实验4测定细菌生长曲线复习过程
细菌生长曲线的测定的实验步骤
细菌生长曲线的测定的实验步骤一、实验目的1. 了解细菌生长曲线特征,测定细菌繁殖的代时;2. 学习液体培养基的配制以及接种方法;3. 反复练习无菌操作技术;4. 了解不同细菌,不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同;5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法二、 实验原理将一定量的细菌接种在液体培养基内,在一定条件下培养,可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性,如以细菌的活菌数的对数作纵坐标,以培养时间作横坐标,可绘成一条曲线,成为生长曲线(如图一)。
图一 微生物生长曲线示意图单细胞微生物的发酵具有四个阶段,即Ⅰ调整期(延滞期)、Ⅱ对数期(生长旺盛期)、Ⅲ平衡期(稳定期)、Ⅳ死亡期(衰亡期)。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。
不同的微生物有不同的生长曲线,同一种微生物在不同的培养条件下,其生长曲线也不一样。
因此,测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多,有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。
本实验采用比浊法测定,由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比,因此,可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
将所测得的光密度值(OD600)与其对应的培养时间作图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意,由于光密度表示的是培养液中的总菌数,包括活菌与死菌,因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间,即代时,以G 表示。
其计算公式为:2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=式中t1和t2为所取对数期两点的时间;W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量(g/L )或OD 。
三、 实验仪器、材料和用具1.实验材料:大肠杆菌,枯草杆菌菌液及平板;2.培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基3.实验仪器:取液器(5000ul, 1000ul 各一支);培养箱, 摇床,722s分光光度计;4.实验用具:无菌1000ul吸头80个;无菌5000ul吸头2个;比色皿9个+共用参比杯一个.四、实验步骤1.准备菌种:将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中,37℃振荡培养18h,另外准备单菌落平板各1块2.分为三个小组:第(1)小组取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm取3.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基,37 ℃ 200rpm取5.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基,37 ℃ 200rpm第(2)小组取一个大肠杆菌菌落接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基,37 ℃ 110rpm取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基, 30 ℃ 200rpm第(3)小组取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基, 30 ℃ 200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基, 37 ℃ 110rpm每培养一小时取样一次(2.5h,3.5h加测1次). 对照组测量起始pH,所有瓶子测量发酵9h结束测pH.3.测量:选用600nm波长,以蒸馏水作为参比,开始培养前测定每组培养液的OD值作为起始点。
微生物实验报告:测定细菌生长曲线
测定细菌生长曲线一、实验目的1.了解细菌生长曲线特征,测定细菌繁殖的代时;2.学习液体培养基的配制以及接种方法;3.反复练习无菌操作技术;4.了解不同细菌,不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同;5.掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法;二、实验原理将一定量的菌种接种在液体培养基内,在一定的条件下培养,可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性,如以细菌活菌数的对数做纵坐标,以培养时间做横坐标,可绘成一条曲线,称为生长曲线。
单细胞微生物发酵具有4个阶段,即调整期(迟滞期)、对数期(生长旺盛期)、平衡期(稳定期)、死亡期(衰亡期)。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。
不同微生物有不同的生长曲线,同一种微生物在不同的培养条件下,其生长曲线也不一样。
因此,测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多,有血细胞计数法,平板菌落计数法,称重法和比浊法。
本实验才用比浊法,由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比,因此,可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。
将所测得的光密度值(OD600)与对应的培养时间做图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意,由于光密度表示的是培养液中的总菌数,包括活菌和死菌,因此所测生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间,即代时,以G表示,其计算公式为:G=(t2-t1)/[(lgW1-lgW2)/lg2]式中t2和t1为所取对数期两点的时间,W1和W2分别为对应时间测得的细胞含量或OD。
三、实验器材大肠杆菌,枯草杆菌菌液及平板;培养基(100mL/250mL三角瓶×10瓶/大组):牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基;取液器(5000ul, 1000ul 各一支),无菌1000ul吸头若干,无菌5000ul吸头若干,比色皿10个及共用参比杯一个,培养箱3台,722s分光光度计;四、实验步骤1.活化菌种将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中,37℃振荡培养18h,另外准备单菌落平板各1块;2.接种6人大组分为3个小组,按表1接种。
细菌生长曲线的测定实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除细菌生长曲线的测定实验报告篇一:细菌生长曲线实验九测定细菌生长曲线[实验目的]1.了解细菌生长曲线特征:2.学习液体培养基的配制以及注意事项。
3.学习液体种子和固体种子的不同接种方法和注意事项。
4.利用细菌悬液浑浊度间接测定细菌生长。
[仪器和材料]1.实验材料(1)大肠杆曲,枯草杆曲培养液及大肠杆菌平板。
(2)牛肉膏蛋门胨葡萄糖培养基(150ml/250ml三角瓶x4瓶/大组),配方:牛肉膏5g,蛋白胨10g,nacl5g,葡萄糖10g,加水至1000ml,ph7.5。
2.实验仪器取液器(5000μl,1000μl,200tμl各一支);培养箱.摇床,722s分光光度汁;1000μl无菌吸头100个;5000μl 无菌吸头2(:细菌生长曲线的测定实验报告)个;1ml或4ml 玻璃或塑料比色皿4个,共用参比杯一个。
[实验原理]将一定量的细菌接种在液体培养基内.在一定的条件下培养,可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性,如以细菌活菌数的对数作纵坐标,以培养时间作横坐标,可绘成一条曲线,称为生长曲线(图91)。
单细胞微生物发酵具有4个阶段,即调整(迟滞期)、对数期(生长旺盛期)、平衡期(稳定期)、死亡期(衰亡期)。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程动态。
不同微生物有不同的生长曲线,同一种微生物在不同的培养条件下,其生长曲线也不一样。
因此,测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的.测定微生物生长曲线的方法很多,有血细胞计数法,平板菌落计数法,称重法和比浊法等。
本实验采用比浊法测定,由于细菌悬液的浓度与浑浊度成正比,因此,可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
将所测得的光密度值(测oD550或oD620或oD600或oD420,可任选一波长)与对应的培养时间作图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意,由于光密度表示的是培养液中的总菌数,包括活菌与死菌,因此所测生长曲线的衰亡期不明显。
细菌的生化实验报告
细菌的生化实验报告细菌的生化实验报告细菌是微生物界中最为常见的一类生物,它们以其微小的身躯和巨大的生物活动而闻名。
在本次实验中,我们旨在探索细菌的生化特性和其在环境中的作用。
通过实验,我们对细菌的生长、代谢和适应能力有了更深入的了解。
实验一:细菌的生长曲线在这个实验中,我们选择了大肠杆菌作为研究对象。
我们将大肠杆菌接种在培养基上,并在一定时间间隔内记录细菌的生长情况。
通过测量培养液中的细菌数量,我们绘制了细菌的生长曲线。
结果显示,细菌的生长曲线呈现出典型的“S”形曲线。
在实验初期,细菌数量增长较为缓慢,这是由于适应期的存在。
随着时间的推移,细菌进入了指数增长期,细菌数量迅速增加。
然而,随着培养基中营养物质的消耗和代谢产物的积累,细菌的生长速率逐渐减缓,进入了平台期。
这是由于细菌的生长受到了环境条件的限制。
实验二:细菌的代谢特性在这个实验中,我们研究了细菌的代谢特性,特别是其对碳源的利用能力。
我们选择了葡萄糖、乳糖和蔗糖作为碳源,通过测量细菌在不同碳源下的生长情况,评估了细菌对不同碳源的利用能力。
结果显示,大肠杆菌对葡萄糖的利用能力最强,其次是乳糖,而对蔗糖的利用能力较弱。
这表明细菌对碳源的利用能力存在差异,可能与其代谢途径和酶的分布有关。
此外,我们还观察到在不同碳源条件下,细菌的生长速率和产生的代谢产物也有所不同。
这提示我们,在实际应用中,选择合适的碳源可以促进细菌的生长和代谢活性。
实验三:细菌的适应能力在这个实验中,我们研究了细菌的适应能力,特别是其对环境压力的响应。
我们将大肠杆菌分别接种在不同的培养基中,其中一组培养基中添加了抗生素,另一组培养基中添加了高温。
结果显示,添加抗生素的培养基中,细菌的生长受到了明显的抑制。
抗生素通过抑制细菌的代谢活性和细胞分裂,从而阻碍了细菌的生长。
而在高温条件下,细菌的生长速率明显减慢,部分细菌甚至无法生存。
这表明细菌对环境压力的适应能力有限,过高的温度和抗生素的存在可能对细菌产生不可逆的影响。
细菌生长特点及生长曲线的测定
实验原理(分光光度计与比浊法)
朗伯-比尔定律 A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc
比浊法虽只能测相对数量,但便捷。某些情况 下,我们重在数量的变化而不在数量本身
三、实验内容
1、分光光度计的使用
2、大肠杆菌生长曲线的测定与绘制
四、实验材料
1. 试剂
蛋白胨、氯化钠、酵母浸粉等。 2. 仪器 托盘天平、高压蒸汽灭菌锅、分光光度计、恒温箱、恒温振荡 器。 3. 玻璃器皿 试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、移液管等。 4. 其它物品
药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、纱布、耐高温皮筋、 报纸等。
恒温振荡器(摇床)
五、实验流程
接种→培养→取样→比浊
★实验安排(4人一组) 第一组:LB 培养基,1:100
第二组: LB 培养基,1:50
第三组: LB 培养基,1:20 第四组: LB 培养基,1:100 第五组: LB 培养基,1:10 第六组: LB 培养基,1:5
二、实验原理
理想中生长曲线
1.4 1.2 1 0.8 0.6
0.4
数 量
n y=2
0.2 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 时间
理想中生长曲线
1.4 1.2 1 0.8 0.6
0.4 0.2 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 时间
八、讨论
1.接种龄如何影响大肠杆菌生长?
2.培养基营养成分/浓度如何影响大肠杆菌生长? 3.实验为何观察不到稳定期和衰退期? (请3选1,作答在实验报告上)
★实验安排(4人一组) 第一组:LB 培养基,1:100
第二组: LB 培养基,1:20
实验4测定细菌生长曲线
仪器:
摇床、分光光度计、取液器。
微生物材料
大肠杆菌菌液、枯草杆菌菌液
培养基
肉汤蛋白胨液体培养基
用具
玻璃比色皿,三角瓶,酒精灯,接种环。
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五、准备步骤
准备菌种:将大肠杆菌和枯草杆菌分别接到于肉汤 蛋白胨液体培养基中,37℃振荡培养14-18h。 另准备大肠杆菌和枯草杆菌斜面种子各1支。
• 将所测的光密度值(OD)与其对应的培养时间作图, 即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线(注意:由于 光密度表示的是培养液的总数,包括活菌与死菌所测 的生长曲线衰亡期不明显)。
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微生物的典型生长曲线图 Ⅰ.延滞期,Ⅱ.指数期,Ⅲ.稳定期,Ⅳ.衰亡期
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四、实验仪器、材料和用具
细菌的生长曲线分为:迟缓期、对数期、稳定期和 衰退期。其表示细菌从开始生长到死亡全过程的动 态。测定微生物的生长曲线对于了解和把握生物的
生长规律是很有帮助的。
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• 测定微生物生长曲线的方法有血球计数法、平板菌落 计数法、称重法和比浊法等。
• 比浊法:由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比。故可 用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
接种:分别取5ml大肠杆菌或枯草杆菌液接种到装有 100ml培养液的三角瓶中,放摇床37℃,200rmp振 荡培养。同时分别从大肠杆菌或枯草杆菌斜面取菌 接种于100ml培养液中,同样条件培养。
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测定(OD)
每小时吸取200ul培养液到2800ul蒸馏水中摇匀, 以蒸馏水为对照,选420nm波长进行光密度(OD值) 的测定(注意应测定0h的光密度值)。
细菌生长曲线的测定的实验步骤
细菌生长曲线的测定的实验步骤一、实验目的1. 了解细菌生长曲线特征,测定细菌繁殖的代时;2. 学习液体培养基的配制以及接种方法;3. 反复练习无菌操作技术;4. 了解不同细菌,不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同;5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法二、 实验原理将一定量的细菌接种在液体培养基内,在一定条件下培养,可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性,如以细菌的活菌数的对数作纵坐标,以培养时间作横坐标,可绘成一条曲线,成为生长曲线(如图一)。
图一 微生物生长曲线示意图单细胞微生物的发酵具有四个阶段,即Ⅰ调整期(延滞期)、Ⅱ对数期(生长旺盛期)、Ⅲ平衡期(稳定期)、Ⅳ死亡期(衰亡期)。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。
不同的微生物有不同的生长曲线,同一种微生物在不同的培养条件下,其生长曲线也不一样。
因此,测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多,有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。
本实验采用比浊法测定,由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比,因此,可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
将所测得的光密度值(OD600)与其对应的培养时间作图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意,由于光密度表示的是培养液中的总菌数,包括活菌与死菌,因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间,即代时,以G 表示。
其计算公式为:2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=式中t1和t2为所取对数期两点的时间;W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量(g/L )或OD 。
三、 实验仪器、材料和用具1.实验材料:大肠杆菌,枯草杆菌菌液及平板;2.培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基3.实验仪器:取液器(5000ul, 1000ul 各一支);培养箱, 摇床,722s分光光度计;4.实验用具:无菌1000ul吸头80个;无菌5000ul吸头2个;比色皿9个+共用参比杯一个.四、实验步骤1.准备菌种:将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中,37℃振荡培养18h,另外准备单菌落平板各1块2.分为三个小组:第(1)小组取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm取3.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基,37 ℃ 200rpm取5.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基,37 ℃ 200rpm第(2)小组取一个大肠杆菌菌落接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基,37 ℃ 110rpm取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基, 30 ℃ 200rpm第(3)小组取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基, 30 ℃ 200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基, 37 ℃ 110rpm每培养一小时取样一次(2.5h,3.5h加测1次). 对照组测量起始pH,所有瓶子测量发酵9h结束测pH.3.测量:选用600nm波长,以蒸馏水作为参比,开始培养前测定每组培养液的OD值作为起始点。
细菌生长曲线测定实验方法的研究
细菌生长曲线测定实验方法的研究一、本文概述细菌生长曲线测定实验方法的研究对于深入了解细菌的生长规律、生长环境、生长条件以及生长过程中的代谢变化等方面具有重要意义。
本文旨在探讨细菌生长曲线测定的实验方法,包括实验原理、实验步骤、实验条件的选择与优化等方面,以期为提高细菌生长曲线测定的准确性和可靠性提供理论支持和实践指导。
本文将介绍细菌生长曲线测定的基本原理,包括细菌生长曲线的定义、特点以及影响因素等。
在此基础上,本文将详细阐述细菌生长曲线测定的实验步骤,包括实验材料的准备、实验条件的设置、实验过程的操作以及实验结果的记录与分析等。
本文将重点讨论实验条件的选择与优化。
实验条件是影响细菌生长曲线测定结果的关键因素,包括培养基的成分、温度、pH值、接种量等。
本文将通过对比实验和数据分析,探讨不同实验条件对细菌生长曲线的影响,从而确定最佳的实验条件组合。
本文将总结细菌生长曲线测定实验方法的优缺点,并提出改进意见和建议。
通过本文的研究,将为细菌生长曲线测定的实验方法提供更为准确、可靠的理论支持和实践指导,有助于推动细菌学研究的深入发展。
二、细菌生长曲线的理论基础细菌生长曲线测定实验方法的理论基础主要源自微生物生长动力学。
微生物生长动力学描述了微生物在特定环境下的生长规律,其中包括细菌生长曲线的形成机制。
细菌生长曲线是反映细菌群体生长状态的重要指标,通过对细菌生长曲线的分析,可以了解细菌生长的不同阶段,以及影响细菌生长的各种因素。
细菌生长曲线通常可分为四个主要阶段:延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期。
在延迟期,细菌适应新的生长环境,进行必要的代谢准备,此阶段细菌数量增长缓慢。
进入对数生长期后,细菌以指数方式迅速增长,这是细菌生长最为旺盛的阶段。
稳定期时,由于营养物质的消耗和代谢产物的积累,细菌增长速率逐渐减缓,细菌数量趋于稳定。
进入衰亡期,细菌由于营养物质的耗尽和代谢产物的毒性作用,生长速率急剧下降,细菌大量死亡。
生长曲线的测定
实验日期:2017.11.1 实验班级:生物技术指导教师:张建丽姓名:高熹学号:1120152430测定细菌生长曲线一.实验目的1.通过对大肠杆菌生长曲线的测定,了解细菌生长的特点,综合训练微生物实验的基本实验技能。
2.巩固培养基的配制、灭菌、仪器的包扎、倒平板。
3.掌握用比浊法测定细菌的生长曲线。
二.实验原理将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中,在适宜的条件下进行培养,一定时间测定培养液中的菌量,以菌量的数量作纵坐标,生长时间作横坐标,绘制的曲线叫生长曲线。
它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。
依据其生长速率的不同,一般可把生长曲线分为延缓期、生长期、稳定期和衰亡期。
将每一种一定量的细菌转入新鲜液体培养基中,在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个阶段。
延迟期:又叫调整期。
细菌接种至培养基后,对新环境有一个短暂适应过程(不适应者可因转种而死亡)。
此期曲线平坦稳定,因为细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异,一般为1~4小时。
此期中细菌体积增大,代谢活跃,为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。
对数生长期:又称指数期。
此期生长曲线上活菌数直线上升。
细菌以稳定的几何级数极快增长,可持续几小时至几天不等(视培养条件及细菌代时而异)。
此期细菌形态、染色、生物活性都很典型,对外界环境因素的作用敏感,因此研究细菌性状以此期细菌最好。
抗生素作用,对该时期的细菌效果最佳。
稳定期:该期的生长菌群总数处于平坦阶段,但细菌群体活力变化较大细菌浓度达到最大即环境最大容纳量。
由于培养基中营养物质消耗、毒性产物(有机酸、过氧化物等)积累PH下降等不利因素的影响,细菌繁殖速度渐趋下降,相对细菌死亡数开始逐渐增加,此期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡。
细菌形态、染色、生物活性可出现改变,并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以及芽孢等。
细菌生长曲线
三、稳定期(stationary phase) 又称恒定期或最高生长期。处于稳定期的微生物, 新增殖的细胞数与老细胞的死亡数几乎相等,整个培养 物中二者处于动态平衡,此时的生长速度又逐渐趋向零。
特 点: 1.培养物中细胞总数最高。如果为了获得大量菌体就 应在此阶段收获。
(一) 抗代谢物(antimetabolites)
在结构上与生物体所必需的代谢产物很相似 ,以至 可以和特定的酶结合,从而阻碍了酶的功能 , 干扰了 代谢的正常进行,这些物质称为抗代谢物。磺胺类药 物 是最常用的化学治疗剂,它可抑制大多数革兰氏阳 性细菌和某些革兰氏阴性细菌的生长繁殖,能治疗多 种疾病。
连续培养(continuous cultivation)是指在一个恒 定容积的流动系统中培养微生物,一方面以一定速率 不断地加入新的培养基,另一方面又以相同的速率流 出培养物(菌体和代谢产物),以使培养系统中的细 胞数量和营养状态保持恒定,即处于稳态。 连续培养可分为:恒浊连续培养和恒化连续培养。
(二)电离辐射
X射线、α射线、β射线和 γ射线均为电离辐射。 电离辐射的杀菌作用主要是间接地通过射线本身引起 环境中水分子和细胞中水分子在吸收能量后导致电离 所产生的自由基起作用,如H20-、OH.、OH-等,上述离 子常与液体内存在的氧分子作用,产生一些具强氧化 性的过氧化物,如H2O2与HO2等使细胞内某些重要的蛋 白质和酶发生变化,如使酶蛋白的-SH基氧化,从而使 细胞受到损伤或死亡。
离心沉降分离法
处于同一生长阶段的同步细胞,其体积和质量大致相等, 处于不同生理阶段的细胞,体积和质量大小不等,子细胞与成 熟细胞大小差别较大,通过离心沉降,易于分开。然后用相同 大小的细胞进行培养便可获得同步培养物。
实验四细菌在培养基中的生长表现与生化实验
可以采用更先进的基因组学和蛋白质组学技术,对细菌的基 因和蛋白质表达进行分析,以更深入地了解细菌的生长机制 。
THANKS
感谢观看
学习并掌握生化实验的基本操作
学习并掌握生化实验的基本操作,如 细菌接种、培养基制备、菌落计数等 。
了解生化实验中常用的试剂和仪器, 并掌握其使用方法。
02
CATALOGUE
实验材料
细菌菌种
大肠杆菌
一种常见肠道细菌,可用于研究 肠道微生物生态和抗生素敏感性
。
金黄色葡萄球菌
一种常见皮肤和呼吸道细菌,可用 于研究其致病性和药物敏感性。
生长。
培养细菌
将接种后的培养基放入恒温培 养箱中,设定适宜的温度和湿
度,进行细菌培养。
观察记录
定时观察细菌的生长情况,记 录生长曲线、菌落形态等信息
。
生化实验操作
试剂准备
根据实验需求,准备所需 的生化试剂和器材。
实验操作
按照实验步骤进行生化实 验,记录实验过程中的现 象和数据。
结果分析
根据实验结果,分析细菌 的生化特性,如酶活性、 代谢产物等。
总结词
生长动力学参数
详细描述
通过生长曲线的分析,可以计算出细菌的生长速率、最大 生长量和倍增时间等生长动力学参数。这些参数对于评估 细菌的生长特性和优化培养条件具有重要意义。
总结词
生长曲线比较
详细描述
比较不同菌株或不同培养条件下细菌的生长曲线,可以分 析它们之间的差异和特点。通过比较,可以深入了解不同 菌株的生长特性和适应性,为菌株筛选和优化提供依据。
生化实验结果分析
总结词
糖发酵实验
详细描述
通过糖发酵实验,可以观察到细菌对不同糖类的利用能力 和代谢特点。分析实验结果,可以初步判断细菌的生化特 性,为菌种鉴定和分类提供依据。
细菌生长曲线的测定
细菌生长曲线的测定细菌生长曲线的测定是研究细菌生长过程中数量的变化规律的重要实验方法。
通过测定不同时间点上细菌的数量,我们可以了解细菌的繁殖速度、生命周期以及适宜生长环境等信息。
本文将介绍细菌生长曲线的测定步骤,并探讨其在科学研究和实际应用中的指导意义。
首先,测定细菌生长曲线的实验需要准备培养基、平板、试管等实验器材,以及待测的细菌样品。
将培养基倒入平板中,使其均匀地附着在平板表面上。
取一定量的细菌样品,接种在试管中的培养基中,然后将试管放入恒温培养箱中。
在不同时间点上,分别取出试管,通过将样品进行稀释后在平板上接种细菌来测定其数量。
通过计数细菌在平板上形成的菌落数,我们可以得到细菌数量随时间的变化规律。
细菌生长曲线通常可以分为四个阶段:潜伏期、指数期、平稳期和衰亡期。
在潜伏期,细菌数量较低,适生环境适宜时,细菌开始繁殖。
进入指数期后,细菌数量呈指数增长,繁殖速度较快。
在平稳期,细菌数量达到平衡,新生细菌数量与死亡细菌数量相等。
最后,在衰亡期中,细菌数量逐渐减少。
细菌生长曲线的测定对于科学研究和实际应用中有着重要意义。
在科学研究中,通过测定细菌生长曲线可以获得细菌的生命周期信息,了解其生长特性和繁殖机制。
这对于研究细菌的生物学特性、药物敏感性以及探索新的治疗方法具有指导意义。
此外,测定细菌生长曲线还可用于评估食品、水源等环境中的细菌污染情况,为公共卫生和食品安全提供重要依据。
在实际应用中,细菌生长曲线的测定可用于制定细菌培养条件和控制措施。
通过了解细菌的繁殖速度和繁殖条件,我们可以优化培养条件以提高细菌产量,或者通过调节环境因素来控制细菌的滋生。
此外,在药物研发和微生物工程中,测定细菌生长曲线可以评估抗生素对细菌的杀菌效果、药物毒性及其机制,为药物设计和微生物工程提供重要参考。
综上所述,细菌生长曲线的测定是一项生动、全面且具有指导意义的实验方法。
通过测定细菌数量随时间的变化规律,我们可以了解细菌的生长特性、繁殖机制和生命周期等信息。
大肠杆菌生长曲线的测定
实验结果
1、将测定的OD600值填入下表: 培养时间(h) 对照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20 OD600
2、绘制大肠杆菌的生长曲线:
OD600值
实用文档
培养时间/h
LB液体培养基配方:100ml 酵母提取物(Yeast extract): 0.5g
蛋白胨(Tryptone):1g 氯化钠(Nacl): 1g
不同培养时间的菌液
实用文档
OD600 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20
2.5 2
1.5 1
0.5 0 培养时间
实用文档
OD600 OD600校正
注意事项:
1. 选用规格一致的试管; 2. 每支试管的装液量应相同(5 ml/支); 3. 混匀的菌悬液加入到比色皿后应迅速读取OD值; 4. 保护比色皿透光面不受磨损,不要用手指直接接触; 5. 分光光度计在未测样品时应及时打开盖。
4将已接种的试管置摇床37振荡培养200rpm在相应时间取出试管放于冰箱中最后一同测定od6005进行光密度测定时以未接种的lb液体培养基为空白对照从早取出的培养液开始依次测定细胞密度大的培养液用lb液体培养基稀释后测定使od600值在01065之内
大肠杆菌生长曲线的测定
授课教师: 孙运军 研 究 生: 何浩 张晨
床、无菌试管、无菌吸管。
实用文档
操作步骤
1、配制LB液体培养基100 ml,分装1支试管(5 ml/支),剩余培养 基装入250 ml的三角瓶,121℃灭菌20min。
2、取11支无菌大试管,用记号笔分别标明培养时间,即0、1.5、 3、4、6、8、10、12、14、16和20 h。
3、用5 ml无菌吸管取2.5 ml大肠杆菌培养液(培养12h)转入装有 LB液体培养基的三角瓶内,混匀后分别取5ml混合液放 入上述标记的11支无菌大试管中。
实验四二次生长曲线
四、操作步骤
1. 取培养24h的E.coli斜面加5ml无菌水洗下,接种于肉膏蛋 白胨培养基中,摇床活化3h,供实验接种用。 2. 配制生长培养基 ,用250ml三角瓶装置50ml,共装42瓶。 加好纱布塞,115OC灭菌25分钟。 3. 接种 将上述准备好的处于对数生长期的大肠杆菌悬液 每瓶接1ml。
4:30
5:00
2-4组每隔5分钟取样,每次3瓶,分别测定OD值,计算平均值。
四、结果与讨论
以生长时间为横坐标,光密度(OD值) 为纵坐标绘制生长曲线。
结合诱导酶形成过程解释E.coli二展生 长曲线。 实验操作中如何保证菌体快速增长?
附录:牛肉膏蛋白胨液体培养 基
牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 水 1000ml pH 7.0-7.2
典型生长曲线典型生长曲线二展曲线二次生长二展曲线二次生长曲线曲线微生物生长测定方法微生物生长测定方法延滞期对数延滞期对数生长期稳定生长期稳定期衰亡期期衰亡期培养基中同时存在两类糖时细菌生长表现出培养基中同时存在两类糖时细菌生长表现出一条双峰的生长曲线
实验四 微生物二展生长曲线
一、基本原理
典型生长曲线
14周(5月20日)实验操作考试
考核内容:微生物生理学基本实验 操作、原理及注意事项
4. 摇床振荡培养 将发酵瓶置37℃恒温室摇床振荡培养3小 时,按编号顺序分别按下面时间取出,每次取3瓶(即3个 重复),用721型分光光度计测OD450nm ,计算其平均值, 填下表。
负责 人
瓶号
再培养时间
OD值
负责人
瓶号
再培养时间 OD值
1组 1组 1组
1,2,3 4,5,6 7,8,9
生长曲线的测定
实验日期:2017.11.1 实验班级:生物技术指导教师:张建丽姓名:高熹学号:1120152430测定细菌生长曲线一.实验目的1.通过对大肠杆菌生长曲线的测定,了解细菌生长的特点,综合训练微生物实验的基本实验技能。
2.巩固培养基的配制、灭菌、仪器的包扎、倒平板。
3.掌握用比浊法测定细菌的生长曲线。
二.实验原理将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中,在适宜的条件下进行培养,一定时间测定培养液中的菌量,以菌量的数量作纵坐标,生长时间作横坐标,绘制的曲线叫生长曲线。
它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。
依据其生长速率的不同,一般可把生长曲线分为延缓期、生长期、稳定期和衰亡期。
将每一种一定量的细菌转入新鲜液体培养基中,在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个阶段。
延迟期:又叫调整期。
细菌接种至培养基后,对新环境有一个短暂适应过程(不适应者可因转种而死亡)。
此期曲线平坦稳定,因为细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异,一般为1~4小时。
此期中细菌体积增大,代谢活跃,为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。
对数生长期:又称指数期。
此期生长曲线上活菌数直线上升。
细菌以稳定的几何级数极快增长,可持续几小时至几天不等(视培养条件及细菌代时而异)。
此期细菌形态、染色、生物活性都很典型,对外界环境因素的作用敏感,因此研究细菌性状以此期细菌最好。
抗生素作用,对该时期的细菌效果最佳。
稳定期:该期的生长菌群总数处于平坦阶段,但细菌群体活力变化较大细菌浓度达到最大即环境最大容纳量。
由于培养基中营养物质消耗、毒性产物(有机酸、过氧化物等)积累PH下降等不利因素的影响,细菌繁殖速度渐趋下降,相对细菌死亡数开始逐渐增加,此期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡。
细菌形态、染色、生物活性可出现改变,并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以及芽孢等。
简述细菌的生长曲线及其实际意义
简述细菌的生长曲线及其实际意义试验一,细菌的生长曲线实验目的:通过生长曲线测量、培养细菌,获得在不同时间的实际菌数,从而了解细菌的繁殖特性。
方法与步骤:一、选取适当大小的烧杯三只(直径30cm,高20cm)。
分别注入75%的酒精10ml,然后分别加入3、 5ml、 1ml的不同浓度的葡萄糖溶液,再分别加入等量的接种培养液,每只容器的液面高度约为容器的1/2。
另取3mL无菌蒸馏水分别加入到第三只烧杯中。
二、用弯曲的玻璃棒轻轻搅拌,使葡萄糖充分溶解。
取出一只稍冷却的烧杯,迅速将此烧杯倒扣于平皿上。
另取一只稍冷却的烧杯,迅速将此烧杯倒扣于平皿上,这样依次重复三次。
三、平板打开后,待其自然冷却至37 ℃左右时,制成细菌平板。
并计算各菌种在不同培养条件下,该菌种生长的曲线。
四、将各菌种稀释液均匀地分成相等的两组,分别设置5个对照组,每个对照组不变。
各组之间按照表1的比例配成含不同浓度葡萄糖的对照培养基,即对照组1、对照组2、对照组3、对照组4、对照组5。
把一支大烧杯中加满酒精,分别加入2。
0mL、 2ml、 1。
5ml、0。
8ml不同浓度的葡萄糖溶液。
并分别加入等量的接种培养液,每只容器的液面高度约为容器的1/2。
另取3mL无菌蒸馏水分别加入到第三只烧杯中。
二、用弯曲的玻璃棒轻轻搅拌,使葡萄糖充分溶解。
取出一只稍冷却的烧杯,迅速将此烧杯倒扣于平皿上。
另取一只稍冷却的烧杯,迅速将此烧杯倒扣于平皿上,这样依次重复三次。
三、平板打开后,待其自然冷却至37 ℃左右时,制成细菌平板。
并计算各菌种在不同培养条件下,该菌种生长的曲线。
四、将各菌种稀释液均匀地分成相等的两组,分别设置5个对照组,每个对照组不变。
各组之间按照表1的比例配成含不同浓度葡萄糖的对照培养基,即对照组1、对照组2、对照组3、对照组4、对照组5。
每过10天,记录一次菌落数,同时调查第二只烧杯中液体的颜色和气味,判断有无污染。
五、观察统计结果。
六、记录结果,绘制如下图示。
细菌生理的实验报告
一、实验目的1. 了解细菌生理的基本原理和实验方法。
2. 掌握细菌生长、代谢和繁殖的基本规律。
3. 通过实验操作,观察细菌在不同条件下的生理变化。
二、实验原理细菌生理学是研究细菌生命活动规律和生命现象的科学。
细菌生理实验主要包括细菌生长、代谢、繁殖和抗逆性等方面的研究。
本实验通过观察细菌在不同条件下的生理变化,了解细菌的生长、代谢和繁殖规律。
三、实验材料1. 菌种:大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等。
2. 培养基:牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基等。
3. 仪器:恒温培养箱、显微镜、移液枪、滴管等。
四、实验方法1. 细菌生长曲线的绘制(1)将大肠杆菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基中,在恒温培养箱中培养。
(2)分别在0、1、2、4、6、8、10、12、24小时取样,测定菌液的光密度(OD 值)。
(3)以时间为横坐标,OD值为纵坐标,绘制细菌生长曲线。
2. 细菌代谢产物的检测(1)将枯草芽孢杆菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中,在恒温培养箱中培养。
(2)分别于0、1、2、4、6、8小时取样,测定发酵液的pH值。
(3)观察并记录细菌发酵过程中有机酸的产生情况。
3. 细菌繁殖能力的观察(1)将大肠杆菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基中,在恒温培养箱中培养。
(2)每隔一定时间取样,计数菌落数,绘制细菌繁殖曲线。
五、实验结果与分析1. 细菌生长曲线通过实验,绘制了细菌生长曲线。
从曲线可以看出,细菌在生长初期呈对数生长期,随后进入稳定期,最后死亡。
2. 细菌代谢产物的检测实验结果显示,细菌在发酵过程中,有机酸的产生量随时间增加而增加。
这表明细菌在代谢过程中,将葡萄糖分解为有机酸。
3. 细菌繁殖能力的观察实验结果显示,细菌在生长过程中,菌落数随时间增加而增加,表明细菌具有繁殖能力。
六、实验结论1. 细菌在生长过程中,经历对数生长期、稳定期和死亡期。
2. 细菌在代谢过程中,将葡萄糖分解为有机酸。
3. 细菌具有繁殖能力,菌落数随时间增加而增加。
细菌生长曲线的测定
细菌生长曲线的测定1 目的1.1 了解细菌生长曲线特点及测定原理1.2 学习用比浊法测定细菌的生长曲线2 原理将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中,在适宜的条件下进行培养,定时测定培养液中的菌量,以菌量的对数作纵坐标,生长时间作横坐标,绘制的曲线叫生长曲线。
它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。
依据其生长速率的不同,一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。
这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。
因此通过测定微生物的生长曲线,可了解各菌的生长规律,对于科研和生产都具有重要的指导意义。
测定微生物的数量有多种不同的方法,可根据要求和实验室条件选用。
本实验采用比浊法测定,由于细菌悬液的浓度与光密度(OD值)成正比,因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度,并将所测的OD值与其对应的培养时间作图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线,此法快捷、简便。
3 材料3.1菌种大肠杆菌3.2培养基肉膏蛋白胨培养基3.3 仪器和器具721分光光度计,比色杯,恒温摇床,无菌吸管,试管,三角瓶。
4 流程种子液→标记→接种→培养→测定5 方法5.1种子液制备取大肠杆菌斜面菌种1支,以无菌操作挑取1环菌苔,接入肉膏蛋白胨培养液中,静止培养18h作种子培养液。
5.2标记编号取盛有50mL无菌肉膏蛋白胨培养液的250mL三角瓶11个,分别编号为0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。
5.3接种培养用2mL无菌吸管分别准确吸取2mL种子液加入已编号的11个三角瓶中,于37℃下振荡培养。
然后分别按对应时间将三角瓶取出,立即放冰箱中贮存,待培养结束时一同测定OD 值。
5.4生长量测定将未接种的肉膏蛋白胨培养基倾倒入比色杯中,选用600nm波长分光光度计上调节零点,作为空白对照,并对不同时间培养液从0h起依次进行测定,对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定,使其OD值在0.10.~0.65以内,经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数,才是培养液实际的OD值。
大肠杆菌生长曲线的测定
(一)目的要求1.通过细菌数量的测量了解大肠杆菌的生物特征和规律,绘制生长线。
2.复习光电比浊法测量细菌数量的方法。
(二)基本原理大多数细菌的繁殖速率很快,在合适的条件下,一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次。
将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中,在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期,对数期、稳定期和衰亡期四个阶段。
以培养时间为横坐标,以细菌数目的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细菌的生长曲线。
不同的细菌在相同的培养条件下其生长曲线不同,同样的细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不相同。
测定细菌的生长曲线,了解其生长繁殖规律,这对人们根据不同的需要,有效地利用和控制细菌的生长具有重要意义。
用于测定细菌细胞数量的方法已在上述实验作了介绍。
本实验用分光光度计(spectrophotometer)进行光电比浊测定不同培养时间细菌悬浮液的OD值,绘制生长曲线。
也可以直接用试管或带有测定管的三角瓶(图15-5)测定“klett units”值的光度计。
如图15—6所示,只要接种1支试管或1个带测定管的三角瓶,在不同的培养时间(横坐标)取样测定,以测得的klett units为纵坐标,便可很方便地绘制出细菌的生长曲线。
如果需要,可根据公式1 klett units=OD/0.002换算出所测菌悬液的OD值。
(三)器材1.菌种大肠杆菌2.培养基 LB液体培养基70ml,分装2支大试管(5ml/支),剩余60ml装入250ml的三角瓶。
3.仪器或其他用具 722型分光光度计,水浴振荡摇床,无菌试管,无菌吸管等。
(四)操作步骤1.标记取11支无菌大试管,用记号笔分别标明培养时间,即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h。
2.接种分别用5ml无菌吸管吸取2.5ml大肠杆菌过夜培养液(培养10~12h)转入盛有50ml LB液的三角瓶内,混合均匀后分别取5ml混合液放入上述标记的11支无菌大试管中。
药品生物技术《4细菌生长曲线-迟滞期》
➢生长曲线代表了单细胞微生物在新的环境中从开始生长、分裂直至死 亡的整个动态变化过程。
第一页,共五页型生长曲线
第二页,共五页。
〔一〕 延滞期
又称:停滞期、调整期、适应期-“万事开头难〞
1、特点: 生长速率常数R= 0; 细胞形态变大或增长;
细胞内RNA特别是rRNA含量增高,原生质嗜碱性增强; 合成代谢活泼〔核糖体、酶类、ATP合成加快〕,易产生诱导酶;
对外界不良条件反响敏感〔如氯化钠浓度、温度、抗生素等理 、化学药物〕。
第三页,共五页。
2、在发酵工业上需设法尽量缩短延迟期,措施有:
①接种龄:对数生长期的菌种接种,子代停滞期短;稳定 期的菌种接种,子代停滞期居中;停滞期或衰亡期菌种 接种,子代停滞期长。 ②增加接种量;一般来说, 接种量增大可缩短甚至消除 延迟期〔发酵工业上一般采用1/10的接种量〕。 ③调整培养基的成分,应适当丰富,且发酵培养基成 分尽量与种子培养基的成分接近。
第五页,共五页。
第四页,共五页。
内容总结
将少量纯种单细胞微生物接种到恒容积的液体培养基中后,在适宜的温度、通气〔厌氧菌除外〕等条件下,它们的群体会有 规律地生长起来。生长曲线代表了单细胞微生物在新的环境中从开始生长、分裂直至死亡的整个动态变化过程。又称:停滞期、 调整期、适应期-“万事开头难〞。合成代谢活泼〔核糖体、酶类、ATP合成加快〕,易产生诱导酶。对外界不良条件反响敏感 〔如氯化钠浓度、温度、抗生素等理、化学药物〕。②增加接种量
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一、实验目的
1.了解细菌生长曲线的特征,认识微生物在一定条 件下生长繁殖的规律。
2.掌握用细菌悬液的浑浊度间接测定细菌生长的方 法。
3.学习液体培养基的配制及接种方法。
二、 实验内容
测定大肠杆菌、枯草杆菌的生长曲线
三、实验原理
将一定量的细菌接种在液体培养基内,一定条件 下培养,细菌的生长繁殖具有一定的规律性。 以细菌活菌数的对数作纵坐标,培养时间作横坐 标,可绘成一条曲线,称为生长曲线。
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测定(OD)
每小时吸取200ul培养液到2800ul蒸馏水中摇ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ, 以蒸馏水为对照,选420nm波长进行光密度(OD值) 的测定(注意应测定0h的光密度值)。
每台分光光度计固定在1个参比杯,每人只能在同 一台分光光度计上测量(注意波长调好后,不要动 波长旋钮)。
六、结果与讨论
1)绘制大肠杆菌和枯草杆菌在两种接种方法下的生长曲线。 (标出生长曲线中四个时期的位置和名称) 2)为什么用比浊法测定的细菌生长只是表示细菌的相对生长 状况? 3)生长曲线中为什么会出现稳定期和衰退期?在生产实践中 怎样缩短延迟期?怎样延长对数期及稳定期?怎样控制衰退期? 4)接种时种子在什么条件下为宜,液体种子比斜面种子为什 么优越?
微生物材料 大肠杆菌菌液、枯草杆菌菌液
培养基 肉汤蛋白胨液体培养基
用具 玻璃比色皿,三角瓶,酒精灯,接种环。
五、准备步骤
准备菌种:将大肠杆菌和枯草杆菌分别接到于肉汤 蛋白胨液体培养基中,37℃振荡培养14-18h。 另准备大肠杆菌和枯草杆菌斜面种子各1支。
接种:分别取5ml大肠杆菌或枯草杆菌液接种到装有 100ml培养液的三角瓶中,放摇床37℃,200rmp振 荡培养。同时分别从大肠杆菌或枯草杆菌斜面取菌 接种于100ml培养液中,同样条件培养。
细菌的生长曲线分为:迟缓期、对数期、稳定期和 衰退期。其表示细菌从开始生长到死亡全过程的动 态。测定微生物的生长曲线对于了解和把握生物的
生长规律是很有帮助的。
• 测定微生物生长曲线的方法有血球计数法、平板菌落 计数法、称重法和比浊法等。
• 比浊法:由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比。故可 用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
• 将所测的光密度值(OD)与其对应的培养时间作图, 即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线(注意:由于 光密度表示的是培养液的总数,包括活菌与死菌所测 的生长曲线衰亡期不明显)。
微生物的典型生长曲线图 Ⅰ.延滞期,Ⅱ.指数期,Ⅲ.稳定期,Ⅳ.衰亡期
四、实验仪器、材料和用具
仪器: 摇床、分光光度计、取液器。