芸香苷的提取、精制、水解和鉴定

• 3、水解时应随时加水，避免蒸干。
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实验内容与方法：
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• 一、芸香苷的提取 • 取槐花米20g（研碎），置于1000ml圆底烧瓶中，
加0.4%硼砂水溶液200ml，在搅拌下加石灰乳调PH8， 加热微沸30分钟，静置几分钟倾出上清液，用棉花 过滤，药渣同上重复一次。合并滤液用6N盐酸调 PH2~3，放置冰箱中析晶（一夜以上），待全部结 晶析出，抽滤，得粗芸香苷（滤饼用水洗3~4次）， 放置空气中自然干燥得粗品，称重、计算提取率。
2.黄酮苷可通过酸水解得到苷元和糖，并 可通过薄层色谱法进行检识。
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• 实验器材： • 试药：槐花米、0.4%硼砂水溶液、石灰乳、蒸馏
水、浓盐酸、2%硫酸、乙醇、1%氢氧化钠溶液、 1%盐酸溶液、10%α-萘酚溶液、浓硫酸、镁粉、 1%醋酸镁甲醇溶液、正丁醇、醋酸 • 仪器：电炉、漏斗、紫外分析仪、锥形瓶、量筒、 烧杯、层析筒、试管
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• 2．呈色反应 • 取芸香苷和槲皮素约10mg，各用5ml乙醇溶解，制成样品
溶液，按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 • （1）Molish反应 取样品溶液1ml，加10%α-萘酚溶液
1ml，振摇后斜置试管，沿管壁滴加0.5ml浓硫酸，静置， 观察并记录液面交界处颜色变化。 • （2）盐酸镁粉反应 芸香甙与槲皮素溶液分别置于试管中， 加入金属镁粉少许，浓盐酸2~3滴，观察并记录颜色变化。 • （3）醋酸镁纸片反应 取两张滤纸条，分别滴两滴芸香苷、 槲皮素的乙醇溶液，然后各加1%醋酸镁甲醇溶液两滴，于 紫外灯下观察荧光变化，记录现象。
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实验内容与方法：
• 二、芸香苷的精制
• 取2g加蒸馏水400ml，加热煮沸溶解，趁热 抽滤，滤液放置过夜，析晶，抽滤，得精制 芸香甙。烘干。
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实验内容与方法：
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• 三、芸香苷的水解
• 取精制芸香甙1g，置250ml圆底烧瓶中，加 2%H2SO4溶液80ml，加热回流30分钟至1小时， 开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结 晶，即为槲皮素。放冷抽滤得结晶，滤液保留作为 糖的检查，沉淀物用蒸馏水洗至中性，抽干水份， 晾干称重，得粗制槲皮素。必要时可用稀乙醇重结 晶。
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• 五、芸香苷及槲皮素的纸层析鉴定 • 层析材料：层析滤纸 • 点 样：（1）提取的芸香苷乙醇溶液
（2）提取的槲皮素乙醇溶液 • 展开剂：正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶5）上层溶液 • 显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在
紫外灯下观察斑点颜色
• （2）喷洒三氯化铝试剂后再观察斑点的变化
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实验注意事项
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• 1、提取过程中，加入硼砂的目的是为了保护芸香苷分子中 邻二酚羟基，以减少其氧化，并使其不与钙离子结合（钙 盐络合物不溶于水），使芸香苷不受损失，提高产率。
• 2、实验中应严格控制碱提取、酸沉淀的PH值。加入石灰 乳即可以达到碱性溶解提取的目的，还可以除去槐花米中 的多糖类、粘液质等，但碱性不宜过高（PH不超过10）， 因为在强碱性条件下煮沸，时间稍长就可促使芸香苷水解 破坏，降低产率；酸化时PH不可过低，否则会使芸香苷形 成样盐而降低产率。
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• 四、芸香苷的检识反应
• 1．成盐反应 取芸香甙10mg左右，置试管中加 蒸馏水2ml，振摇，观察试管有无变化，滴加1%氢 氧化钠溶液数滴，振摇使芸香甙全部溶解成为黄色 澄明溶液，然后再滴加1%盐酸溶液数滴至成酸性 反应，溶液则由澄明转为混浊状态（若当时不出现 混浊时可放置片刻或放置冰箱中冷冻一定时间后再 观察）。
LOG实O 验二 芸香苷的提取、精制、 水解和鉴定
HO
O
OH OH
O Glc-Rha
OH O
Rutinose
LOG实O 验二 芸香苷的提取、精制、 水解和鉴定
实验原理：
1.芸香苷分子中具有酚羟基，显弱酸性， 在碱水中成盐增大溶解能力，用碱水为溶 剂煮沸提取，提取液加酸酸化后又成为游 离的芸香苷而析出。并利用芸香苷对冷水 和热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。