河豚毒素免疫亲和柱的说明书

河豚毒素（TTX）免疫亲和柱说明书

产品编号：MC01B

1、用途：

免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的河豚毒素，从而对样品起到非常针对性的纯化作用，过柱净化后的样品液可直接用于HPLC分析。

亲和柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的，以改善信噪比，提高检测方法的准确度。

2、概述：

河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)是豚鱼类（俗称河豚鱼）及其它生物体内含有的一种生物碱（氨基全氢喹唑啉型化合物），是自然界中所发现的毒性最大的神经毒素之一；其毒性比剧毒的氰化钠还要高1250多倍，0.5mg 即可致人于死命。

3、原理：

测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、稀释，缓慢的通过河豚毒素免疫亲和柱，在免疫亲和柱内河豚毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用洗脱液洗脱河豚毒素，然后注入到分析仪器中用于检测。

4、包装组成：

盒中包括各种规格的河豚毒素免疫亲和柱及1份说明书。

5、需要的材料但盒中不提供：

5.1设备

----HPLC

----气控操作架

----空气泵

----天平

----涡旋仪

----离心机

----25mL/50mL量筒

----离心管

----1mL移液器

----刻度试管

----针头滤器

----注射器

----样品瓶

----转接头（配3mL免疫亲和柱使用）

5.2 试剂

----甲醇(样品处理用分析纯，分析用色谱纯)

----乙酸（分析纯）

----NaCl（分析纯）

----十二水合磷酸氢二钠（分析纯）

----二水合磷酸二氢钠（分析纯）

----蒸馏水或去离子水。

6、注意事项：

----使用前，免疫亲和柱需回至室温（22～25℃）；

----亲和柱2～8℃储存，不得冻存；

----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱；

----取样量：根据需要可以适当增加或减少取样量，注意提取液量要相应改变；

----柱容量：柱容量是1000ng，当样本中待检毒素的含量除以稀释倍数高于柱容量时，需要适当降低上样液体积，重新检测。

----上机检测的溶剂与流动相保持一致可以消除溶剂效应影响；

----河豚毒素具有强烈的神经毒性，应戴手套口罩操作；

----使用过的容器及河豚毒素溶液最好用次氯酸钠溶液（5%V/V）浸泡过夜。

7、溶液配制：

7.1 1%乙酸-甲醇溶液

----移取5mL乙酸，用甲醇溶液稀释并定容至500mL；

7.2 PBS溶液（0.05M pH7.3）：

----称取十二水合磷酸氢二钠6.45g，二水合磷酸二氢钠1.0875g，氯化钠4.25g，用去离子水溶解并定容至500mL；

7.3 洗脱液（2%乙酸-甲醇）

----移取10mL乙酸，用甲醇溶液稀释并定容至500mL；

8、样品处理：

----称取2g样品，加入10mL 1%乙酸-甲醇溶液，涡旋振荡3min；

----于40℃水浴超声提取15min；

----冷却至室温后，于6000r/min离心5min；

----取上清，7mL上清液加入28mL PBS溶液进行稀释【用适量的1N 氢氧化钠溶液调整pH值至7左右】；----用玻璃微纤维滤纸过滤；

----移取10mL滤液作为上样液检测。

稀释倍数：2.5

9、操作程序：

----取出免疫亲和柱，将注射器筒的下端直接穿透亲和柱上方的塞子，完成亲和柱筒与亲和柱的连接，将其放置在气控操作架上进行固定，去掉亲和柱下方堵头，排尽柱内保存液；

----取10mL步骤8中的待上样液，注入到注射器筒中；

----调节开关，使液体以1~2滴/秒的速度流出；

----待液体排干，用10mL蒸馏水洗涤1次，流速2~3滴/秒；

----待液体排干，往柱管内加入2mL洗脱液，堵上亲和柱堵头静置2min，用试管收集洗脱液，流速1滴/秒，再加入2mL洗脱液，收集洗脱液，待液体排干后，将洗脱液于40℃下氮气吹至近干，用流动相定容至1mL；----混匀后用0.22μm滤器过滤至样品瓶进行液相检测。

* 使用前，免疫亲和柱需回至室温（22~25℃）。

* 每次上样前都要将亲和柱内上次液体完全排干。* 也适用于GB 5009.206-2016。

10、结果判读：

河豚毒素=检测浓度×稀释倍数

11、贮藏条件及保存期

贮藏条件：2~8℃。

保存期：该产品有效期为12个月。