硫酸软骨素的提取及分析鉴定

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硫酸软骨素

硫酸软骨素的提取和纯化工艺及其应用展望张蒙蒙 09生物工程（2）班摘要日前，由科技部会同国家发改委、财政部、教育部、中科院、中国工程院、自然基金会、中国科协等有关部门和单位，共同编制完成的《国家“十二五”科学与技术发展规划》正式发布。

其中，生物医药卫生领域的相关工作在规划中占重要地位。

在生物医药领域，各种动物源性的活性物质被大量利用以治疗各种困扰人类的疾病，如蟾蜍提取物、全蝎提取物、蜈蚣提取物及蛇胆提取物等。

本文就从动物软骨中提取的硫酸软骨素的生产工艺、分析方法及临床应用的新进展予以简单的描述，介绍了硫酸软骨素的来源、结构、性质及其生理功能，对硫酸软骨素的提取方法——中性盐法、碱提取法、酶提取法、超声波法﹑乙酸抽提法和纯化方法——溶剂法、季铵盐化合物沉淀法、超滤膜法、色谱法电泳法的具体工艺路线及其优缺点进行了综述。

关键词：硫酸软骨素；提取；纯化；生产工艺；分析方法；临床应用一、前言硫酸软骨素(Chondroitin sulfate)是一种酸性粘多糖，广泛存在于哺乳动物的软骨、喉骨、鼻骨和气管中。

硫酸软骨素是由葡萄糖醛酸和氨基己糖交替连结而成的双糖聚合物，它通常与蛋白质结合成糖蛋白的形式存在，当其水解时发生消去反应，连接硫酸软骨素与蛋白质中丝氨酸羟基的苷键断裂，可以得到游离态的硫酸软骨素。

硫酸软骨素为白色或微黄色粉末,具有吸湿性，易溶于水而成粘度较大的溶液，难溶于甲醇、乙醇、乙醚、丙醇、丙酮和冰醋酸等有机溶剂，并且遇热不稳定，乙酰基易发生水解脱落,在酸性条件下更易水解成不同聚合度的低聚糖。

硫酸软骨素具有降血脂、抗凝血、抗炎症及抗肿瘤等生理活性，临床上可用于预防动脉粥状硬化、提高机体免疫力、治疗风湿病和肾炎及由链霉素引起的听觉障碍。

硫酸软骨素与铜等金属离子结合可用于治疗皮肤病，与硝酸铋或氢氧化铝反应得到的络合物可用于治疗消化性溃疡，与苯甲酸酯、利多卡因或布比卡因作用生成的衍生物可用作麻醉剂。

作为食品添加剂，硫酸软骨素可用于食品的乳化、保湿和祛除异味。

硫酸软骨素含量测定方法

硫酸软骨素含量测定方法
硫酸软骨素是一种重要的生物活性分子，常用于保健品和药物中。

测定硫酸软骨素的含量是非常重要的，因为它可以确保产品的质量和安全性。

以下是几种常见的测定方法：
1. 光度法，光度法是一种常用的测定硫酸软骨素含量的方法。

在这种方法中，首先将硫酸软骨素与一种特定的试剂反应生成有色产物，然后使用分光光度计测定产物的吸光度，从而间接测定硫酸软骨素的含量。

2. 离子色谱法，离子色谱法是一种高效的测定硫酸软骨素含量的方法。

在这种方法中，样品中的硫酸软骨素会被分离并通过离子色谱柱，然后使用检测器检测硫酸软骨素的浓度。

3. 高效液相色谱法（HPLC），HPLC是一种高灵敏度和高分辨率的分析方法，也常用于测定硫酸软骨素的含量。

在这种方法中，样品中的硫酸软骨素会被分离并通过色谱柱，然后使用紫外检测器或荧光检测器进行检测。

4. 毛细管电泳法，毛细管电泳法是一种基于电泳原理的分析方
法，可以用于测定硫酸软骨素的含量。

在这种方法中，样品中的硫酸软骨素会在电场作用下被分离，并通过检测器进行检测。

总的来说，测定硫酸软骨素含量的方法有很多种，每种方法都有其优缺点。

选择合适的方法需要考虑样品的特性、实验条件和设备的可用性等因素。

在进行测定时，需要严格按照方法要求操作，以确保测定结果的准确性和可靠性。

硫酸软骨素含量测定方法研究进展

硫酸软骨素含量测定方法的研究进展摘要：综述了硫酸软骨素含量测定方法的研究进展。

含量测定方法包括比色法、色谱法、电泳法、原子吸收法、比浊法、配位滴定法及免疫法等。

硫酸软骨素的测定方法按其测定指标主要分为软骨素二糖、氨基己糖、葡萄糖醛酸、硫酸基和阴性基团5类。

对各种含量测定方法的原理和特点进行了介绍。

关键词：硫酸软骨素高效液相色谱醋酸纤维素薄膜电泳法硫酸软骨素(chondroitin sulfate，CS)系从动物软骨组织中提取、纯化所得的酸性黏多糖，具有降血脂、抗肿瘤、抗衰老、治疗关节炎、促进溃疡愈合、耳呜症及神经痛等多种作用，无明显的毒副作用。

在临床具有广阔的应用前景。

近年来，CS大量出口美国及欧洲，已成为出口量最大的生化医药产品之一。

CS的含量测定方法有许多种，每种含量测定方法均有其特点，但测定原理均是基于其组成的糖单位(D-葡糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖)、硫酸基以及酸性黏多糖的大分子性质。

在分子结构上，CS由D-葡萄糖醛酸和N-乙酞-D-氨基己糖以1, 3糖苷键连接形成重复二糖，二糖单位之间以1, 4糖苷键连接形成糖链，氨基己糖糖环的4位C或6位C可硫酸化，硫酸化后分别形成硫酸软骨素A(CS-A)和硫酸软骨素C(CS-C)。

本文对CS的含量测定方法进行综述，以便对不同CS测定方法及特点有一较全面的了解。

1.测定硫酸软骨素的指标物质根据CS的分子结构特点，研究出以CS某一化学成分为测定指标的多种方法，这些指标包括软骨素二糖、氨基己糖、葡萄糖醛酸、硫酸基、阴性基团等5类。

1.1 以葡萄糖醛酸为指标的测定方法在酸性条件下降解CS，生成与其软骨素二糖单位摩尔数相等的葡萄糖醛酸，再加入咔唑、间苯三酚和4-氨基-3-肼基-5-巯基-1, 2, 4，-三唑(AHMT)等色原物质与葡萄糖醛酸显色，最后测定反应液特定波长处吸收值，以葡萄糖醛酸或CS标准品为对照制作标准曲线，转换为葡萄糖醛酸含量，根据葡萄糖醛酸与软骨素二糖之间的分子量之比换算成CS含量。

硫酸软骨素质量标准及含量测定

硫酸软骨素质量标准及含量测定青岛大学药学系高华一、硫酸软骨素结构是种硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate,CS,是一种重要的天然酸性粘多糖。

硫酸软骨素是由D-葡糖醛酸和N-乙酰基-D-氨基半乳糖以β-1,3糖苷键结合而成的双糖,而双糖之间以β-1,4苷键连接而成生物大分子。

-14CS相对分子质量一般为5000~50000Da。

根据硫酸基在半乳糖上位置不同主要分为硫酸软骨素A(CSA硫酸软骨素C(CSC硫酸软骨素结构根据硫酸基在半乳糖上位置不同主要分为硫酸软骨素A(CSA和硫酸软骨素C(CSC硫酸软骨素A(CSA硫酸软骨素C(CSC硫酸基团在半乳糖的第4位C上硫酸基团在半乳糖的第6位C上二硫酸软骨素存在形式二、硫酸软骨素存在形式ChS的来源有陆产动物和海洋动物两大类。

陆产动物主要是牛、猪、羊和禽等软骨组织中,如喉骨、鼻中骨、气管、血管壁等,主要成分4-硫酸软骨素(CSA 。

海洋动物包括软骨鱼的软骨、海参和贝类等,主要成分6-硫酸软骨素(CSC。

贝类等主要成分6软骨中的硫酸软骨素与蛋白质相结合以蛋白多糖的形式存在组织中。

三、硫酸软骨素质量标准z USP32--美国药典29版硫酸软骨素(牛、猪、鸡、鲨鱼z JPC1997 --《日本药局方外标准》(1997硫酸软骨素(牛、猪、鲨鱼硫酸软骨素(牛猪鲨鱼z WS-10001-(HD-0894-2002硫酸软骨素A 钠z WS-10001-(HD-0892-2002 硫酸软骨素(供注射用 z WS-10001-(HD-0895-2002 硫酸软骨素A钠胶囊WS-10001-(HD-0896-2002 硫酸软骨素滴眼液WS-10001-(HD-0854-2002 复方硫酸软骨素片硫酸软骨素(USP32/JPC1997z :白色至乳白色z:牛、猪、鸡软骨◎硫酸软骨素钠◎澄清度无色透明外观白色乳白色z 理化指标来源牛猪鸡软骨◎硫酸软骨素钠:≥90% ◎澄清度:无色透明◎pH 值(1%溶液:5.5~7.5 ◎干燥失重:≤10.0% 氯化物硫酸盐◎氯化物:≤0.142% ◎硫酸盐:≤0.240%◎重金属:≤20 mg/kg ◎积灼残渣:23.0~30.0% ◎旋光度:-28°~-32°◎氮含量:2.5~3.8%z 微生物指标◎细菌总数:≤100 CFU/g ◎霉菌和酵母:≤10 CFU/g 微物指标◎沙门氏菌,大肠杆菌,葡萄球菌,致病菌:不得检出硫酸软骨素(USP32/JPC1997z :白色至乳白色z:鲨鱼软骨◎硫酸软骨素钠◎澄清度无色透明外观白色乳白色z 理化指标来源鲨软骨◎硫酸软骨素钠:≥90% ◎澄清度:无色透明◎pH 值(1%溶液:5.5~7.5 ◎干燥失重:≤10.0% 氯化物硫酸盐◎氯化物:≤0.142% ◎硫酸盐:≤0.240%◎重金属:≤20 mg/kg ◎积灼残渣:23.0~30.0% ◎旋光度:-12°~-18°◎氮含量:2.5~3.8%z 微生物指标◎细菌总数:≤100 CFU/g ◎霉菌和酵母:≤10 CFU/g 微物指标◎沙门氏菌,大肠杆菌,葡萄球菌,致病菌:不得检出硫酸软骨素A 钠猪软骨z外观:白色或微黄色外白色或微黄色z来源:猪软骨z理化指标◎硫酸软骨素钠:≥90% ◎澄清度:无色透明~◎硫酸盐:与标准硫酸钾溶液5.0ml对照液比较,不得更浓(0.5%◎重金属:≤20 mg/kg ◎平均分子量:35000500035000-5000 ◎旋光度:-27°~-33°◎氮含量:2.2~3.8%z微生物指标◎细菌总数:≤1000 CFU/g ◎霉菌和酵母:≤100 CFU/g ◎沙门氏菌,大肠杆菌,葡萄球菌,致病菌:不得检出硫酸软骨素(供注射用猪软骨z外观:白色或微黄色外白色或微黄色z来源:猪软骨z理化指标◎硫酸软骨素钠:≥90% ◎澄清度(5%溶液: A≤0.05640nm~◎硫酸盐:与标准硫酸钾溶液5.0ml对照液比较,不得更浓(0.5%≤20 mg/kg ◎氯化物:≤1.0%◎重金属:10%◎旋光度:-27°~-33°◎氮含量:2.5~3.8%z微生物指标◎细菌总数:≤1000 CFU/g ◎霉菌和酵母:≤100 CFU/g ◎沙门氏菌,大肠杆菌,葡萄球菌,致病菌:不得检出四、硫酸软骨素含量测定方法z各个国家对CS含量测定方法不尽相同。

硫酸软骨素的液质质测定方法

硫酸软骨素的液质质测定方法硫酸软骨素是一种常用的药物成分，广泛应用于医药领域。

为了确保药品的质量和稳定性，需要对硫酸软骨素进行液质质测定。

本文将介绍硫酸软骨素的液质质测定方法。

一、液质质测定的原理液质质测定是通过测定溶液中化合物的质量来确定其浓度。

对于硫酸软骨素的液质质测定，常用的方法是通过酸碱滴定法。

硫酸软骨素在酸性条件下可以与碘形成复合物，而硫酸软骨素的含量可以通过测定与碘的配位比来确定。

二、实验步骤1. 准备试剂和仪器：首先需要准备好硫酸软骨素样品、稀硫酸溶液、0.1mol/L碘溶液、淀粉指示剂、滴定管、容量瓶等实验用品。

2. 样品预处理：将硫酸软骨素样品溶解在水中，并进行适当的稀释，使其浓度适合测定。

3. 酸化反应：将适量的硫酸软骨素溶液取出，加入适量的稀硫酸溶液，并加热至沸腾，使硫酸软骨素与碘反应生成复合物。

4. 滴定反应：将酸化反应后的溶液冷却至室温，加入适量的碘溶液，同时加入少量的淀粉指示剂。

开始滴定，直至出现深蓝色终点。

5. 计算结果：根据滴定所消耗的碘溶液的体积，计算出硫酸软骨素的含量。

三、注意事项1. 实验过程中要注意安全，避免接触皮肤和吸入气体。

2. 滴定时要注意滴定液的滴加速度，避免过快或过慢导致误差。

3. 实验仪器和容器要清洁干燥，以避免杂质的干扰。

4. 实验操作要规范，严格按照实验步骤进行。

四、实验结果分析通过液质质测定方法，可以准确测定硫酸软骨素的含量。

实验结果可以用于判断药品的质量和稳定性，以及控制药品的生产工艺和质量标准。

总结：硫酸软骨素的液质质测定方法是通过酸碱滴定法，根据硫酸软骨素与碘形成的配位比来确定其含量。

实验操作要规范，注意安全，并严格按照实验步骤进行。

通过该方法可以准确测定硫酸软骨素的含量，用于药品质量控制和生产标准。

这种方法简单、快速、准确，被广泛应用于药品生产和质量检验中。

硫酸软骨素的提取

硫酸软骨素的提取蛋壳膜硫酸软骨素的提取工艺及其优化摘要：以蛋壳膜为原料，采用稀碱与酶解相结合的方法提取硫酸软骨素。

以胰蛋白酶、胃蛋白酶分解去除杂蛋白，经酒精沉淀并干燥后得到产品。

实验得到的最佳提取工艺为：料液比１：１．５，碱浓度５％，碱提温度４０℃，胰蛋白酶、胃蛋白酶的用量分别为１．５％、０．８％，ｐＨ值分别为８．２和５．５，酶的各自最适条件作用时间均为２．０ｈ。

关键词：硫酸软骨素；蛋壳膜；胰蛋白酶；胃蛋白酶Optimization of Extraction Technology of Chondroitin Sulfate from Eggshell MembraneLIU Guo-qing，LING Qing-zhi，SUN Jun-fei(School of Biotechnology and Food Engineering, Hefei University of Technology, Heifei 230009, China)Abstract ：Chondroitin sulfate was extracted from the eggshell membrane with a method of dilute alkali-enzyme hydrolysis.The product of chondroitin sulfate was gotten after ethanol disposition and desiccation by eliminating the protein with trypsinand pepsin. The resultsshowed the optimumconditions of weight proportion 1:1.5 (material:liquid), alkali concentration 5%,temperature 40 ℃. Dosage of trypsin and pepsin 1.5% and 0.8% respectively, pH value 8.2 and 5.5 respectively and reactiontime 2.0 h respectively.Key words：chondroitin sulfate；eggshell membrane；trypsin；pepsin硫酸软骨索(chondroitin sulfate，简称CS)是来自于动物软骨和鸟类卵的壳膜等组织的一类重要的酸性粘多糖即糖胺聚糖[1]。

硫酸软骨素提取工艺的研究

硫酸软骨素提取工艺的研究硫酸软骨素提取工艺的研究摘要：硫酸软骨素是一种重要的天然生物高分子，在药物、保健品、食品添加剂等领域有广泛应用。

本文通过研究硫酸软骨素的提取工艺，探讨了影响提取效果的因素，优化了提取过程，提高了硫酸软骨素的提取率和品质。

1. 引言硫酸软骨素是一种含硫酸基的天然多糖，主要存在于动物软骨和鱼鳞中。

它具有优良的生物活性，被广泛用作药物、保健品和食品添加剂等。

在提取硫酸软骨素的过程中，工艺条件对提取率和品质有着重要影响。

因此，研究硫酸软骨素的提取工艺，优化提取条件，对于提高硫酸软骨素的利用率具有重要意义。

2. 提取工艺材料与方法2.1 提取原料选择新鲜鱼鳞作为提取原料，通过初步研究发现，鱼鳞中含有较高的硫酸软骨素。

2.2 提取方法将新鲜鱼鳞切碎，加入适量酶解剂，用搅拌器混合酶解，促使软骨素从鱼鳞中释放出来。

然后，经过酶解一定时间后，用破壁机破碎鱼鳞细胞壁，进一步释放软骨素。

最后，通过过滤和浓缩等步骤，得到硫酸软骨素浓缩液。

3. 影响因素分析3.1 酶解时间在酶解过程中，不同的酶解时间会对软骨素的提取率和品质产生影响。

通过一系列实验，发现酶解时间越长，软骨素的提取率越高，但超过一定时间后，提取效果变化不大。

因此，在实际操作中，选取适宜的酶解时间可以提高提取效率。

3.2 酶解剂比例酶解剂对软骨素的提取率和品质同样具有重要影响。

通过调整酶解剂的比例，发现当酶解剂比例为1:10时，软骨素的提取率最高，且品质最好。

因此，选取适宜的酶解剂比例也是提高提取效果的关键步骤。

4. 工艺优化通过对影响因素的分析，我们总结出一套优化硫酸软骨素提取工艺的方法。

首先，选择新鲜鱼鳞作为提取原料；其次，进行适当的酶解和破壁处理，以促使软骨素释放出来；最后，通过过滤和浓缩等步骤，得到硫酸软骨素浓缩液。

此外，还可以通过合适的酶解时间和酶解剂比例，提高提取效率和品质。

5. 结论本文通过研究硫酸软骨素提取工艺，探讨了影响提取效果的因素，并优化了提取过程，提高了软骨素的提取率和品质。

硫酸软骨素的制备及其示波极谱分析法的研究

硫酸软骨素的制备及其示波极谱分析法的研究第一部分硫酸软骨素的制备摘要：本文用稀碱浓盐酸的综合浸提法工艺生产硫酸软骨素。

硫酸软骨素的生产是参照刘智等报道的优化实验：浸提、盐解、稀释、沉淀、干燥等步骤，并进行了一些改进。

?关键词：硫酸软骨素；制备硫酸软骨素(ChS)是从动物喉骨等软骨组织提取出来的一种粘多糖类药物［1］?。

自上世纪60年代以来，国外用来防治冠心病。

目前还用于某些神经性头疼、关节疼以及由庆大霉素和丁胺霉素等引起的听觉障碍及肝炎的辅助治疗［2］?。

它有很好的医用价值，长时间以来倍受人们的普遍关注。

因此提供一个快速简便的制备方法，对ChS的生产和应用都具有重要意义。

ChS生产工艺较多，稀碱或浓碱，稀碱稀盐等都要酶解和活性炭脱色等处理才能达到口服标准［3］?。

我们通过研究，发现刘智等报道的稀碱浓盐法工艺生产具有优越性，有生产实际价值，可以省去酶解脱色步骤并提高收率和纯度。

但是产品难过滤且最终产品颜色较深。

为摸索最佳实验条件，我们进行了一些实验并作了改进。

取得了满意的效果，供开发疗效较强的ChS参考和进一步完善。

?1、实验部分?1．1 仪器与试剂?恒温磁力搅拌器电热鼓风箱（上海市上海县第二五金厂）20%NaCl的溶液10%的盐酸10%NaOH的溶液丙酮乙醚乙醇（92%以上）滑石粉或炭粉所用水均为一次蒸馏水。

?1．2 实验方法?1.2. 1 浸提取ChS粗品于干净的烧杯中，加入三倍原料量的20%NaCl溶液浸没。

用10%的NaOH溶液调pH值12―13，加热至40℃恒温搅拌7小时。

?1.2.2 盐解用10%的盐酸调pH值5―6，加入5%原料量的滑石粉，搅拌后，迅速升温至90℃,恒温20min,速降温至40℃以下。

?1.2.3 稀释将盐解液放置12小时，抽滤去残渣，调滤液pH值6―7，加滤液量3―5倍的二次水稀释。

?1.2.4 沉淀、干燥在稀释液中加入92%以上的乙醇，使乙醇的浓度为60―80%，摇匀，放置2h左右。

硫酸软骨素含量的测定方法--HPLC法

液相色谱法GB/T 20365-2006该法的直接分析对象是硫酸软骨素分子本身，不同的硫酸软骨素有不同的保留时间，根据硫酸软骨素的特性进行色谱柱分离，通过色谱柱分离后定量测定CS含量，同时可检测CS产品纯度。

该法专属性强、精密度和准确度较高，样品溶解可直接测定CS含量以及确定CS纯度。

但要考虑到自己的CS含量可能不纯，到时候可能会出现杂峰。

酶解-液相色谱法（药典-硫酸软骨素钠）CS钠在硫酸软骨素ABC酶作用下，酶解为三种不饱和的二糖，再通过色谱柱分离后定量测定氨基己糖和葡萄糖醛酸的含量。

此法优点是可以根据硫酸软骨素A、B 和C 的量判断产品软骨的来源。

猪来源的硫酸软骨素A与C 的比值约5.5；牛的比值约1.5；鸡的比值约4.6；鱼的比值约0.5。

如果胶原蛋白中不含有葡萄糖醛酸和氨基己糖的话，该方法就是最适合的方法了。

比色法（国家药监局-WS-10001-HD-0892）-2002）根据Elson-Morgan反应进行。

用此反应测定分子组成中的2-氨基-D-葡萄糖和2-氨基-2-脱氧-半乳糖，包括用碱性乙酰丙酮处理生成的几个生色基团与对二甲氨基苯甲醛（Ehr lich’s 试剂）反应生成红色化合物，以分光光度法测定吸收值，同时用氨基己糖制备标准曲线。

操作时，先用HCI水解硫酸软骨素产生氨基己糖，在碱性条件下与乙酰丙酮反应，再与对二甲氨基苯甲醛缩合，生成红色化合物。

该法操作繁琐，影响因素较多，如水解时间、保温时间、pH值、浓度等，不仅不能准确测定CS的主体结构的真实含量，而且结果重现性不好。

因为待测物中还含有羟脯氨酸等氨基酸，影响含量测定，故在本测试中不适用。

改善的Briefly, in this procedure the polysaccharide solution was hydrolyzed by heating in 6 N HCI at 95°C for 4 hr. The hydrolyzate was dissolved in distilled water to a final concentration of about 100μg/ml and 1 ml of the dissolved hydrolyzate was used for each separate determination. The solution of monosaccharides was then heated at 95°C at pH 9.8 and successively reacted with 2,4-pentanedione (acetylace- tone, Fisher Scientific, Fair Lawn, N.J.) and with p-dimethylamino benzal-dehyde (DAB) (Fisher Scientific, Fair Lawn, N.J.) until a red chromagen adduct was formed. The concentration of chromagen was determined spectropho-tometrically at 527 nm (Model 6-20A Spectrophotometer, Coleman Instruments, Maywood, Ill.).Our modification consisted in replacing 95% ethanol (Commercial Solvents, Terre Haute, Ind.), the solvent commonly used in preparation of the DAB solution (Ehrlich’s reagent), with 2-propanol (Certified ACS, Spectranalyzed, Fisher Scientific, Fair Lawn, N. J.). This replacement improved the procedure by reducing significantly the color developed by the DAB solution (blank) in the absence of the polysaccharide unknown. Use of 2-propanol in place of 95% ethanol (100% ethanol, Commercial Solvents, Terre Haute, Ind., was also tried but found unsatisfactory) increased the signal/ noise ratio of the spectrophotometric reading by a factor of 5 through the entire range of concentration of the polysaccharide.Elson-morgan方法标准差为9%。

硫酸软骨素生产工艺

硫酸软骨素生产工艺
硫酸软骨素（chondroitin sulfate）是一种具有生物活性的多糖，广泛应用于医药领域。

下面将介绍硫酸软骨素的生产工艺。

硫酸软骨素的生产通常采用软骨组织提取法。

具体工艺如下：
1. 选材：选择新鲜、干净、成熟的动物软骨作为原料，如鸡、鹅、牛等。

2. 清洗：将软骨进行清洗，去除表面的杂质。

3. 粉碎：将清洗后的软骨进行粉碎，使其成为均匀的颗粒状。

4. 萃取：将软骨颗粒放入锅中，加入适量的水，然后进行煮沸。

在煮沸的过程中，软骨中的硫酸软骨素会溶解在水中。

5. 过滤：将煮沸后的软骨溶液进行过滤，去除其中的固体颗粒和杂质。

6. 浓缩：将过滤后的软骨溶液进行蒸发浓缩，使得溶液中的硫酸软骨素含量增加。

7. 沉淀：通过加入盐酸或硫酸等沉淀剂，使溶液中的硫酸软骨素发生沉淀。

8. 分离：将硫酸软骨素沉淀与溶液分离，可以使用离心机等分离设备进行分离。

9. 洗涤：将硫酸软骨素沉淀进行洗涤，去除其中的盐酸或硫酸等残留物。

10. 干燥：将洗涤后的硫酸软骨素沉淀进行干燥，使其达到所
需的含水量。

11. 粉碎：将干燥后的硫酸软骨素进行粉碎，使其成为细小的
颗粒状。

12. 包装：将粉碎后的硫酸软骨素进行包装，以便存储和运输。

以上就是硫酸软骨素生产的一般工艺流程。

生产过程中需要注意卫生和质量控制，确保产品的安全和有效性。

鸡胸软骨硫酸软骨素的提取及分离纯化

（500000），T110（110000），T70（70000），T40（40000）， T20（20000），T10（10000），葡萄糖测定 Vt，蓝色葡聚糖测定 V0，流动相为 0.1 mol/L，流速 0.9 mL/min，检测器为 Waters2410 示差折光检测器，温度 45℃；
1.2.6 硫酸软骨素的红外光谱分析溴化钾压片，4000～400 cm-1 扫描。
2.1 软骨各营养成分含量由表 3 可以看出，鸡胸软骨中主要成分为蛋白质和
碳水化合物。蛋白质中主要是胶原蛋白、糖蛋白和蛋白
聚糖等，而碳水化合物中主要为硫酸软骨素、透明质酸及其他生物活性多糖[9]。
表 3 软骨主要成分含量
Table 3 Main ingredients of cartilage
/%
1.1.2 试剂木瓜蛋白酶，生化纯；硫酸软骨素 A，葡萄糖醛酸
标准品，乙酰氨基葡萄糖标准品、间羟基联苯（Sigma 公司）；732#阳离子交换树脂（天津市科密欧化学试剂有限公司）；Sephacryl-300HR，（Phamacia 公司）；三氯乙酸等皆为分析纯。
1.1.3 仪器 Waters2410 型高效液相色谱仪(检测器 Waters 2410
方差来源
模型 A-温度 B-pH 值 C-时间
AB AC BC A2 B2 C2
残差
失拟项
净误差
平方和
5.69 1.49 0.57 8×10-5 8×10-4 0.064 4.5×10-4 1.52 0.63 0.035 0.100 0.078 0.021
自由度
9 1 1 1 1 1 1 1 1 1 10 5 5
0 引言
畜禽软骨，如猪喉软骨、牛鼻软骨和鸡胸软骨等，是动物产品来源的主要副产物之一，它们富含硫酸软骨素（Chondroitin sulfate, ChS）、糖蛋白和胶原蛋白。其中 ChS 主要由 D-葡萄糖醛酸（GlcA）和 N-乙酰-D-氨基半乳糖构成。根据硫酸基在葡萄糖醛酸和半乳糖上的位置和多少的不同，将其分为 4 硫酸软骨素（Ch4S，硫酸基在氨基半乳糖的第 4 位 C 上）和 6 硫酸软骨素（Ch6S，硫酸基在氨基半乳糖的第 6 位 C 上），以及硫酸软骨素 E （Ch4,6S，硫酸基在氨基半乳糖的第 4 位和 6 位 C 上）等。它具有抗炎、抗癌、降血脂和抗粥样斑块形成等药理作用，已应用于医药、功能性食品、生物材料，以及化妆品原料等领域[1-3]。而且，其生物活性随结构变化而变化[4]。但是，目前 ChS 生产工艺简单，主要用碱提取，产率低，并且污染严重[5,6]，特别是对鸡胸软骨硫酸软骨素的结构及功能之间的关系研究尚不多，本文主要采用酶法提取，运用中心组合设计和响应曲面法（response surface methodology）优化酶解工艺参数，以提高产率，并进行纯化和初步结构分析，为其构效关系研究和软骨综合开发利用提供理论基础。

硫酸软骨素提取

硫酸软骨素提取硫酸软骨素是一种在医疗、保健和美容领域中广泛使用的天然成分。

提取硫酸软骨素的方法很多，包括胶体溶液扩散、硫酸法提取、酶法提取、高压水法提取等。

在这篇文章中，我们将重点介绍硫酸法提取硫酸软骨素。

1. 硫酸法提取硫酸软骨素的原理硫酸法提取硫酸软骨素是利用硫酸的强酸性，将软骨中的硫酸软骨素分离和提取出来的方法。

当软骨样品与浓硫酸反应时，硫酸软骨素中的硫酸基被硫酸酸化，产生如下反应：C6H12O6·SO3H + H2SO4 → C6H10O5·SO3H2 + H2O此反应将硫酸软骨素分离出来，从而实现提纯。

2. 硫酸法提取硫酸软骨素的步骤及方法(1) 材料准备提取硫酸软骨素的样品可以来自动物软骨，如猪的生骨、脊椎骨和坯骨，或者鱼骨等。

在选用样品时，需要确保样品来源合法、质量优良，以确保提取到的硫酸软骨素质量优良。

(2) 去除脂肪与残余组织将软骨样品切割成小块并去除脂肪和残余组织，排除干扰因素以便于提取。

(3) 酸性处理将软骨样品溶于浓硫酸中，然后放置在85℃下加热6-8小时。

此过程中需要不断搅拌以确保反应充分均匀。

(4) 开始提取待软骨样品在高温下过硫酸化之后，加入冰水并不断搅拌，使硫酸软骨素在水中形成白色或灰色固体沉淀，以进行提纯和过滤。

(5) 水洗净化在将硫酸软骨素从溶液中提取出来后，需要经过水洗净化。

直接用水冲洗，直至PH值达到7左右时，就可以达到最优效果。

(6) 干燥提取在提取出硫酸软骨素后，需要将其进行干燥。

将提取的硫酸软骨素过滤干燥后，如有必要，可以进行粉碎、筛分等处理，以便于储存或使用。

3. 硫酸法提取硫酸软骨素的优点和局限性硫酸法提取硫酸软骨素的优点是，步骤简单，产量高，成分纯净，符合生产和制备的需求。

然而，其也存在一些局限性。

主要表现在硫酸会对环境和人体产生污染和危害。

同时，在提取过程中还需要注意控制反应温度、时间等参数，否则会影响硫酸软骨素的成分和产量。

鲟鱼骨中硫酸软骨素的提取及测定

ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｔｒｅａｔｍｅｎｔｔｉｍｅ．ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＮａＯＨａｎｄｍａｔｅｉａｒｌｌｉｑｕｉｄｒａｔｉｏｏｎｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎｓｕｌｆａｔｅｃｏｎｔｅｎｔｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．ａｎｄｔｈｅｎｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｓ：ｔｈｅｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｔｒｅａｔｍｅｎｔｔｉｍｅｗａｓ３０ｍｉｎ．ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＮａＯＨｗａｓ２．０％ａｎｄｔｈｅｍａｔｅｉａｒｌｌｉｑｕｉｄｒａｔｉｏｗａｓ１：８．Ｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｏｆｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎｓｕｌｆａｔｅｗａｓｇｏｏｄｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ１０．０ —１ｏｏ０ｍｇ／Ｌ．Ｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｌｉｍｉｔｗａｓ２．０ｍｓ／ｋｇ．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｉｅｒｓｗｅｒｅｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ９２％～１０１％ａｎｄＲＳＤｗａｓ１．０７％．Ｔｌｌｉｓｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ．

碱_酶法提取硫酸软骨素的工艺研究_吴枫楠

第29卷第1期2010年1月食品与生物技术学报Journal of Food Science and BiotechnologyV ol.29 N o.1Jan. 2010文章编号:1673-1689(2010)01-0081-03收稿日期:2008-11-04作者简介:吴枫楠(1982-),男,蒙古族人,吉林人,助理工程师,主要从事生物技术研究及新产品研发工作。

Email:w unan8866@163.co m碱)酶法提取硫酸软骨素的工艺研究吴枫楠(吉林龙谷生物科技有限公司,吉林132101)摘要:研究以猪软骨组织为原料,采用碱液提取和酶解相结合的方式提取硫酸软骨素。

通过对影响碱液提取效率和酶解效果因素的研究,确定了碱液提取的最佳条件为:碱液的体积分数715%、提取温度为50e 、提取时间2h 、提取2次。

酶解的最佳条件为:采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的混合酶1B 1(w B v )、添加质量分数110%,pH 值8、提取36h 。

关键词:硫酸软骨素;碱)酶法;木瓜蛋白酶;胰蛋白酶;猪软骨中图分类号:Q 81文献标识码:AExtraction of Sulphuric Acid Cartilage Biotin by Alkal-i Enzyme ProcessWU Feng -nan(R ongo o Jilin Bio lo gical T echno log y Co.L td.,Jilin 132101,China)Abstract:This aims of this study is to develop an efficient extraction process o f chondroitin sulfate from pig cartilage by Alkal-i enzy me hydr olysis.For this,the optim um co nditions w er edeter mined and listed as fo llow s:Density 715%,T em perature 50e ,T im e 2h,tw o times.the optim um conditions to ex tracted enzy me are as follow :M ixed enzy me w ith quince protein enzym e and try psin(1B 1)、Additive Quantity:110%,pH =8、Extracting 36h.Key words:chondroitin sulfate,alkal-i enzy me m ethod,quince pr otein enzym e,tr ypsin,pig cartilage硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate,简称CS)是存在于动物软骨组织中的多种酸性多糖的混合物,主要通过共价键与核心蛋白质相连,以蛋白聚糖的形式存在。

硫酸软骨素含量的测定方法

含量测定参考文献《3、（比色法，探讨其原理和操作步骤及注意事项）硫酸软骨素含量测定法的说明与探讨》方法原理：硫酸软骨素先用盐酸水解生成氨基己糖，然后在碱性条件下与乙酸丙酮反应，生成几种色原(Chromogen)—一色素的无色前体，再与对二甲氨基苯甲醛的盐酸醇溶液(Ehrlich试剂)反应产生红色，以盐酸氨基葡萄糖为对照品，用比色法测。

这个方法是Elson和Morgan 1933 年首先提出的，故其反应称Elson–Morgan反应。

在一定条件，氨基葡萄糖与氨基半乳搪的吸收系数没有明显的差别，故在本方法的条件下，虽然硫酸软骨素经水解后产生的氨基己糖是氨基半乳糖，但仍能以氨基葡萄糖为对照品应该注意在不同条件下，两种氨基己糖的吸收系数可有明显不同。

操作的注意事项与说明无醛乙醇的制备测定时必须用无醛乙醇，因加乙酰丙酮后生成的色原能与乙醇中的醛反应，影响测定结果供试品溶液的制备供试品溶液的制备原理是供试品先用盐酸水解，然后用氢氧化钠溶液中和至中性并稀释后，取其滤液使用。

技术的关键是水解的程度，水解不够则氨基己糖不能充分释出，但如反应过度，则部分氨基己糖会在强酸加热条件下破坏，所以，水解所用盐酸的浓度，一定量盐酸情况下所溶解供试品的量，水解反应的温度和时间都应该严格掌握，才能使测定的重现性良好。

水解时须加塞，以防止盐酸挥发，保持其恒定的浓度。

加热时应保持水浴温度恒定在100℃，准确水解2h，并在反应结束后立即将容量瓶取出水浴锅，冷却、中和和稀释都要连续进行。

乙酰丙酮反应的操作在加乙酰丙酮后，为防止其挥发以保证反应完全，必须密塞。

但要在放入水浴后1min，使气压平衡再加塞，以防加塞后放入水浴加热导致塞子被高于试管内容物的液面，试管底部不要与水浴锅底接触，以保证反应温度准确，乙酰丙酮的作用是使氨基己糖乙酰化而生成色原，故乙酰丙酮试液的浓度，配制比试液所用碳酸钠溶液的浓度以及此试液的加水量，都要严格掌握。

对照品溶液的制备精密称取经105℃干燥至恒重的盐酸氨基葡萄糖对照品0.1g，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。

实训硫酸软骨素的提取分离

实训硫酸软骨素的提取分离硫酸软骨素，为酸性黏多糖，白色粉末，无臭，无味，易吸湿，易溶于水，不溶于乙醇和丙酮等有机溶剂，遇水即膨胀或成黏浆，对热较不稳定。

其分子式为：(C14H21NO14S)n。

软骨素由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-半乳糖胺组成的黏多糖。

硫酸软骨素是软骨素的硫酸酯，是构成结缔组织的主要成分，为澄清脂质。

硫酸软骨素具有广泛的药理、生理作用，如可调血脂而防治动脉粥样硬化，对神经有营养和保护作用而用于神经痛和防治链霉素引起的听觉障碍，硫酸软骨素亦广泛地用于关节病的防治。

硫酸软骨素广泛存在于人和动物软骨组织中。

其药用制剂主要含有硫酸软骨素A和硫酸软骨素C两种异构体，是由动物喉骨、鼻中隔、气管等软骨组织提取制备。

不同品种、年龄动物的软骨及不同部位的软骨中硫酸软骨素的含量不同。

本次实训利用酶法提取硫酸化软骨素，硫酸化软骨素经除杂粉碎后加胰酶浸提，活性炭脱色，乙醇沉析分离后可制得硫酸化软骨素粗品，再利用金属阳离子Na+与阴离子结合成沉淀除去杂质，进一步精制得硫酸化软骨素纯品，并通过苯酚硫酸法进行多糖的含量测定。

[任务实施］一、准备工作1.建立工作小组，制定工作计划，确定具体任务，任务分工到个人，并记录到工作表。

2.收集硫酸软骨素的提取分离工作中必须信息，掌握相关知识及操作要点，与指导教师共同确定出一种最佳的工作方案。

3.完成任务单中实际操作前的各项准备工作。

（1）材料准备鸡软骨（2）试剂2%氢氧化钠溶液、6mol/L盐酸、活性白土、活性炭、胰酶、95%乙醇、无水乙醇、苯酚、浓硫酸、甲苯胺、CTAB、葡萄糖标准品、α-萘酚、NaCl。

（3）器具烧杯、布氏漏斗、抽滤瓶、分液漏斗、量筒、离心机、水浴锅、透析纸、滤纸、组织捣碎机、不锈钢锅、消化罐。

二、操作过程（一）操作流程见图1。

图1硫酸化软骨素制备操作流程（二）操作步骤1.提取将软骨洗净煮沸，除去脂肪和其他结缔组织，粉碎机粉碎后，加入4倍量的2%氢氧化钠溶液搅拌提取2h，过滤，滤渣再用2倍量的2%氢氧化钠溶液提取12h，过滤，合并两次提取液。

硫酸软骨素提取及质量分析

本文行业背景和研究内容161行业背景162研究内容10引言1221实验试剂及仪器12211实验流程12212实验材料及试剂12213实验仪器与设备1322硫酸软骨素提取方法1323硫酸软骨素各项指标测定方法14231葡萄糖醛酸含量测定方法14232样品纯度测定方法14233蛋白质的标定方法14233脂肪含量测定方法15234水分含量测定方法15235ph测定方法1631硫酸软骨素中葡萄糖醛酸含量分析1632硫酸软骨素纯度分析1733硫酸软骨素中蛋白质含量分析1834脂肪含量测定结果及分析1935水分含量ph值的测定结果及分析2036硫酸软骨素提取率测结果和外观性状分析2137硫酸软骨素光谱分析2441结论2442展望25参考文献28人工养殖鲟鱼头软骨提取硫酸软骨素质量分析摘要硫酸软骨素作为动物蛋白聚糖的代表物质主要存在于动物的喉骨鼻软骨气管等结缔组织中
人工养殖鲟鱼头软骨提取硫酸软骨素质量分析
目录摘要 ............................................................................................................................................... I Abstract ............................................................................................................ II 1 文献综述 ........................................................................................................................

硫酸软骨素的提取与生物活性研究

硫酸软骨素的提取与生物活性研究近年来，随着人们对健康意识的增强，越来越多的人开始关注保持关节健康。

而软骨是维持关节正常功能的重要组成部分，而硫酸软骨素则是软骨的重要组分之一。

硫酸软骨素具有促进软骨修复和保护关节健康的作用，因此，其提取与生物活性研究引起了广泛关注。

提取硫酸软骨素的方法有很多种，其中常用的方法包括酶解法和酸法。

酶解法通过使用酶类降解软骨组织，然后从中提取硫酸软骨素。

酸法则通过使用酸性溶液将软骨骨架溶解，从中提取硫酸软骨素。

这两种方法各有优势和劣势，研究者根据具体需要选择合适的方法进行提取。

提取硫酸软骨素的关键在于寻找合适的软骨组织源。

目前常用的软骨组织来源主要包括鱼软骨、牛软骨和鸡爪软骨等。

不同的软骨来源所含的硫酸软骨素含量有所不同，因此有必要对这些组织进行生物活性的研究，以确定最适合提取硫酸软骨素的来源。

硫酸软骨素具有多种生物活性，其中最重要的是其对软骨细胞的刺激作用。

研究表明，硫酸软骨素可以促进软骨细胞的增殖和分化，并增加软骨基质的合成。

此外，硫酸软骨素还具有抗炎和抗氧化作用，可以抑制关节炎的发生和发展，减轻疼痛和关节功能障碍。

这些生物活性使得硫酸软骨素在关节疾病治疗方面具有巨大的潜力。

除了以上提到的生物活性外，还有一些新的研究表明，硫酸软骨素可能具有抗肿瘤和免疫调节作用。

研究者通过体外和动物实验发现，硫酸软骨素可以抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭，并激活免疫系统对肿瘤的抗击能力。

这些发现为硫酸软骨素在癌症治疗和免疫调节领域的应用开辟了新的途径。

尽管硫酸软骨素具有如此多的生物活性，但目前关于其机制的研究还相对不足。

研究者普遍认为，硫酸软骨素通过调节细胞信号通路发挥其生物活性。

例如，硫酸软骨素可以通过激活钙信号通路和细胞外信号调节激酶（ERK）通路来促进软骨细胞的增殖和分化。

此外，硫酸软骨素还可以通过抑制炎症因子的表达和激活抗氧化酶来发挥其抗炎和抗氧化作用。

然而，这些机制还需要进一步的研究来验证和完善。

硫酸软骨素检测

硫酸软骨素检测
硫酸软骨素（Chondroitin sulfate）是从动物组织中提取制备的酸性粘多糖类物质，广泛分布于动物组织的细胞外基质和细胞表面。

硫酸软骨素在医疗上作为治疗关节疾病的药品，与氨基葡萄糖配合使用，具有止痛、促进软骨再生的功效。

迪
信泰检测平台采用高效液相色谱（HPLC）和生化法，可高效、精准的检测硫酸软骨素。

对于稀有的糖代谢物，如提供标准样品，迪信泰检测平台可提供定制检测。

对于无法用HPLC检测的样品，迪信泰检测平台可提供定制检测或试剂盒代测定服务。

此外，我们还提供其他糖代谢物检测服务，以满足您的不同需求。

样品制备：
糖代谢物提取方法（此部分涉及到公司的核心工艺，以下提供常规的提取工艺）。

1）称取500 mg的固体样品；
2）加入5 mL去离子水；
3）超声处理30 min；
4）取2 mL，用乙腈定容至10 mL；
5）用HPLC-ELSD检测。

HPLC测定硫酸软骨素样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期：2~3周。

项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。

2. 相关质谱参数（中英文）。

3. 质谱图片。

4. 原始数据。

5. 硫酸软骨素含量信息。

迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体请咨询技术支持181-0124-2586 HPLC糖代谢物测定项目样本报告，点击查看>。