葡萄籽提取物中原花青素含量的最佳测定方法
葡萄籽原花青素液相检测方法
原花青素原花青素原花青素原花青素HPLC初步方案初步方案初步方案初步方案一．实验目的：分析样品原花青素纯度，了解其中杂质成分。
二．实验方案：1. 方案一：Waters 公司高效液相色谱，C18柱(4.6 ×250 mm) , 检测波长为280 nm，进样量10μL ,柱温为室温。
待测液均经0.45μm 孔径的滤膜过滤。
流动相及流速见下表(A —10 %乙酸,B —重蒸水)：2. 方案二：（间接法定量）（原理类似铁盐催化比色法）(1) 标准曲线：称取前花青素标准品10mg 溶于10ml甲醇中,吸取该溶液0、0.1、0.25、0.5、1.0、1.5ml 置于10ml 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。
各取1ml 测定。
(2) 试样测定: 将正丁醇与盐酸按95 ：5的体积比混合后,取出6.0ml 置于具塞锥瓶中,再加入0.2ml硫酸铁铵[NH4Fe(SO4) 2·12H2O]溶液（用浓度为2mol/L 盐酸配成2%(w/v)的溶液）和1.0ml 经0.45μm滤膜过滤的试样溶液,混匀,置沸水浴回流,精确加热40min后,立即置冰水中冷却,待进行高效液相色谱分析。
(3)液相色谱参考分析条件: 色谱柱Shimadzu Shim –pak CLC –ODS 4.6 ×150mm;柱温35 ℃;检测器:紫外检测器,检测波长525nm流动相: 水:甲醇:异丙醇:10 %甲酸= 73 :13 :6 :8 流速0.9ml/min。
注：该方法使用的水解方法与我们当前使用的铁盐催化水解原花青素方法稍有差异，哪种效果更好，可进行预实验加以比较。
3．方案三：（反相高效液相色谱）标样：原花青素标准品色谱柱：Hypersi ODS-2 ，150 × 4.6mm 5μm；流动相：A：0 . 2%(V/V) 乙酸；B：乙腈；流量：1ml /min；进样量：5μl;柱温：30℃；检测波长：280nm.洗脱梯度：以乙腈的百分比浓度表示(B液溶于A液)0 ～5 % ，10min；5%～20%，10～20min；20%～40%，20～40min；40%～50%，40～50min；50%～5%，45～50min；5%～0，50～60min。
比色法测定葡萄皮和葡萄籽中原花青素的含量
中国公共卫生 2003 年第 19 卷第 10 期 Chi n J Public Healt h 2003 V ol . 19 No. 10
文章编号 : 100120580 (2003) 1021228202 中图分类号 : R151 文献标识码 : A
【实验研究】
比色法测定葡萄皮和葡萄籽中原花青素的含量
作者单位 : 11 浙江省卫生监督所 ,杭州 310009 ; 21 浙江省疾病预防控制中心
作者简介 : 张法明 (1952 - ) ,男 ,浙江黄岩人 ,主管医师 ,大专 ,主要从 事食品卫生监督工作 。
件样品含量比较高 ,分别是猪肉样品 1 件 ,为 01468 mg/ kg ;猪 肝样品 2 件 ,分别为 01186 ,01341 mg/ kg ;猪肺样品 3 件 ,分别 为 01136 ,01470 ,01249 mg/ kg ;猪尿样品 2 件 ,分别为 01360 , 01161 mg/ kg ;猪饲料 1 件 ,为 01689 mg/ kg。(2) 不同监测点 样品盐酸克仑特罗检出阳性率 :屠宰场 、农贸市场及宾馆饭店 等饮食业采样 610 件 ,阳性 67 件 ,阳性率为 1110 % ;其中屠 宰场采样 469 件 ,阳性 50 件 ,阳性率为 1017 % ;农贸市场采 样 129 件 ,阳性 17 件 ,阳性率为 1312 % ;养猪场 (户) 采样 79 件 ,阳性 5 件 ,阳性率 613 % ;饮食业采样 12 件 ,未检出盐酸 克仑特罗 。(3) 不同地区盐酸克伦特罗阳性率比较 :4 个市共 送检样品 610 件 ,其中曾发生过盐酸克仑特罗食物中毒的 3 个市的阳性率分别为 2212 % ,1115 %和 219 % ;作为对照的另 一个市未检出阳性样品 。阳性率与各市发生中毒起数基本一 致。
葡萄籽提取物中原花青素含量的测定
ｍＩ和 一定 体 积 的 浓 盐 酸 ， 匀 ， 于 （０± 摇 置 ２
关键词
葡萄籽． 原花青 素，香 草醛法，音量测定
原 花青 素是指 从植 物 中分离得 到 的一类
在热酸 处理 下 能产 生花 色 素 的 多酚 化 合 物 。 近 年来 ， 类 化 合物 所 体 现 的 生物 活 性 屡 见 该
公司 产 品 （ ｓ ； 萄 籽精 提 取 物 为 四 川大 Ｙ Ｐ） 葡 力 天然 产 物 公 司产 品 （ Ｄ ； 萄 籽 提 取 物 Ｓ Ｐ） 葡 制 成品 为美 国 Ｌ ＨＰ公 司产 品。
已有 多家 企 业 正 着 手 该 类 产 品 的生 产 。 目
ＵＶＱ５ １ Ｃ型 光 谱 仪 为 日本 岛津 公 司 ０Ｐ
产 品
前， 关于原 花青 素的 测定 方法还 无统 一 标准， 而文献报道 的几 种 方 法 中， 丁醇 法 ＿ 受 原 正 ２ 花青 素结构 的影 响较 大 ， 于 低 聚 合 度 原 花 对 青 素 的测 定并不适 宜 ； 草 醛． 酸法 ＿ 由于 香 硫 ３ ］ 硫 酸的强 氧化作 用也 使得 测定结 果偏 低 。本
１ ７
维普资讯 Βιβλιοθήκη 食 品与 发 酵 工 业
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５ ０ ｍ 处的 吸光 度 ， ０ｎ 由标 准 曲线求 得 试 样 中
高铁盐_铁氰化钾分光光度法测定葡萄籽原花青素的含量
样品的分析 准确称取葡萄籽提取物保健药品，依照实验方
法测定， 结果见表 "。
表& 样品 样品含量 (I5 A6V 9 粒 I(5 *H 样品测定结果 （ ’ ( $） EFG 加入量 测得量 回收率 H !V 9 68 45 <" "5 4< 45 <" "5 4< !V 9 68 45 AI "5 4* 45 <* "5 4! H IA5 = I=5 ( "4$5 = I<5 !
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凯氏定氮法测定粗蛋白应注意的几个问题
雷彩霞
（ 安徽省宿州市粮油中心化验室， 安徽 宿州 "#$%%% ） 摘 要：阐述了凯氏定氮法测定蛋白质中应注意的几个问题， 并提出了相应的解决办法。 文献标识码：* 文章编号：+%%( , !#-. / "%%# 0 %+ , %%!" , %#
溶性深蓝色配位化合物， 在 $%",- 处有最大吸收 ，线性范围为 ". % / %" !0 1 -2， !+ 3 ". &&&4 ，567 为 %. %8 / %. )8 ， 回收率为 &9. :8 / %"+. 98 。 关键词：高铁盐 # 铁氰化钾 ; 葡萄籽 ; 原花青素 ; 分光光度法 中图分类号：<6 +"$. ) 文献标识码：= 文章编号：%""$ # !)&9 > +"") ? "% # ""!" # "+
葡萄籽提取物中原花青素含量的测定
标准物
表儿茶素 儿茶素
YS P 含量
/% 19.10 21.57
相对标准偏差
/% 1.83 0.79
线性范围
/μg.mL -1 10 ～ 100 10 ～ 150
原花青素是由不同数量的儿茶素或表儿 茶素单体及其聚合体构成的多酚化合物 , 聚 合体在酸的作用下易降解成儿茶素或表儿茶 素单体 。葡萄籽提取物中的原花青素主要以 儿茶素及其二聚体为主 , 故采用儿茶素作为
其中盐酸添加量为 6.0 m L 时的相对标准偏 差最低 , 如表 2 所示 。 这可能是由于反应环 境 pH 值的不同 , 导致反应生成的正碳离子 具有不同的稳定性 。
表 2 盐酸添加量对测定结果的影响
盐酸添加量/m L 5.0 原花青素含量/ % 19 .93 相对标 .57
0 .79
7.0 21 .04
0 .85
8.0 20 .88
0 .91
2.3 反应时间的确定 实验发现 , 随着反应时间的延长 , 儿茶素
或原花青素与香草醛形成的有色化合物会使
反应液颜色逐渐变深 , 但随后又逐渐减弱 , 吸 光值降低 , 这说明反应过程形成的有色物质 不稳定 , 其结构会发生一定程度的改变 。 图
参 考文献
1 石 碧 , 狄 莹 .植 物 多 酚 .北 京 :科 学 出 版 社 , 2000.126 ～ 133
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F &F I 政策 法规 标准
葡萄籽提取物中原花青素含量的最佳测定方法
葡萄籽提取物中原花青素含量的最佳测定方法葡萄籽提取物-原花青素被誉为“最强效的自由基清除剂”，其抗氧化能力是VC的20倍，VE的50倍。
也是唯一能透过血脑屏障的抗氧化剂，因此在促进皮肤新陈代谢，分解黑色素，以及提高机体免疫力，延缓衰老方面的应用极为广泛。
葡萄籽提取物由原花青素、儿茶素、表儿茶素、没食子酸等多酚类物质组成的，由于原花青素的成分极其复杂，目前的研究实验中还无法提供原花青素的标准品，因此Bate-Smith 和Porter法只能测定葡萄籽提取物中原花青素的相对含量。
一、Bate-Smith法、Porter法测定葡萄籽原花青素含量西安源森生物实验室对Bate-Smith法和Porter法测定原花青素相对含量实验进行了研究：（一）Bate-Smith法测定葡萄籽原花青素含量【实验目的】由于目前没有原花青素的标准品，因此此方法测定的只是葡萄籽提取物中原花青素的相对值，其含量用原花青素指数(procyanidolic index)来表示。
【Bate-Smith法原理】原花青素在酸性条件下加热转化为红色的花青素(图1)。
【实验步骤】称取适量的葡萄籽提取物(约15～40mg)用甲醇溶解，最后定溶于100ml。
从中取1ml样品溶液加到10ml比色管中，然后再加入6ml盐酸-正丁醇溶液(5/95,V/V)，在97℃±1下反应40min后，取出迅速冷却，在550nm处测定其吸光度，以甲醇代替提取物溶液作为空白。
原花青素指数=A×7.0/WW:样品质量(g)；A:吸光度【实验结果】由于用Bate-Smith法测得的葡萄籽提取物中原花青素指数一般在80～100之间，有时也可能大于100。
因此，目前很多植物提取物生产厂家使用原花青素指数来表示葡萄籽提取物中原花青素的百分含量，是不正确的。
（二）Porter法测定葡萄籽原花青素含量【实验概述】由于Bate-Smith法测定的结果重现性很差,并且原花青素在此条件下反应不是很彻底。
紫外分光光度法测定葡萄籽提取物中的原花青素含量
紫外分光光度法测定葡萄籽提取物中的原花青素含量作者：傅武胜， 赵道辉， 黄剑锋作者单位：傅武胜,赵道辉(福建省卫生防疫站,福州,350001)， 黄剑锋(南京市卫生防疫站,南安,360001)刊名：食品研究与开发英文刊名：FOOD RESEARCH AND DEVELOPMENT年，卷(期)：2002，23(6)被引用次数：27次1.Vanhaelen M.Vanhaelen-Fastrer TLC-densimetric determination of 2 3-procyanidin monomer and oligomers from hawthorn (crataegus Laevigata and C.monogyna) 1989(12)2.傅武胜铁盐催化比色法测定葡萄籽提取物中原花青素的研究[期刊论文]-食品与发酵工业 2001(10)wrence J Porter.Liana N Hrstrichm.bock G查看详情 1986(01)4.David M I Mcmurrough.Malcom R Smyth Determination of proanthocyanidins and catechins in beer and barley by high-performance liquid chromatography with dual-electrode electrochemical detection 19945.Toshiko Shoji.Akio Yanagida.Tomomasa Kanda Gel permeation Chromatography of nathocyanin pigments from rose cider and red wine 1999(07)6.Yanagida nda T.Shoji Fraction of Apple Procyanidins by Size-exclusion Chromatography 19991.期刊论文马红江.王莹.葛彬.唐慧芬.李予霞.任雪艳吐鲁番地区常见品种葡萄籽中原花青素和脂肪含量的测定-安徽农业科学2008,36(8)[目的]测定吐鲁番地区常见葡萄品种葡萄籽中活性成分的含量.[方法]以吐鲁番地区常见的13个葡萄品种的葡萄籽为材料,测定并比较各品种葡萄籽中原花青素和脂肪的含量.[结果]在各品种葡萄籽中.和田红葡萄籽的脂肪含量最高,达21.5%;玛奶子葡萄籽次之,为21.0%;星浦一号葡萄籽最少,仅12.5%.原花青素含量最高的葡萄籽是黑提,达9.150%;赤霞珠次之,为8.790%;哈什汉最少,仅3.800%.[结论]该研究为吐鲁番地区葡萄籽的综合开发利用提供了理论依据.2.期刊论文任其龙.魏冠红.金米聪.苏宝根.黄梅.Ren Qilong.Wei Guanhong.Jin Micong.Su Baogen.Huang Mei 反相高效液相色谱-电喷雾质谱法鉴定葡萄籽低聚原花青素-食品与发酵工业2006,32(3)建立了采用LC-ESI-MS对葡萄籽提取物中的多种低聚原花青素进行分析鉴定的方法.原花青素用体积分数60%乙醇水溶液从葡萄籽中提取并用聚酰胺柱层析精制后,以乙腈-1%醋酸水溶液为流动相在ZORBAXSB-C18柱上进行梯度洗脱分离,在电喷雾电离负离子模式下采用选择离子监测模式(SIM)将几种低聚体进行了选择性的分离.结果所检葡萄籽提取物中共含有(+)-儿茶素、(-)-表儿茶素和(-)-表儿茶素没食子酸酯3种单体、8种非酯型和4种没食子酸酯型共12种二聚体及4种非酯型三聚体等.建立的方法可以较好地解决葡萄籽中各种低聚原花青素的定性检测,了解提取物中原花青素的成分.同时文中还对原花青素二聚体的质谱碎裂途径进行了讨论.3.学位论文李春阳葡萄籽中原花青素的提取纯化及其结构和功能研究2006葡萄是世界上经济价值较高的一种水果，为葡萄科(Vitaceae)葡萄属(Vitis)植物。
葡萄籽提取物原花青素95%执行标准
葡萄籽提取物原花青素95%执行标准
葡萄籽提取物原花青素95%的执行标准主要包括以下内容：
1. 提取方法：采用超声波辅助萃取、回流萃取等方法，从葡萄籽中提取目标成分。
2. 成分含量：葡萄籽提取物原花青素的含量应达到95%以上。
3. 鉴定方法：应运用高效液相色谱（HPLC）或者紫外分光光度法等可靠的分析方法对葡萄籽提取物原花青素进行鉴定和分析。
4. 检测限值：确定葡萄籽提取物原花青素的检测限值，保证提取物的质量符合要求。
5. 外观特征：葡萄籽提取物原花青素应为深紫色至红棕色粉末，无异味。
6. 残留溶剂：葡萄籽提取物原花青素中不得含有明显的溶剂残留。
7. 重金属限量：葡萄籽提取物原花青素应符合国家或地区规定的重金属限量标准，确保产品安全。
需要注意的是，具体的执行标准可能会因国家、地区以及生产厂家的要求而有所不同，以上内容仅为常见的执行标准举例，具体要求还需参考相关标准文件。
葡萄籽原花青素含量检测方法
杭州尼诺生物科技有限公司葡萄籽原花青素一目的：建立葡萄籽原花青素含量测定法。
二仪器：紫外可见分光光度UV—UNIC7200。
三责任者：QC检验员。
四原理：原花青素在酸性条件下加热水解产生色素，产生色素的过程是定量反应。
通过检测水解产物的最大吸收波长下的吸光度对原花青素进行定量。
在吸光度0.2-0.7纳米范围内浓度和吸光度呈线性关系。
五试剂和对照品：甲醇（分析纯）正丁醇（分析纯）盐酸（分析纯）硫酸铁铵（分析纯）葡萄籽对照品（公司自制）六试剂配制及溶液配制：1 试剂配制：50%甲醇溶液：量取50毫升甲醇溶于50毫升纯化水中。
盐酸正丁醇溶液：量取5毫升盐酸溶于95毫升正丁醇，置阴凉处避光保存。
硫酸铁铵盐酸溶液：称取2克，NH4F e (SO4)212H2O溶于100毫升2摩尔/升的盐酸水溶液中。
2 溶液配制：对照品溶液：称取10毫克葡萄籽对照品，精密称定，用50%甲醇溶解并定容到100毫升容量瓶中。
供试品溶液：称取10毫克葡萄籽供试品，精密称定，用50%甲醇溶解并定容到100毫升容量瓶中。
七测定步骤：在一系列10毫升具塞硼硅酸玻璃刻度试管中，各加0.2毫升硫酸铁铵盐酸溶液，6毫升正丁醇盐酸溶液，再逐个加1毫升待测样品溶液，1毫升对照品溶液，1毫升甲醇（空白），记录试管体积V A。
加塞，振荡混匀。
于98。
C沸水浴中反应45分钟，取出试管于冰水中迅速冷却，记录试管的体积V B。
在546纳米处用紫外分光光度计检测相对于空白的吸光度。
八计算：此方法受环境因素影响，操作中用对照品来定量待测样，其计算公式如下：原花青素%=K×A1×M2×V1/（A2×M1×V2）式中：A1 为供试品吸收度A2 为对照液吸收度M1 为供试品称样量M2 为对照品称样量V1 为供试品最终体积V A-V BV2 为对照品液最终体积K 为对照品的含量。
葡萄籽原花青素的提取和检测方法
葡萄籽原花青素的提取和检测方法摘要:对原花青素的概念、测定方法及其存在的问题进行了分析，综述了原花青素的性质，安全性和提取、检测方法，并对统一的原花青素检测方法进行了展望。
关键词:葡萄籽原花青素提取检测EXTRACTION AND DETERMINA TION METHODS OF PROANTHOCYANIDIN FROM GRAPE SEEDAbstract:The definition, determination methods of proanthocyanidin from grape seed and their problems were analyzed. The character, safety, extraction methods of proanthocyanidin were also introduced in this paper. Besides, the development foreground of uniform determination method of proanthocyanidin was illustrated.Key words:grape seed ; proanthocyanidins ; extraction; determination20世纪70年代，法国科学家J．Masqulier发现了比松树皮更好的原花青素资源——葡萄籽。
“地中海地区膳食”健康效果揭示了酚类化合物和不饱和脂肪酸的神奇功效Ⅲ；“法国悖论”现象更是揭示了葡萄籽的多酚神奇功能。
葡萄籽中含有丰富的亚油酸、蛋白质、原花青素等成分，但研究最多的还是原花青素成分，现已被证明具有显著的抗氧化和清除自由基的活性，具有极大的开发前景。
同时由于葡萄籽原花青素成分的复杂性，原花青素概念认识的不一致，还没有统一的检测方法。
因此，迫切需要建立葡萄籽原花青素含量的统一分析方法，以便对葡萄籽原料及其产品中的原花青素准确定量。
以原花青素B2标定葡萄籽提取物中原花青素含量
以原花青素B2标定葡萄籽提取物中原花青素含量吴巍，程秀凤，王春辉，崔文熹，傅荧荧（天津市尖峰天然产物研究开发有限公司，天津300457）摘要：目的：建立以原花青素B2为标准品测定葡萄籽提取物中原花青素含量的方法。
方法：以含量≥99%的原花青素B2（HPLC标定）做标准品，参照Bate-Smith法，在546 nm处测定吸光度，来标定葡萄籽提取物中原花青素含量。
结果：原花青素B2通过Bate-Smith法反应后的吸收度与浓度成良好线性关系，其线性范围为22.89μg.mL-1～ 114.5μg.mL-1，r=0.99902（n=5）。
回收率：97.99%，RSD：1.02%(n=6)。
结论：该法以通过HPLC标定的原花青素单一成分B2做为标准品，解决了过去以原花青素混合物做标准品其原花青素含量标准不统一，无法让人信服的问题，其测定结果能准确反映葡萄籽提取物中的原花青素的真实含量，可用作质控方法。
关键词：原花青素B2; 原花青素;葡萄籽提取物Determine proanthocyanidins in grape seed extract with proanthocyanidin B2 standardWU Wei ，CHENG Xiu-feng，W ANG Chun-hui，CUI Wen-xi，FU Ying-ying（Tianjin Jianfeng Natural product R&D Co.，Ltd.，Tianjin 300457，China）Abstract: Objective: To establish a method for detecting proanthocyanidins in grape seed extract with proanthocyanidin B2 standard. Methods: Refer to the Bate-Smith method, using proanthocyanidin B2（≥99%;HPLC）to calibrate proanthocyanidins in grape seed extract at 546nm. Results: Linear range of proanthocyanidins is 22.89μg.mL-1～114.5μg.mL-1 (r=0.99902, n=5) ,Recovery: 97.99%, RSD: 1.02%( n=6 ). Conclusion: Using single ingredient proanthocyanidin B2 standard calibrated by HPLC to calibrate proanthocyanidins, resolving the problem that the standard content is not identical and can not convince when using proanthocyanidin compound standard. The method have better linearity and repeatability , can detect grape seed extract’s proanthocyanidins exactly.Key Words: proanthocyanidin B2; proanthocyanidin; grape seed extract原花青素是一类物质，它们是由儿茶素、表儿茶素及其没食子酸酯通过C4-C6或C4-C8键共价相连组成的多聚体，葡萄籽提取物中的最主要成分就是原花青素，各种1聚合程度的原花青素在其中混合存在着，测定其中总原花青素的含量是衡量其质量好坏的主要指标之一。
紫外分光光度法测定葡萄籽提取物中的原花青素含量
紫外分光光度法测定葡萄籽提取物中的原花青素含量
傅武胜;赵道辉;黄剑锋
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2002(023)006
【摘要】本文建立了葡萄籽提取物中原花青素的测定方法-紫外分光光度法.本法最低检测限为8.23μg,原花青素浓度在10.4～52.0μg/mL范围内线性相关,r=0.9996,加入浓度为52.0～520μg的原花青素标准溶液时,回收率(n=3)为96.2%～101%,RSD为0.45%～0.67%,符合测定要求.葡萄籽提取物样品经6次分析,平均含量为95.2%,铁盐催化比色法较之略高(99.3%).本法具有测定准确、稳定、灵敏,操作简便的特点,适用于葡萄籽精提物中原花青素总量的测定.
【总页数】3页(P90-92)
【作者】傅武胜;赵道辉;黄剑锋
【作者单位】福建省卫生防疫站,福州,350001;福建省卫生防疫站,福州,350001;南京市卫生防疫站,南安,360001
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
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1.钼酸铵分光光度法测定葡萄籽提取物中的原花青素 [J], 马亚军;杨秉勤;郎惠云
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3.紫外分光光度法测定花生衣原花青素的含量及平均聚合度 [J], 段圣飞;康倩倩;汪
豪;叶文才
4.高效液相色谱法同时测定葡萄籽提取物中儿茶素、原花青素B1和原花青素B2的含量﹡ [J], 倪慧敏;汤洋;张言;杜倩;刘雨;孙鑫波
5.柱色谱-紫外分光光度法测定关黄柏中总生物碱的含量 [J], 蓝松
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葡萄籽中原花青素的提取与分离
葡萄籽中原花青素的提取与分离高德艳;胡文效;魏彦峰;李彦奎;张晶莹【摘要】本实验利用有机溶剂从葡萄籽中提取原花青素，通过正交实验确定葡萄籽原花青素提取条件为：提取液有机酸调节pH值为3，料液比1∶12，乙醇浓度70%，提取温度70℃，提取时间为2 h，提取3次。
提取液通过静态试验从8种大孔吸附树脂中筛选出HPD100型树脂，实验证明该型号树脂对葡萄籽原花青素吸附量大、解吸率高、解吸液纯度高，利于葡萄籽原花青素的分离与纯化。
动态实验确定最佳吸附上样浓度为8.0 mg/mL，上样pH值为3，上样流度为3 BV/h。
解吸时用60%乙醇2 BV/h流速进行洗脱，通过该工艺方法获得的原花青素纯度达到60%以上。
%Organic solvents were used to extract proanthocyanidins from grape seed in this experiment and the extraction conditions were determined by orthogonal experiments as follows:the extraction solution pH value adjusted to 3, material liquid 1:12, 70% ethanol concentration, extraction temperature 70 ℃, extraction time 2 h, extracting 3 times. HPD100 resin was selected from eight kinds of macroporous adsorption resins by static experiment. The experiment results showed that the adsorption quantity and desorption rate of proanthocyanidins and the desorption liquid purity were high with HPD100 resin, good for the separation and purification of grape seed procyanidins. Dynamic experiment determined that the optimal concentration of sample loading was 8.0 mg/mL, pH value of 3, velocity of 3 BV/h. The desorption rate was the highest by 60%ethanol solution with the velocity of 2 BV/h. The purity of proanthocyanidins extracted by this technology was above 60%.【期刊名称】《中外葡萄与葡萄酒》【年(卷),期】2013(000)005【总页数】6页(P6-11)【关键词】葡萄籽;原花青素;柱层析;分离【作者】高德艳;胡文效;魏彦峰;李彦奎;张晶莹【作者单位】齐鲁工业大学，济南 250353;山东省葡萄研究院，济南 250100;山东省葡萄研究院，济南 250100;山东省葡萄研究院，济南 250100;山东省葡萄研究院，济南 250100【正文语种】中文【中图分类】TQ28葡萄籽是葡萄酒、葡萄果汁饮料生产中产生的资源性副产物。
硫酸_香草醛法测定葡萄籽原花青素含量
硫酸-香草醛法测定葡萄籽原花青素含量孙 芸 谷文英(江南大学食品学院,无锡,214036)摘 要 以硫酸作为香草醛法的酸性介质,测定葡萄籽提取物水溶液中原花青素含量,对硫酸浓度、香草醛浓度、反应温度及时间等影响比色反应的因素进行了研究,选择出较适宜的反应条件。
关键词 葡萄籽,原花青素,硫酸-香草醛法第一作者:博士研究生(谷文英为通讯作者)。
收稿时间:2003-04-17,改回时间:2003-09-03原花青素是一类由黄烷-3-醇缩合而成的聚多酚类物质,具有很强的生物活性,作为防癌、抗突变、防治心血管疾病药物的有效成分和用作安全无毒的新型天然抗氧化剂,在医药、保健食品等领域具有广泛的用途。
原花青素的定量测定方法,除比较经典的H PLC 法外,更多的是比色测定方法,包括Folin -Ciocateau (FC )法[1]、酸化香草醛(Vanillin)法[2,3]、盐酸-正丁醇(BuOH -H Cl)法[4]及紫外吸收法[5],其中FC 法测定的是总酚含量,对原花青素缺乏专一性,Vanillin 法可同时测定原花青素单体及聚合体的总含量,BuOH -H Cl 法只测定聚合原花青素含量,儿茶素单体不反应,但与香草醛法相比,反应中易形成副产物,且受结构影响较大,同时比色测定法反应的条件要求较高,重复性较差,原花青素的紫外吸收法一般用于经HPLC 纯化分离后组分的定性及定量检测(270~280nm)。
从测定方法的灵敏度、专一性及简便性来讲,目前应用比较多的是酸化香草醛法。
盐酸及硫酸均可作为其酸性介质,但在不同含量的葡萄籽原花青素含量测定过程中发现,传统的以盐酸为酸性介质的香草醛法在测定原花青素含量较低的葡萄籽提取物水溶液时,体系透明度较低,干扰较大。
而据报道[6],在测定甲醇溶液中原花青素含量的香草醛反应体系中,以硫酸催化的反应灵敏度高于盐酸。
据此,本实验以硫酸作为香草醛法的酸性介质,探索出了测定葡萄籽提取物水溶液中原花青素含量的硫酸-香草醛比色法。
硫酸香草醛法测定葡萄籽原花青素含量
硫酸香草醛法测定葡萄籽原花青素含量一、本文概述本文旨在探讨硫酸香草醛法在测定葡萄籽原花青素含量中的应用。
原花青素作为一种重要的天然抗氧化剂，在葡萄籽等植物中含量丰富，具有显著的生物活性，对人体健康具有积极作用。
因此，准确测定葡萄籽中原花青素的含量对于评估其营养价值和开发相关健康产品具有重要意义。
硫酸香草醛法作为一种常用的原花青素测定方法，具有操作简便、灵敏度高、重现性好等优点，在食品、药品等领域得到了广泛应用。
本文将详细介绍硫酸香草醛法的原理、操作步骤、影响因素及注意事项，并通过实验验证该方法的准确性和可靠性，为葡萄籽原花青素含量的测定提供科学依据。
二、材料与方法硫酸香草醛、葡萄籽提取物、原花青素标准品（纯度≥98%）、甲醇、乙醇、丙酮、盐酸等均为分析纯，购自国内外知名试剂公司。
紫外可见分光光度计、电子天平、恒温水浴锅、离心机、超声波清洗器等。
准确称取葡萄籽粉末适量，加入一定比例的甲醇-水-盐酸混合溶液，置于恒温水浴锅中进行回流提取。
提取液经过离心、过滤后，得到原花青素提取液。
精确称取原花青素标准品，用甲醇溶解并定容，得到不同浓度的标准溶液。
分别取各浓度标准溶液，加入硫酸香草醛试剂，摇匀后在一定温度下反应一定时间，测定其吸光度。
以吸光度为纵坐标，原花青素浓度为横坐标，绘制标准曲线。
取适量葡萄籽原花青素提取液，加入硫酸香草醛试剂，摇匀后在相同条件下进行反应，测定其吸光度。
根据标准曲线计算样品中原花青素的含量。
所有数据均以平均值±标准差表示，采用SPSS等统计软件进行数据分析，采用单因素方差分析（ANOVA）比较不同处理组之间的差异，显著性水平设为P<05。
通过以上方法和步骤，可以准确测定葡萄籽中原花青素的含量，为进一步研究葡萄籽的营养价值和开发利用提供依据。
三、实验结果与分析在本次研究中，我们采用硫酸香草醛法测定了葡萄籽原花青素含量。
此方法基于原花青素在特定条件下与硫酸香草醛发生显色反应，通过测定反应后溶液的光密度值，可推算出原花青素含量。
葡萄籽原花青素的提取和检测方法
葡萄籽原花青素的提取和检测方法
葡萄籽原花青素的提取和检测方法有多种，其中一种常用的方法是索氏提取法和固相萃取法相结合，具体步骤如下：
1. 将葡萄籽进行干燥、粉碎、过筛、脱脂，得到葡萄籽粉末。
2. 将葡萄籽粉末进行提取、过滤、浓缩，再溶解，最后进行固相萃取，得到精制原花青素。
3. 精制原花青素过微孔滤膜后进入高效液相色谱进行检测。
另外，也可以使用Bate-Smith法和Porter法来检测葡萄籽中原花青素的
含量。
Bate-Smith法是先称取适量的葡萄籽提取物用甲醇溶解，然后加入
盐酸-正丁醇溶液在特定温度下反应一定时间后迅速冷却，在特定波长下测
定其吸光度，以甲醇代替提取物溶液作为空白。
而Porter法是对Bate-Smith法进行了改进，主要是在试剂中添加了Fe3+以提高反应的程度和颜
色的稳定性。
请注意，不同方法提取和检测葡萄籽原花青素的步骤和条件可能会有所不同，具体的操作方法和参数需要根据实际情况和实验条件进行调整。
同时，由于提取和检测过程中可能会涉及到化学试剂的使用，因此也需要注意安全问题。
以原花青素B2标定葡萄籽提取物中原花青素含量
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以原花青素混合物做标准品其原花青素含量标 准不统 一， 无法让人信服的 问题 ， 测定结果能准确反 映葡萄籽提取 其
物 中的原 花青素的真 实含量 ， 可用作质控 方法 。 关键词 ： 原花青素 Ｂ ； ２ 原花青素 ； 萄籽提取物 葡
Ｄｅｅ ｍｉ ｏ ｎｔ ｃ ａ ｉ ｎ ｎ Ｇｒ ｐ ｅ ｔ ａ ｔｗｉｈ ｏ ｎ ｈ ｃ ａ ｄ ｎ Ｂ２ Ｓ ａ ａ ｄ ｔ ｒ ｎｅＰｒ ａ ｈｏ ｙ ｎ ｄｉｓｉ ａ ｅＳｅ ｄ Ｅｘ ｒ ｃ ｔ Ｐｒ ａ ｔ ｏ ｙ ｎｉ ｉ ｔ ｎｄ ｒ Ｗ Ｕ ｅ ，ＣＨＥＮＧ ｕ ｆ ｎ Ｗ ｉ Ｘｉ－ ｅ ｇ，ＷＡＮＧ ｕ — ｕｉ Ｃｈ ｎ ｈ ，ＣＵＩＷ ｅ —ｘ ，ＦＵ ｎ — ｉ ｇ ｎ ｉ Ｙｉ ｇ ｙｎ
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保健食品中原花青素的测定
1原花青素的测定(来源于《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版))1.1 范围本方法规定了保健食品中原花青素的测定方法。
本方法适用于保健食品中原花青素的含量测定。
本方法最低检出量为3μg，最低检出浓度为3μg/mL。
本方法最佳线性范围:3-150μg/mL。
1.2 原理:原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。
原花青素本身无色，但经过用热酸处理后，可以生成深红色的花青素离子。
本法用分光光度法测定原花青素在水解过程中生成的花青素离子。
计算试样中原花青素含量。
1.3 试剂1.3.1甲醇:分析纯。
1.3.2正丁醇:分析纯。
1.3.3盐酸:分析纯。
1.3.4硫酸铁铵:NH4Fe(SO4)2·12H20溶液:用浓度为2mol/L盐酸配成2%(w/v)的溶液。
1.3.5原花青素标准品:葡萄籽提取物，纯度95%。
1.4仪器1.4.1分光光度计。
1.4.2回流装置1.5 分析步骤1.5.1试样的制备1.5.1.1片剂:取20片试样，研磨成粉状。
1.5.1.2胶囊:挤出20粒胶囊内容物，研磨或搅拌均匀，如内容物含油，应将内容物尽可能挤出。
1.5.1.3口服液:摇匀后取样。
1.5.2 提取1.5.2.1粉状试样:称取50-100mg试样，置于50mL容量瓶中，加入30mL甲醇，超声处理20min，放冷至室温后，加甲醇至刻度，摇匀，离心或放置至澄清后取上清液备用。
1.5.2.2含油试样:称取50mg试样，置于小烧杯中，用20mL甲醇分数次搅拌，将原花青素洗入50mL容量瓶中，直至甲醇提取液无色，加甲醇至刻度，摇匀。
1.5.2.3口服液:吸取适量样液(取样量不超过1mL)，置于50m容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。
1.5.3测定1.5.3.1标准曲线:称取原花青素标准品10.0mg溶于10mL甲醇中，吸取该溶液0、0.1、0.25、0.5、1.0、1.5mL，置于10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。
葡萄籽中原花色素的含量测定方法简述
葡萄籽中原花色素的含量测定方法简述摘要：葡萄籽中的原花色素具有很多的生物活性，其含量的测定对于研究葡萄籽的生物活性以及开发葡萄籽的药用价值具有很大的意义。
本文介绍了葡萄籽中原花色素的含量测定方法，包括提取、纯化、检测等步骤，为研究葡萄籽的生物活性以及开发葡萄籽的药用价值提供了一定的参考。
关键词：葡萄籽；原花色素；含量测定；生物活性；药用价值一、引言葡萄籽是葡萄的种子，富含原花色素、多酚类物质、黄酮类物质等多种生物活性成分。
其中，原花色素是一种天然的生物活性成分，具有很多的生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。
因此，研究葡萄籽中原花色素的含量及其生物活性具有很大的意义。
二、葡萄籽中原花色素的提取葡萄籽中原花色素的提取可采用乙醇提取法、水提取法、超声波提取法、微波辅助提取法等多种方法。
其中，乙醇提取法是一种常用的提取方法，其步骤如下：1、取适量的葡萄籽，粉碎成细粉。
2、将葡萄籽粉末加入适量的乙醇中，并加入一定量的氢氧化钠。
3、在室温下振荡提取2-3小时。
4、离心沉淀，取上清液。
5、重复以上步骤，直至提取液无色。
6、将提取液浓缩至一定体积，得到葡萄籽中原花色素的提取物。
三、葡萄籽中原花色素的纯化葡萄籽中原花色素的提取物中含有其他的杂质，需要进行纯化。
纯化方法可以采用硅胶柱层析法、逆流色谱法、高效液相色谱法等多种方法。
其中，高效液相色谱法是一种常用的纯化方法，其步骤如下：1、将葡萄籽中原花色素的提取物溶解在适量的溶剂中。
2、用C18柱进行分离，选择合适的流动相，进行梯度洗脱。
3、将纯化后的葡萄籽中原花色素的溶液收集起来，用氮气吹干。
4、将干燥后的纯化产物溶解在适量的溶剂中，得到纯化后的葡萄籽中原花色素。
四、葡萄籽中原花色素的检测葡萄籽中原花色素的检测可以采用紫外分光光度法、高效液相色谱法、质谱法等多种方法。
其中，高效液相色谱法是一种常用的检测方法，其步骤如下：1、将纯化后的葡萄籽中原花色素溶解在适量的溶剂中。
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葡萄籽提取物中原花青素含量的最佳测定方法葡萄籽提取物-原花青素被誉为“最强效的自由基清除剂”，其抗氧化能力是VC的20倍，VE的50倍。
也是唯一能透过血脑屏障的抗氧化剂，因此在促进皮肤新陈代谢，分解黑色素，以及提高机体免疫力，延缓衰老方面的应用极为广泛。
葡萄籽提取物由原花青素、儿茶素、表儿茶素、没食子酸等多酚类物质组成的，由于原花青素的成分极其复杂，目前的研究实验中还无法提供原花青素的标准品，因此Bate-Smith 和Porter法只能测定葡萄籽提取物中原花青素的相对含量。
一、Bate-Smith法、Porter法测定葡萄籽原花青素含量西安源森生物实验室对Bate-Smith法和Porter法测定原花青素相对含量实验进行了研究：（一）Bate-Smith法测定葡萄籽原花青素含量【实验目的】由于目前没有原花青素的标准品，因此此方法测定的只是葡萄籽提取物中原花青素的相对值，其含量用原花青素指数(procyanidolic index)来表示。
【Bate-Smith法原理】原花青素在酸性条件下加热转化为红色的花青素(图1)。
【实验步骤】称取适量的葡萄籽提取物(约15～40mg)用甲醇溶解，最后定溶于100ml。
从中取1ml样品溶液加到10ml比色管中，然后再加入6ml盐酸-正丁醇溶液(5/95,V/V)，在97℃±1下反应40min后，取出迅速冷却，在550nm处测定其吸光度，以甲醇代替提取物溶液作为空白。
原花青素指数=A×7.0/WW:样品质量(g)；A:吸光度【实验结果】由于用Bate-Smith法测得的葡萄籽提取物中原花青素指数一般在80～100之间，有时也可能大于100。
因此，目前很多植物提取物生产厂家使用原花青素指数来表示葡萄籽提取物中原花青素的百分含量，是不正确的。
（二）Porter法测定葡萄籽原花青素含量【实验概述】由于Bate-Smith法测定的结果重现性很差,并且原花青素在此条件下反应不是很彻底。
因此Porter等人对Bate-Smith法进行了改进。
Porter法改进之处主要是在试剂中添加了Fe3+，以提高反应的程度和颜色的稳定性。
此方法测定的也是原花青素的相对含量，结果用PVU(porter value unit)表示。
【实验步骤】称取适量的葡萄籽提取物(约10～30mg)用甲醇溶解，最后定溶于100ml。
从中取1ml样品溶液加到10ml比色管中，然后依次加入6ml盐酸-正丁醇(5/95,V/V)，0.2ml 2.0%硫酸铁铵溶液(用2mol.L-1的盐酸溶解),在97℃±1下反应40min后,取出迅速冷却,在550nm 处测定其吸光度,以甲醇代替提取物溶液作为空白。
PVU=A×7.2/WW:样品质量(g)；A:吸光度【实验结果】美国葡萄籽方法评定委员会认为葡萄籽提取物的PVU在250～350之间是比较理想的。
PVU过高，说明该产品中高聚体原花青素含量较高；PVU过低，可能说明该产品中原花青素的含量较低。
但由于porter法不能区分测出的是何种原花青素,所以若一种葡萄籽提取物测出的PVU=300，则该产品可能是低聚体原花青素含量较多，也可能是单体和高聚体原花青素含量较多。
（三）Bate-Smith法和Porter法测定葡萄籽原花青素含量实验结论Bate-Smith法测得原花青素指数一般在80～100之间，有时甚至可能大于100；而Porter 法所得PVU值无法明确是葡萄籽提取物中高聚体原花青素含量还是原花青素的含量。
因此上述两种方法不能都作为葡萄籽提取物中总多酚或原花青素的定量分析方法。
据此实验结论，西安源森生物实验室另辟蹊径，探索出一种新的测定葡萄籽原花青素含量的方法——Folin-Ciocalteau法与HPLC相结合法：由于葡萄籽提取物由原花青素和几种单体组成，因此原花青素的含量可用葡萄籽提取物中总多酚的含量减去其中单体含量求得。
葡萄籽提取物总多酚含量可采用Folin-Ciocalteau 法测定，单体的含量采用高效液相(HPLC)测定。
因此，本次实验中，西安源森生物实验室采用Folin-Ciocalteau法和HPLC相结合的方法来测定葡萄籽提取物中原花青素的含量。
二、Folin-Ciocalteau法与HPLC相结合测定葡萄籽提取物中原花青素含量【实验步骤】(一)实验条件1. 材料葡萄籽提取物:西安源森生物科技有限公司实验室专项制备2. 仪器和试剂（1）瑞士BUCHI R-200真空旋转蒸发仪。
Wa-ter公司1525 HPLC。
色谱柱:Hypersil ODS 150mm×4mm,5μm。
（2）Folin-Ciocalteau试剂（3）没食子酸，儿茶素，表儿茶素标准品；表儿茶素没食子酸酯；乙睛。
3. 色谱条件检测波长:280nm；柱温:30℃；流速:1mL/min；流动相：A,20.0%乙酸；B，80% 乙腈；采用梯度洗脱：0min-85min,100%-20%A;进样量:10μL（二）葡萄籽提取物中总多酚的测定:Folin-Cio-calteau法1. 原理葡萄籽提取物中总多酚的测定一般采用Folin-Ciocalteau法进行测定。
在碱性溶液中，酚类化合物可以将钨钼酸还原(W6+变为W5+)，生成蓝色的化合物，颜色的深浅与多酚含量呈正相关，蓝色化合物在760nm处有最大吸收。
Folin-Ciocal-teau法测定总多酚一般用没食子酸作为对照品。
葡萄籽提取物中总多酚的含量以等同于没食子酸(gallicacid equivalent)表示。
2. 标准曲线的制定①准确称取真空干燥至恒重的没食子酸对照品44.3mg→水溶解并定容至100ml；②以此溶液配成浓度为8.86，17.72，35.44，53.16，70.88，88.60μg/ml的溶液；③分别取上述不同浓度溶液1ml加到10ml比色管中→依次加入1ml去离子水→0.5ml Folin-Ciocalteau试剂→1.5ml 26.7%Na2CO3溶液→用水定容至10ml→室温下反应2小时→在760nm下测定其吸光度。
由吸光度对浓度进行回归，求得标准曲线：3. 葡萄籽提取物中总多酚含量的测定准确称取适量的葡萄籽提取物，用水溶解，浓度在0.08mg/ml左右。
取1ml样品液加到10ml比色管中→依次加入1ml去离子水→0.5mlFolin-Ciocalteau试剂→1.5ml 26.7%Na2CO3溶液→用水定容至10ml，室温下反应2小时→在760nm下测定其吸光度。
测得的吸光度代入以上标准曲线，即可求得葡萄籽提取物中总多酚的含量。
源森生物实验室特制葡萄籽提取物多酚含量为91.2%(按绝对干重计算)。
（三）葡萄籽提取物中单体含量的分析葡萄籽提取物中的单体主要包括四种:儿茶素、表儿茶素、没食子酸、表儿茶素没食子酸酯，这四种单体的含量占到了葡萄籽提取物中单体含量的90.0%以上。
美国葡萄籽方法评定委员会(The grape seed method evaluation of committee)建议用上述四种单体的含量来标定葡萄籽提取物中单体的总含量。
因此西安源森生物实验室的本次实验中，仅测定葡萄籽提取物中这四种单体的含量。
1. 精密称取80℃减压干燥至恒重的上述四种对照品适量，用甲醇分别配制标准溶液，浓度在8.0～90.0μg/mL之间；分别精密取10μl注入色谱仪；以峰面积积分值对进样量进行回归，求得标准曲线；结果表明:进样量在0.09～0.9μg范围内线性关系良好。
以上为西安源森生物实验室测得的葡萄籽提取物的单体含量值。
2. 单体反应系数的测定按Folin-Ciocalteau法测定的总多酚是以相当于没食子酸表示的，因此葡萄籽提取物中儿茶素等单体按Folin-Ciocalteau法测定，并以没食子酸的量表示时，不能反应其真实含量。
这就造成按Folin-Ciocalteau法测定总多酚时反应出的葡萄籽提取物中的单体含量与HPLC法测定的单体含量存在差异，因此葡萄籽提取物中原花青素的含量用总多酚的含量减出其中单体的含量必须有一个校正系数。
这样才能使Folin-Cio-calteau法和HPLC测定单体含量等同起来：准确配制含量为100.0μg/ml的儿茶素，表儿茶素，表儿茶素没食子酸酯甲醇溶液，按Folin-Ciocalteau法进行反应，反应后的溶液在760nm读取吸光值，吸光值代入以没食子酸为对照品的标准曲线计算其多酚的含量(即相当于没食子酸的量表示(GAE)。
用按Folin-Ciocalteau法测得的每种单体的多酚含量除以其真实含量即为反应系数，单位为：g GAE/g。
（四）葡萄籽提取物中原花青素含量的计算葡萄籽提取物中原花青素的含量的计算公式：CPC=CGSE-[(CM1×RFM1)+(CM2×RFM2)+(CM3×RFM3)+(CM4×RFM4)]其中，CPC：原花青素的含量,以每克葡萄籽提取物相当于多少克没食子酸表示；CGSE：按Folin-Ciocalteau法测定的总多酚含量；CM1，CM2，CM3，CM4：分别表示HPLC法测定的葡萄籽提取物中没食子酸，儿茶素，表儿茶素，表儿茶素没食子酸酯的含量。
RFM1，RFM2，RFM3，RFM4：分别表示没食子酸，儿茶素，表儿茶素，表儿茶素没食子酸酯的反应系数。
CPC=91.2-0.84×6.35-6.02×1.08-1.23-0.58×1.20=77.4%(五)实验结果分析本次实验中，西安源森生物实验室采用用高效液相和Folin-Ciocalteau相结合的方法分析了葡萄籽提取物中原花青素的百分含量，此方法能够弥补Bate-Smith法和Porter法只能测定原花青素相对含量的缺陷。
西安源森生物实验室提示实验中还应该注意两个问题：1. Folin-Ciocalteau法测定葡萄籽提取物中总多酚时，蛋白质和氨基酸的存在会对测定的结果产生影响。
因此，当葡萄籽提取物中蛋白质含量较高时，注意应消除蛋白质对总多酚的影响。
2. 由于单体的极性要比原花青素的极性要小，当用低浓度的丙酮(一般为30～40%)洗脱时，可使单体洗脱下来，而原花青素由于极性较大不被洗脱，从而达到分离的效果。
因此，当使用HPLC对单体进行直接分离效果不佳时，可以采用60-80目的聚酰胺柱层析对提取物进行进一步的分离纯化。