微生物菌种筛选与分离
从自然界中筛选微生物菌种的方法和步骤
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从自然界中筛选微生物菌种的方法和步骤【最新版4篇】《从自然界中筛选微生物菌种的方法和步骤》篇1从自然界中筛选微生物菌种是一项重要的任务,可以用于研究新的微生物物种、寻找具有特定功能的微生物、以及发掘新的抗生素等。
以下是从自然界中筛选微生物菌种的一般方法和步骤:1. 采集样本:采集样本是筛选微生物菌种的第一步。
可以从不同的环境中采集样本,如土壤、水、空气、生物组织等。
采集样本时需要注意保持样品的完整性和避免污染。
2. 富集培养:采集到的样本中微生物的数量通常很少,需要进行富集培养以增加微生物的数量。
富集培养可以使用选择性培养基,以促进目标微生物的生长。
3. 纯种分离:通过富集培养后,需要将混合的微生物分离成单个菌落,以便进行进一步的研究和分析。
分离纯种可以使用平板划线法、涂布法等。
4. 性能测定:对分离得到的微生物进行性能测定,以确定其是否符合筛选的目标。
性能测定可以包括微生物的生长速度、形态、生理代谢特性等。
5. 筛选出目标菌种:根据性能测定的结果,筛选出符合目标的微生物菌种。
6. 鉴定和保藏:对筛选出的微生物进行鉴定,包括形态、生理、生化、分子生物学等方面的鉴定。
同时,需要将筛选出的微生物保藏,以便后续的研究和应用。
需要注意的是,不同的筛选目标和应用场景可能需要不同的筛选方法和步骤。
《从自然界中筛选微生物菌种的方法和步骤》篇2从自然界中筛选微生物菌种是一项重要的任务,可以用于研究微生物的生态学、生理学、遗传学等方面,也可以用于应用领域,如食品、医药、农业等。
以下是从自然界中筛选微生物菌种的一般方法和步骤:1. 采集样本:首先需要采集自然界中的样本,如土壤、水、植物、动物等,采集时需要注意样本的代表性和可靠性。
2. 富集培养:将采集到的样本放入含有营养物质的培养基中,进行富集培养,以增加目标微生物的数量。
3. 分离纯种:通过不同的分离技术,如涂布平板法、倾注法、斜面法等,将目标微生物从其他微生物中分离出来,并进行纯种培养。
微生物遗传育种的 第三章——菌种的分离筛选
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第三章菌种的分离筛选● 1.菌种来源● 2.分离方法● 3.菌种保藏● 4. 菌种复壮典型的微生物新种分离筛选过程第一节菌种来源1.向菌种保藏机构索取有关菌株,从中筛选所需菌株。
国内主要菌种保藏机构:●AS—中国科学院微生物研究所●CMCC—中国医学细菌保藏管理中心●CVCC—兽医微生物菌种保藏管理中心●IA—中国医学科学院抗菌素研究所●IANP—华北制药厂抗菌素研究所●ID—中国医学科学院皮肤病防治研究所、●CAMS—中国医学科学院流行病学微生物研究所●IFFI—轻工业部食品发酵工业科学研究所等。
国外主要的菌种保藏机构●ATCC—美国标准菌种收藏所●NIH—美国国立卫生研究院●NRRL—美国农业部北方开发利用研究所●CMI—英联邦真菌研究所,CSH—美国冷泉港实验室●IAM—日本东京大学应用微生物研究所,IFO—日本大阪发酵研究所,KCC—日本科研化学有限公司,●NCTC—英国国立标准菌种收藏所●WB—美国威斯康星大学细菌学系等。
2.由自然界(土样、水、动植物体等)采集样品,从中进行分离筛选。
不可培养微生物是指目前尚不能实现人工培养的微生物。
原因可能为尚不了解该类微生物的营养需求和生长需要的理化环境。
目前人类认识和培养的微生物还不到其存在种类的1%。
3.从发酵制品中分离目的菌株。
如从酱油中分离蛋白酶产生菌,从酒醪中分离淀粉酶或糖化酶产生菌等。
采样过程(一)从土壤中采样要考虑土壤的有机质含量和通气状况、酸碱度和植被状况、地理条件和季节条件。
用采样铲采集5-25cm(北方干燥的土壤,采集10-30cm)土样10-25g,装入事先准备好的塑料袋内扎好,并编号,记录采集地点、土壤质地、植被名称、采集时间等。
土样采集后要尽快分离,否则可取3-4g撒到事先准备好的选择性培养基试管斜面,避免菌株因不能及时分离而死亡。
根据微生物生理特点采样1.根据微生物营养类型采样(1)微生物的营养要求和代谢类型与其生长环境有很大的相关性森林土壤富含纤维素,可分离纤维素酶产生菌;肉类加工厂附近和饭店排水沟的污水、污泥中,能分离到蛋白酶和脂肪酶产生菌;面粉加工厂、糕点厂、酒厂及淀粉加工厂等,容易分离到产生淀粉酶和糖化酶的菌株;从果园土和腐烂的柑橘、草莓及山芋中,容易分离到果胶酶产生菌。
菌种的筛选和分离
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工业微生物菌种得分离与筛选来源:青岛海博一、微生物工业对菌种得要求(一)、微生物工业得生产水平由三个要素决定:生产菌种得性能、发酵及提纯工艺条件、生产设备。
其中生产菌种得性能就是最重要得因素。
(二)、微生物工业对菌种得要求就是:(1)菌株高产,在较短得时间内发酵产生大量发酵产物得能力;(2)在发酵过程中不产生或少产生与目标产品相近得副产品及其她产物;(3)生长繁殖能力强,较强得生长速率,产孢子得菌种应该具有较强得产孢子能力;(4)能够高效地将原理转化为产品;(5)能利用广泛得原材料,并对发酵原料成分得波动敏感性小;(6)对需要添加得前体物质有耐受能力,并且不能将这些前体物质作为一般碳源利用;(7)在发酵过程中产生得泡沫要少;(8)具有抗噬菌体得能力;(9)遗传稳定性,二、工业用微生物菌种得来源及选育(一)微生物菌种得来源一般通过以下几个途径收集菌种、采集样品与分离筛选:(1)就是根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买;(2)从大自然中采集样品分离;(3)从一些发酵制品中分离筛选目得菌株、当前发酵工业所用菌种总趋势就是从野生菌转向变异菌,自然选用转向代谢育种,从诱发基因突变转向基因重组得定向育种。
(二)微生物工业菌种得分离1、野生菌株得分离、筛选过程(1)新菌种分离与筛选得步骤菌种分离得流程如下:标本采集→标本材料得预处理→富集培养→菌种初筛→菌种复筛→性能鉴定→菌种保藏①采样采样季节:以温度适中,雨量不多得秋初为好。
采土方式:在选好适当地点后,用小铲子除去表土,取离地面5—15cm处得土约10g,盛入清洁得牛皮纸袋或塑料袋中,扎好,标记,记录采样时间、地点、环境条件等,以备查考。
为了使土样中微生物得数量与类型尽少变化,宜将样品逐步分批寄回,以便及时分离、②标本预处理④纯种分离:采用划线分离法、稀释分离法等纯化方法获取单菌落、⑤高产菌株得筛选:这一步就是采用与生产相近得培养基与培养条件,通过三角瓶得容量进行小型发酵试验,获得适合于工业生产用菌种。
微生物菌种的分离和纯化方法
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微生物菌种的分离和纯化方法1.空气平板法空气平板法是一种常用的微生物菌种分离方法。
将待分离的微生物样品进行适当的稀释并均匀涂布在含有经过固化的琼脂平板上,然后放置在适宜的温度下进行培养。
微生物在平板上呈现为单个菌落,每个菌落都代表一个来自单一细胞的微生物。
通过挑取单个菌落,将其再次传代培养,最终可以得到纯净的菌种。
2.稀释平板法稀释平板法也是一种常用的微生物菌种分离方法,在空气平板法的基础上进行了改进。
先将待分离的微生物样品按一定比例稀释,然后将稀释后的样品均匀涂布在琼脂平板上。
由于稀释后的样品中菌落之间的距离更远,因此每个菌落代表的是来自更少数的微生物细胞,得到纯净的菌种的几率更高。
3.前体菌种法前体菌种法是一种通过选择性培养基将目标微生物分离出来的方法。
选择性培养基可以通过添加特定的抗生素、酸碱度调节和特定营养物等来抑制其他微生物的生长而促进目标微生物的生长。
将待分离的微生物样品进行适当的稀释后接种在选择性培养基上,利用培养基的选择性促使目标微生物生长并抑制其他微生物的生长,最终得到纯净的菌种。
4.形态学分离法形态学分离法是一种根据微生物在形态和结构上的差异进行分离的方法。
先选择合适的培养基和培养条件,将待分离的微生物样品进行培养。
在培养过程中,观察并挑选出形态和结构上有明显差异的微生物,然后将其进行单菌维持培养,并通过形态特征进一步分离和纯化菌种。
5.生理生化特性分离法生理生化特性分离法是一种根据不同微生物菌株在代谢和物质转化方面的差异进行分离的方法。
根据微生物菌株的生理生化特性,如生长速度、氨基酸利用能力、产酸产气等,将微生物菌株进行初步分离,然后通过进一步的生化鉴定和特性测试,最终得到纯净的菌种。
总结起来,微生物菌种的分离和纯化方法有很多种类,选择合适的方法依赖于待分离的微生物特性和研究目的。
这些方法在微生物学的研究中起到了关键作用,为了获得纯净的微生物菌种提供了有效的手段。
菌种筛选方法
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菌种筛选方法菌种筛选是微生物学研究中的一项重要工作,通过筛选出具有特定特性或功能的菌株,可以广泛应用于医药、食品、农业和环境等领域。
本文将介绍一些常见的菌种筛选方法。
一、传统筛选方法1. 纯培养与分离纯培养与分离是最基本的菌种筛选方法。
通过采集样品,将其中的微生物分离出来,并通过重复分离和鉴定,筛选出单一菌种用于后续研究。
这种方法简单易行,但需要进行大量的繁琐工作。
2. 形态学特征筛选菌落形态学特征是菌株之间的重要区别指标,通过观察菌落的大小、颜色、形状等特征,可以初步筛选出具有目标性状的菌株。
这种方法不需要复杂的设备和技术,适合初步筛选大量样品。
3. 生理生化特征筛选生理生化特征是菌株在代谢和生长方面的表现,通过测定菌株对各种生理生化指标的反应,例如抗生素敏感性、产酶能力等,可以进一步缩小筛选范围。
这种方法需要特定的培养基和试剂,对筛选条件有一定要求。
二、分子生物学方法1. PCR扩增PCR扩增是一种常用的分子生物学技术,可以利用特异性引物扩增目标基因。
通过在筛选过程中选择特定的基因片段作为指标,可以筛选出具有目标特性的菌株。
这种方法具有高灵敏度和高特异性,适用于筛选基因工程菌株等特定要求的菌株。
2. 基因芯片基因芯片是一种高通量技术,可以同时检测上千个基因。
通过在菌种筛选中选择合适的探针,可以迅速准确地筛选出具有目标基因表达的菌株。
这种方法操作简便,适用于大规模筛选。
3. 基因重组技术基因重组技术是一种将异源基因导入宿主细胞中的方法,通过构建适当的载体和选择合适的宿主细胞,可以快速筛选出具有目标基因功能的菌株。
这种方法需要相关的分子生物学技术支持,适用于特定的目标筛选。
三、高通量筛选方法1. 微孔板筛选微孔板是一种用于大规模平行筛选的工具,通过在每个微孔中添加不同培养条件和指标物质,可以同时筛选多个菌株。
这种方法高效快速,可以用于大规模筛选和反复筛选。
2. 流式细胞术流式细胞术是一种利用特定染料对菌株进行筛选的方法,通过检测菌株表面或内部的荧光信号,可以筛选出具有特定特性的菌株。
活性污泥中微生物菌种的分离筛选及固定化方法研究
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班级:给水排水工程1002班姓名:白帆学号:10330204活性污泥中微生物菌种的分离筛选及固定化方法研究微生物通常是肉眼看不到的微小生命体,而且无处不在。
人类利用微生物已经有几千年的历史,利用微生物处理人类的各种污染物也有100多年的历史。
分离纯化,是研究和利用微生物的第一步,是微生物工作中最重要的环节之一。
从混杂的细胞群体中将不同的细胞区分开来达到分离纯化,主要是根据不同的细胞所具有的各种各样的特性来实现的,包括细胞的物理特性如密度、体积、电荷等,以及细胞的生物学特性如特异性表面标志和功能、对某种营养元素或抗生素的敏感性¨J。
不同种类的微生物,其特性和生理功能不同,因此微生物的分离纯化也有差异。
常采用的方法如下:1、固体培养基分离纯培养:⑴稀释倒平板法⑵l涂布平板法⑶平板划线法⑷L稀释摇管法(用于厌氧菌的分离纯化)2、液体培养基分离纯培养:稀释法3、单细胞(单孢子)分离法4、选择培养基分离5、二元培养物微生物固定化技术是20世纪60年代由生物化工中的固定化酶技术发展起来的生物技术,所谓固定化微生物技术,是利用化学或物理手段将游离的微生物和酶固定在载体上使其高度密集并保持其生物活性功能,在适宜的条件下还可以增值以满足应用之需的生物技术。
与其它应用游离微生物的过程相比,固定化微生物技术可以使微生物在某一固定区域具有较高的度,减轻或消除微生物的流失,提高反应速度,同时便于培养优势微生物种群,提高处理过程的稳定性,减少或消除副反应的发生,便于控制处理过程。
目前,固定化微生物技术己成为国内外生物科学、环境科学及其相关学科研究的重点。
20世纪80年代起,中国在废水生物处理方面进行固定化酶及固化微生物的生物处理废水研究,从好氧活性污泥和厌氧污泥中分离筛选对某一种废水成分分解能力强的微生物,将其固定化用于废水处理试验。
一、试剂与仪器菌种(I)试剂:氢氧化钠:AR分析纯;蛋白胨:A.R;琼脂:C.P;牛肉膏;100 g/L NaOH:在电子天平上准确称取固体氢氧化纳10 g,用去离子水定容至100 mL;100 g/L HCL:取10 mL盐酸,用去离子水定容至100 mL;(2)仪器:BS/BT系列电子天平,北京赛多利斯仪器系统有限公司;电热恒温鼓风干燥,DGG-9140B,海森信实验仪器有限公司;不锈钢立式电热蒸汽压力消毒器,LDZX-40型;上海申安医疗器械厂恒温振荡器,CHA-S,常州国华电子有限公司;可见分光光度计,VIS-7220,北京瑞利分析仪器公司;生化培养箱,LRH-150B,广东省医疗器械厂;(3)移液管:1 ml,2 ml,10 ml若干。
菌种的筛选和分离
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工业微生物菌种的分别与筛选起源:青岛海博一.微生物工业对菌种的请求(一).微生物工业的临盆程度由三个要素决议:临盆菌种的机能.发酵及提纯工艺前提.临盆装备.个中临盆菌种的机能是最重要的身分.(二).微生物工业对菌种的请求是:(1)菌株高产,在较短的时光内发酵产生大量发酵产品的才能;(2)在发酵进程中不产生或少产生与目标产品邻近的副产品及其他产品;(3)发展滋生才能强,较强的发展速度,产孢子的菌种应当具有较强的产孢子才能;(4)可以或许高效地将道理转化为产品;(5)能应用普遍的原材料,并对发酵原料成分的摇动迟钝性小;(6)对须要添加的前体物质有耐受才能,并且不克不及将这些前体物质作为一般碳源应用; (7)在发酵进程中产生的泡沫要少;(8)具有抗噬菌体的才能;(9)遗传稳固性,二.工业用微生物菌种的起源及选育(一)微生物菌种的起源一般经由过程以下几个门路收集菌种.收集样品和分别筛选:(1)是依据材料直接向有科研单位.高级院校.工场或菌种珍藏部分索取或购置;(2)从大天然中收集样品分别;(3)从一些发酵成品平分别筛选目标菌株.当前发酵工业所用菌种总趋向是从野生菌转向变异菌,天然选用转向代谢育种,从诱发基因突变转向基因重组的定向育种.(二)微生物工业菌种的分别1.野生菌株的分别.筛选进程(1)新菌种分别与筛选的步调菌种分别的流程如下:标本收集→标本材料的预处理→富集造就→菌种初筛→菌种复筛→机能判定→菌种珍藏①采样采样季候:以温度适中,雨量不久不多的秋初为好.采土方法:在选好恰当地点后,用小铲子除去表土,取离地面5-15cm处的土约10g,盛入干净的牛皮纸袋或塑料袋中,扎好,标识表记标帜,记载采样时光.地点.情形前提等,以备查考.为了使土样中微生物的数目和类型尽少变更,宜将样品慢慢分批寄回,以便实时分别.②标本预处理④纯种分别:采取划线分别法.稀释分别法等纯化办法获取单菌落.⑤高产菌株的筛选:这一步是采取与临盆邻近的造就基和造就前提,经由过程三角瓶的容量进行小型发酵实验,获得合适于工业临盆用菌种.还要对菌种进行发酵机能测定,⑥毒性实验:据有的国度划定,微生物中除啤酒酵母.脆壁酵母.黑曲霉.米曲霉和枯草杆菌作为食用无须作毒性实验外,其他微生物作为食用,均需经由过程两年以上的毒性实验.2.菌种的分别办法(1)施加选择性压力分别法主如果应用不合种类的微生物其发展滋生对情形和养分的请求不合,如温度.pH.渗入渗出压.氧气.碳源.氮源等,工资控制这些前提,使之利于某类或某种微生物发展,而晦气于其他种类微生物的生计,以达到使目标菌种占优势.而得以快速分别纯化的目标.如可以控制造就时的氧,可将好氧微生物和厌氧微生物离开;经由过程控制温度,可将嗜热微生物和非嗜热微生物离开;控制pH,可将嗜酸.嗜碱微生物分别等.在分别造就基中也可以参加不合的抗生素或试剂来增长选择性.如在分别放线菌和细菌时,可参加抗真菌抗生素;分别真菌时,可参加抗细菌药物.(2)随机分别办法有些微生物的产品对筛选没有直接的选择性指导感化,是以常采取随机分别办法分别.A.抗生素产生菌的分别抗生素产生菌的分别经常应用抑菌圈法.实验必须用对象菌:采取抗生素的迟钝菌,传统上经常应用金黄色葡萄球菌和枯草杆菌.B.抗肿瘤药物产生菌的分别抗肿瘤药物产生菌的分别经常应用办法:生化引诱法.SOS生色检测法.DNA修复才能突变株.道理是应用DNA的毁伤,微生物产生突变.B1.生化引诱法:将大肠杆菌的lacZ基因衔接在λ噬菌体的PL启动子下,当DNA毁伤时,诱发λ隔绝物CI分化,PL启动子启动lacZ基因转录,测定表达的ß-半乳糖苷酶活性,来检测药物的消失.B2.SOS生色检测法:应用当DNA毁伤时,可活化yecA蛋白,进而分化噬菌体的隔绝蛋白,再引起sifA基因启动lacZ基因转录,测定表达的ß-半乳糖苷酶活性,来检测药物的消失.C.发展因子产生菌的分别以氨基酸产生菌为例,介绍筛选办法.起首将待试菌接入加了抗真菌的化合物(如亚胺环己酮)的分别造就基中发展,然后采取影印法,将菌落复印到能支撑氨基酸产生菌发展的造就基中,造就2-3天后,用紫外线杀司长好的菌落,再往此平板上面铺一层响应养分缺点型菌株菌悬液,造就16小时后,被杀逝世的氨基酸产生菌的菌落四周应有一检测菌的发展圈.(3)目标微生物分别A.依据形态筛选突变株B.依据平板菌落生化反响筛选变株透明圈法.呈色圈法.抑菌圈法.污浊圈法等.①透明圈法:在平板造就基中参加消融性较差的底物,使造就基混浊.能分化底物的微生物便会在菌落四周产生透明圈,圈的大小初步反响该菌株应用底物的才能.该法在分别水解酶产生菌时采取较多,如脂肪酶.淀粉酶.蛋白酶.核酸酶产生菌都邑在含有底物的选择性造就基平板上形成肉眼可见的透明圈.在分别某种产生有机酸的菌株时,也平日采取透明圈法进行初筛.在选择性造就基中参加碳酸钙,使平板成混状,将样品悬浮液涂抹到平板长进行造就,因为产生菌可以或许把菌落四周的碳酸钙水解,形成清楚的透明圈,可以随意马虎地辨别出来.分别乳酸产生菌时,因为乳酸是一种较强的有机酸,是以,在造就基中参加的碳酸钙不但有辨别感化,还有酸中和感化.②变色圈法:对于一些不轻易产生透明圈产品的产生菌,可在底物平板中参加指导剂或显色剂,使所需微生物能被快速辨别出来.如筛选果胶酶产生菌时,用含0.2%果胶为惟一碳源的造就基平板,对含微生物样品进行分别,待菌落长成后,参加0.2%刚果红溶液染色4h,具有分化果胶才能的菌落四周便会消失绛红色水解圈.在分别谷氨酸产生菌时,可在造就基中参加溴百里酚蓝,它是一种酸碱指导剂,变色规模在pH6.2~7.6,当pH在6.2以下时为黄色,pH7.6以上为蓝色.若平板上消失产酸菌,其菌落四周会变成黄色,可以从这些产酸菌中筛选谷氨酸产生菌.③发展圈法:发展圈法通经常应用于分别筛选氨基酸.核苷酸和维生素的产生菌.对象菌是一些相对应的养分缺点型菌株.将待检菌涂布于含高浓度的对象菌并缺乏所需养分物的平板长进行造就,若某菌株能合成平板所需的养分物,在该菌株的菌落四周便会形成一个混浊的发展圈.如嘌呤养分缺点型大肠杆菌(如E.coliP264)与不含嘌呤的琼脂混淆倒平板,在其上涂布含菌样品保温造就,四周消失发展圈的菌落即为嘌呤产生菌.④抑菌圈法:经常应用于抗生素产生菌的分别筛选,对象菌采取抗生素的迟钝菌.若被检菌能排泄某些克制菌发展的物质,如抗生素等,便会在该菌落四周形成对象菌不克不及发展的抑菌圈,很轻易被辨别出来.实验十从天然界平分别筛选微生物菌种1 目标(1)进修并控制优秀曲霉菌的分别道理和办法.(2)进修工控制酸乳中乳酸菌的分别道理和办法.2 道理从天然界平分别筛选微生物菌种,是我们获得优秀新菌种最根本.最重要的办法,是以,食物工业菌种的分别筛选是一项重要的.长期而沉重的工作.天然界消失着各类各样的微生物,尤其是泥土中微生物种类齐备,是微生物的大本营.是以可以从泥土平分别到几乎所有微生物.别的,不合的天然界情形中生计的微生物优势菌种也不合.各类食物.农副产品等养分构成不合,从中可以分别出不合的微生物.食物工业菌种经常应用的分别源有被污染的临盆或科研菌种.临盆中长期应用的菌种.发酵食物用菌种.动物肠道菌群.经各类育种办法处理过的微生物质料和天然界菌种样品.天然界的微生物是混淆生计的,要从平分理出一种微生物,不但须要斟酌分别源应含有较多半量的目标菌,还要在分别操纵中使之与其他菌种互相离开.对于样品中含量较低的菌处,要针对其生物学特色合理设计分别办法,如富集造就.选择造就.应用其特别的心理反响产生特定的发展现象等,以便于从大量杂菌中选出目标菌种.从混淆群体平分别特定微生物的经常应用办法有:控制分别造就基的养分成分.控制造就基的pH值.添加克制剂.控制造就温度.控制空气前提.对样品进行特别处理等.经常应用的纯种分别办法有平板划线分别法.简略平板分别法.稀释分别.涂布分别法.毛细管分别法.显微操纵单细胞分别法等.本实验将采取稀释法和涂布法对目标微生物进行分别筛选.优秀曲霉菌的分别采取透明圈法,即先用淀粉琼脂造就基造就样品,因为糖化酶的感化,长出的菌落四周的淀粉被水解,遇碘后呈无色透明圈而平板的其他处呈蓝色.一般来讲,透明圈的直径越大,该菌的糖化力越强.可依据透明圈的大小筛选出糖化力强的菌株.酸乳中乳酸菌的分别采取溴甲酚绿(BCG)牛乳养分琼脂平板分别法.溴甲酚绿指导剂在酸性情形中呈黄色,在碱性情形中呈蓝色.在分别造就基(pH6.8)中加处溴酚绿指导剂后呈蓝绿色,乳酸菌在该造就基中发展并分化乳糖,产生乳酸,使菌落呈黄色,菌落四周的造就基也变成黄色.乳酸可用纸上层析法辨别.3材料3.1 样品黑曲霉种曲.酸奶.3.2 器具及其他用品平皿.三角瓶.涂布器.试管.玻璃珠.纱布.3.3 造就基及试剂2%淀粉察氏造就基.BCG牛乳造就基.0.02mol/L碘液.10%牛乳造就基.无菌心理盐水.4 流程4.1 优秀糖化酶菌株的分别与筛选熔化造就基→倒平板→打散孢子团粒→梯度稀释→涂布平板→造就不雅察→滴加碘液→挑菌落→接种→造就→糖化酶活气测定→菌种保管4.2 酸乳成品中的乳酸菌的分别制造就基→倒平板→梯度稀释→涂布平板→造就不雅察→挑菌落→接牛乳管→造就不雅察→传代造就→遴选凝乳管→乳酸测定→菌种保管5 步调5.1 优秀糖化酶菌株的分别与筛选(1)熔化淀粉察氏造就基,稍冷后倒平板与斜面数个.(2)取种曲少许,参加10mL带玻璃球的无菌心理盐水的三角瓶中,用力振荡打散孢子团粒,使之形成平均的孢子悬浮粒.然后将其用无菌纱布过滤于无菌试管中.(3)将上述滤液以10倍稀释法知释至10-7,取后3个稀释度的稀释液各0.2mL,于淀粉察氏造就基平板上用无菌涂布器分别依次涂布2至3个皿,30℃造就1~2d.(5)机能测定:测定各菌落的糖化酶活气.5.2 酸乳成品中的乳酸菌的分别(1)制备BCG牛乳养分琼脂造就基.①称取脱脂奶粉10g,溶于50mL水中,参加1.6%溴甲酚绿酒精溶液0.07mL,0.075MPa压力下灭菌20min.②另取琼脂2g,溶于50mL水中,加酵母膏1g,消融后调pH值至6.8,0.1MPa压力下灭菌20min.③趁热将上述两液以无菌操纵混淆平均,倒平板6个,待凝固后,置37℃造就24h,若无杂菌发展,即可应用.(2)将样品以10倍稀释法稀释至10-7,取个中10-7.10-6 2个稀释度的稀释液各0.1~0.2mL,分别置于上述各养分平板上,用无菌涂布器依次涂布2至3个皿,置43℃造就48h,如消失圆形稍扁平的黄色菌落及其四周造就基亦为黄色者初步定为乳酸菌.(3)将典范菌落转至脱脂乳发酵管,43℃造就8~24h,若牛乳管凝固,无气泡,呈酸性,镜检细胞杆状或链球状,革兰氏染色呈阳性,则将其持续传代若干次,43℃造就,遴选出在3~4h能凝固的乳管,保管备用.(4)乳酸菌的判定及生物量的测定.6 成果(1)描写黑曲霉分别株的形态特点及其分生孢子头的生态.(2)绘制所分别的乳酸菌形态图,并记载成果.7 思虑题(1)为什么消融样品的瓶内要参加玻璃珠?(2)解释用透明圈直径与菌株淀粉酶产量有何干系?(3)哪些情形可以或许引起凝乳?。
食品工程中的微生物菌种筛选与利用
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食品工程中的微生物菌种筛选与利用随着科技的发展和人们对食品质量要求的提高,微生物菌种在食品工程中的筛选和利用变得越来越重要。
微生物菌种可以分为有益菌种和有害菌种,而在食品工程中,主要关注的是有益菌种的利用。
本文将探讨微生物菌种的筛选方法、有益菌种的应用以及未来的发展趋势。
首先,微生物菌种的筛选是食品工程中至关重要的一步。
传统的方法包括菌种隔离、培养、纯化和鉴定,而现代的方法则包括利用分子生物学技术对微生物菌种进行筛选。
菌种隔离和培养是最基本的步骤,通过从食品样品中分离出微生物,并在合适的培养基上进行培养,可以得到纯净的菌株。
接下来,可以利用生理生化特性和分子生物学方法对菌株进行鉴定,以确定其属于哪个物种和品系。
筛选出合适的菌株后,可以进行后续的利用和应用。
其次,有益菌种在食品工程中有着广泛的应用。
其中最常见的是酸奶中的乳酸菌,这些菌种可以将乳糖转化为乳酸,降低酸奶的pH值,增加其保质期和口感。
另外,在乳制品、肉制品和蔬菜制品中也可以添加益生菌,如双歧杆菌和酪酸菌,以促进肠道健康和消化系统功能。
此外,微生物菌种还可以用于食品的发酵和发酵调味品的生产。
比如,酱油、醋、酒类等都是通过微生物的发酵过程制成的,不仅能增加食品的口感和风味,还能提高其营养价值。
另外,一些微生物菌种还可以用于食品的防腐和保鲜,减少食品中的有害菌的生长和繁殖。
最后,未来微生物菌种在食品工程中的应用仍然有很大的潜力和发展空间。
随着对食品质量和安全的要求越来越高,微生物菌种的筛选和利用将更加细致和精确化。
未来可能会出现更多针对特定食品的菌种和工艺的开发,以满足不同人群的需求。
此外,利用基因工程技术改良微生物菌种的能力也将不断提高,可以通过基因组编辑和基因组学的方法来改良和优化菌株的性状,使其在食品工程中的应用更加广泛。
另外,微生物菌种的利用也可以进一步扩展到环保和资源利用等领域,比如利用微生物菌株进行有机废弃物的降解和能源生产。
综上所述,微生物菌种在食品工程中的筛选和利用具有重要意义,可以为食品质量和品种的改良带来巨大的潜力和机会。
微生物筛选方法核心工作步骤解析
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微生物筛选方法核心工作步骤解析微生物筛选是一种利用微生物在特定环境中的生长特征和代谢能力来筛选和开发有益微生物的方法。
这些有益微生物可以用于农业、食品、医药、化工等多个领域。
下面将解析微生物筛选方法的核心工作步骤。
1. 筛选目标确定微生物筛选的第一步是确定筛选目标。
根据需求,可以选择寻找具有特定功能的微生物,如具有高产酶活性的菌株、优良抗病菌株等。
确定筛选目标的具体特征有助于更好地筛选出符合要求的微生物。
2. 样品采集和处理微生物筛选的第二步是样品的采集和处理。
根据筛选目标,可以选择不同环境的样品,如土壤、水体、动物肠道等。
采集的样品需要适用于微生物的生长,同时应避免携带过多的其他微生物。
样品采集后,需要进行处理,如过滤、离心、稀释等,以得到适合筛选的样品。
3. 微生物菌种的分离和纯化微生物筛选的第三步是菌种的分离和纯化。
采集到的样品中可能含有大量混杂的微生物,需要通过分离和纯化的方法得到单一的纯种菌株。
常用的方法包括病原菌分离法、单菌落法、酵母分离法等。
经过分离和纯化的微生物菌株可以进一步进行筛选。
4. 筛选条件的建立微生物筛选的第四步是建立筛选条件。
根据筛选目标,可以确定合适的培养基和环境条件,包括温度、pH、氧气供应等。
建立适宜的筛选条件有助于提高筛选效率和筛选到更符合要求的微生物。
5. 筛选方法和指标选择微生物筛选的第五步是选择合适的筛选方法和指标。
常用的筛选方法包括培养基筛选法、物质转化筛选法、抗生素敏感性筛选法等。
根据筛选目标,可以选择不同的指标来评价微生物的特性,如酶活性、抗菌活性、代谢产物等。
合适的筛选方法和指标有助于更准确地筛选和评价微生物。
6. 筛选效果评价微生物筛选的最后一步是评价筛选效果。
通过对筛选出的菌株进行分析和验证,如酶谱分析、基因测序、活性检测等,可以评估微生物的筛选效果。
评价结果可以进一步引导后续的研究和应用。
综上所述,微生物筛选方法的核心工作步骤包括筛选目标确定、样品采集和处理、微生物菌种的分离和纯化、筛选条件的建立、筛选方法和指标选择以及筛选效果评价。
培育技术中微生物菌种筛选的方法与技巧
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培育技术中微生物菌种筛选的方法与技巧微生物菌种在许多领域具有广泛的应用,如农业、环境、医药等。
为了获得具有所需特性的微生物菌种,科研人员需要进行有效的筛选和培育。
下面将介绍一些常用的微生物菌种筛选的方法与技巧。
一、菌种来源的选择菌种来源的选择是微生物筛选的第一步。
科研人员可以选择从自然环境中采集的样品,如土壤、水体等,并进行初步的分离和纯化。
此外,还可以从已有的菌种库中选择具有潜在特性的菌种。
菌种库是一个宝贵的资源,可以提供各种类型的微生物菌种,有助于筛选工作的展开。
二、菌株的鉴定与鉴定方法在菌种筛选的过程中,菌株的鉴定是必不可少的。
菌株的鉴定可以通过形态特征观察、生理生化特性测定和分子生物学方法进行。
形态特征观察包括菌落形态的观察和细胞形态的观察。
生理生化特性测定可以通过菌株对不同的碳源、氮源和温度等条件的利用能力来进行。
分子生物学方法常用的有16S rDNA序列分析和PCR技术等。
三、菌株的筛选技术与技巧1. 直接筛选法直接筛选法是针对目标特性直接进行的方法。
比如,如果我们需要筛选具有产酶能力的菌株,可以通过培养基添加对应底物,观察菌株的酶活性来筛选合适的菌株。
此外,还可以利用抗生素敏感性、产生特定颜色或气味等特性进行直接筛选。
2. 间接筛选法间接筛选法是通过菌株与其他生物或物质之间的相互作用来筛选菌株。
其中一种常用的方法是菌株之间的拮抗作用。
比如,我们可以将目标病原菌与已知拥有抑制病原菌能力的菌株进行共培养,观察是否存在抑制圈。
另外,还可以利用菌株对有毒物质的耐受性进行筛选。
3. 特定培养条件的筛选不同的微生物在不同的培养条件下表现出不同的特性。
通过调节培养条件,可以筛选得到具有特定特性的菌株。
例如,根据菌株的嗜温、嗜酸碱、盐耐受能力等特点,可以调整培养基的温度、pH值和含盐量等条件,以筛选得到适应特殊环境的菌株。
四、菌种筛选的评价与鉴定在菌种筛选的过程中,鉴定和评价菌株的有效性和稳定性是必要的。
实验室菌种筛选的一般步骤
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实验室菌种筛选的一般步骤一、引言在微生物学研究和应用中,菌种筛选是一个重要的步骤。
通过筛选得到的菌种可以用于生产有益物质,治疗疾病,或作为实验材料进行进一步的研究。
本文将介绍实验室菌种筛选的一般步骤。
二、菌种的采集菌种的采集是菌种筛选的第一步。
可以从自然环境中采集到的样品中筛选出具有潜在应用价值的菌株。
常见的采集样品包括土壤、水体、植物和动物组织等。
采集样品后,需要进行样品的处理和分离,以得到单一的菌株。
三、菌种的分离与纯化菌种的分离与纯化是为了得到单一的菌株,以便进行后续的筛选和研究。
样品可以通过稀释涂布法、均匀涂布法或稀释液滴法等方法进行分离。
分离后的菌落需要进行纯化,即通过反复传代分离,确保每个菌落都是单一的。
四、菌种的初步筛选菌种的初步筛选是为了筛选出具有潜在应用价值的菌株。
可以通过形态学特征、生理生化特性或抗生素敏感性等方法进行初步筛选。
例如,通过菌落形态的观察可以初步判断菌株的类群;通过代谢产物的检测可以初步评估菌株的代谢能力。
五、菌种的功能筛选菌种的功能筛选是为了筛选出具有特定功能的菌株。
根据研究的目的可以选择不同的功能筛选方法。
例如,如果研究的目的是寻找产酶菌株,可以通过酶活性测定或代谢产物的分析进行筛选;如果研究的目的是寻找产生抗生素的菌株,可以通过抗生素活性测定进行筛选。
六、菌种的稳定性和可重复性验证菌种的稳定性和可重复性验证是为了确保所筛选得到的菌株具有稳定的功能,并且可以重复产生相同的结果。
可以通过连续传代培养和功能性验证进行验证。
如果菌株在连续传代培养过程中能够保持稳定的功能,并且重复产生相同的结果,那么该菌株可以进一步应用于研究或生产中。
七、菌种的保存与管理菌种的保存与管理是为了长期保持菌株的存活和功能。
常见的菌种保存方法包括低温保存、冷冻保存、冻干保存和液氮保存等。
菌种的管理包括菌种的编号、记录和文献归档等。
这些措施可以确保菌株的长期保存和使用。
八、结论实验室菌种筛选是一个复杂而关键的过程,涉及到多个步骤和方法。
生产中常用菌种的分离、选育和保藏
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生产中常用菌种的分离、选育和保藏在生产中,分离、选育和保藏常用菌种是非常重要的步骤,这些菌种可以用于各种不同的应用,如发酵过程中的生物转化、抗生素的生产以及食品工业中的乳酸发酵等。
以下是常用菌种的分离、选育和保藏的基本步骤:1. 分离:分离菌种是指从自然环境中分离出纯种菌株的过程。
首先,需要选择合适的样品来源,如土壤、水样或食品样品等。
然后,将样品进行稀释、接种到固体培养基上,培养出菌落。
最后,从菌落中挑选单一菌株,并进行纯化培养,得到纯种菌株。
2. 选育:选育是指对已有菌种进行进一步培养和筛选,选出优良品系。
在选育过程中,可以根据所需特性进行筛选,如产量高、抗性强或代谢产物优良等。
通过连续传代培养和筛选,可以逐步培育出符合要求的优良品系。
3. 保藏:保藏是为了长期储存和保存已经分离和选育得到的菌种。
常用的保藏方法包括冷冻保存和冷冻干燥等。
冷冻保存是将菌种保存在低温 (-80℃或液氮温度下),可以长期保存并保持菌株的生物学性状。
而冷冻干燥则是在低温下将菌种先冷冻,然后通过真空蒸发使其脱水,最后用密封容器保存。
冷冻干燥具有长期保存时间和较小的储存体积的优点。
在菌种的分离、选育和保藏过程中,需要注意的是严格遵守无菌操作规范,以防止杂菌污染。
另外,应该建立相应的菌种信息管理系统,记录并标注每个菌株的来源、特性以及保藏条件等重要信息,以便日后使用和查询。
菌种的分离、选育和保藏在生产中扮演着极其重要的角色。
下面将进一步探讨这些过程,并介绍一些常用的菌种及其应用领域。
在分离菌种的过程中,重要的是选择适当的样品来源。
不同的环境中存在着各种微生物,如土壤、水体、植物、动物及其制品等。
通过采集不同来源的样品,可以获得不同类型和特性的微生物,从而得到多样性的菌株资源。
在接种前,样品经过稀释,使微生物适当分散。
然后将稀释液均匀接种于固体培养基上,并进行孵育。
在培养过程中,微生物通过分裂繁殖形成菌落,而每个菌落代表一个菌株。
微生物菌种选育
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株,苏云金杆菌模式菌株等细菌、食用菌等大型真菌、林 木病原菌、菌根菌、病虫生防菌、木腐菌、病毒和植原体 类等。 中国工业微生物菌种保藏管理中心:保藏各种工业微生物菌种 资源包括:细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌和大型真菌 。 中国医学细菌保藏管理中心: 兽医微生物菌种保藏管理中心:
美国典型菌种保藏中心 (American Type Culture Collection, ATCC)
三、菌种分离思路
1:新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要 求、菌种的特性,采用各种筛选方法,快速、准确地把所 需要的菌种挑选出来。
2:实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌,也必须重新进行 分离纯化。
3:有了优良的菌种,还要有合适的工艺条件和合理先进的 设备与之配合。
8、几种微生物纯培养分离方法的比较
1)固体稀释平皿法: 即可定性,又可定量,用途广泛;
2)平皿划线分离法: 方法简便,多用于分离细菌;
3)组织分离法: 高等真菌及植物病原菌。
4)单细胞挑取法: 局限于专业化的科学研究;
5)利用选择培养基法: 适用于分离某些生理类型较特殊的微生物。
二、菌种的来源
1、根据资料直接向有科研单位、高等院校、工 厂或菌种保藏部门索取或购买;
菌种分离筛选的5个步骤
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菌种分离筛选的5个步骤一、样品采集与处理菌种分离筛选的第一个步骤是样品采集与处理。
在进行菌种分离之前,我们需要选择合适的样品进行采集。
样品可以来自不同的环境,如土壤、水体、动植物等。
采集样品时,我们需要注意卫生和安全,避免污染和交叉感染。
采集后,样品需要进行处理,包括样品的细碎、过滤、稀释等步骤,以便于后续的菌种分离工作。
二、菌种分离菌种分离是菌种分离筛选的核心步骤。
在这一步骤中,我们需要将样品中的微生物菌种分离出来,并培养成单菌种。
常用的分离方法有稀释平板法、涂布平板法、过滤法等。
分离时,需要选择适当的培养基和培养条件,以促进菌种的生长和繁殖。
分离出的单菌种需要进行纯化,以确保其纯度和纯种性。
三、菌种鉴定菌种鉴定是确定分离出的菌种种属和种类的步骤。
鉴定菌种的方法有形态学观察、生理生化特性测定、分子生物学方法等。
通过对菌种的形态、生长特征、代谢产物等进行观察和分析,可以初步确定其分类地位。
而通过分子生物学方法,如16S rRNA基因序列分析,可以更准确地确定菌种的种属和种类。
四、菌种筛选菌种筛选是根据特定需求从众多菌种中选择出具有特殊功能或性质的菌株的步骤。
筛选的目标可以是抗菌活性、产酶能力、产生生物活性物质等。
常用的筛选方法有抗菌活性筛选、产酶能力筛选、生物活性物质筛选等。
在进行筛选时,需要设置合适的筛选条件和指标,并利用适当的方法进行评价和选择。
五、菌种保存与应用菌种保存与应用是菌种分离筛选的最后步骤。
在菌种分离筛选过程中,我们通常会得到很多有潜力的菌株。
为了保证这些菌株的长期保存和应用,我们需要采取相应的保存措施,如冷冻保存、冻干保存、液氮保存等。
同时,我们还可以将这些菌株应用于不同的领域,如农业、医药、环境等。
通过进一步的研究和开发,这些菌株可以发挥出更大的应用价值。
通过以上五个步骤,我们可以从自然环境中分离出具有特殊功能或性质的菌株,并进行进一步的研究和应用。
菌种分离筛选是微生物学研究中的重要工作,对于发现新的生物资源和开发新的生物产业具有重要意义。
工业微生物产生菌的分离筛选
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根据微生物对环境因子旳耐受范围具有可塑性旳 特点,可经过连续富集培养旳措施分离降解高浓 度污染物旳环境保护菌。例如:降解高浓度苯胺 旳微生物分离;环己烷降解菌旳分离
2、控制培养条件:pH、温度及通气
富集培养基旳pH值调整到被分离微生物旳要求 范围不但有利于本身生长,也可排除一部分不需要 旳菌类。
搜集和筛选 旳途径:
➢向菌种保藏机构索取有关旳菌株,从中筛选所需 菌株
➢由自然界采集样品,如土壤、水、动植物体等, 从中进行分离筛选
➢从某些发酵制品中分离目旳菌株,如从酱油中分 离蛋白酶产生菌,从酒醪中分离淀粉酶或糖化酶旳 产生菌等
本章内容
一、 含微生物样品旳采集 二、 富集培养 三、 好氧微生物旳分离 四、厌氧微生物旳分离
3)、生长圈法
一般用于分离筛选氨基酸、核 苷酸和维生素旳产生菌 工具菌(指示菌)是某些相相应旳营养缺陷型菌株
将待检菌涂布于高浓度工具菌并缺乏所需营养物旳平板 上进行培养,若某菌株能合成平板所需旳营养物,在该 菌株旳菌落周围便会形成一种混浊旳生长圈
如 嘌呤营养缺陷型大肠杆菌与不含嘌呤旳琼脂混 合倒平板,在其上涂布含菌样品保温培养,周围 出现生长圈旳菌落即为嘌呤产生菌
筛选霉菌时,可在培养基中加入四环素等抗生素克 制细菌,使霉菌在样品旳百分比提升,从中便于分离到 所需旳菌株
三、好气微生物旳分离
经富集培养后来旳样品,目旳微生物得到增殖, 占了优势,其他种类旳微生物在数量上相对降低,但 并未死亡。所以,经过富集培养后旳样品,也需要进 一步经过分离纯化,把最需要旳菌株直接从样品中分 离出来。
➢ 移植时间是关键,应在所需菌种确已占优势 旳情况下进行。
新型微生物菌种的筛选和应用
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新型微生物菌种的筛选和应用近年来,随着科技的不断进步,微生物的研究也在不断的深化。
新型微生物菌种的筛选和应用,成为了当前微生物研究领域中极为重要的课题之一。
一、筛选新型微生物菌种新型微生物菌种的筛选,是研究人员在微生物菌群中,寻找并筛选出具有独特功能的微生物细胞。
筛选的过程中,通常会采用“分离培养-鉴定-评估-应用”四个步骤。
1. 分离培养分离是指将所需的微生物菌株,从其他混合菌中分离出来。
常用的微生物分离方法有凝胶扩散法、滤膜法、渐进稀释法等。
分离得到单纯的微生物菌株后,再通过发酵、培养等方法进行菌体的生长。
菌体的生长条件需要十分精确而细致,需要控制温度、pH值、氧气含量等因素。
2. 鉴定鉴定是指通过对微生物菌株的形态、结构、生长习性、代谢产物等方面的观察和分析,确定微生物所属的科属和种属等信息。
常用的微生物鉴定技术有生物化学鉴定法、分子生物学鉴定法等。
鉴定过程中,需要采用多种技术手段,避免因单一技术的误差而导致的鉴定失误。
3. 评估评估是指通过对微生物菌株的活性、产物等因素的评估,确定微生物所具有的生物功能和应用价值。
评估过程中,需要进行多项实验,以确定微生物的活性、毒性、生长环境等信息。
同时,也需要进行微生物的遗传学研究,帮助人们更好的了解微生物的生长和繁殖机制。
4. 应用新型微生物菌株的发现,通常会带来一些独特的应用价值。
这些应用,可以涵盖农业、医学、环境等多个领域。
例如:发现能够有效降解污染物的微生物菌株,可以用于解决水体和土壤的污染问题;发现能够产生新型生物药物的微生物菌株,可以用于医学领域中,制备新型药物。
二、新型微生物菌种的应用新型微生物菌株的应用,是人们对其独特功能和潜在价值的充分挖掘和发扬。
下面将从农业、医学、环境三个方面,介绍新型微生物菌株的常见应用。
1. 农业领域新型微生物菌株在农业领域中,可以发挥出自身的生物学特性,对植物的生长和发育起到一定的促进作用。
例如:与根系共生的微生物,可以促进植物的生长和发育;可以吸收空气氮的细菌菌株,可以为植物提供充足的氮元素,加速植物的生长和发育。
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自然选育是一种简单易行的选育方 法。但是自然选育的效率低,因此经 常与其它育种方法交替使用,以提高 育种效率。
自然选育程序:
取样→菌悬液→稀释→平板分离→单菌 落→能力检测→菌种。
第二节 诱变选育
微生物有一套严密的积累。因此从自然环境中分离的菌 种生产能力有限,一般不能满足生产的实 际需要。
两种以上诱变剂同时、先后处理或多次 处理。
3).诱变剂剂量选择
对不同微生物使用的剂型、剂量不 同,诱变剂的剂量与致死率有关,而 致死率又与诱变率有一定的关系。因 此,用致死率作为诱变剂剂量选择的 依据。
一般来说,诱变率随诱变剂剂量 的增加而提高,但达到一定程度以后, 再提高剂量反使诱变率下降。
近年来已将处理剂量从过去的致死 率99%~99.9%降至70%~80%,甚至 更低。
据统计,这种碱基错误配对引起自然突变的几率为10-5~10-9。
自然突变结果:
1.菌种退化--产物产量或质量下降; 2.菌种进化--对生产有益的突变。
注意: 在工业生产中,由于各种条件因
素的影响,自然突变是经常发生的, 也造成了生产水平波动,所以要注意 从高水平的生产批次中,分离高生产 能力的菌种再用于生产。
诱变育种是提高菌种生产能力,使所需 要的代谢产物过量积累的有效方法之一。
3.1 诱变育种的原理
诱变育种的理论基础是基因突变,突变主要 包括染色体畸变和基因突变两大类。
染色体畸变:是指染色体或DNA片段发生缺 失、易位、逆位、重复等。
基因突变:是指DNA中的碱基发生变化即点 突变。
诱变育种: 是利用物理、化学诱变剂处理微生
3).组成型突变株的筛选
在酶制剂的发酵生产中,常采用在发酵 过程中分批限量加入诱导物的方法,提高 诱导酶的活性。为解除对诱导物的依赖, 可通过诱变改变菌种的遗传特性,筛选组 成型突变株。突变发生在调节基因或操纵 基因,都可获得组成型突变株。筛选的方 法是设计某种有利于组成型菌株生长,并 限制诱导型菌株生长的培养条件,造成组 成型菌株生长的优势或适当的分辨两类菌 落的方法,选出组成型突变菌株。
4).抗性突变株的筛选
①抗生素抗性突变。 ②抗噬菌体菌株的选育。 ③条件抗性突变。 ④敏感突变。
第三节 杂交育种
杂交育种:是将不同菌株的遗传物质进 行交换、重组,使不同菌株的优良性状集 中在重组体中,克服长期诱变引起的生活 力下降等缺陷。
通过杂交还可以扩大变异范围,改变 产品的产量和质量,创造出新品种。
当亲株没有或很少标记的情况下, 可利用灭活的原生质体(单亲株或双 亲株灭活均可)融合,筛选有生物活 性的重组子。
此外可以利用荧光染色,将两个 亲株用不同的荧光色素染色并融合后, 在落射荧光装置的立体显微镜下观察 融合子;如在一个个体上观察到双亲 的两种荧光色素,即为融合子。
通过上述方法产生的融合子如果产 生了杂合双倍体或单倍重组子,其遗 传性状比较稳定。但也可能产生的融 合子是一种短暂的融合,会再次分离 成亲本类型。所以还要再进行多次筛 选,找到稳定的融合子。
例如胸腺嘧啶(T)和鸟嘌呤(G)可以酮式或烯醇式出现,胞嘧啶(C)和腺嘌 呤(A)可以氨基式或亚氨基式出现。平衡是倾向于酮式或氨基式的,因此DNA双链中 以AT和GC碱基配对为主。但在偶然的情况下,当T以烯醇式出现时的一瞬间,DNA链 正好合成到这一位置上,与T配对的就不是A,而是G;若C以亚氨基式出现时的一瞬间, 新合成的DNA链这一位置上,与C配对的就不是G,而是A。
能力。
1).出发菌株的选择
①诱变出发菌株要有目标产物的生产能力; ②其它生产性能如生长繁殖快、营养要求低、
产孢子多且早; ③对诱变剂敏感,则变异幅度大; ④产量、形态、生理等方面情况。 另外,可选择已经过诱变处理的菌株,这样
的菌株对诱变剂的敏感。
2).诱变剂的使用方法
诱变的方法:单一诱变和复合诱变。 单一诱变:指只用一种诱变剂处理菌种。 复合诱变:指两种以上诱变剂处理菌种。 复合诱变处理包括同一诱变剂多次处理、
第一节 自然选育
自然选育: 不经人工处理,利用微生物自然突变进
行菌种选育的过程。 自然突变原因:
1.多因素低剂量的诱变效应, 2.互变异构效应。
多因素低剂量的诱变效应:
是指自然界中低剂量的宇宙射线、各种 短波辐射、诱变物质和微生物自身代谢产 生的诱变物质等作用引起的突变。
互变异构效应:
指四种碱基第六位上的酮基或氨基的瞬 间变构,会引起碱基的错配。
几丁质酶、蜗牛酶、纤维素酶、硫 酸脂酶多用于制备霉菌的原生质体。
2) 原生质体融合和再生
两个出发菌株制备的原生质体可以通过化学 因子或电场诱导的方法进行融合。
化学因子诱导:采用聚乙二醇(PEG)4000 和6000作为融合剂,并加Ca2+和Mg2+等阳离子。
电融合过程是原生质体在电场中极化成偶极 子,并沿电力线方向排列成串,再加直流脉冲 击穿原生质体膜,导致原生质体融合。
革兰氏阳性枯草杆菌和巨大芽抱杆 菌的细胞壁——溶菌酶;
黄色短杆菌的原生质体制备是先加 青霉素培养1.5h后,再用酶消化;
革兰氏阴性细菌则要采用EDTA加溶 菌酶,或甘氨酸一溶菌酶一EDTA,或 在含青霉素培养基培养等条件下制备 原生质体;
链霉菌一般在含甘氨酸的培养基中 培养后,用溶菌酶消化;
酵母的原生质体制备是首先接种在 疏基乙醇和EDTA的溶液中培养,再用 细胞壁溶解酶消化获得。或者用蜗牛 酶或纤维素酶消化时,添加疏基乙醇 来提高原生质体的形成率。
物细胞,提高基因突变频率,再通过 适当的筛选方法获得所需要的高产优 质菌种的育种方法。
常用的诱变剂--物理、化学和生物 的三大类,见下表。
2.2 诱变育种的基本方法
诱变育种----诱变和筛选 诱变----包括出发菌株选择、诱变剂种
类和剂量选择,以及合理使用方法。 筛选----初筛和复筛,测定菌种的生产
微生物菌种分离 筛选与育种
发酵工程的生产水平由生产菌种的 性能、发酵条件、提取工艺和生产设备。 其中生产菌种是最重要的,生产菌种最 初都来源于自然界(土壤、空气、江、 河、湖、海)。
一个菌种能否满足工业生产的实际 需要,是否有工业生产价值极为重要。
工业生产对生产菌种自身的特性 提出了许多要求,这些要求是评价生 产菌种优劣的标准和菌种选育工作的 研究目标。
融合后的原生质体具有生物活性, 但由于缺少细胞壁,不是正常的细胞, 不能在普通培养基上生长。所以要涂 布在高渗培养基上令其再生。可以增 加高渗培养基的渗透压或添加蔗糖来 增加再生率。
3) 融合子的检出
融合子是在选择性培养基上检出, 即通过两个遗传标记互补确定的,如 利用营养缺陷型互补,在基本培养基 上识别融合子。
菌种保藏的方法很多,一种好的保藏方法 除了能长期保持菌种原有的优良性状不改变外, 还应简便、经济,以便在生产上能广泛使用。
6.1 斜面保藏法和穿刺保藏法
6.1.1 斜面保藏法 6.1.2 穿刺保藏法
6.2 沙土管干燥保藏法 6.3 真空冷冻干燥保藏法 6.4 液氮保藏法 6.5 悬液保藏法 6.6 低温保藏法
2.3 突变菌株的筛选
诱变后,正向突变的菌株通常较少,菌 种性能有可能发生各种各样的变异,如营 养、抗性、代谢、形态、生长繁殖和温度 等。这些变异菌种可用各种方法筛选。
通过初筛和复筛后,还要经过发酵条件 优化研究,确定最佳发酵条件,使高产菌 株生产能力充分发挥出来。
1).营养缺陷型突变菌株的筛选
并且不能将这些前体物质作为一般碳 源利用。
⑦发酵过程中产生的泡沫要少。 ⑧具有抗噬菌体感染的能力。 ⑨遗传特性稳定,保证发酵过程能够长
期、稳定地进行,同时有利于实施最 佳的工艺控制。
以上是对优良菌种特性的要求, 也是菌种选育工作研究和需要解决的 问题。
生产菌种选育方法:
自然选育、诱变选育、抗噬菌体菌 种选育、杂交育种、原生质体融合技 术、基因工程技术等。
营养缺陷型突变菌株的诱变育种具有重要的 理论研究和工业应用价值,已广泛地在氨基酸、 核苷酸生产中广泛应用。
在营养缺陷型突变菌株中,生物合成途径 中某一步发生了酶缺陷,合成反应不能完成,末 端产物不能积累,因此末端产物的反馈调节作用 被解除。只要在培养基中限量加入所要求的末端 产物,克服生长障碍,就能使中间产物积累。
2).抗反馈阻遏和抗反馈抑制突变菌 株的筛选
末端产物的反馈调节在生物合成途 径中是普遍存在的,除了采用筛选营 养缺陷型突变菌株来降低末端产物的 浓度外,更加有效的办法是筛选抗阻 遏和抗反馈抑制突变株。这两种突变 均是由于代谢失调,它们有共同的表 型,即在细胞中已经有了大量的末端 产物时,仍不断合成这一产物。
一般来说,优良的生产菌种应该 具备如下的基本特性:
①具有在较短的发酵周期内产生大量发 酵产物的能力。
②在发酵过程中不产生或少产生与目标 产品性质相近的副产物及其他产物。
③生长繁殖能力强,生长速率快。
④能够高效地将原料转化为产品。 ⑤有广泛利用不同来源原材料的能力,
并对发酵原料成分波动敏感性较小。 ⑥对需要添加的前体物质有耐受能力,
原生质体融合技术提供了充分利用 遗传重组杂交的方法。
原生质体融合技术首先是在动植 物细胞融合研究的基础上发展起来的, 然后才应用于真菌、细菌和放线菌。 由于这一技术可以打破种属间的界限, 提高重组频率,扩大重组幅度,而倍 受关注。
4.1 原生质体融合的优越性
原生质体融合方法: 首先用酶分别 酶解两个出发菌株的细胞壁,在高渗 环境中释放出原生质,将它们混合, 在助融剂或电场作用下,使它们互相 凝集,发生细胞融合,实现遗传重组。
的基因重组过程。 准性生殖过程包括异核体形成、二
倍体形成和体细胞的重组。
3.4 酵母的杂交育种
酵母菌是双单性微生物,存在着 单倍体和二倍体生活史;
酵母杂交育种有三种杂交方式:即 孢子与孢子、单倍体细胞与孢子、以 及细胞间杂交。