河豚毒素免疫亲和柱的说明书
河豚毒素研究及其免疫研究PPT课件
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参考文献
[1] 于丽华,周力,谢克勤.河豚毒素对小鼠镇痛作用的实验研究[J].山东医科大学学报, 1999, 37(2): 120. [2] 李中华,李春英,汪晨净.TTX局部应用对家兔齿髓刺激所引起的疼痛的影响[J].中国药理学会通讯, 2000,
17(2): 47. [3] 潘心富,黄致强.河豚药用研究概况[J].药学通报,1984, 19(4): 40. [4] 靳艳卿,段世明,王钧,等.侧脑室注射TTX和藜芦定对大鼠异氟醚MAC的影响[J].中华麻醉, 2000, 20(5):
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适应性进化
通过克隆调控豹纹东方骨骼肌 Na v 1.4 通道表达的 cDNA，发现 Nav1.4通道区域Ⅰ401位点处存在一个不饱和氨基 酸，即天冬酰胺。通过基因工程把不饱和氨基酸移植到对河豚 毒素敏感的小鼠骨骼肌 Na v 1.4 通道处，移植的不饱和氨 基酸的折叠程度越高，小鼠抵抗河豚毒素的能力越强。当不饱 和氨基酸的折叠程度大于取代位点氨基酸折叠程度的2500倍时 IC50(50%Na+通道发生阻断时河豚毒素的浓度)提高至47µmol/L。 河豚对河豚毒素具有免疫力是基因变异的结果，更是适者生存、 长期自然选择的结果。河豚对河豚毒素的适应性进化为河豚提 供了更大的生存空间，也为人类研制河豚毒素中毒后的解毒药 品提供了依据。
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适应性进化
在对河豚毒素没有免疫力的生物体内，钠通道的 α-亚 基上存在河豚毒素的受体，河豚毒素与 α-亚基门孔附近的氨 基酸残基结合，阻止钠离子进入细胞内，引起河豚毒素中毒。 而河豚体内细胞的构造与其他生物不同，河豚体内还存在可以 和河豚毒素结合的蛋白质，从而使河豚对体内的河豚毒素具有 免疫力。比较红鳍东方鲀、黑青斑东方鲀 和斑马鱼的基因序 列图谱，发现红鳍东方鲀和黑青斑东方鲀骨骼肌的 Nav1.4通 道发生了变异，正是这种变异使河豚具有抵抗河豚毒素的能力。 红鳍东方鲀和豹纹东方鲀的变异类似，都是在 Na v 1.4 通 道的 401 位点上发生了取代，取代为一个折叠程度更高的不 饱和氨基酸，河豚的这些氨基酸是不与河豚毒素结合的，从而 也就不能对河豚的钠通道造成影响。
多功能净化柱和免疫亲和柱工作原理-黄曲霉毒素检测
多功能净化柱和免疫亲和柱工作原理
（黄曲霉毒素检测）
PriboFast 系列多功能净化柱分为柱压型（带玻璃试管）和推杆型（针筒式）
两种，以极性、非极性及离子交换等基团组成填充剂，可选择性吸附样液中的
脂类、蛋白质类等杂质，毒素不被吸附而直接通过，其操作更为简便，不需要
进行活化、淋洗和洗脱操作，只需要直接上样，30秒钟即可完成整个净化过程，效果理想，可同时净化多种毒素，降低检测成本，有效提高检测效率，稳定性强，回收率高，适用于食品、粮食饲料、饮料、中药材等多种复杂样品。
同时
我们还提供多毒素符合免疫亲和柱。
PriboFast®免疫亲和柱利用抗原抗体特异性可逆结合的原理, 将抗体与凝胶共价结合，然后填充柱子。
将样品提取溶液过免疫亲和柱,而非目标化合物则沿柱流下,最后用洗脱缓冲液洗脱抗原,从而得到纯化的抗原。
其提纯效率很高,适用于
各类复杂样品包括食品、饲料等多种基质。
整个纯化过程30分钟左右。
河豚毒素在暗纹东方鲀体内的转移分布规律及相关代谢酶活性分析
河豚毒素在暗纹东方鲀体内的转移分布规律及相关代谢酶活性分析卢义博1,2，曾军杰2,3，陈思3，王瑞瑞3，张小军2（1.浙江海洋大学水产学院，浙江舟山 316021）（2.浙江省海洋水产研究所，浙江舟山 316021）（3.浙江海洋大学食品与药学学院，浙江舟山 316021）摘要：为了研究河豚毒素（TTX）在暗纹东方鲀体内的转移分布规律及其对肝脏代谢酶活性的影响，实验选择口服灌喂的给药方式，通过超高效液相色谱串联质谱法测定不同组织中TTX的浓度变化，同时测定肝脏代谢酶活力。
结果如下，在灌喂TTX后的短期转移分布期间，性腺中TTX的浓度从19.00 ng/g升至42.02 ng/g，蓄积率为121%。
肝脏中TTX浓度呈波动性变化，在4 h时，TTX 浓度最高为11.43 ng/g，在48 h时，TTX浓度最低为1.27 ng/mL。
皮肤、肌肉、血液、肠道、鳃组织中TTX含量在2 h时最高，分别为7.43 ng/g、1.15 ng/g、11.44 ng/g、9.77 ng/g、31.75 ng/g。
脾脏、肾脏、胆组织中TTX浓度分别在2 h、4 h、6 h时最高为5.05 ng/g、6.54 ng/g、9.06 ng/g。
此外，肝脏代谢酶活力的检测结果显示，TTX显著提高了乳酸脱氢酶、谷草转氨酶和谷丙转氨酶的活性（p<0.05），在前期对两种磷酸酶活性具有明显的抑制效应（p<0.05），而后恢复至正常水平。
实验结果表明，TTX在暗纹东方鲀中的转移分布具有组织特异性，并且对肝脏中不同代谢酶活性具有促进和抑制作用。
关键词：暗纹东方鲀；灌喂；河豚毒素；组织含量；相对毒素量；肝脏；代谢酶活性文章篇号：1673-9078(2021)06-129-135 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2021.6.1055 The Transfer and Distribution of Tetrodotoxin in Takifugu obscurus and the Activity Analysis of Related Metabolic EnzymesLU Yi-bo1,2, ZENG Jun-jie2,3, CHEN Si3, W ANG Rui-rui3, ZHANG Xiao-jun2(1.Fisheries College of Zhejiang Ocean University, Zhoushan 316021, China)(2.Marine Fisheries Research Institute of Zhejiang, Zhoushan 316021, China)(3.School of Food and Pharmacy of Zhejiang Ocean University, Zhoushan 316021, China)Abstract: In order to study the transfer and distribution of tetrodotoxin (TTX) in Takifugu obscurus and its activity on liver metabolizing enzymes, the oral gavage administration method was used in the experiment. The concentration changes of TTX in different tissue were measured by ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry, and the activity of metabolic enzymes in the liver was also measured. The results were as follows, during the short-term metastasis distribution period after TTX instillation, the concentration of TTX in the gonads increased from 19.00 ng/g to 42.02 ng/g, and the accumulation rate was 121%. The TTX concentration was fluctuated in the liver. At 4 h, the highest TTX concentration was 11.43 ng/g, at 48 h, the lowest TTX concentration was 1.27 ng/mL. The TTX contents in the tissues of skin, muscle, blood, intestine, and gills were highest at 2 h, which were 7.43 ng/g, 1.15 ng/g, 11.44 ng/g, 9.77 ng/g, and 31.75 ng/g, respectively. The highest TTX concentrations in the spleen, kidney and gallbladder tissues were 5.05 ng/g, 6.54 ng/g, and 9.06 ng/g at 2 h, 4 h, and 6 h, respectively. In addition, the test results of liver metabolic enzyme activity showed that TTX significantly increased the activities of lactate 引文格式：卢义博,曾军杰,陈思,等.河豚毒素在暗纹东方鲀体内的转移分布规律及相关代谢酶活性分析[J].现代食品科技,2021,37(6):129-135,+265 LU Yi-bo, ZENG Jun-jie, CHEN Si, et al. The transfer and distribution of tetrodotoxin in Takifugu obscurus and the activity analysis of related metabolic enzymes [J]. Modern Food Science and Technology, 2021, 37(6): 129-135, +265收稿日期：2020-11-16基金项目：国家重点研发计划项目（2017YFC1600701）作者简介：卢义博（1994-），男，硕士，研究方向：水产品质量安全通讯作者：张小军（1982-），男，博士，高级工程师，研究方向：水产品质量安全dehydrogenase, aspartate aminotransferase and alanine aminotransferase (p<0.05). And it had a significant inhibitory effect on two phosphatase activities in the early stage (p<0.05), and then returned to normal levels. Theresults indicate thatthe transfer and distribution of TTX in Takifugu obscurus has tissue specificity, and can promote and inhibit the activities of different metabolic enzymes in the liver.Key words: Takifugu obscurus; irrigation; tetrodotoxin; tissue content; relative toxin content; liver; metabolic enzyme activity暗纹东方鲀（Takifugu obscurus）主要分布在中国近海和长江中下游，其肉质鲜美，营养价值丰富，但是野生河豚鱼体内均含有河豚毒素（Tetrodotoxin，TTX）可致人死亡。
DON亲和柱说明书
苏微呕吐毒素免疫亲和柱使用说明书【产品用途】呕吐毒素（DON）免疫亲和柱适合于和DON酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测DON。
适用于谷物、饲料等样本中的DON净化处理，提高了样品的纯度，纯化后的提取液可用不同的分析方法测定。
【产品性能】柱吸附能力：≥1000ng/支；回收率：75%~90%。
柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。
【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，呕吐毒素（DON）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的DON经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过DON免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，DON与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用甲醇洗脱DON，然后进行相关分析。
【产品组成】标准品（选配）；25支/盒；125μL凝胶/每支柱管说明书1份。
【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：甲醇（色谱级）、聚乙二醇8000（PEG）、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5g聚乙二醇8000，并与125mL水混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用快速定性滤纸过滤，并用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
【亲和柱净化】注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥！----将柱子上方堵头取出后斜剪断，然后再插回柱子上；----将20mL注射器连接于免疫亲和柱上部，用5~10mL pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）或者去离子水平衡柱子，以1滴/秒的速度缓慢通过免疫亲和柱，（用注射器加以正压或用真空泵施加负压，也可以使用泵流操作架配合免疫亲和柱）；----准确移取2mL上述滤液（相当于0.4g样品）注入注射器中，调节针筒压力使其以1滴/2秒的速度缓慢通过免疫亲和柱；----用20mL 水冲洗柱子，弃去流出液，流速1滴/秒，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体；----准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速1滴/2~3秒，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体。
饲料 毒素 亲和柱 验收
饲料毒素亲和柱验收
饲料中的毒素是一个非常重要的问题，因为毒素对动物的健康和生产性能都会产生负面影响。
饲料中的毒素主要来自于饲料原料本身或者在饲料加工、储存过程中受到污染。
常见的饲料毒素包括黄曲霉毒素、赤霉酮、霉菌毒素、真菌毒素等。
这些毒素可能导致动物中毒、免疫抑制、生长发育受阻甚至死亡。
为了保证饲料的质量和安全，饲料生产企业通常会进行严格的验收程序。
其中，亲和柱技术是常用的饲料检测手段之一。
亲和柱是一种固相萃取技术，利用化学亲和性固定相对目标物质进行选择性吸附和分离。
在饲料检测中，亲和柱可以用来富集和分离饲料中的毒素，提高检测的灵敏度和准确性。
在饲料的验收过程中，通常会进行多项检测，包括外观检查、理化指标检测、微生物检测和毒素检测等。
通过这些检测手段，可以全面了解饲料的质量和安全情况，确保符合相关的标准和法规要求。
饲料生产企业在验收过程中需要严格遵守相关的法律法规和标准，确保饲料的质量和安全。
同时，饲料生产企业也应加强自身管
理，建立健全的质量控制体系，加强原料采购的管理和控制，确保从源头上控制饲料中毒素的含量。
另外，定期对生产设备和生产环境进行清洁和消毒，防止污染物的产生和传播，也是保证饲料质量和安全的重要措施。
总之，饲料中的毒素问题对动物健康和生产具有重要影响，因此饲料生产企业在验收过程中需要采取多种手段和措施，确保饲料的质量和安全。
亲和柱技术作为一种重要的检测手段，在饲料质量控制中发挥着重要作用。
同时，加强原料采购管理、设备和环境清洁消毒等措施也是保证饲料质量和安全的重要环节。
免疫亲和柱-高效液相色谱荧光检测法测定饲料中的T-2毒素
免疫亲和柱-高效液相色谱荧光检测法测定饲料中的T-2毒素林淼;赵志辉;韩薇【摘要】A method of determining T-2 toxin in feed was established by high performance liquid chromatography with fluorescence detection via immunoaffinity column purification and precolumn derivatization.A sample was extracted with methanol-water(V/V = 80/20),purified by immunoaffinity columns containing antibodies specific for T-2 toxin,and quantified by reversed phase high performance liquid chromatography with fluorescence detection after derivatization with l-anthroylnitrile(l-AN)and 4-dimethylam inopyridine(DMAP). The results showed that the linearity range of T-2 toxin was 10～200 μg/L,the recovery was 76.9%~92. l%,and the relative standard deviation was under 6%,indicating that this method could precisely determine T-2 toxin in feed.%建立了免疫亲和柱净化-柱前衍生化-高效液相色谱荧光检测器测定饲料中T-2毒素含量的方法.样品经甲醇-水(体积比80∶20)提取,通过免疫亲和柱(IAC)净化,以1-蒽腈(1-anthroylnitrile,1-AN)为衍生化试剂、4-二甲基氨基吡啶(DMAP)为催化剂进行衍生,C18色谱柱分离,荧光检测器检测,外标法定量.结果表明:T-2毒素的线性范围为10～200 μg/L,加标回收率为76.9％～92.1％,相对标准偏差(RSD)小于6％.该方法可用于饲料中T-2毒素的测定.【期刊名称】《上海农业学报》【年(卷),期】2013(029)001【总页数】6页(P42-47)【关键词】饲料;T-2毒素;高效液相色谱;免疫亲和柱;柱前衍生化【作者】林淼;赵志辉;韩薇【作者单位】上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所,上海201403;上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所,上海201403;上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所,上海201403【正文语种】中文【中图分类】TS207T-2毒素（T-2 toxin）是一种倍半萜烯化合物，学名为4β-1，5-二乙酰氧基-8α-（3-甲基丁酰氧基）-3α-羧基-12，13-环氧单端孢霉-9-烯，为白色针状结晶，室温下稳定，烹调过程不易将其破坏［1］；熔点为150～151℃；难溶于水；易溶于极性溶剂。
食品冷链品控专业《72. 河豚毒素(TTX)定量酶联免疫检测试剂盒说明书》
河豚毒素〔TTX〕定量酶联免疫检测试剂盒说明书ELISA-it for TTX本测试盒用间接竞争免疫分析法定量测定河豚鱼中的河豚毒素〔TTX〕。
该测试盒反响孔可拆卸，可测单份样品，也可测多份样品。
定量分析时需有含450nm波长的微孔板酶标仪。
1．概要河豚毒素〔TTX〕是一种强神经毒素，其性质稳定，加热、盐腌及高温烹煮均不易使其被破坏。
河豚鱼中常含有河豚毒素。
我国沿海居民素有食用河豚鱼的习惯。
因误食或食用加工不当的河豚鱼而发生人畜中毒的事件每年都有发生。
故准确检测河豚鱼中的河豚毒素对预防和控制河豚毒素中毒，具有重要意义。
本检测方法具有灵敏、快速、简便、特异性好、取样量小并可同时检测大量样品等优点。
2．测定原理本试剂盒采用固相酶联免疫吸附原理，利用间接竞争ELISA 法进行测定。
用抗原包被微孔板，参加河豚毒素标准品或样品、抗河豚毒素单克隆抗体进行孵育后，将未与包被抗原结合的抗体洗去；再参加酶标记的抗鼠IgG抗体孵育，参加显色液，经过终止液终止后，用酶标仪在450nm处测定OD值。
3 提供的物品微孔板5个浓度的TTX标准溶液〔各〕标准1：0ng/mL直接使用标准2：mL直接使用标准3：mL直接使用标准4：mL直接使用标准5：mL直接使用抗体溶液〔6mL〕直接使用酶标物〔12mL〕直接使用显色液〔12mL〕直接使用终止液〔6mL〕直接使用浓缩洗液〔30mL〕稀释使用4．盒中未提供，需自备物品微孔板酶标仪〔含450nm〕、离心机、电炉、微量移液器、磁力搅拌器、量筒、漏斗、容量瓶、快速定性滤纸、分液漏斗；乙酸、乙醚、氢氧化钠、去离子水或蒸馏水、in内；孵育过程中应避光；不要使用过期试剂盒；不要交叉使用不同批号试剂盒中的试剂。
6．储存条件保存试剂盒于2~8℃。
不要冷冻。
显色液对光敏感，因此要防止直接暴露在光线下。
将不用的微孔板放进原铝箔袋中，置2~8℃保存。
7．试剂变质的标志标准1的吸光度值小于个单位〔A450nm<〕时，表示试剂可能变质。
河豚毒素在半褶织纹螺体内富集和消除的研究
河豚毒素在半褶织纹螺体内富集和消除的研究作者：陈页张小军曾军杰严忠雍宗靖靖来源：《安徽农业科学》2019年第22期摘要;以有毒的河豚鱼肝脏和无毒虾肉饲喂半褶织纹螺，定期取样，通过免疫亲和柱净化-超高效液相色谱-串联质谱法分析织纹螺体内河豚毒素含量的变化。
结果表明，半褶织纹螺对河豚毒素的耐受力高，投喂有毒河豚鱼肝脏后，其体内毒素含量迅速增加。
当投喂无毒虾肉后，其体内的河豚毒素初期会呈现减少趋势，此后又快速增加。
处理组和对照组几乎在同一时间段内出现毒素升高。
因此，推断半褶织纹螺能自身产生河豚毒素，也能从食物链获得河豚毒素。
关键词;织纹螺;河豚毒素;富集;超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）中图分类号;S917.4文献标识码;A文章编号;0517-6611（2019）22-0097-03Abstract;The common snails of Nassarius semiplicatus were fed with toxic pufferfish liver and nontoxic shrimp meat in laboratory environment.The samples were taken regularly to analyze the changes of TTX content by UPLCMS/MS based on immunoaffinity column （IAC）purification.The results showed that Nassarius semiplicatus had high tolerance to toxin.After feeding toxic puffer fish liver，the toxin content in the body increased rapidly.When the nontoxic shrimp meat was fed，the accumulated TTX tended to decrease initially，but then the toxin content increased rapidly.In the same time period，there was an increase of toxin in the treatment group andthe control group.Therefore it could be hypothesized that TTX in Nassarius semiplicatus might be produced by themselves.At the same time，Nassarius semiplicatus could enrich TTX through the food chain.Key words;Nassarius spp.;Tetrodotoxin;Enrichment;UPLCMS/MS織纹螺（Nassarius spp.）是一类海洋腹足类动物，是沿海地区常见的螺种，大多生活在潮间带滩涂上，腐食性，在我国从南到北都有分布，主要在浙江、江苏、广东、福建一带，其中最常见的是半褶织纹螺（Nassarius semiplicatus）。
AFB1免疫亲和柱使用说明书
2013版苏微黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书【产品用途】黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫亲和柱适合于和AFB1酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测AFB1。
用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。
纯化后的样品可用不同的分析方法测定。
【适应范围及产品性能】用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中AFB1时的样本前处理。
柱吸附能力：≥100ng/支（可根据要求选择相应柱容量）；回收率：75%~90%。
柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。
【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFB1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFB1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFB1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用甲醇洗脱AFB1，然后进行相关分析。
【产品组成】标准品（选配）。
25支/盒，1mL柱管/支；20支/盒，3mL柱管/支。
说明书1份。
【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】（1）谷物、花生及其制品----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用定量滤纸过滤，----准确移取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。
OA亲和柱说明书
2013版苏微赭曲霉毒素（OA）免疫亲和柱使用说明书【产品用途】赭曲霉毒素（OA）免疫亲和柱适合于和OA酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测OA。
用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。
纯化后的样品可用不同的分析方法测定。
【适应范围及产品性能】用于定性、定量检测粮食、食品等样本中OA的样本前处理。
柱吸附能力：≥40ng/支（可根据要求选择相应柱容量）；回收率：70%~90%。
柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。
【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，赭曲霉毒素（OA）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的OA经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过OA免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，OA与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用甲醇洗脱OA，然后进行相关分析。
【产品组成】标准品（选配）；25支/盒；1mL柱管/支；说明书1份；【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。
【试剂配制】提取液1：甲醇+水（80+20）提取液2：称取150g氯化钠、20g碳酸氢钠，于约950mL水中溶解后，加水定容至1L。
冲洗液（用于酒类样品）：称取25g氯化钠、5g碳酸氢钠，于约950mL水中溶解后，加水定容至1L。
清洗缓冲液（用于粮食等样品）：称取25g氯化钠、5g碳酸氢钠，加入0.1mL吐温-20，加水定容至1L。
PBS缓冲液（pH7.0）：分别称取8g氯化钠、1.2g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾，用990mL水将上述试剂溶解，然后用浓HCl调pH至7.0，最后用水定容至1L。
河豚毒素的新国标与检测
河豚毒素的新国标与检测作者：梁文文来源：《食品安全导刊》2017年第10期在中国古代人们便对河豚毒素的毒性有了深刻认识。
晋人左思《三都赋·吴都赋》便有“王鲔鯸鲐”之句，其注曰：“鯸鲐鱼状，如蝌蚪，大者尺余，腹下白，背上青黑，有黄纹，性有毒。
”沈括在《梦溪笔谈》中说：“吴人嗜河豚鱼，有遇毒者，往往杀人，可为深戒。
”即便如此，河豚的鲜美仍使人趋之若鹜，所以长久以来就有“拼死吃河豚”的说法。
随着科学技术的进步，人类可以运用检测手段来避免河豚毒素造成的伤害，而如何检测河豚毒素是防止人们中毒的重中之重。
检测技术的改进，使得检测标准也有了变化。
在由《食品安全导刊》、食安中国网共同举办的线上专题研讨会“食安大讲堂”中，美正生物运营总监伦丽丽围绕“河豚毒素检测技术”进行了详细的阐述。
什么是河豚毒素？河豚毒素是一种通俗的说法，其学名为河鲀毒素（TTX），是鲀鱼类（俗称河豚鱼）及其它生物体内含有的一种生物碱，也是自然界中所发现的毒性最大的神经毒素之一，曾一度被认为是自然界中毒性最强的非蛋白类毒素。
TTX的毒性比氰化物高1250多倍，0.5mg即可致人丧命。
TTX对肠道有局部刺激作用，吸收后会迅速作用于人的神经末梢及神经中枢，并可高选择性和高亲和性地阻断神经兴奋膜上的钠离子通道，阻碍神经传导，从而引起神经麻痹甚至死亡。
TTX是起源于生物体本身还是其寄生物尚有争议，因为河鲀毒素及类似物不仅存在于各种鲀科鱼类中，还广泛分布于各种高等、低等生物中。
其他含有河鲀毒素的生物有一个共同点，即其体内含有多种能分泌毒素及其类似物的细菌，这些生物体内毒素的积累和分布因季节和部位不同而存在差异。
解读新国标GB 5009.206-2016《食品安全国家标准水产品中河豚毒素的测定》于2016年12月23日发布，2017年6月 23日实施，新标准规定了水产品中河豚毒素的4种测定方法。
第一法为小鼠生物法，适用于河豚鱼肌肉、肝脏、皮肤和性腺组织中河豚毒素的测定。
河豚毒素(TTX)产品说明书
河豚毒素（TTX）产品说明书一、产品简介1．英文名：Tetrodotoxin 简称TTX。
2．分子式：C11H17N3O8·1/2H2O3．分子量：319.284．化学结构图：二、可供产品三、化学性质可溶于酸性水或醇溶液。
在强酸或强碱溶液中，其活性易受破坏。
加温至220℃以下不熔，超过220℃以上逐渐变黑并炭化。
四、药理机制专一性阻断神经细胞膜Na+通道，由此阻断神经冲动的传递，产生药理作用。
五、技术指标1．感官指标：无嗅，无味，白色粉末状无定形结晶。
2．纯度指标：HPLC、H-NMR、HR-MS测定，TTX含量≥99%。
3．毒性指标：对小鼠LD50=10±0.5μg / kg（ip）。
六、产品用途在戒毒、镇痛、麻醉等方面具有高效、特异性功能，用于科研及新药研发。
七、保管及保质期存放在具有干燥剂的密封容器中，环境温度0-5℃（或室内常温），避光，保质期五年以上。
注意：保管本品必须具有防盗设施。
八、使用方法含有柠檬酸缓冲剂的TTX，可根据需要直接加入一定量的纯水，就可以溶解和使用。
不含柠檬酸缓冲剂的TTX，可采用柠檬酸或磷酸，或醋酸的水溶剂进行溶解，酸浓度一般为0.1%-1.0%，酸溶液用量一般为每毫克TTX加100μl。
九、声明本品属于剧毒药品，购买、运输、保管必须按照国家相关规定执行。
客户凡从本公司购买的河豚毒素必须妥善保管，要严防失窃，严防儿童接触。
使用时要加强防范，要防止误入口腔、眼睛、鼻腔及皮下组织，如发生事故，责任自负。
客户凡从本公司购买的河豚毒素，只能用于对人类有益的事业，不得用于研制武器或危害人类安全，否则，所产生的一切恶果由买方独自承担。
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河豚毒素（TTX）免疫亲和柱说明书
产品编号：MC01B
1、用途：
免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的河豚毒素，从而对样品起到非常针对性的纯化作用，过柱净化后的样品液可直接用于HPLC分析。
亲和柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的，以改善信噪比，提高检测方法的准确度。
2、概述：
河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)是豚鱼类（俗称河豚鱼）及其它生物体内含有的一种生物碱（氨基全氢喹唑啉型化合物），是自然界中所发现的毒性最大的神经毒素之一；其毒性比剧毒的氰化钠还要高1250多倍，0.5mg 即可致人于死命。
3、原理：
测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、稀释，缓慢的通过河豚毒素免疫亲和柱，在免疫亲和柱内河豚毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。
用洗脱液洗脱河豚毒素，然后注入到分析仪器中用于检测。
4、包装组成：
盒中包括各种规格的河豚毒素免疫亲和柱及1份说明书。
5、需要的材料但盒中不提供：
5.1设备
----HPLC
----气控操作架
----空气泵
----天平
----涡旋仪
----离心机
----25mL/50mL量筒
----离心管
----1mL移液器
----刻度试管
----针头滤器
----注射器
----样品瓶
----转接头（配3mL免疫亲和柱使用）
5.2 试剂
----甲醇(样品处理用分析纯，分析用色谱纯)
----乙酸（分析纯）
----NaCl（分析纯）
----十二水合磷酸氢二钠（分析纯）
----二水合磷酸二氢钠（分析纯）
----蒸馏水或去离子水。
6、注意事项：
----使用前，免疫亲和柱需回至室温（22～25℃）；
----亲和柱2～8℃储存，不得冻存；
----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱；
----取样量：根据需要可以适当增加或减少取样量，注意提取液量要相应改变；
----柱容量：柱容量是1000ng，当样本中待检毒素的含量除以稀释倍数高于柱容量时，需要适当降低上样液体积，重新检测。
----上机检测的溶剂与流动相保持一致可以消除溶剂效应影响；
----河豚毒素具有强烈的神经毒性，应戴手套口罩操作；
----使用过的容器及河豚毒素溶液最好用次氯酸钠溶液（5%V/V）浸泡过夜。
7、溶液配制：
7.1 1%乙酸-甲醇溶液
----移取5mL乙酸，用甲醇溶液稀释并定容至500mL；
7.2 PBS溶液（0.05M pH7.3）：
----称取十二水合磷酸氢二钠6.45g，二水合磷酸二氢钠1.0875g，氯化钠4.25g，用去离子水溶解并定容至500mL；
7.3 洗脱液（2%乙酸-甲醇）
----移取10mL乙酸，用甲醇溶液稀释并定容至500mL；
8、样品处理：
----称取2g样品，加入10mL 1%乙酸-甲醇溶液，涡旋振荡3min；
----于40℃水浴超声提取15min；
----冷却至室温后，于6000r/min离心5min；
----取上清，7mL上清液加入28mL PBS溶液进行稀释【用适量的1N 氢氧化钠溶液调整pH值至7左右】；----用玻璃微纤维滤纸过滤；
----移取10mL滤液作为上样液检测。
稀释倍数：2.5
9、操作程序：
----取出免疫亲和柱，将注射器筒的下端直接穿透亲和柱上方的塞子，完成亲和柱筒与亲和柱的连接，将其放置在气控操作架上进行固定，去掉亲和柱下方堵头，排尽柱内保存液；
----取10mL步骤8中的待上样液，注入到注射器筒中；
----调节开关，使液体以1~2滴/秒的速度流出；
----待液体排干，用10mL蒸馏水洗涤1次，流速2~3滴/秒；
----待液体排干，往柱管内加入2mL洗脱液，堵上亲和柱堵头静置2min，用试管收集洗脱液，流速1滴/秒，再加入2mL洗脱液，收集洗脱液，待液体排干后，将洗脱液于40℃下氮气吹至近干，用流动相定容至1mL；----混匀后用0.22μm滤器过滤至样品瓶进行液相检测。
* 使用前，免疫亲和柱需回至室温（22~25℃）。
* 每次上样前都要将亲和柱内上次液体完全排干。
* 也适用于GB 5009.206-2016。
10、结果判读：
河豚毒素=检测浓度×稀释倍数
11、贮藏条件及保存期
贮藏条件：2~8℃。
保存期：该产品有效期为12个月。