硫酸软骨素的提取及分析鉴定

2. 2 仪器 红外光谱仪(BRUKER VECTOR33 型)德国Bruker 公司。 2. 3 方法 1) 预处理 :除去肉和油脂 2) 碱性复合酶酶解 :原料量 1 %碱性复合酶 55 ℃
酶解搅拌溶解 12h ; 3) 粗结晶 :复合酶酶解液调节 pH6. 5 ,于 70 %乙
醇结晶 ; 4) 胰酶酶解 : 原料量 1 %胰酶 pH8. 5 ,53 ℃酶解
Modern Scientific Instruments 2003 3
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3 CHS 分析鉴定
所测得的纯化样品红外光谱如图 2 所示 ,整个红 外光谱大致分为两个区域 :官能团区 (4000～1300cm )- 、1 指纹区 (1300～400cm - 1) ,与标准样品的红外光谱图 3 比较基本完全一致 。
2) 糖醛酸含量测定 :按硫酸2咔法唑[4] ; 3) 氨基糖含量测定 :按 Elson2morgan 法[5] ; 4) 硫酸基含量测定 :按玫棕酸钠法[6] ; 5) 分子量的测定 :按 Wasteson 法[7] ; 6) 钠 、钙含量测定 : 用原子吸收光谱 (1CP EMIS2
2 材料 、仪器与方法
2. 1 材料 牛软骨 ,市场采集 ;胰酶粉 (或活性鲜胰浆) ,苏州
生化制药厂 ;NaOH(cp) ,HC1 (cp) ,EtOH(cp) ,Ca (OH) 2 (cp) ,上海试剂厂 ;复合酶制剂 ,自制 。
收稿日期 :2002 - 12 - 23 作者简介 :宋国胜 ,男 ,工学硕士 ,从事多糖物质的研究及波谱分析工作 。 60
The Extraction , Analysis and Identif ication of Chondroitin Sulfate
Song Guosheng , Cao Zhennian (Analytical & Testing Center , South China University of Technology , Guangzhou 510640 ,China)
Key words Chondroitin sulfate ; extraction ; analysis
1 前 言
硫酸软骨素 (chondzitin sulfate , CHS) 是来自动物 喉骨 、鼻软骨 、气管骨等富含 CHS 的软骨组织的一类 重要的酸性粘多糖[1] 。有 CHSA ,C 和 D 三种异构体 。 它们均由 D2葡萄糖醛酸和 N2乙酰2D2氨基酸半乳糖组 成 ,只是硫酸基团位置不同 。60 年代后 ,国外将 CHS 用于治疗冠心病 ,临床效果满意 。目前还用于某些神 经性头痛 、神经痛 、关节痛 、偏头痛 、动脉粥样硬化等 症及链霉素引起的听觉障碍和肝炎的辅助治疗 ,此 外 ,还是化妆品的重要原料 。随着制备方法的不同 , 还开发出硫酸软骨素 (Chondroitin Polysulfate ,ChPS) 和 低分 子 硫 酸 软 骨 素 (Low Molecurlar Chondzoition Sul2 fare ,LMCHS) ,大大拓宽了 CHS 的临床应用范围 ,并增 强了它的药效 。本文详细研究了牛的硫酸软骨素的 提取及分析鉴定 。
对照 。 3. 3 CHS 的成份分析
1) 蛋白质含量测定 :按 Lowry 法[3] ;
[1 ] 林之藻 ,王凤山等. 生化制药学. 北京 :科学出版社 ,1998 ,245～246 [ 2 ] Dietrich C. P. , et al . ,J . Chronatogr 1997 ,130 :299 [ 3 ] Lowry O H , Rosebrough N J , Farr A L , et al . Protein Measutem Ent with
4h ; 5) 热处理 :85 ℃加热 15min ,过滤 ; 6) 酸处理 :调 pH2. 5 ,静止 2h 后过滤 ; 7) 超滤 :用 MNWC6000 中空纤维超滤浓缩至一半
体积 ; 8) 结晶 :调节 pH6. 5 ,于 70 %乙醇结晶 ; 9) 干燥 :55 ℃热风干燥 6h ; 10) 成品 :磨粉分装灭菌 。
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Biochem , 1962 , 4 :330～335 [5 ] Elson T , M organ W T J . Determination of Glucosamine and Chondrosam
3. 1 CHS 的红外光谱鉴定 3. 1. 1 测试方法
称取约 2mg 的样品 ,在红外灯的照射下 ,置于玛 瑙研钵中研磨 4～10min ,再和 150mg 左右干燥的溴化 钾粉末充分混合 ,继续研磨 2～5min 。将研磨好的混 合物粉末倒在硫酸纸上灌注于压膜中 ,抽真空 2min , 以免混入空气影响样品薄片的透明度 。缓慢加压至 10t ,保持 5min ,切断真空 ,缓慢除去压力 ,取出样品薄 片 ,放入样品架上 ,置于红外光谱仪内全波段扫描 ,绘 出红外光谱图 。 3. 1. 2 测试结果
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Hale Waihona Puke Baidu
含硫量 (干品汁)
(类) 白色粉末 ≥90 % pH5. 5～7. 5 ≤1000/ g 合格 ≤10 % 6. 1 %～6. 4 %
(类) 白色粉末 92 % pH6. 5 800/ g 合格 9. 3 % 6. 3 %
含氮量 (干品汁) 重金属
3. 05 %～3. 3 % ≤1. 0 ×10 - s
3. 2 % 6. 8 ×10 - 7
图 2 纯化样品的红外光谱图
4. 2 讨论 我们研究硫酸软骨素的生产工艺 ,得到一条适合
工业化生产技术及产品的检测 、鉴定方法 。
参考文献
图 3 标准样品的红外光谱图
3. 2 CHS 的纯度鉴定 琼脂糖电泳按 Dietrich[2] 法进行 ,标准品 CHS 为
Abstract The extraction , purity , analysis and identification of chondroitin sulfate of ox were studied in this paper. The method of preparation for chondroitin sulfate was developed too.
硫酸软骨素的提取及分析鉴定
宋国胜 曹珍年
(华南理工大学测试中心 广州 510640)
E2mail :songgs8 @163. net
摘 要 研究了牛的硫酸软骨素的提取 、分离 、纯化及分析鉴定 。开发了一条切实可行的生产硫酸软骨素的工 艺方法 。
关键词 硫酸软骨素 ;提取 ;分析 中图分类号 TQ033
Molecular Weight Distribution of Chondroitin Sulfate. J Chromatogr , 1971 , 59 :87～92 [8 ] AOAC International . Official Methods of Analysis < Modified > . 16th Edition , Method 50. 1. 15 , AOAC , Arlington , VA ,1995
SION SPECTROMETRY) 法[8] ;
4 结果与讨论
4. 1 硫酸软骨素质量指标测定结果 硫酸软骨素质量指标测定结果如表 1 所示
表 1 硫酸软骨素质量指标测定结果
项目
出口标准指标
测定结果
性状 含量 (干品汁)
( Elson2Morgan 法) 酸碱度
总菌数
蛋白质 (TCA 法) 水份
ine. J Biol Chem , 1933 , 17 : 265～268 [ 6 ] Tuulikki T , Hartiala K. Method for Determination of the Sulfate Content of
Glycosam Inlglycan. Anal Biocham , 1971 , 41 : 471～476 [ 7 ] Wasteson A. A method for the Determ Ination of the Molecular Weight and