品处理方法可能导致染色结果的差异。

其次，染色结果只能显示目标基因的表达水平和组织分布情况，无法提供更详细的信息，如基因的调控机制和表达动力学等。

此外，由于染色底物的选择和反应条件的不同，染色结果可能存在一定的差异性，需要在实验设计和数据分析中进行合理控制。

gus染色原理

gus染色原理
Gus染色原理。

Gus染色是一种用于检测β-葡萄糖苷酶活性的方法，它是以β-葡萄糖苷酶的
底物5-氯-4-溴-3-吲哚基葡萄糖（X-葡萄糖）为基础的染色方法。

在染色过程中，
X-葡萄糖会被β-葡萄糖苷酶水解，产生游离的5-氯-4-溴-3-吲哚基（X-吲哚），然后X-吲哚会与染色底物中的氧化剂氧化反应，生成可见的蓝色产物，从而实现对
β-葡萄糖苷酶活性的检测。

Gus染色的原理可以分为以下几个步骤：
1. 底物水解，X-葡萄糖是β-葡萄糖苷酶的底物，当β-葡萄糖苷酶存在时，它
会催化X-葡萄糖的水解反应，将其分解为X-吲哚和葡萄糖。

2. 氧化反应，X-吲哚与染色底物中的氧化剂（如溴化4-溴-3-吲哚苯）发生氧
化反应，生成可见的蓝色产物。

3. 结果观察，通过观察样品的颜色变化，可以判断β-葡萄糖苷酶的活性水平。

活性高的样品会呈现深蓝色，活性低的样品则会呈现浅蓝色或无色。

Gus染色方法具有操作简便、结果直观、灵敏度高的特点，因此被广泛应用于
细菌、植物和动物细胞等生物体系中对β-葡萄糖苷酶活性的检测。

同时，Gus染
色还可以在组织学研究中用于检测β-葡萄糖苷酶的表达情况，为研究者提供重要
的实验数据。

总的来说，Gus染色是一种简单而有效的β-葡萄糖苷酶活性检测方法，其原理清晰，操作方便，结果可靠。

在生物学研究中具有重要的应用价值，为科研工作者提供了有力的实验手段。

通过对Gus染色原理的深入了解，可以更好地应用和优
化这一方法，为科学研究提供更加可靠的数据支持。

GUS组织化学染色

GUS组织化学染色GUS组织化学染色GUS组织化学染色1. 实验原理适宜的反应条件下，β-葡聚糖苷酶（GUS）可将X-Gluc水解成蓝色物质，因此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。

2．实验材料1）转基因烟草叶片或试管苗2）非转基因烟草的叶片或试管苗（阴性对照）3．药品试剂1) X-Gluc，用N-N-二甲基酰胺配成20mM的贮存液，分装成每管100L，保存于-20℃。

2) 底物溶液（染色液）：3) 1mM X-Gluc加入100mM磷酸钠缓冲液（pH=7.0）,缓冲液中含10mM EDTA-Na2，1-5mM K3[Fe(CN)6](铁氰化钾)，1-5mM K4[Fe(CN)6](亚铁氰化钾)，0.001%（V/V）Triton X-100 4．实验器材小药瓶，培养皿，培养箱（37℃），微量移液器5．实验步骤1) 将准备好的叶片放入小药瓶，加入染色液浸没试材，封好盖子；2) 37℃培养箱中温育1小时至过夜；3) 将浸染过的试材转入70%或95%乙醇中脱色2-3次（除去叶绿素），至阴性对照材料呈白色为止。

6．结果叶片上GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点。

先用DMSO溶解X-GLUC 好像是100mg/2ml PBF 94ML+X-GLUC 0.1ML+***** X-100 2ML +FE2+ 2ML+ FE3+ 2ML Gus staining1. Excise root and leaf segments, wash with 100mM potassiumphosphate buffer (pH7.0) for 3 times.GUS组织化学染色2. Immerse in the Gus substrate solution, 37C, dark, 12-24h3. Rinse in phosphate buffer4. Fix for 4h or longer5. Rinse in the same buffer6. Observe as whole specimens or as sections.1M potassium phosphate buffer (pH7.0)K2HPO4: 34.8g ---200mlKH2PO4: 27.2g----200ml184.5ml K2HPO4+115.5ml KH2PO4---- 300ml 1M potassium phosphate buffer(pH7.0)Gus substrate solutionVolume(500ml)Final concentrationPotassium ferricyanide82mg0.5mMPotassium ferrocyanide105.6mg0.5mMPotassium phosphate buffer (pH7.0, 1M)50ml100mMStore at -20C. Add 1mM x-gulc (MW521.8~~0.5mg/ml) freshly when use.Fix solution2.5% glutaraldehyde200mM sodium cacodylate, pH7.2GUS组织化学染色共培养后愈伤的瞬时表达、抗性愈伤的鉴定以及转基因植株的鉴定用GUS组织化学法测定.将待测定的材料,如愈伤或叶片,浸入适量X-Gluc溶液,于37 ℃保温过夜后,在体视显微镜下观察,拍照记录.若将加有X-Gluc溶液的材料抽真空,染色效果将更好.如材料存在色素干扰问题,染色后用酒精脱色,使色素的颜色褪掉而使染成的蓝色保存.X-Gluc染色液：（20*）0.2 mol/L Na3PO4缓冲液(62 mL 0.2 mol/L Na2HPO4;38 mL 0.2 mol/L NaH2PO4)，pH 7.0；0.1 mol/L K3［Fe(CN)6］;0.1 mol/L K4［Fe(CN)6］.3H2O;1.0 mol/L Na2EPTA;0.1% X-Gluc.1000mlx-gluc 1000mg （20ml dmso）Na2HPO4: 620*0.2*M=0.620*0.2*358（12H2O）=44NaH2PO4: 380*0.2*M=0.358*0.2*156（2H2O）=11K3［Fe(CN)6:1000*0.01*M=329．26*0.01=3.3K4［Fe(CN)6]:1000*0.01*M=422．39（3H2O）*0.01=4.2Triton 1MLNa2EPTA:1000*0.1*M=372.24(2H2O)=371. 取 5 mg X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl glucuronide)溶於100 l DMSO於中.2. 加入10 ml reaction buffer (10 mM Na2EDTA, 100 mM NaH2PO4H2O, 0.1% Triton, 0.5 mM potassium ferricyanide, 0.5 mM potassium ferrocyanide, pH 7.0).3. 混合均匀后分装於eppendorf tube中,保存於-20℃冰箱内.100ml x-gluc染液配制x-gluc 50mg加入溶入1ml dmso1ml triton 100Na2EDTA (20mM) 10mM 5ml ; K3Fe(CN)6 (0.1M) 5mM 0.5ml K4Fe(CN)6 (0.1M) 5mM 0.5ml ; Na2HPO4 (0.2M) 100mM 3.1ml。

GUS步骤

1.1 GUS染色底物的配制
按下表1配制GUS染色的底物。
表1. GUS染色底物的配制
试剂名称
母液浓度
母液配制方法
工作液浓度
工作液配制方法
磷酸缓冲液（pH 7.2）
0.5M
将0.5M Na2HPO4和0.5M NaH2PO4混合*
50mM
1 ml
Triton X-100
10%
取10ml Triton X-100溶于水，定容至100ml。
10 mM
0.2 ml
X-Gluc
/
2 mM
10.4mg
ddH2O
/
/
定容至10ml
* 0.5M Na2HPO4配制方法：将17.907g Na2HPO4溶于水，定容至100ml。0.5M NaH2PO4的配制方法：将7.800g NaH2PO4溶于水，定容至100ml。
1.2 染色步骤
（1）将材料在90%丙酮中(冰浴)轻微固定15-20min；
（2）在缓冲液中(染色液去掉X-Gluc)漂洗3次，共计l0min；
（3）将需要染色的拟南芥植株或组织放在1.5 mL离心管中，加入染色液浸过材料抽气5-l0min，37℃过夜，染色12-16h；
（4）用50%，60%，70%，80%，90%乙醇依次脱水30min后，在100%乙醇中放置1h；观察、照相(BX50 OLYPUS，显微镜)。
0.1%
0.1 ml
铁氰化钾K3Fe(CN)6
100mM
将3.2924g铁氰化钾溶于水，定容至100ml。
2 mM
0.2 ml
亚铁氰化钾
K4[Fe(CN)6溶于水，定容至100ml。
2 mM
0.2 ml

gus染色原理

gus染色原理Gus染色原理。

Gus染色是一种用于研究植物组织中β-葡萄糖苷酶活性的常用方法。

这种染色方法利用了β-葡萄糖苷酶对X-葡萄糖苷基苯基酚的水解作用，使得组织中含有该酶的部分在染色后呈现出蓝色的颜色。

下面将介绍Gus染色的原理及其应用。

Gus染色的原理主要是利用了β-葡萄糖苷酶对X-葡萄糖苷基苯基酚的水解作用。

X-葡萄糖苷基苯基酚是一种无色底物，在β-葡萄糖苷酶的作用下，会被水解成苯基酚和葡萄糖。

而苯基酚在碱性条件下会发生氧化反应，生成蓝色产物。

因此，含有β-葡萄糖苷酶的组织在Gus染色后会呈现出蓝色，从而可以直观地观察到该酶的活性分布情况。

Gus染色在植物学研究中有着广泛的应用。

首先，它可以用于研究植物生长发育过程中β-葡萄糖苷酶的活性分布情况。

通过对不同发育阶段的植物组织进行Gus染色，可以清晰地观察到该酶在不同组织中的表达情况，从而揭示其在植物生长发育中的作用。

其次，Gus染色还可以用于研究植物对逆境的响应机制。

在逆境条件下，植物体内的β-葡萄糖苷酶活性可能会发生变化，通过Gus染色可以对其进行快速、直观的检测，从而揭示植物对逆境的生理响应。

除了在植物学研究中的应用，Gus染色还可以用于转基因植物的筛选。

在转基因植物中，外源基因通常会与Gus基因进行融合，从而使得转基因植物组织中具有Gus活性。

通过对转基因植物进行Gus染色，可以快速、准确地筛选出具有外源基因表达的植物组织，为转基因植物育种提供了重要的技术手段。

总之，Gus染色作为一种常用的酶活性检测方法，在植物学研究中发挥着重要作用。

它不仅可以用于研究植物生长发育过程中酶活性的分布情况，还可以用于研究植物对逆境的响应机制，以及转基因植物的筛选。

相信随着技术的不断进步，Gus染色方法将在植物学研究中发挥更大的作用。

GUS 组织化学染色-拟南芥

幼苗GUS染色实验GUS洗液配方：0.1 M PBS, pH 7.010mM EDTA2mM 亚铁氰化钾potassium ferrocyanide2mM 六氰合铁酸钾potassium ferricyanide300mL中加0.254 g亚铁氰化钾，0.198 g六氰合铁酸钾，EDTA 6 mL（10 mM）GUS染色液(1mM)就是把5 mg X-Glus（5 mg加100µL DMSO助溶，X-Glus用前离心3min）加到5 mL洗液里即成染色液。

一次配5 mL染色液，1.5 mL离心管每管分装200 µL，锡纸包住-20℃保存。

步骤：一般5d幼苗可进行试验，早上做以方便白天随时观察幼苗着色情况。

1.90%丙酮固定20min；(丙酮(acetone)渗透力很强，能使蛋白质沉淀凝固，但不影响蛋白质的功能基团而保存酶的活性，用于固定磷酸酶和氧化酶效果较好，因此可用于GUS染色前的固定，可防止GUS信号的扩散。

缺点是固定快、渗透力强，易使组织细胞收缩，保持细胞结构欠佳。

一般4℃下20分钟为宜)2. 加1 mL GUS洗液洗去丙酮，洗2遍；3. 加GUS染色液，冰上抽真空15-20 min；4. 37℃放置，隔一阵观察一下，染上色了就进行下面步骤；5. 吸出染色液，加入1 mL 70%乙醇，停止染色反应及脱色；6. 更换几次乙醇直到脱色完全；7. 解剖镜及显微镜拍照观察载玻片上加适量HCG透明液，用镊子取出幼苗在透明液中铺平，盖上盖玻片，解剖镜观察整株，显微镜观察细节并拍照。

实验原理：GUS基因编码β-葡萄糖苷酸酶，相当稳定而不易降解。

根据GUS基因检测所用的底物不同，可以选择三种检测方法：组织化学法、分光光度法和荧光法（灵感度为分光光度检测法最高）。

其中最为常用的是组织化学法。

组织化学法检测以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸（X-Gluc）作为反应底物，将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡。

β-葡萄糖醛酸糖苷酶GUS组织化学染色检测转基因植物

也存在一些缺点：1）虽然非致死检测的研究取得了一些进展，但
这一检测对于活体组织仍然不太合适；2）由于酶和产物非常稳定，因而不能真实地反映出GUS替代的那个蛋白在稳定状态下的丰度；3）
在GUS表达水平很高的组织中会发生无色反应中间产物渗漏的现象，
但是这可以通过在底物溶液中加入氧化剂高铁氰化钾或亚铁氰化钾或者二者都加来使这种渗漏减至最少；4）同所有的组织化学方法
β -葡萄糖醛酸糖苷酶（GUS）组织化学染色检测转基因植物
实验目的
学习转GUS基因的植物组织化学染色方法，掌握染色的原理。
实验原理
β -葡萄糖醛酸糖苷酶（GUS）基因是植物转基因中常用
的一个报告基因。GUS基因是从大肠杆菌中分离出来的，在 GUS基因附近插入启动子区就产生了转录融合基因或翻译融合基因。在稳定转化的植物中，利用一个简单的组织化学检测就可以精确地分析GUS融合基因的时空表达模式。用X-
5．70% 乙醇
实验步骤
1．将阴性对照材料和转GUS基因或带有可表达的GUS基因的烟草叶片切成小块，浸入盛有 100 μ l 染色液的 0.5ml的离心管中。 2．抽真空后37℃温育4-16h。
3．叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2-3次，至阴性材料呈白色。
4．肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为 GUS表达位点。
gluc（5-溴-4-氯-3-吲哚葡糖苷酸）作为底物可以精确地进
行活体GUS活性的定位。这一反应分两步进行：首先是切割葡糖醛酸部分，产生无色的吲哚氧基中间产物，随后吲哚氧基中间产物氧化成为不溶的蓝色沉淀。
用GUS进行这些实验有如下优点：1）大多数植物组织中GUS活
性的本底低；2）反应产物不扩散，在表达基因的植物细胞内积累； 3）通过简单的扩散或真空渗入，底物易被植物细胞吸收。当然，

gus染色原理

gus染色原理Gus染色原理。

Gus染色是一种常用的细胞染色技术，用于检测β-葡萄糖苷酶（β-glucuronidase）的活性。

β-葡萄糖苷酶是一种水解酶，能够水解含有葡萄糖醛酸酯的底物，产生游离的葡萄糖醛酸。

Gus染色的原理是利用β-葡萄糖苷酶水解底物后产生的蓝色产物，对细胞或组织进行染色，从而观察β-葡萄糖苷酶的活性和分布情况。

在进行Gus染色之前，首先需要准备Gus染色液和底物。

Gus染色液通常由染色缓冲液、染色底物和其它辅助试剂组成。

染色底物是一种含有葡萄糖醛酸酯的化合物，一般为5-溴-4-氯-3-吲哚基葡萄糖醛酸（X-gluc）。

X-gluc在β-葡萄糖苷酶的作用下会产生蓝色的沉淀物，用于显示β-葡萄糖苷酶的活性。

辅助试剂通常包括有机溶剂、金属离子螯合剂等，用于增强染色效果和稳定染色产物。

在实际操作中，将待检测的细胞或组织样品加入Gus染色液中进行染色处理。

在适当的温度和时间条件下，X-gluc会被β-葡萄糖苷酶水解，产生蓝色的沉淀物。

通过显微镜观察染色结果，可以直观地了解β-葡萄糖苷酶在样品中的活性和分布情况。

活性高的细胞或组织会呈现出深色的染色，而活性低的则呈现较浅的染色或无染色。

Gus染色技术在植物学、动物学和微生物学等领域得到了广泛的应用。

在植物学中，可以利用Gus染色观察植物各部位中β-葡萄糖苷酶的表达情况，从而研究植物的生长发育过程和应激响应机制。

在动物学中，Gus染色也可用于研究动物胚胎发育过程中的基因表达和细胞分化情况。

在微生物学中，Gus染色可以用于检测细菌和真菌中β-葡萄糖苷酶的活性，从而研究微生物的代谢特性和环境适应能力。

总之，Gus染色技术是一种简单、直观的细胞染色方法，能够有效地检测β-葡萄糖苷酶的活性和分布情况。

通过对样品进行Gus染色，可以为细胞生物学和生物化学研究提供重要的实验数据，促进对生物学问题的深入理解和探讨。

随着生物技术的不断发展，相信Gus染色技术在生命科学领域中会有更广泛的应用和深入的研究。

gus染色原理

gus染色原理Gus染色原理及应用引言：Gus染色原理是一种常用的实验方法，主要用于检测和定位β-葡萄糖苷酶的活性。

本文将介绍Gus染色原理的基本概念、实验步骤以及其在生物学研究中的应用。

一、Gus染色原理的基本概念Gus染色原理，即β-葡萄糖苷酶染色原理，是通过Gus染色剂对β-葡萄糖苷酶进行染色，从而观察其活性和分布情况。

Gus染色剂是一种人工合成的染料，它能与β-葡萄糖苷酶发生化学反应，形成蓝色沉淀物。

这种染色剂在染色过程中是无色的，但在与酶反应后会产生明显的颜色变化。

二、Gus染色的实验步骤1. 制备Gus染色剂：将Gus染色剂溶解于适当的缓冲液中，制备成一定浓度的染色溶液。

2. 取样：选择待检测的生物组织或细胞，进行取样。

3. 固定：将取样的生物组织或细胞进行固定处理，以保持其形态结构的完整性。

4. 染色：将固定的生物组织或细胞浸泡于Gus染色溶液中，进行染色反应。

5. 观察：观察染色结果，通过显微镜对染色的生物组织或细胞进行观察和记录。

三、Gus染色在生物学研究中的应用1. 植物生物学研究：Gus染色可以用于检测植物中β-葡萄糖苷酶的活性和分布情况，帮助研究植物生长和发育过程中的基因调控机制。

2. 动物生物学研究：Gus染色可用于检测动物组织和细胞中β-葡萄糖苷酶的表达情况，有助于研究动物发育、疾病发生和治疗等方面的问题。

3. 微生物学研究：Gus染色可以用于检测细菌和真菌中β-葡萄糖苷酶的活性和分布情况，对于研究微生物代谢途径和菌种鉴定等具有重要意义。

4. 分子生物学研究：Gus染色可以与基因表达报告载体结合，用于检测基因的活性和表达水平，为分子生物学研究提供了一个简便、直观的方法。

结论：Gus染色原理是一种常用的实验方法，通过对β-葡萄糖苷酶的染色反应，可以检测和定位其活性和分布情况。

该方法在植物学、动物学、微生物学和分子生物学等领域具有广泛的应用。

通过对Gus染色原理的了解和掌握，我们可以更好地开展生物学研究，揭示生物体内重要酶的功能和调控机制，为相关领域的研究提供有力的支持。

gus染色原理

gus染色原理Gus染色原理。

Gus染色是一种常用的生物学实验技术，主要用于检测β-葡萄糖苷酶（β-glucuronidase）的活性。

β-葡萄糖苷酶是一种水解酶，能够水解含有葡萄糖醛酸的底物。

在实验中，通过对含有β-葡萄糖苷酶的细胞或组织进行Gus染色，可以直观地观察到β-葡萄糖苷酶的活性分布情况，从而对生物学研究提供重要的信息。

Gus染色的原理主要包括底物、酶作用和染色三个步骤。

首先是选择合适的底物，通常使用5-溴-4-氯-3-吲哚基葡萄糖苷（X-Gluc）作为底物，它在β-葡萄糖苷酶的作用下会产生可染色的产物。

其次是酶作用，β-葡萄糖苷酶在底物的作用下水解产生的产物，这些产物会与染色剂发生化学反应，形成蓝色的沉淀物。

最后是染色，将样品浸泡在染色液中，待染色完成后观察样品的染色情况。

Gus染色的实验步骤相对简单，但在实验过程中仍需注意一些关键的技术细节。

首先是对样品的处理，样品的预处理对实验结果有着重要的影响。

其次是对底物和染色剂的选择，合适的底物和染色剂可以提高实验的准确性和可靠性。

最后是对实验条件的控制，包括温度、时间、pH值等因素的控制都会对实验结果产生影响。

Gus染色技术在生物学研究中有着广泛的应用，特别是在植物和微生物领域。

通过对植物组织进行Gus染色，可以观察到β-葡萄糖苷酶在不同组织和不同发育阶段的表达情况，从而研究植物的生长发育过程。

在微生物研究中，Gus染色也常用于检测转基因微生物中外源基因的表达情况，为基因功能研究提供重要的数据支持。

总的来说，Gus染色是一种简单而有效的生物学实验技术，通过对β-葡萄糖苷酶活性的检测，为生物学研究提供了重要的手段。

在实际应用中，我们需要充分理解其原理和操作技巧，才能更好地利用这一技术进行科学研究。

希望本文对Gus染色的原理有所帮助，谢谢阅读！。

GUS染色操作

Updated 03/05/09 powered by Li-WenyangGUS染色操作1．取材（避免夹伤）；2．PBS漂洗3次；3．加入染色液，37C避光反应（如何控制反应时间：” Incubate seedlings at 37C until the desired staining intensity is observed”, ACC培养基上 5X EBS-GUS/Col-0 3天黄化苗经染色约2小时，在根的上半部就会有明显蓝色出现）；4．回收染液；5．PBS漂洗3次；6．固定液室温固定2~4小时，或者过夜；7．95%乙醇（目的是使用接近固定液浓度的乙醇）漂洗数次至脱掉色素（室温或者37C均可）；8．70%乙醇漂洗（目的是让材料在接近生理浓度时恢复形状）；9．透明液室温透明15’，或者过夜（推荐1~24h）；10．临时压片观察，照相。

注明：阴影字为快捷操作步骤，另外绿苗在此操作基础上需要进行脱色／透明操作，快捷步骤为100%乙醇、37C漂洗数次至脱掉绿色。

●PBS：100mM磷酸盐缓冲液A液：3.582g Na2HPO4·12H2O溶解于无菌蒸馏水，定容至10ml；B液：1.56g NaH2PO4·2H2O溶解于无菌蒸馏水，定容至10ml；取5.77ml A试剂、4.23ml B试剂混合，无菌蒸馏水定容至100ml；●staining buffer取40ml PBS，依次加入试剂：0.01861g EDTA0.01211195g 六氰合铁(II)酸钾0.016462g六氰合铁(III)酸钾（加入铁盐的目的：防止无色反应中间产物渗漏）用PBS定容至50ml，加入1% Trrton-X 100，避光保存；●GUS染液用EP管称取适量X-gluc粉末，加入少量DMSO或 N,N-二甲基甲酰胺助溶（一般溶解10mg 粉末约10~20ul二甲基甲酰胺），然后用staining buffer配成终浓度为1mg/ml的GUS染液，避光保存；●固定液无水乙醇：冰醋酸=9：1●透明液：30 ml H2O80 g 水合氯醛10 ml 100%甘油搅拌约1小时，使之充分溶解●背景GUS 基因由大肠杆菌E. coli 菌株K12 中uidA (也称为gusA) 基因座编码。

GUS活性的组织化学检测

GUS染色液的配制GUS染色液的配制主要参照Jefferson（1987）的方法。

(1)配制50mmol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）：A液：称取NaH2PO4.2H2O 3.12g 溶于无菌蒸馏水，定容至100ml。

B液：称取Na2HPO4.12H2O 7.7g 溶于溶于无菌蒸馏水，定容至100ml。

取39ml A液与61ml B液混合。

(2)配制X-Gluc(5-bromo-4chloro-3indolylglucuronide)母液：称5mg X-Gluc，溶于1mlDMF(二甲基甲酰胺)。

(3)染色液配制：磷酸钠缓冲液50 mmol/L（pH7.0），0.1%TritonX-100, 亚铁氰化钾5mmol/L，高铁氰化钾5mmol/L,X-Gluc 0.5mg/ml。

GUS活性的组织化学检测GUS活性的组织化学检测主要参照Jefferson（1987）的方法。

(1)愈伤组织瞬间表达及稳定转化的GUS检测愈伤组织瞬间表达的GUS检测：用带有重组质粒pOsMT2bL-GUS和35S-GUS的农杆菌EHA105感染水稻愈伤，共培养3d后，从每皿中各取10颗愈伤，用蒸馏水清洗除去愈伤表面附着的农杆菌。

滤纸吸干水分。

同时用未作任何处理的愈伤作阴性对照，将这些愈伤分别浸没在染色液中，37℃保温3-20h。

肉眼或显微镜下观察，愈伤上的蓝色小点即为GUS表达位点。

愈伤组织稳定转化的GUS检测：取经两轮抗性筛选后pOsMT2bL-GUS和35S-GUS转基因抗性愈伤，同时用未作任何处理的愈伤作阴性对照，将这些愈伤分别浸没在染色液中，37℃保温3-20h。

肉眼或显微镜下观察，愈伤上的蓝色小点即为GUS表达位点。

(2)根、茎、叶中的GUS检测剪取pOsMT2bL-GUS和35S-GUS转基因水稻及未转基因水稻成熟植株的根、茎、叶、叶鞘、叶舌叶耳结合部（其中根、茎、叶鞘用解剖刀横切），浸没在染色液中，37℃保温3-20h，转入70%乙醇中脱色2-3次，至阴性对照材料呈白色。

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GUS染⾊转基因植物中报告基因实验七实验七、转基因植物中报告基因实验七、GUS组织化学定位检测原理GUS基因就是转β-葡糖醛酸酶基因，它存在于E.coli等⼀些细菌基因组内，编码β-葡萄糖苷酸酶。

葡萄糖苷酸酶是个⽔解酶以β-葡萄糖苷酸酶是⼀个⽔解酶，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可⽤多种⽅法检测出来。

由于绝⼤多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶来由于绝⼤多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，因此这个基因被⼴泛应⽤于基因调控的研究中。

根据地gus基因检测所⽤的底物不同，可以选择三种检测⽅法：组织化学法、分光光度可以选择种检测⽅法组织化学法分光光度法和荧光法（灵感度为分光光度检测法最⾼），其中最为常⽤的是组织化学法。

其中最为常⽤的是组织化学法组织化学法检测：以5--4--3---织化学法检测以溴氯吲哚β葡萄糖苷酸酯（X-Gluc）作为反应底物。

将被检材料⽤含有底物的缓冲液浸若织细胞被转了基底物的缓冲液浸泡，若组织细胞被转⼊了GUS 因，并表达出Gus，在适宜的条件下，该酶就可将X-Gluc⽔解⽣成蓝⾊产物，这是由其初始产物经氧⽔解成产物是其初始产物氧化⼆聚作⽤于形成的靛蓝染料，它使具Gus活性的部位或位点现蓝⾊⽤⾁眼或在显微镜下可看到部位或位点呈现蓝⾊，⽤⾁眼或在显微镜下可看到，且在⼀定程度下根据染⾊深浅可反映出Gus活性因此利⽤该⽅法可观察到外源基因在特定器官。

因此利⽤该⽅法可观察到外源基因在特定器官、组织，甚⾄单个细胞内的表达情况。

本实验材料中使⽤的转基因载体的部分图谱克隆拟南芥中的AK12基因的启动⼦插⼊到PBI101载体GUS 基因的上游的克隆位点（具体图⽰如下）农杆菌转化转化拟南芥AK12-proRB LBNPT ПGUS NOS-ter NOS-ter 35S-pro pBI101本实验基本流程拟南芥AK12-pro种⼦萌发，长成幼苗取幼苗组织化学检测--GUS检测报告基因GUS的表达的检测拟南芥AK12pro材料：AK12-试剂：GUS⼯作液：在450mlddH2O中加⼊82mg铁氰化钾，105.6mg亚50ml1mol/L pH70铁氰化钾，50ml 1mol/L磷酸钾缓冲液（pH7.0），加⽔⾄500ml，4℃储存备⽤。

植物组织GUS染色方法

GUS染色试剂配制1. 50mmol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）：A液：称取NaH2PO4●2H2O 3.12g溶于无菌蒸馏水，定容100ml；B液：称取Na2HPO4●12H2O 7.17g溶于无菌蒸馏水，定容100ml；取39ml A液与61ml B液混合。

2．染色液：50mmol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）中含有：0.1 mol/L K3[Fe(CN)6]，0.1 mol/L K4[Fe(CN)6]，10mmol/L Na2EDTA，0.001%（v/v）Triton-X100，20%甲醇，0.5mg/ml X-Gluc。

3．一般固定液：1%甲醛，50mmol/L磷酸钠缓冲液，0.05% Triton X-100（或Tween-20）。

4．FAA固定脱色液：5%甲醛，5%乙酸，5%乙醇。

染色直接染色法1．将准备好的试材浸泡在染液中，于25~37℃保温1h至过夜。

2．叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2~3次，至阴性对照材料呈白色。

3．肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为Gus表达位点。

固定染色法1．将材料浸入固定液，必要时刻抽真空1min，室温下轻摇30~60min。

2．取出材料，用磷酸钠缓冲液漂洗3~4次。

3．将材料放入无菌离心管中，加入染色液，浸没材料，盖上盖子，于37℃水浴中保温几分钟至过夜。

4．取出材料，用75%的乙醇漂洗，或放入FAA固定液中20min。

5．先后用20%乙醇，50%乙醇个浸泡20min以上。

6．显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为Gus表达位点。

7．染色后的材料可浸入含80%乙醇的FAA固定液中保存。

GUS组织化学染色

GUS组织化学染色试剂：GUS染色液（200ml）：X-Gluc 100mg； 50mM k4[Fe(CN)6] 2 ml; 50 mM k3[Fe(CN)6] 2 ml；0.5 mol/L EDTA (pH 8.0) 4 ml; 甲醇 5ml；Triton X-100 0.2ml; 加入50mM 磷酸缓冲液（pH 7.0）补足200ml；无菌膜过滤。

X-Gluc：100mg溶于1ml DMF，保存于4℃50 mM k3[Fe(CN)6]： 0.824g溶于50ml ddH2O，避光保存于4℃50 mM k4[Fe(CN)6]： 1.056g溶于50ml ddH2O，避光保存于4℃50mM 磷酸缓冲液（pH 7.0）：先配:0.2M Na2HPO4：称取71.632g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水中，0.2 M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水中，然后：62ml的0.2M Na2HPO4与38ml的0.2 M NaH2PO4混合，加蒸馏水稀释至400ml。

二、实验步骤：1. 取新鲜烟草叶片组织于90%丙酮中固定20 min；2. 弃丙酮，加入适量GUS染色液（不含X-Gluc）润洗一遍；3. 加入GUS染色液，真空处理20 min；4. 37℃孵育24h；5. 无水乙醇浸泡24h，除去叶绿素；6. 观察结果并照相。

烟草叶片GUS活性的荧光定量测定MrBAS基因启动子转基因烟草叶片组织器官的GUS活性定量分析以GUS蛋白荧光测定完成,表2 GUS蛋白提取缓冲液TabIe.2 GUS protein extraction buffer组分母液体积50 mmol/L 磷酸缓冲液(pH 7.0) 0.1 mol/L 磷酸缓冲液(pH 7.0) 50 mL10 mmol/L Na2-EDTA 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0) 2 mL10 mmol/L β-巯基乙醇β-巯基乙醇100μl0.1% TritonX-100 Triton X-100 100μl0.1% SDS 10% SDS 1 mLddH20 补足 100 mL烟草叶片总蛋白的提取1) 取超低温冰箱保存的样品材料并用液氮充分研磨成粉末，分别称取1.2g样品组织于离心管中；2) 向离心管中分别加入1mL GUS蛋白提取缓冲液，涡旋混匀，冰上放置2h至沉淀；3) 4℃ 6000 r/min 离心 20min，收集上清液；4) 滤纸过滤，去除植物组织残渣；5)吸取200μl上清液，保存在4℃冰箱中待用(考虑到GUS蛋白的活性,时间以一周内为宜)。

gus染色原理与方法

gus染色原理与方法
嘿，你问的是GUS染色原理与方法呀！那咱就来好好说道说道。

先说原理哈，GUS染色呢，其实就是利用了一种酶，叫β-葡萄糖苷酸酶。

这玩意儿能把底物分解，然后产生一些有颜色的物质，这样我们就能通过颜色变化来观察它在细胞或者组织里的情况啦。

就好比一个小侦探，通过特殊的手段让目标显现出来。

那方法呢，也不复杂。

首先得准备好材料，像要染色的样本啦，GUS染色液之类的。

然后把样本处理好，放到合适的环境里，让它和染色液充分接触。

这时候，那个神奇的酶就开始工作啦，如果样本里有它，就会发生反应，慢慢出现颜色变化。

比如说，你要是观察植物的某个组织，把它放在染色液里，过一会儿，可能就会看到有蓝色或者其他颜色出现，这就说明GUS酶在起作用啦。

我给你举个具体例子哈。

比如说你想研究一种植物的根，看看GUS酶在根里面是怎么分布的。

你就把根取出来，小心地处理一下，别弄坏了。

然后把它放到GUS染色液里，就像给它洗个特殊的澡一样。

接着你就耐心等着，可能过几个小
时，你再去看，哇，根的某些部位就变色了。

可能是在根尖啊，或者是根的某个特定区域。

这就告诉你，这些地方有GUS 酶的存在，说不定它在这些地方正忙着参与什么重要的生理过程呢，比如吸收营养啥的。

通过这种方法，我们就能更清楚地了解生物体内的一些情况啦，是不是还挺有意思的呀！反正就是这么个原理和方法，你多试试，多观察观察，就能掌握得更好啦！哈哈，希望你能顺利搞定GUS染色哦！。

gus染色原理

gus染色原理Gus染色原理：探索细胞内的奥秘引言：Gus染色原理是一种常用的细胞染色技术，它能够帮助研究人员观察和分析细胞中特定化合物的存在与分布情况。

本文将深入探讨Gus染色原理的基本概念、实验步骤和应用领域。

一、Gus染色原理的基本概念Gus染色原理是基于β-葡萄糖苷酶（Gus）酶的活性，通过其与葡萄糖苷酶底物X-葡萄糖苷（X-Gluc）的反应来实现细胞染色。

Gus 酶是一种广泛存在于真核生物和细菌中的酶，它能够催化底物X-Gluc的水解反应，产生可观察的蓝色沉淀。

二、Gus染色原理的实验步骤1. 样品处理：首先，需要准备待研究的细胞样品。

样品的获取可以通过组织切片、细胞培养等方式进行，确保样品的完整性和活性。

2. Gus染色液配制：将X-Gluc溶解在染色缓冲液中，制备Gus染色液。

染色缓冲液的配制需要根据实验需求来确定，一般包括pH 值的调节，以保证酶的活性。

3. 细胞染色：将样品浸泡在Gus染色液中，经过一定时间的反应，底物X-Gluc与Gus酶发生反应，生成蓝色沉淀物。

染色时间的长短应根据具体情况进行调整，以确保染色效果的最佳化。

4. 观察和分析：通过显微镜观察染色后的细胞，可以观察到蓝色沉淀物的存在和分布情况。

通过对细胞的形态、数量、位置等特征进行分析，可以进一步推测特定化合物的存在和功能。

三、Gus染色原理的应用领域1. 植物生物学研究：Gus染色在植物生物学研究中得到广泛应用。

通过染色观察植物组织中特定基因的表达情况，可以揭示基因在不同组织和发育阶段的活性，进而理解其在生长和发育过程中的功能。

2. 微生物学研究：Gus染色也在微生物学研究中发挥重要作用。

通过对细菌、酵母等微生物中特定基因的表达进行染色观察，可以研究其在适应环境、代谢调控等方面的功能。

3. 分子生物学研究：Gus染色可作为一种辅助手段，用于研究基因调控网络和信号传导途径。

通过观察Gus染色后的细胞，可以揭示基因在细胞内的表达模式和调控机制，为深入理解细胞功能提供重要线索。