(新)淋巴细胞标志和功能的检测

特
异
性
E受体、全部T细胞和部分NK细胞 成熟T细胞 T（辅助/诱导）细胞、M、HIV受体 T（杀伤/抑制）细胞、NK细胞的亚群 活化T细胞、IL－2受体
（1）间接免疫荧光法 是将分离获得的外周血单个 核细胞分别与抗相应CD的单克隆 抗体结合后，洗去游离的抗体， 继而加入荧光素标记的抗小鼠IgG 抗血清，温育，取样制片，荧光 显微镜观察并计数，求出相应CD 抗 原阳性的T淋巴细胞的百分率。
1、形态法 方法：外周血+PHA→混匀，37℃72小时→ 取培养液涂片染色、镜检，分别计数转化细 胞（淋巴母细胞、过渡型母细胞和核有丝分 裂相细胞）和成熟的淋巴细胞，共计数200个 细胞。并计算转化率。 转化的淋巴细胞数 转化率﹦
×100%
转化的淋巴细胞数+未转化的淋巴细胞数
正常成人转化率为：60%~80%。﹤50%视为降低
花环法简便易行，不需特殊仪 器，试剂相对便宜，是较经典 的T淋巴细胞检测方法，但影 响因素较多，个人主观性较强， 结果不太稳定，各实验室间的 检测结果可比性较差。
2、特异性受体的检测－－E花环试验
原理：T细胞表面有SRBC受 体，可以与SRBC形成花环。 实验：淋巴细胞与SRBC按一定 比例(1:10)混合→4℃2小时或过夜 →取样涂片染色、镜检计数E花 环数，算出总花环形成率。 正常值为60%~80%。
2、 Fc受体的检测
B细胞表面的IgG Fc受体段结 合的受体，极易与抗原抗体复合物 中的抗体Fc段牢固结合，故用相就 抗体致敏的红细胞作指示物，在一 定条件下形成EA花环。即：致敏的 红细胞（EA）+LC →B细胞的Fc受 体与EA结合→形成EA花环。
常用方法有： 1、形态检查法 LC+肿瘤细胞→涂片，瑞氏染色→镜检 →计数残留的肿瘤细胞数→计算LC抑制 肿瘤细胞生长的抑制率。
抑制率%
﹦
对照组平均残留 的肿瘤细胞数
﹣
实验组平均残留 的肿瘤细胞数
对照组平均残留的肿瘤细胞数
×100%
2、同位数法 常用125I－UdR掺与法或51Cr释放率表示T细胞的细 胞毒性
第三节
B细胞表面标志的检测
B细胞活化后转化为浆细胞， 分泌抗体，执行体液免疫的功能。 B细胞表面有：CD 19、 CD20、 CD21、 CD22和CD23等 分化抗原。健康成人外周血 CD19、 CD20阳性的B细胞约占 淋巴细胞总数的8%~15%。
一、 B细胞表面标志的检测 B细胞表面有膜免疫球蛋白 （SmIg）、Fc受体、补体受体、EB 病毒受体和小鼠红细胞受体等标志， 其中SmIg 为B细胞所特有，是鉴别B 细胞的可靠指标。 1、 SmIg的检测－－常用间接免疫荧 光法
B细胞经荧光标记的抗体染色， 细胞膜表面呈现的荧光形式可有 多种： （1）呈环状均匀分布 （2）集中在某些部位呈斑点状 （3）集聚在一个部位呈帽状 （4）因被吞饮入胞质而膜上无 荧光着色。
Fra Baidu bibliotek
这些现象的出现是由于淋巴细胞膜 由双层类脂组成，上嵌有蛋白分子， 在体温条件下膜呈半液体状，镶嵌 物能在其中移动。当SmIg抗体发生 结合时，由于抗血清为双价，使 SmIg出现交联现象，这种抗原抗体 复合物可连成斑点状和帽状，时间 一长，帽状结合物可脱落或被吞饮 而消失。因此染色后必须在30min 进行观察。
2、同位数法 方法：测定管:血+PHA →5%CO2，37℃，56h 对照管:血
→+3H－TdR →将细胞收集于玻璃纤维膜→ 液体闪烁仪，记录每分钟脉冲数（cpm)→计 算刺激指数（SI）。
SI=测定管cpm值/对照管cpm值
二、T细胞介导的细胞毒试验
T细胞介导的细胞毒性（LMC） 是细胞毒性细胞（CTL）的特性，凡 致敏的T细胞再次遇到相应靶细胞抗 原，均可表现出对靶细胞的破坏和溶 解作用，它是评价机体细胞免疫水平 的一种常用指标，特别是测定肿瘤患 者CTL杀伤肿瘤的能力，常作为判断 预后和观察疗效的指标之一。
淋巴细胞转化试验可以通过形 3 态学观察计数、也可以用 H －TdR掺入法检测细胞内 DNA合成量的增加，据此判 断出淋巴细胞对有关刺激的反 应性与功能状态。
体 外 引 起 淋 巴 细 胞 转 化 的 刺 激 物
非抗原性刺激物：植物血凝素 （PHA）、刀豆素A(ConA）、美 洲商陆（PWM）、脂多糖 （LPS），通称为促有丝分裂原。 PHA和ConA刺激T细胞转化； LPS刺激B细胞转化；PWM可刺 激T和B细胞转化 抗原性刺激物：破伤风类毒素、 链球菌激酶、纯化蛋白衍生物、 白色念珠菌等。
Ea(活性)花环检测：将淋巴 细胞和SRBC按1：4混合， 温育半小时~1小时，取样涂 片镜检，计数花环形成率即 为Ea花环。正常人约为 20%~40%。Ea花环细胞比 E花环细胞更能反映受检者 的细胞免疫水平。
第二节 T细胞功能的检测 一、 T细胞增殖试验（ T细胞转化试验） T细胞在体外受到刺激物作用下，细 胞代谢和形态相继发生变化，表现为短 时间内细胞表面电荷即起变化，数小时 后细胞内酶活化，在24h~48h细胞内蛋 白质和核酸合成增加，从而产生一系列 增殖的变化，细胞变大，浆扩大，出现 空泡、核仁明显，染色质疏松→转化为 淋巴母细胞。
第二十一章
淋巴细胞标志 和功能的检测
何印蕾
概述 人体内的淋巴细胞分为T细胞、 B细胞和包括NK细胞为代表 的第三群细胞。淋巴细胞及其 亚群的检测是判断机体细胞免 疫水平的重要指标。
第一节 T细胞表面标志的检测 一、特异性抗原的检测
T细胞表面主要CD抗原及其特异性
CD抗原 CD2 CD3 CD4 CD8 CD25
（2）免疫细胞化学法 通常用酶免疫检测法，如生 物素-链霉素系统试剂作ABC法 染色。该方法可用普通显微镜观 察，凡呈棕黄色的细胞为相应的 CD抗原阳性细胞，计数其占总 淋巴细胞的百分率。
（3）抗体致敏的细胞花环法
用相应的CD单克隆抗体致敏醛 化的红细胞作为指示物，它与受检 的细胞混匀后，置室温片刻，低速 离心，室温2小时或4 ℃过夜，取样 涂片，瑞氏染色镜检。凡受检细胞 周围粘有3个或3个以上红细胞即为 花环形成细胞，计数200个淋巴细胞 的花环细胞数，并计算花环形成率。