细胞培养技巧

细胞培养技巧

铺板：

1、一般96孔板每孔加100μl细胞悬液，从孔的左边靠近底部加入，加完半边板后，将未加的细胞悬液混匀一下再继续加剩余的半边板子，都加完后盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘，注意把握力度（一般轻敲三下），太强或次数太多会导致细胞集中成堆，将板顺时针旋转（逆时针效果不好），依次敲击剩余三个边，静置5min左右，放入37℃培养箱。

2、6孔板、12孔板或24孔板，均采用浸润孔底的方法。在第一个孔加入少量无血清培养基，晃动浸润整个孔底，然后用移液枪吸至第二孔，同样方法浸润孔底，其它孔依次类推，这样整个孔底都是湿润的，细胞悬液会平铺在整个孔底，加细胞悬液的时候可以避免加在中间而中间细胞多，加在周边晃匀后周边细胞多中间少的现象，细胞分散较均匀，注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下（在工作台上放置20-30min，细胞不差这一会温度和二氧化碳的，等细胞贴壁和孔板的底部有些附着了，轻轻移入到孵箱中）。振荡也可以采用轻拍的方式，但力度没有96孔板好掌握，效果没有96孔板好，所以推荐使用浸润孔底的方法。

3、细胞悬液加完后，将细胞培养板抬高，对着灯光，从底部往上看，看细胞有没有成团。然后从底部敲击，使之分散。

4、如果实验室有平板振荡器，建议使用这个仪器稍振荡一下，效

果会不错（振幅小，频率高）。

5、细胞要尽量吹散，大部分呈单个状态。离心后，要充分悬浮！还有，转移到孔板后要晃一下！晃的时候最好不要让细胞液转圈，不然细胞就全被带到中间去了，就会不均匀！

5、一瓶细胞长满后（均匀铺满一层），正常处理，在培养瓶里吹匀，然后铺6孔板，每孔2毫升，铺完之后不用观察直接用酒精棉擦拭，然后放到培养箱里，轻微的左三圈右三圈前三圈后三圈。基本上24小时之后观察每孔的细胞都会很均匀。

6、计算好所需要的全部液体量和细胞量，混匀后，加到六孔板里，六孔板按横8字型晃，显微镜下观察，如果不均匀，按上述方法再晃。如果细胞未计数直接接种的话，在种六孔板的过程中，随时晃一下混匀用的瓶子，瓶子我通常是顺时针或逆时针转圈。

7、放在水平板面上先上下移动，再左右移动，每个方向５到６次，但关键的是摇完后最好直接放入培养箱中，不要再做过多的运动，例如放到镜下去看，否则很容易就又聚到中间去了。

注：

1. 悬浮离心后的细胞团时，先不要把所有液体都加进去！一般先加2mL液体，然后用1mL移液器“轻轻”将细胞吹起，细胞像云雾一样散开，这样易于形成单细胞。

2. 离心收集细胞一般用低转速离心，250g（1000rpm/min），5min

就行，离心力太大容易抱团！

3. 接种细胞的时候从边缘缓慢注入，左右倾斜混匀。