药物的含量测定方法与验证
药物分析含量测定方法与验证
药物分析含量测定方法与验证选择合适的测定方法是药物分析含量测定的首要任务。
常用的测定方法包括色谱法、光谱法、电化学法和滴定法等。
在选择方法时，需要考虑以下几个因素：1.应用对象：考虑药物的理化性质和活性成分的特点，选择适合的分析方法。
例如，对于具有荧光特性的活性成分，可以选择荧光光谱法进行分析。
2.灵敏度和准确度：选取具有良好灵敏度和准确度的方法，以确保对样品中微量活性成分的准确测定。
例如，高效液相色谱法(HPLC)和气相色谱法(GC)是常用的灵敏度高的色谱法。
3.可行性和经济性：考虑方法的可行性和经济性，选择合适的仪器设备和试剂，以确保分析成本和操作难度的控制。
在药物分析含量测定方法选择后，需要对方法进行验证以确保其准确性和可靠性。
药物分析含量测定方法的验证主要包括以下几个方面：1.精密度和重复性：重复测定多个样品，并计算其相对标准偏差(RSD)来评估方法的精密度。
RSD越小，说明方法的重复性越好。
2.准确度：与已知浓度的标准样品进行比较，计算方法的准确度。
一般使用回收率作为评价指标，回收率越接近100%，说明方法的准确度越高。
3.灵敏度和线性：测定一系列不同浓度的样品，并计算测定结果的线性相关性。
通常使用相关系数和回归方程来评估方法的线性。
4.特异性和选择性：分析样品中可能存在的干扰物质，并验证方法对活性成分的选择性。
一般通过添加干扰物质来测试方法的特异性。
5.稳定性：测试方法在不同条件下的稳定性，包括温度、湿度、光照等。
确保方法在不同条件下的测定结果一致。
除了以上验证的基本步骤，还需要根据具体的药物分析含量测定方法的特点和要求，进行其他适当的验证参数的测试。
在实际操作中，应制定详细的验证方案和实施计划，并按照规定的方案进行验证实验。
实验结果需要进行统计分析，并按规定的标准判断方法的验证结果。
综上所述，药物分析含量测定方法的选择和验证是确保药物质量稳定性和一致性的重要环节。
通过选择合适的方法和进行严格的验证，可以保证药物分析结果的准确性和可靠性，并为药物研发和生产提供科学依据。
04药物的含量测定方法与验证
04药物的含量测定方法与验证药物的含量测定方法与验证是保证药物质量的重要环节。
药物的含量测定方法可以通过物理方法、化学方法和仪器分析等不同手段来完成。
下面将对药物含量测定方法的几种常用技术进行介绍，并探讨验证这些方法的重要性。
一、药物的含量测定方法1.物理方法：物理方法主要通过质量法和体积法来测定药物的含量。
-质量法：通过称取一定质量的样品，然后溶解或者加热提取，根据所测得的质量差异来确定药物的含量。
-体积法：通过将药物溶于适量的溶剂，然后使用容量管或者酸碱滴定法来测定样品中所含的物质的体积，从而计算出药物的含量。
2.化学方法：化学方法主要是通过定量分析法来测定药物的含量。
-酸碱滴定法：将标准溶液滴加到药物样品中，通过观察溶液的变色点来确定药物的含量。
-还原滴定法：将氧化剂溶液滴加到药物样品中，通过观察溶液的变色点来确定药物的含量。
-吸光光度法：通过测量药物溶液在特定波长下的吸光度来确定药物的含量。
3.仪器分析：现代化学分析仪器可以通过多种分析技术来测定药物的含量。
-高效液相色谱法：通过将样品溶解于溶剂中，然后通过系统对样品进行分离和检测，从而测定药物的含量。
-气相色谱法：通过样品的汽化和分离，然后通过色谱柱对样品进行分离和检测，从而测定药物的含量。
-质谱法：通过对样品中的离子进行检测和分析，从而测定药物的含量。
二、药物含量测定方法的验证药物含量测定方法的验证是为了确认所选方法的准确性、可靠性和适用性，确保得到的结果符合相关法规和规定的要求，常见的验证方法有下面几个方面：1.选择药物含量测定方法：确认所选的测定方法适用于特定药物的含量测定，并能满足法规和规定的要求。
2.方法准确性验证：通过测定稳定样品的含量来评估方法的准确度。
可以使用标准品进行比对，验证方法的偏差是否在可接受范围内。
3.方法精密度验证：通过反复测定同一样品，评估方法的重复性和精密度。
可以计算相对标准偏差来评估方法的精密度。
4.方法选择性验证：通过测定样品中其他可能存在的干扰物质，评估方法的选择性。
药物的含量测定方法与验证-样品的前处理方法
R-NH2
H2SO4 K2SO4
(NH4)2SO4 NaOH (NH4)HSO4
NH3↑
NH3↑+H3BO3→NH4BO2 →H2SO4滴定
13
前处理方法-湿法破坏
பைடு நூலகம்
凯氏定氮法(kjeldahl nitrogen determination)
间接法 水-NaOH溶液 硫 浓H2O2溶液与水 磷水 硒 硝酸溶液（1→30）
22
前处理方法-干法破坏
氧瓶燃烧法（oxygen flask combustion method ） 3.样品制备
固体样品（研细） 无灰滤纸 液体样品 纸袋
样品研细后放中间,按 虚线折叠 固定于铂丝下端螺旋 处.
23
前处理方法-干法破坏
氧瓶燃烧法（oxygen flask combustion method ）
4.实例-碘苯酯的含量测定（P163）
I
CH3
CH (CH2)8 COOCH2CH3
24
例1. 氧瓶燃烧法中的装置有 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 磨口软质玻璃锥形瓶 C. 铂丝 D. 铁丝 E. 铝丝
25
例2．选择氧瓶燃烧法所必备的实验 物品 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 铂丝 C. 普通滤纸 D. 氢气 E. 无灰滤纸
一方法测定
回收率%= 测定对照品量平均结值果比×较100%
加入对照品的量
33
分析方法验证的效能指标
—— 1.准确度 (accuracy)
（一）含量测定方法的准确度
2.制剂准确度
用本法测定 结果与已知
药物含量测定方法与验证
C样 D C样＝ 1% 含量％＝ 100% E1cm 100 W
A
A样
含量%
1% E1 cm
1 D 100 100% W
c. 标准曲线法 A=a+bC d. 计算分光光度法 e .比色法
A
C（浓度）
例1. 奥沙西泮原料药含量测定
精密称定 0.0150g ，置 200ml 容量瓶中，加乙 醇 150ml ，于温水浴中加热，振摇使奥沙西泮溶 解，放冷，用乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取
Sb5++2KI I2 +2Na2S2O3 Sb3+ +I2 2NaI +2Na2S4O6
O C O Sb
-
不 经 有 机 破 坏 的 方 法
CH O
CH O Sb O CH
C O-
O
2K+ 3H2O O C O
O C
O CH
O
第二节 定量分析样品的前处理方法 2. 经水解后测定法
不 经 有 机 破 坏 的 方 法 （1）碱水解后测定法 适用卤素原子与碳原子结合不牢固药 物。如卤素与脂肪碳链相连。 将含卤素的有机药物溶于适当溶剂 （如乙醇）中 , 加氢氧化钠溶液回流使其 水解 , 将有机结合的卤素转变为无机的卤 素离子,然后选用间接银量法进行测定。
1% E1 cm
3. 仪器校正和检定
波长校正用汞灯中较强谱线 237.83,253.65,275.28,296.73, 313.16,334.15,365.02,404.66,435.83,546.07nm 与 576.96nm 或 用 仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm进行校正。
吸收度的检定：用 K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4 液至
药物的含量测定方法与验证
药物的含量测定方法与验证一、化学分析法：化学分析法是目前最常用的药物含量测定方法，最常见的是滴定法和分光光度法。
滴定法是通过已知浓度的试剂与待测药物发生化学反应，从而进行定量测定。
而分光光度法是利用物质溶液对特定波长的光的吸收特性来进行定量测定。
二、色谱法：色谱法是目前药物分析中应用最为广泛的方法之一、其中，高效液相色谱法（HPLC）是最常用的色谱法之一、它通过将药物溶解于流动相中，经过固定相的作用，不同成分在流动相的驱动下以不同速度通过，从而分离和测定药物中的活性成分。
三、免疫学测定法：免疫学测定法主要是利用抗体与药物中的特定成分发生特异性反应，形成免疫复合物，然后通过染色、标记等方法进行定量测定。
如放射免疫测定（RIA）和酶联免疫测定（ELISA）等。
一、方法准确性验证：方法准确性是指测定结果与真实值之间的吻合程度。
验证方法准确性通常采用标准样品加测实验、自行合成样品以及与其他方法的比较等方法，来评估测定方法的准确性。
二、方法精密度验证：方法精密度是指同一样品在相同条件下进行重复测定的结果的分散程度。
验证方法精密度通常采用平行测定、应用统计方法进行数据处理等方法。
三、方法特异性和选择性验证：方法特异性和选择性是指说明测定方法的新颖性，以及该方法能将要测定的物质在样品中与其他干扰物质分开。
验证过程中需要进行对不同样品和干扰物进行测定，以确定测定结果不受其他物质的影响。
四、方法线性验证：方法线性是指测定方法在一定浓度范围内，测定结果与浓度之间的直线关系。
验证方法线性通常需要制备不同浓度的标准曲线，然后通过线性回归分析来确定测定方法的线性范围。
五、方法限度验证：方法限度是指测定方法能对样品中含量低至何种程度的物质进行定量分析。
验证方法限度通常采用比较检验，即比较待测样品中最低可检测含量与其他方法、药典或他国标准的要求。
六、稳定性验证：稳定性是指测定方法在一定条件下的稳定性和可重复性。
验证稳定性通常需要进行如温度、湿度等条件的变化实验，评估测定方法在不同条件下的结果的变化情况。
第四章药物的含量测定方法与验证
第四章药物的含量测定方法与验证第一节定量分析方法的分类与特点（自学）第二节样品分析的前处理方法（自学）第三节药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法适合于相应检测要求。
在建立药品质量标准时，分析方法需经验证；在药品生产工艺变更、制剂的组分改变、原分析方法进行修订时，质量标准分析方法也需进行验证，该验证过程亦被称为方法再验证，方法再验证的内容可以是全面验证或是部分验证。
方法验证理由、过程和结果均应记载在药品标准起草或修订说明中。
需验证的分析项目有：鉴别试验，杂质定量或限度检查，原料药或制剂中有效成分含量测定，以及制剂中其他成分（如防腐剂等）的测定。
药品溶出度、释放度等检查中，其溶出量等的测试方法也应作必要验证。
验证内容有：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。
视具体方法，拟定需要验证的内容。
表4-3中列出的分析项目和相应的验证内容要求，可供参考。
一、准确度准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（％）表示。
准确度应在规定的范围内测试。
（一）含量测定方法的准确度1、原料药的含量测定：可用已知纯度的对照品或供试品进行测定，并按下式计算回收率；或用本法所得的结果与己知准确度的另一方法测定的结果进行比较。
加入量：加入对照品的量。
一般与制剂原有的含量按1:1加入。
如该分析方法已经测试并求得其精密度、线性和专属性，在准确度无法直接测试（采用对照品对照法计算含量的方法，如高效液相色谱法）或可推算出的情况下，该项目可不再进行验证。
2、制剂的含量测定：主要测试制剂中其他组分及辅料对含量测定方法的影响。
可用含已知量被测物的制剂各组分混合物（包括制剂辅料）进行测定，回收率的计算同原料药的含量测定项下。
如不能获得制剂的全部组分，则可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，回收率则应按下式计算；或用本法所得的结果与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较。
415.7药物含量测定方法验证
Pharmaceutical Analysis
方法学验证内容
准确度
精密度
专属性
检测限
定量限
线性
范围
耐用性
药物含量测定方法验证
准确度（accuracy）
定义：指用该方法测 定的结果与真实值或 参考值接近的程度， 用回收率（%）表示。
药物含量测定方法验证
准确度（accu
药物含量测定方法验证
精密度 （precision）
定义：指在规定测 试条件下，同一个 均匀样品，经多次 取样测定所得结果 之间的接近程度。
药物含量测定方法验证
精密度 （precision）
考察分析方法在不同时间、不同人员、不同实验室 所获结果的重复性或重现性。
表示：标准偏差(SD) 或相对标准偏差(RSD)
原料药含量：用已知纯度对照品或供试品测定。
回收率％＝测 加得入量量100％
制剂含量: 向制剂中加入已知量的被测物对照品进行 测定。
回收率％＝测得量－本底量 加入量
100％
药物含量测定方法验证
准确度（accuracy）
➢ 同一浓度供试品（相当于100%浓度水平）， 测定6份。
➢ 设计三个浓度，每个浓度测3份。
药物含量测定方法验证
精密度 （precision）
精密度包括：重复性、中间精密度、重现性。 02 中间精密度
同实验室; 不同时间; 不同分析者; 不同仪器测定 结果的变异程度。
03 重现性
不同实验室, 不同分析者测定结果的精密度。
药物含量测定方法验证
专属性（specificity）
定义：指有其他成分（杂质、降解物、辅料等） 可能存在情况下，采用的方法能准确测定出被 测物的能力 。
药物的含量测定方法与验证
ห้องสมุดไป่ตู้
紫外光谱法
利用药物在紫外光区的 特征光谱来测定其含量。
高效液相色谱法
归一化法
外标法
通过比较待测药物与其他已知浓度的标准 品在色谱图上的峰面积来计算药物的含量 。
用已知浓度的标准品绘制标准曲线，通过 比较待测药物在色谱图上的峰面积与标准 曲线来计算药物的含量。
内标法
面积归一化法
在样品中加入已知浓度的内标物，通过比 较待测药物与内标物在色谱图上的峰面积 来计算药物的含量。
03
要求RE和RSD均在可接受范围内，以确保测定方法的准确性。
精密度验证
精密度验证的方法
通过多次重复测定同一已知含量的样品，评估测定方 法的精密度。
精密度验证的指标
包括标准偏差（SD）和变异系数（CV），用于衡量 测定结果的稳定性。
精密度验证的要求
要求SD和CV均在可接受范围内，以确保测定方法的 精密度。
通过比较待测药物与其他组分在色谱图上 的峰面积总和来计算药物的含量。
气相色谱法
内标法
在样品中加入已知浓度的内标物， 通过比较待测药物与内标物在色 谱图上的峰高或峰宽来计算药物 的含量。
外标法
用已知浓度的标准品绘制标准曲 线，通过比较待测药物在色谱图 上的峰高或峰宽与标准曲线来计 算药物的含量。
标准加入法
自动化与智能化的发展趋势
自动化
通过引入机器人技术实现样品前处理 、进样和数据分析等过程的自动化， 提高工作效率和减少人为误差。
智能化
利用人工智能和机器学习技术对药物 含量测定数据进行处理和分析，实现 数据解释、预测和优化等方面的智能 化应用。
06
药物含量测定方法的最新研 究进展
药物的含量测定方法与验证
9
(1) 直接滴定法
解：精密称取供试品Ws=0.4018g
NaOH实际浓度0.1002mol/L，则F=0.1002/0.1=1.002
消耗的NaOH滴定液体积：V样=22.20ml
V样 F T 100% 阿司匹林含量= WS
22.20 1.002 18.20 103 100% 0.4018
三 色谱分析法
1.特点与适用范围
特点： 高灵敏度：10-15～ 10-12g/ml， 高专属性： 高效能与高速度： 适用范围：广泛应用于药物制剂的含量测定，尤其 是复方制剂含量测定的首选方法。
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（二）荧光分析法
2.干扰及排除
(1)溶剂——空白试验 (2)溶液： 药物浓度不宜过高， 悬浮物——过滤， 溶氧——通惰性气体除去 溶液pH。 (3)玻璃仪器及测定池——高度洁净 (4) 温度：控制测定温度
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（二）荧光分析法
3.测定方法与含量计算
在一定实验条件时，在较稀浓度范围内药物的荧 光强度与溶液中该物质的浓度成正比。
1% 1cm
品相当于标示量的百分含量
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A D V 1% C X D V E1cm L 100 标示量% = 100% V B V B 0.521 200 100 2 1000 5 4211100 100% 99.0% 50 2
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（二）荧光分析法
20
二、光谱分析法
（2）吸光度的准确度校正 60mg重铬酸钾用0.005mol/L的硫酸溶液稀释至 1000ml，在规定波长处测定并计算吸收系数，与 规定值比较。 规定值：235nm 123.0～126.0
257nm
313nm
142.8～146.2
chp4-药物的含量测定分析方法与验证
例3：用异烟肼比色法测定复方己酸孕酮注射液的含量。 当己酸孕酮对照品的浓度为50g/ml，按中国药典规定显 色后在380nm波长处测得吸收度为0.160。取标示量为
250mg/ml(己酸孕酮)的供试品2ml配成100ml溶液，再稀
释100倍后，按对照品显色法同样显色，测得吸收度为 0.154。求供试品中己酸孕酮的含量为标示量的多少？
C4H2FeO4
原理
HC O C C O CH Oˉ
+
Fe2+
Oˉ
Fe2+ + Ce4+
Ce3+ +
Fe3+
Fe2+ + e
N N 3 N N 3
Fe3+
红色
浅蓝色
例
硬脂酸镁的测定
ChP
取本品约0.1g，精密称定，精密加硫酸滴 定液(0.05mol/L) 50ml，煮沸至油滴澄清，继续 加热10min，放冷至室温，加甲基橙指示液1~2 滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml 硫酸滴定液(0.05mol/L)相当于2.016mg的MgO。
例 泛影酸的测定
取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠溶液30ml 与锌粉1.0g，加热回流30min，放冷，冷凝管用少量水 洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤3次，每次15ml，洗 液与滤液合并，加冰醋酸5ml与曙红钠指示液5滴，用 硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸银滴定液 (0.1mol/L)相当于20.46mg的C11H9 I 3N2O4。
(K=138 )
Fe (SCN) 2+ （淡棕红色）
反应摩尔比为1∶3
T
a b
b a
第四章 药物的含量测定方法与验证
第四章药物的含量测定方法与验证1、药物的含量：指药物中所含主成分的量，是评价药物质量的重要标准。
2、可供药物含量测定的分析方法：（1）容量分析法①优点：操作简便，结果准确，方法耐用性高。
②缺点：方法缺乏专属性。
③适用：适用于对结果准确度与精密度要求较高的样品的测定。
（2）光谱分析法①优点：简便，快速，灵敏度高，并具有一定的准确度。
②缺点：方法专属性稍差。
③适用：适用于对灵敏度要求较高、样本量较大的分析项目。
（3）色谱分析法①优点：高灵敏度与高专属性，并具有一定的准确度。
②缺点：结果计算需要对照品。
③适用：适用于对方法的专属性与灵敏度要求较高的复杂样品的含量测定。
3、为确保分析结果的可靠性，要求分析方法应准确、稳定、耐用。
4、验证内容包括：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。
§4-1 定量分析方法的分类与特点一、容量分析法容量分析法：也称滴定法。
是将已知浓度的滴定液（标准物质溶液）由滴定管滴加到被测药物的溶液中，直至滴定液与被测药物反应完全（通过适当方法指示），然后根据滴定液的浓度和被消耗的体积，按化学计量关系计算出被测药物的含量。
当滴定液与被测药物完全作用时，反应达到化学计量点。
在进行容量分析时，当反应达到化学计量点时应停止滴定，并准确获取滴定液被消耗的体积。
但在滴定过程中反应体系常常无外观现象的变化，必须借助适当的方法指示化学计量点的到达。
其中，最常用的方法是借助指示剂的颜色或电子设备的电流或电压变化来判断化学计量点。
指示剂的颜色或检测设备的电信号的突变点通常被称为滴定终点。
但滴定终点与滴定反应的化学计量点不一定恰好符合，二者之差被称为滴定误差。
滴定误差是容量分析法中系统误差的重要来源之一，为了减少滴定误差，要选用合适的指示剂或指示方法（如在非水溶液中常见用电位滴定法），使滴定终点尽可能的接近滴定反应的化学计量点。
（一）容量分析法的特点与适用范围1、容量分析法的特点（1）方法简便易行：本法所用仪器廉价易得，操作简便、快速。
药物的含量测定方法与验证-定量分析方法的分类与特点
T=m×a/b×M=0.05×1/1×260.23 =13.01(mg/ml)
含量（％） ＝[（V0-VS）Ｂ× FB×TA ]/W×100% =[(23.21-15.73)×1.038×13.01]
×1000/0.1022 ×100% =98.8%
14
二、光谱分析法
（一）紫外-可见分光光度法
可以避免样品前处理及 进样体积误差对结果的影响
28Βιβλιοθήκη 地塞米松的HPLC法测定：取本品精密称 定，质量为0.0697g，置50ml量瓶中， 加30ml乙醇溶解，用水稀释至刻度，摇 匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加 0.2mg/ml甲基睾丸素液5.0ml，用流动 相稀释至刻度，摇匀，取20µl进样， 测得地塞米松的峰面积为1313，甲基睾 丸素的峰面积为1032，质量校正因子为 1.05，求其含量。
29
地塞米松% =（f×AX ）/AS×Cs × D/W× 100% =（1.05×1313） /1032×0.2×250/69.7×100%
=96.8%
30
三、色谱分析法—HPLC
(2)外标法 含量：
C供＝（A供/ A对） C对
31
用外标法测定某胺类药物的含量。对照品溶液的制备： 精密称取对照品50.0mg，置50mL量瓶中， 加甲醇溶解并稀释至刻度，精密量取上述溶液5mL， 置25mL量瓶中，加流动相稀释至刻度。 供试品溶液的制备：精密称取供试品50.5mg， 照对照品溶液制备方法制备。 取对照品溶液和供试品溶液各10μL进样， 测得对照品溶液中，对照品的峰面积分别为1350， 供试品溶液的峰面积分别为1313。 试计算样品的百分含量
12
已知：司可巴比妥钠的摩尔质量M=260.23， 司可巴比妥钠与溴反应的摩尔比为1：1； 供 试 品 的 量 W=0.1022g ， 硫 代 硫 酸 钠 滴 定液(0.1mol/L) 浓度校正因数F=1.038； 供试品滴定消耗硫代硫酸钠滴定液 15.73ml ， 空 白 试 验 消 耗 硫 代 硫 酸 钠 滴 定液23.21ml。
药物的含量测定方法和验证1
一、容量分析法（滴定分析法）
含量的计算： （2）制剂标示量百分含量的计算
VTF 平均片重 标示量% W 100% 标示量
例：取司可巴比妥钠胶囊（标示量为0.1g）20粒， 除去胶囊后测得内容物总重为3.0780g，称取 0.1536g，按药典规定用溴量法测定。加入溴液 （0.1 mol/L） 25ml，剩余的溴液用硫代硫酸钠液 （0.1025mol/L）滴定到终点时，用去17.94ml。 空白试验用去硫代硫酸钠液25.00ml。按每1ml 溴 液（0.1mol/L）相当13.01mg的司可巴比妥钠，计 算该胶囊中按标示量表示的百分含量。
二、光谱分析法
（二）荧光分析法 某些物质受到光照射时，除吸收某种波长的光 之外还会发射出比原来所吸收的光的波长更长 的光；当激发光停止照射后，这种光线也随之 消失，这种光称为荧光。 从样品池出来的荧光是各方向发射的，在与激 发光光源排成直角的方向测荧光强度可以避免 透射的激发光的干扰。
三、色谱分析法
一、容量分析法（滴定分析法）
例题：滴定分析中，一般利用指示剂的突变来判断化 学计量点的到达，在指示剂变色时停止滴定，这一点 为： A.化学计量点 B.滴定分析 C.滴定等当点 D.滴定终点 E.滴定误差 答案：D
一、容量分析法（滴定分析法）
酸碱滴定 氧化还原滴定 滴定分析法 配位滴定 沉淀滴定 非水滴定
三、色谱分析法
例题：HPLC法与GC法用于药物复方制剂的 分析时，其系统适用性试验系指 A.测定拖尾因子 B.测定回收率 C.测定保留体积 D.测定分离度 E.测定柱的理论板数
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1. 特点
准确度高，RSD（%）< 2%
仪器价格低廉操作简单，易普及，应用广
2. 定量：朗伯-比耳定律
A = E1%1cmCl
3. 仪器校正和检定
波长校正用汞灯中较强谱线237.38,253.65,275.28,296.73, 313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nm与576.96nm 或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm进行校正。 吸收度的检定：用K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4液至1000ml 波长(nm) 235(最小) 257(最大) 313(最小) 350(最大)
(Ksp=1.56×10–10 )
AgSCN ↓ + NH4NO3
(Ksp=1.0×1012 ) Fe3+ + SCNˉ Fe (SCN) 2+
（淡棕红色）
3、经还原后测定法 碱性还原后测定
方法原理；在氢氧化钠和锌粉存在的条件下，有 机药物（多用于含碘有机药物）加热回流，发生 还原裂解反应，使有机结合的卤素（碘）转变为 无机卤素离子（碘离子），继而采用间接银量法 或其他方法进行测定，如泛影酸的测定。 适用范围：碘原子与苯环直接相连的药物。
第四章 药物的含量测定方法与验证
定量方法特点：
分析方法
容量分析法
方法优点
方法缺点
适用对象
化学原料药含 量测定 制剂中溶出度、 释放度测定
简便、准确度 专属性差 好、精密度高
光谱分析法
简便、快速、 专属性差 灵敏度高
色谱法
灵敏度高、 专属性好
操作相对复杂 （低）制剂的 含量测定
第一节 定量分析方法的分类与特点
E1%1cm
124.5
试剂 NaI NaNO2
144.0
浓度(g/ml) 1.00 5.00
48.62
测定波长 220nm 340nm
106.6
透光率(%) ＜ 0.8 ＜ 0.8
杂散光检查：
4. 对溶剂的要求:
220～240nm 241～250nm 251～300nm 300nm以上
溶剂+吸收池A ＜0.40 ＜0.20 ＜0.10 ＜0.05
内标法：
过 程 ： m s m i 混 匀 进 样 测 Ai和 A s
校正因子（f）=
对内标物要求：
AS/CS AR/CR
含量（CX）=f
AX A’S/CS’
a．内标物须为原样品中不含组分 b．内标物与待测物保留时间应接近且R>1.5 c．内标物为高纯度标准物质，或含量已知物质
内标法优点：
第二节 定量分析样品前处理方法
概述 含金属与卤素药物须处理后进行测定。处理方法视结合牢固
程度而异。卤素与芳环相连牢固；与脂肪族碳相连，结合不
牢固。 含金属药物：金属不直接与碳相连为含金属的有机药物，不 牢固，一般直接测定；金属与碳相连为有机金属药物，须适 当处理。
不经有机破坏的分析方法
经有机破坏的分析方法
例 泛影酸的测定
取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠溶液30ml与锌粉 1.0g，加热回流30min，放冷，冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧 瓶与滤器用水洗涤3次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰醋
酸5ml与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。
每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于20.46mg的C11H9 I 3N2O4。
100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度， 摇匀。在257nm的波长处测定吸收度为0.570，按C8H9NO2 的百分吸收系数为715计算。
（二）荧光分光光度法
灵敏度高，可达10-12g/ml ～ 10-10g/ml 在低浓度进行测定，防止F与C不成正比及自熄灭作用
1. 特点 用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减
进样量不超量时，重复性及操作条件对结果无影响
只需待测组分和内标物出峰，与其他组分是否出峰
无关 。
内标法缺点： 制样要求高；须寻找合适内标物
外标法特点：
1）不需要校正因子，不需要所有组分出峰
2）结果受进样量、进样重复性和操作条件影响大
→每次进样量应一致，否则产生误差
例：醋酸氢化可的松的含量采用HPLC法测定：取 本品对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成每 ml约含0.35mg的溶液。精密量取该溶液和内标溶液 （0.30mg/ml炔诺酮甲醇溶液）各5ml，置25ml量瓶 中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取10ul注入液相色 谱仪，记录色谱图。另取本品适量，同法测定，按 内标法计算含量。已知：对照品取样为36.2mg，样 品取样为35.5mg，测得对照液中醋酸氢化可的松和 内标的峰面积分别为5467824和6125843，样品液中 药物和内标的峰面积分别为5221345和6122845，计 算本品的含量
TVF 平均片重 ms 标示量 % 100 % 标示量
烟酸片含量测定
取本品10片精密称定为3.5840g，研细，精密称取
0.3729g，置100 mL锥形瓶中水浴加热溶解后，放冷。加酚 酞指示剂3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1005mol/L)滴定至粉 红色消耗25.02 mL。每1mL氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当 12.31mg的烟酸。求供试品中烟酸的标示百分含量（标示量
间接银量法：定量加入过量的AgNO3 ，过量的 硝酸银以硫氰酸铵为滴定剂，硫酸铁铵为指示剂 滴定。
CCl3C(CH3)2OH + 4NaOH
回流 (CH3)2CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2O △
NaCl + AgNO3
AgNO3 + NH4SCN
AgCl↓ + NaNO3
分别测得供试品和对照品的吸收度为0.520和0.545，已知1mg
硫喷妥相当于1.091mg的硫喷妥钠，试计算硫喷妥钠的含量
1% E1 cm c供l 1% E1 cm c对l c供
对照品比较法
A供 A对 A供 A对
c对 A供 A对
c供 c对
（2）吸收系数法
1% A E1 cm cl
司可巴比妥的含量测定：取供试品0.1301g，置碘量瓶中，加水
10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.1mol/L)25ml，再加盐 酸5ml，立即密塞并振摇1min，暗处静置15min后，加碘化钾试 液10ml，立即密塞摇匀，用0.0999mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定， 至近终点时加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结
一、容量分析法 （一）容量分析法的特点
操作简单、快速；
比较准确（RSD＜0.2%）； 仪器普通易得。
（二）容量分析法的有关计算
1. 滴定度（T）的概念 每1ml滴定液相当于被测物质的量(mg) 2. 滴定度的计算
aA + bB
cC + dD
T = M×a/b×B
3. 百分含量的计算（原料药）
（1）直接滴定法 D% = V ×F × T/W ×100%
灵敏度高，但干扰因素多。 制备荧光衍生物，可提高其灵敏度和选择性。 用样品量少。
2. 荧光分析仪 有二个单色光器—激发单色光器与发射单色光
器；且激发光源、样品池和检测器成直角。 3. 含量测定 常用的方法为对照品比较法: Cx = (Rx-Rxb)/(Rr-Rrb) ×Cr Ch.P2010收载利血平片
一、不经有机破坏的分析方法 1、直接测定法
金属元素不直接与碳原子相连的含金属有机药物或 C-M键结合不牢的有机金属药物，在水溶液中可电
离，不须破坏直接采用适当的方法测定
如葡萄糖酸钙中的钙离子-EDTA络合滴定
2、经（酸、碱）水解后测定法
方法原理（卤素）：将含卤素的有机药物溶于适 当溶剂中，加氢氧化钠或硝酸银溶液加热回流使 其水解，将有机结合的卤素，经水解作用转变为 无机卤素离子，然后采用间接银量法测定。如三 氯叔丁醇的测定。
重复性：RSD≤2%
拖尾因子：T = W0.05h/2A 应在0.95 ～ 1.05
正常峰和不正常峰如何判断？
用拖尾因子（对称因子）：T T= W0.05h/2A
内标法加校正因子测定供试品中主成分含量
3. 测定方法
外标法测定供试品中主成分含量
标准曲线法 外标一点法
含量= CR×
AX AR
外标一点法：一种浓度对照物对比样品中待测组分含量 前提：截距接近0，对照品浓度与待测组分浓度接近
果用空白试验校正。已知：样品消耗硫代硫酸钠滴定液15.05ml，
空白消耗25.05ml，每ml溴滴定液（0.1mol/L)相当于13.01mg的司 可巴比妥。计算含量
片剂含量测定结果的计算
每片含量 标示量 % 100 % 标示量 测得量（ g） 平均片重（ g） 供试品重（ g） 100 % 标示量（ g / 片）
COOH
I I
+ 11NaOH + Zn
H3COCHN I
NHCOCH3
COONa
回流
△
H2N N H2
+ 3NaI + 2CH3COONa
+ 2Na2ZnO2 + H2O
酸性还原后测定法
方法原理；在醋酸和锌粉存在的条件下，有机 药物（多用于含碘有机药物），发生还原裂解 反应，使有机结合的卤素（碘）转变为无机卤 素离子（碘离子），采用银量法测定卤素离子 的含量。
0.3g/片）。
V × T × F ×平均片重 标示量%=
W ×标示量
×100 %