(新)淋巴细胞标志和功能的检测
医学免疫学实验六 淋巴细胞功能检测
CCK8法与其他检测法的优势
实验材料
小鼠、75%酒精、PBS缓冲液（PH7.4） 红细胞裂解液、RPMI-1640不完全培养液 、胎牛血清、刀豆蛋白A、CCK8检测试剂 盒
眼科剪刀、镊子、酒精棉球、注射器枕芯、 无菌平皿、尼龙指套、15mL离心管、微量 移液器、枪头、血球计数板、计数器
淋巴细胞在体内外接受有丝分裂原刺激后，静止淋 巴细胞向母细胞转化。这种转化的细胞DNA合成增 加，细胞体积增大，胞质增多以及出现有丝分裂等 形态变化。
淋巴细胞体外检测方法---形态检测法
主要根据淋巴细胞在转化为淋巴母细胞的过 程中，细胞形态结构发生明显改变，经染色 镜检即可计算出淋巴细胞的转化率。
96孔板布局
PBS孔
调零孔 未刺激组 刺激组
K8检测：培养结束后，每孔（调零组、未 刺激组、刺激组）加入10 μL CCK8溶液，将 培养板在培养箱内孵育1-4小时，用酶标仪测 定在450nm处吸光度。
优点：简便易行，仪器简单 缺点：受实验者主观因素影响，准确性和重复
性较差
同位素渗入法
根据淋巴细胞转化程度与DNA合成增加呈明显正相关 ，此时若加入用同位素标记的DNA前体物质胸腺嘧啶 核苷（3H-TdR），即可被转化的淋巴细胞摄取而渗入 到DNA分子中。培养结束，通过检测β射线来测定渗入 淋巴细胞内3H-TdR的量，能客观精确分析淋巴细胞的 转化程度。
淋巴细胞功能检测
实验目的
掌握免疫细胞基本培养方法 掌握一到两种淋巴细胞功能检测技术 了解淋巴细胞体外检测的原理
基本概念
T细胞在体外培养时，如受到一定物质刺激 ，可出现体积增大转化为母细胞、代谢旺盛 、蛋白质和核酸合成增加等细胞转化现象， 所以通过淋巴细胞体外增殖反应实验，可了 解T细胞功能
淋巴检查科目-概述说明以及解释
淋巴检查科目-概述说明以及解释1.引言1.1 概述淋巴检查是一种用于评估人体淋巴系统功能和健康状况的检查方法。
淋巴系统是人体的重要组成部分，它包括淋巴液、淋巴器官和淋巴管道。
淋巴系统在维持体液平衡、免疫防御以及废物清除等方面发挥着重要作用。
淋巴检查科目是通过对淋巴液、淋巴器官和淋巴管道的检测来评估淋巴系统的功能和健康状况。
淋巴检查科目包括淋巴器官的超声检查、淋巴结活检、淋巴液细胞学检查等。
这些检查项目能够提供淋巴系统结构与功能的详细信息，有助于医生判断淋巴系统是否存在异常或疾病。
淋巴检查在临床中有着广泛的应用。
它可以用于评估淋巴结肿大、淋巴癌、免疫功能异常等疾病的病因和进展情况，并指导相应的治疗方案制定。
此外，淋巴检查还可用于评估淋巴系统在感染、外伤和手术等应激状态下的应对能力。
总之，淋巴检查科目是一项重要的医学检查，可以对淋巴系统的功能与健康进行全面评估。
它在临床上有着重要的应用价值，能够为医生提供有力的诊断依据和治疗指导，促进患者的康复和健康。
1.2文章结构1.2 文章结构本文将以淋巴检查科目为主题展开讨论，并按照以下结构布局：第一部分：引言1.1 概述：介绍淋巴检查的背景和意义，解释为什么淋巴检查对人体健康至关重要。
1.2 文章结构：本部分，详细介绍文章的结构和各个部分的内容。
1.3 目的：明确本文的目的，即探讨淋巴检查的科目，并为读者提供相关知识和信息。
第二部分：正文2.1 淋巴检查科目1：解释第一个淋巴检查科目，在检查中的作用及其重要性，并提供相关的检查方式和操作过程。
2.2 淋巴检查科目2：详细介绍第二个淋巴检查科目，包括其应用领域、常见的检查方法和临床意义。
2.3 淋巴检查科目3：讨论第三个淋巴检查科目，强调其在疾病诊断和预防中的重要性，并列举常见的检查指标和结果分析。
第三部分：结论3.1 总结：对前面章节进行总结，强调淋巴检查科目的综合作用和重要性。
3.2 结果分析：分析各个淋巴检查科目的结果，探讨其在临床实践中的应用前景。
淋巴细胞亚群检测报告怎样看懂？
淋巴细胞亚群检测报告怎样看懂？淋巴细胞是一种包括T细胞、B细胞和自然杀伤细胞等多个亚群的白细胞，它们各自具备不同的免疫作用，协同工作来维护机体免疫平衡和抵御外部侵害。
淋巴细胞亚群检测可以帮助医生了解不同亚群的数量和比例，从而判断免疫系统是否受到影响，同时也能够为一些免疫相关疾病的诊断提供重要参考依据。
在本文中，我们将详细介绍淋巴细胞亚群检测报告中的各项指标含义及其正常值范围，希望能够帮助您更好地理解和解读检测结果。
1.淋巴细胞亚群是如何检测淋巴细胞亚群的检测通常采用流式细胞术、荧光素标记技术等方法。
流式细胞术是一种通过测量单个细胞的光学和物理特性来分析淋巴细胞亚群的数量和比例的技术。
通过将淋巴细胞标记上荧光素等物质，然后把标记的淋巴细胞注入流式细胞术仪中，利用激光束照射、散射、荧光及电导等特性检测并分析细胞的类型、数量、活性等参数，从而识别出各类淋巴细胞亚群。
而荧光素标记技术则是一种在淋巴细胞前处理过程中进行标记的技术，该技术可将淋巴细胞分类并标记在表面（例如用荧光标记）后，再使用流式细胞仪来测量并分析淋巴细胞亚群的数量、活性以及分布情况等。
这些检测方法都是无创的、准确度较高、操作简便、结果可靠，已经成为临床上常用的检测手段之一。
1.淋巴细胞亚群检测的临床意义2.1 评估机体免疫功能淋巴细胞是机体免疫系统中最重要的细胞类型之一，在免疫应答中发挥着重要作用。
淋巴细胞亚群检测可以对机体免疫功能进行全面评估，了解机体是否有免疫功能障碍或免疫力下降等问题。
2.2 辅助诊断病情淋巴细胞亚群检测可以帮助医生判断感染性疾病的类型及病情轻重，如通过测定CD4+ T细胞数目，可以确定HIV感染者的病情进展及治疗效果；通过测定CD8+ T细胞数目，可以推测病毒性肝炎等疾病的病情程度。
2.3 指导免疫治疗方案针对某些自身免疫性疾病例如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等，淋巴细胞亚群检测可以帮助医生选择合适的免疫调节治疗方案。
第一节淋巴细胞的功能检测一、T细胞功能检测二、B细胞功
7. NK细胞活性测定的方法学有哪些？
8. 中性粒细胞功能检测方法学及相应原理。 9. 巨噬细胞功能检测方法学及相应原理。 10. 免疫细胞功能检测的临床应用有哪些？
小 结
免疫细胞功能试验包括体内和体外试验。免疫细胞功
能体外试验主要根据免疫细胞的增殖活性、分泌活性 和杀伤活性等特性而进行实验设计。
第十五章 免疫细胞功能检测技术
第一节 淋巴细胞的功能检测
Hale Waihona Puke 一、T细胞功能检测二、B细胞功能检测
三、NK细胞活性测定
第二节 吞噬细胞功能检测技术 一、中性粒细胞功能检测
二、巨噬细胞功能检测
第三节 免疫细胞功能检测的临床应用
思考题
小 结
对淋巴细胞群，中性粒细胞、巨 噬细胞、树突状细胞等功能测定可
以有效评价机体特异性和非特异性
用IFN-γ激活小鼠巨噬细胞，观察其
对125I-UdR标记的DBA/2小鼠肥大细胞瘤
P815的杀伤活性。
(五) 巨噬细胞促凝血活性测定
激活的巨噬细胞可产生一种与膜结合
的凝血活性因子，加速正常血浆的凝固，
为此取已经37℃预温的正常兔血浆和CaCl2
混合液，加入经粘附有单层巨噬细胞的试
管中，移置37℃，即时记录血浆凝固时间。
3．临床应用与评价
溶血空斑试验主要用于测定药物和
手术等因素对体液免疫功能的影响
评价免疫治疗或免疫重建后机体产
生抗体的能力。
(三 )
1.原理：
B细胞抗体形成功能的检测 ——酶联免疫斑点法
2．应用与方法学评价：
该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检
测抗体分泌量。
优点：
稳定、特异、抗原用量少； 可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定 量；可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。
T淋巴细胞亚群检测参考值
T淋巴细胞亚群检测参考值淋巴细胞表面标志物检测：E玫瑰花形成试验、免疫荧光法（IFA）、荧光激活细胞分类法（FACS）、免疫金银法以及免疫酶染色法等。
E玫瑰花形成试验SRBC+CD2参考值Et 64.4%±6.7%免疫荧光法T淋巴细胞表面标志物检测意义可用于T淋巴细胞计数，T淋巴细胞亚群的分类以及判断T淋巴细胞的活化程度。
CD3 分子表达于所有成熟T淋巴细胞的表面，是总T淋巴细胞的重要标志，CD3+ 常见于甲状腺功能亢进、淋巴细胞性甲状腺炎、重症肌无力以及器官移植后排斥反应。
CD3+ 主要见于免疫缺陷病，如AIDS、先天性胸腺发育不全综合征以及联合免疫缺陷病等。
亦可见于恶性肿瘤、SLE、免疫抑制剂治疗等。
T细胞分化抗原测定白细胞分化抗原（cluster differentiation，CD）CD3代表总T淋巴细胞，CD4是辅助、诱导T细胞的标志，CD8是抑制、杀伤性T细胞的标志。
应用单抗和荧光标记二抗反应在荧光显微镜下或流式细胞仪中计数CD的百分率。
参考值：免疫荧光法（IFA）：CD3为63.1%±10.8%；CD4 为42.8%±9.5%；CD8 19.6%±5.9%；CD4 /CD8为（2.2±0.7）/1。
流式细胞术：CD3 61%~85%；CD4 28%~58%；CD8 19%~48%；CD4 /CD80.9~2.0/1。
T细胞分化抗原测定临床意义CD3CD4+T细胞下降常见于某些病毒感染性疾病，如AIDS、MCV、严重创伤、全身麻醉、大手术、应用免疫抑制剂等；升高见于类风湿性关节炎活动期。
CD8+ T细胞下降常见于类风湿性关节炎、Sjogren综合征、重症肌无力、DM（II型）以及膜型肾小球肾炎等；升高见于传染性单核细胞增多症急性期、MCV以及慢性乙肝。
CD4 +/CD8+比值下降，常见于AIDS、瘤型麻风病、恶性肿瘤进行期和复发时。
也见于部分感染性疾病如传染性单核细胞增多症、MCV、血吸虫病等；增高见于类风湿性关节炎活动期、SLE、Sjogren综合征、重症肌无力、膜型肾小球肾炎以及器官移植后排斥反应等。
免疫学实验——淋巴细胞功能检测
材料: 1.肝素(100单位/毫升)、 淋巴细胞分层液人 的正常血液 2.0.5%绵羊红细胞悬液(用Hanks液配制), Hanks 液 3.吸收过的胎牛血清:取经56℃30分钟加热灭 活后的胎牛血清加半量压积兔红细胞混合后， 37℃水浴20分钟，2000转/分离心10分钟， 取上清液即成。 4. 灭菌注射器，针头，试管，吸管等。
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B细胞产生抗体能力的测定
ELISPOT法
原理：ELISPOT全称为酶联免疫斑点试验，可用于测定产 生IgG和IgM抗体的B细胞。其方法是用抗原包被固相，然后 加入抗原特异性B细胞。如果B细胞产生抗体，抗体与板上的 抗原结合。加入酶标二抗和显色剂就会显色。一个斑点就代 表一个产生抗体的细胞。
方法
1.抗原包被: 37C° 2h，或4C°过夜。固相载体可用聚苯乙烯 平皿、亚硝酸纤维膜、96孔板。 2.抗体生成细胞培育:加入适量抗体生成细胞，37C°, 5%CO. ，3~4h，或过夜。洗涤，去除为与固相结合的细胞。 3.测定斑点产生细胞:加二抗，37C° ，5%CO.2，2~3h。加辣 根过氧化物酶或碱性磷酸酶和底物显色。 4计数: 24h后用10~30倍显微镜下计数斑点形成细胞。
淋巴细胞功能检测
实验任务
市场上有一广告产品，据说有免疫增强作用， 请设计一个方案证实之(从影响淋巴细胞功能、
T淋巴细胞增殖的角度考虑) .
淋巴细胞功能检测
•T细胞增殖（转化）实验 •绵羊红细胞玫瑰花环试验 •B细胞产生抗体能力的测定 •细胞因子的检测
T细胞增殖（转化）实验
原理：T细胞在体外经某种物质刺激，细胞代谢和形态相继变化，在 24~48h细胞内蛋白质和核酸的合成增加，产生一系列增殖的变化，如 细胞变化、细胞浆扩大、出现空泡、核仁明显、核染色质疏松等，由 淋巴细胞转变为淋巴母细胞。因此，这种淋巴细胞增殖又叫淋巴细胞 转化。据此可判断出淋巴细胞对有关刺激的反应性与功能状态。
项目十七 T淋巴细胞表面标志和功能检测
项目十七T淋巴细胞表面标志和功能检测一、E花环形成试验(Erythrocyte rosette formation assay)【实验原理】人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞(SRBC)受体，可与SRBC结合形成花环样细胞团(即E花环)。
此试验用于计数T细胞数量，进而可判断机体细胞免疫状况。
由于T 细胞的异质性，其中在4℃放置1h以上，所形成的花环数代表T细胞总数，称为总花环(Et 花环)，而淋巴细胞与SRBC混合后不经4℃作用，立即反应形成的花环称为活性花环(Ea花环)。
【试剂和器材】1．肝素抗凝剂用Hanks液将肝素配成500U/ml，分装，每管0.1ml，置4℃备用。
2．淋巴细胞分离液(密度为1.077±0.001)。
3．小牛血清56℃加热灭活30min，按2:1比例与沉积SRBC混合，置37℃30min，离心，收集血清备用。
4．0.5％SRBC悬液取脱纤维或Alsever液保存的羊血，用5～10倍量生理盐水洗3 次。
第3次2500r/min离心10min，弃上清液，用生理盐水配成0.5％的SRBC悬液(约108个细胞/ml)。
5．0.8％戊二醛取30.25ml 4.5 g/L NaCl 盐水，加入1ml 25％戊二醛即可。
6．姬姆萨-瑞氏染液取磷酸缓冲液(PB：1/15 mol/L, pH7.0～7.4)10ml，加入姬姆萨染液6滴及瑞氏染液1滴。
7．Alsever液、Hanks液(无Ca2+和Mg2+, pH7.2～7.4)、PB(1/15 mol/L, pH7.0～7.4)、生理盐水。
8．离心机、水浴箱、电冰箱、显微镜、离心管、载玻片、盖玻片、吸管、吸球、注射器。
【步骤和方法】1．淋巴细胞悬液的制备取2ml肝素抗凝血，加入2ml Hanks液，叠加于2ml 淋巴细胞分离液上，水平离心2000 r/min 20 min。
取出单个核细胞层，用4~5倍Hanks液洗2次，每次离心1000r/min 10min。
免疫细胞标志和功能检测技术-四川大学
CD 抗原
鉴定与检测: 单克隆抗体（ McAb） CD抗原国际统一编号 目前已鉴定的CD分子达300多种，已
弄清130多种CD分子编码基因的核苷 酸序列及其染色体定位 很少通过单一CD抗原区分某一淋巴细 胞亚群
CD分组
T细胞相关CD B细胞相关CD 髓系细胞相关CD NK细胞相关CD 血小板相关CD 激活抗原 粘附分子 内皮细胞 细胞因子受体
CD8分子：细胞毒性T细胞标志
由α、β链借二硫键连接形成的异二聚体， 胞膜外结构属IgSF成员
α链V样区与MHCⅠ类分子非多态α3区域 结合
生物学功能：胞浆区可与p56lek激酶结合 参与信号传导
CD4和CD8分别是MHC-II类或MHC-I类分子
的受体，可加强和稳定T细胞表面TCR与抗原呈 递细胞或其它靶细胞表面非己抗原肽-MHC分子 复合物的结合，并有助于TCR-CD3信号传递。
CD2可与绵羊红细胞（SRBC）结合，故又称绵 羊红细胞受体（E受体）。 E花环试验: 测定外周血T细胞总数
外周血淋巴细胞 + SRBC
T淋巴细胞CD2-多个SRBC形成致密花环
计数外周血T细胞总数
（2）CD3：
表达于全部T细胞表面 T细胞表面标志 由γ、δ、ε、ζ和η五种链组成的跨膜多肽
第十五章
免疫细胞标志和功能检测技术
白杨娟
华西医院实验医学科临床免疫实验室
中枢免疫器官：胸腺、骨髓 免疫器官 外周免疫器官：淋巴结、脾脏等
免
疫
参与免疫应答或与
免疫细胞 免疫应答有关的各
淋巴细胞 单核巨噬细胞
系
种细胞
其他免疫细胞
统Hale Waihona Puke 免疫分子Ig、补体、细胞因子、黏附分 子、神经递质、CD抗原等
t淋巴细胞检测指标
t淋巴细胞检测指标1.引言1.1 概述概述部分的内容应该对淋巴细胞检测指标进行简要介绍，概括其意义和作用。
以下是一种可能的写作方式：淋巴细胞检测指标是评估人体免疫功能及疾病诊断的重要指标之一。
淋巴细胞作为免疫系统中的主要细胞类型，发挥着抗体产生、细胞毒性反应和免疫调节等重要功能。
因此，通过对淋巴细胞数量和功能的检测，我们能够了解人体免疫状态的稳定性、免疫应答的活跃程度以及疾病发展的可能性。
淋巴细胞检测指标主要包括淋巴细胞总数、淋巴细胞亚群比例、淋巴细胞功能等。
淋巴细胞总数是了解人体免疫系统整体状况的重要指标，通常通过血液样本中的淋巴细胞计数得出。
而淋巴细胞亚群比例则是指不同亚群淋巴细胞（如CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、B细胞等）在总淋巴细胞中所占的比例，通过测量不同亚群的数量可以更准确地评估免疫系统的功能和状态。
淋巴细胞功能方面的检测，如免疫细胞活化标志物表达、细胞增殖能力和细胞因子产生等，能够进一步揭示免疫系统的活跃程度和具体机制。
例如，通过测量特定的细胞因子（如白介素-2、干扰素-γ等）的产生，可以间接评估特定疾病（如肿瘤、传染病等）的发展情况，并为治疗方案的选择提供依据。
综上所述，淋巴细胞检测指标在临床医学中具有重要的意义。
它不仅可以用于评估免疫功能的状态，还可以为疾病的早期诊断和治疗提供参考。
随着检测技术的不断发展和深入研究的推进，相信淋巴细胞检测指标将会在医学领域中发挥更大的作用。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以是：文章结构是指文章整体组织和框架的安排方式，它决定了文章思路的清晰度和逻辑性。
本文按照以下结构展开：第一部分是引言部分，包括概述、文章结构和目的。
在引言部分，我们将介绍淋巴细胞检测的重要性以及本文的目的和结构安排。
第二部分是正文部分，包括了两个要点。
在第一个要点中，我们将详细介绍淋巴细胞检测的背景和意义。
我们将探讨淋巴细胞检测的作用、相关的检测方法和常用的指标。
在第二个要点中，我们将深入讨论淋巴细胞亚群检测及其相关指标的意义和应用。
第三章细胞免疫功能测定
第三章细胞免疫功能测定第一节淋巴细胞计数和亚群测定淋巴细胞各亚群细胞的膜表面均具有可供鉴别的特殊结构，即表面标志。
应用化学方法可检测淋巴细胞在不同发育阶段所含酶种类及含量的差异。
检测外周血中各类淋巴细胞及其亚群的数量，这对了解机体的免疫功能状态，研究某些疾病发病机制及辅助临床诊断具有一定的意义。
（一） E花结试验人类T细胞表面具有绵羊红细胞(SRBC)受体，称E受体。
该受体在体外与SRBC结合，从而形成玫瑰花结样细胞团，可用来计数T细胞。
1、试验方法：外周血淋巴细胞：2×106／m1SRBC：2×108／m1各取0.1m1在试管中混匀，置37℃水浴温育5min，1000r／min离心5min，4℃冰箱放置2h后取出。
轻轻吸去大部分上清，旋转试管使细胞重悬，取一滴细胞悬液于载玻片上，甲苯胺蓝染色后镜检，结合3个以上SRBC的淋巴细胞为E花结形成细胞，即T细胞。
计数200个淋巴细胞后计算T细胞的百分率。
2、正常参考值：60％一80％3、意义：有助于细胞免疫缺陷性疾病的诊断和疗效观察，有助于对恶性肿瘤、严重病毒或真菌感染、活动期自身免疫疾病患者的疗效观察和预后判断。
（二）活性E(Ea)花结试验部分T淋巴细胞与较低比例SRBC混合，经低速离心沉淀后，需在低温共同培育，即能迅速形成E花结，故称为活性E花结形成细胞。
现认为此类细胞对SRBC具有高度亲和力的T细胞亚群，它能更敏感地反映细胞免疫的水平和动态的变化。
1、试验方法：同E花结试验基本相同，只是省去4℃冰箱放置2h一步。
2、正常参考值：15％一20％3、意义：临床上用于评价癌症、免疫缺陷病、迟发型变态反应、某些感染和组织器官移植时人体细胞免疫状况以及判断预后，并用于考核药物疗效，研究药物作用机制等。
（三）稳定性E花结试验在E花结试验中，如将形成的E花结在37℃放置30min，绝大多数会快速解离，但有极少数振荡后仍不解离，称为稳定性E花结(Es花结)。
免疫T淋巴细胞检测——帮助了解你的免疫力
免疫T淋巴细胞检测——帮助了解你的免疫力免疫力是人体抵御疾病的重要依靠，而T淋巴细胞是免疫系统的重要组成部分。
T淋巴细胞检测是一种现代化的检测方法，可以帮助人们了解自己的免疫状态，有助于保持免疫系统的健康。
本文将向大家介绍免疫T淋巴细胞检测的相关知识，帮助大家正确认识自己的免疫力。
T淋巴细胞是什么？T淋巴细胞是一种白细胞，是免疫系统中的核心细胞之一，主要负责识别和攻击病原体、癌细胞等异物。
T淋巴细胞在人体免疫系统中起着重要作用。
它们通过产生特异性抗体、杀伤病原体和调节免疫反应等方式来保护身体免受疾病侵害。
T淋巴细胞的种类和数量各不相同，包括CD4+ T淋巴细胞、CD8+ T淋巴细胞、调节性T淋巴细胞等。
它们各自承担着不同的免疫功能。
例如，CD4+ T淋巴细胞主要负责指挥和调节免疫反应，激活其他免疫细胞，如B淋巴细胞和巨噬细胞等；CD8+ T淋巴细胞则是通过直接杀死病原体和癌细胞来保护身体免受侵害，T淋巴细胞数量过低可能意味着免疫系统出现了问题，进而导致身体容易感染疾病。
T淋巴细胞检测的作用是什么？1. 了解免疫系统的状况：T淋巴细胞检测可以帮助确定免疫系统的状况，包括T淋巴细胞的数量和比例。
通过了解自己的T淋巴细胞状态，可以判断免疫系统是否正常工作，是否存在免疫功能异常或免疫系统亢进的情况。
2. 预防和诊断疾病：T淋巴细胞检测可以帮助医生预防和诊断一些疾病。
例如，艾滋病、白血病等。
某些疾病会导致T淋巴细胞数量异常，通过检测T淋巴细胞的数量和比例，可以及早发现这些疾病的存在。
3. 判断免疫功能：T淋巴细胞检测可以帮助判断免疫功能的强弱。
免疫功能强的人，T淋巴细胞数量和比例通常在正常范围内。
而免疫功能较弱的人，会存在T淋巴细胞数量不足或功能异常的情况，容易导致感染和疾病的发生。
如何进行T淋巴细胞检测？1. 流式细胞术：流式细胞术是一种通过样本细胞的荧光染色，使不同的T淋巴细胞呈现不同的颜色，然后采用流式细胞仪器进行检测的方法。
医学免疫学实验六 淋巴细胞功能检测
性较差
同位素渗入法
根据淋巴细胞转化程度与DNA合成增加呈明显正相关 ，此时若加入用同位素标记的DNA前体物质胸腺嘧啶 核苷（3H-TdR），即可被转化的淋巴细胞摄取而渗入 到DNA分子中。培养结束，通过检测β射线来测定渗入 淋巴细胞内3H-TdR的量，能客观精确分析淋巴细胞的 转化程度。
。 ✓ CCK8细胞毒性非常低，因此加入CCK8显色后，可以在不同时间反
复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间。 ✓ 如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK8之前更换新鲜
培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培 养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更 换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
淋巴细胞在体内外接受有丝分裂原刺激后，静止淋 巴细胞向母细胞转化。这种转化的细胞DNA合成增 加，细胞体积增大，胞质增多以及出现有丝分裂等 形态变化。
淋巴细胞体外检测方法---形态检测法
主要根据淋巴细胞在转化为淋巴母细胞的过 程中，细胞形态结构发生明显改变，经染色 镜检即可计算出淋巴细胞的转化率。
淋巴细胞功能检测
实验目的
掌握免疫细胞基本培养方法 掌握一到两种淋巴细胞功能检测技术 了解淋巴细胞体外检测的原理
基本概念
T细胞在体外培养时，如受到一定物质刺激 ，可出现体积增大转化为母细胞、代谢旺盛 、蛋白质和核酸合成增加等细胞转化现象， 所以通过淋巴细胞体外增殖反应实验，可了 解T细胞功能
CCK8（Cell Counting Kit-8）检测 细胞增殖
CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中,不需要预配各种成 分。CCK-8法是用于测定细胞增殖或细胞毒性试验中活细 胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。WST-8 法检测细胞增殖、细胞毒性实验的灵敏度比其它四唑盐如 MTT, XTT, MTS或WST-1高。由于CCK-8溶液相当稳定 ，并且对细胞没有毒性，因此可以长时间孵育。
淋巴细胞活力的表示常用
淋巴细胞活力的表示常用淋巴细胞是免疫系统中重要的细胞类型之一，能够识别、攻击和摧毁有害的细菌、病毒、真菌等外来物质，以及异常细胞，起到保护人体健康的作用。
而淋巴细胞的活力，也是评估免疫系统功能的重要指标之一。
下面将详细介绍淋巴细胞活力的表示常用方法：一、淋巴细胞计数淋巴细胞计数是衡量免疫系统能力的重要指标之一，通常使用血液学检测方法进行测定。
正常人的淋巴细胞计数在每个立方毫升的血液中约为1,500到4,000个。
如淋巴细胞计数低于正常值，可能表示免疫系统功能受损，有可能存在免疫缺陷病等疾病。
二、淋巴细胞增殖淋巴细胞增殖是免疫系统抵御病原微生物攻击的重要机制。
可以通过淋巴细胞增殖实验来评估淋巴细胞的活力和功能状态。
常用的实验方法包括PHA诱导增殖实验、植物血凝素P (ConA) 诱导增殖实验等。
实验结果显示淋巴细胞增殖指数可作为定量指标反映淋巴细胞活力。
三、淋巴细胞活化标志物检测淋巴细胞活化标志物检测是检测淋巴细胞细胞表面及内部功能蛋白的特异性方法。
例如，通过CD69、CD25、CD38等标志物的检测，可以评估淋巴细胞是否处于活化状态，及其程度。
这些标志物的表达水平与淋巴细胞活力和功效密切相关。
四、T淋巴细胞亚群检测T淋巴细胞分为多个亚群（如CD4+ 和CD8+ T细胞），它们在免疫系统中扮演不同的角色。
T淋巴细胞亚群比例的改变可能会表明免疫系统的活力状态。
例如，CD4+ T细胞比例降低可能表示免疫系统受损，容易引起感染等疾病。
五、淋巴细胞凋亡检测淋巴细胞凋亡可以用来评估淋巴细胞的生存状态及活力。
淋巴细胞凋亡的测定方法包括Annexin V/FITC 和propidium iodide (PI) 双染法、TdT介导的dUTP-biotin DNA末端标记（TUNEL）和DNA Ladder等方法。
这些方法可用于检测淋巴细胞受到的损伤和免疫细胞激活程度，反映淋巴细胞功能状态。
综上所述，淋巴细胞活力的表示常用方法包括淋巴细胞计数、淋巴细胞增殖、淋巴细胞活化标志物检测、T淋巴细胞亚群检测和淋巴细胞凋亡检测等。
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（4）CTLA-4和CD28
两者结构高度同源，是由两条多肽链连接而
成的同源二聚体，均表达于活化T细胞表面。其
天然配体是CD80/CD86， CD28与CD80/CD86 结合为T细胞提供主要的协同刺激信号， CTLA-4与CD80/CD86结合给予已活化T细胞抑 制信号。
（5）CD40L
Ⅱ型跨膜蛋白，主要表达于活化的 CD4+T细胞和CD8+ T细胞表面，CD40L 与B细胞表面的CD40相互作用，提供协 同刺激信号参与促进B细胞增生、分化、 抗体合成和TD-Ag诱发的免疫应答反应。
T细胞功能的检测
1. 淋巴细胞转化实验 （lymphocyte transformation test，LTT）
基本原理：
T细胞在体外受到刺激物的刺激后将 发生增殖、转化，根据其增殖转化的能力 评定相应的细胞功能。
淋巴细胞刺激物的种类和作用细胞
刺激物
特异性刺激物 肿瘤抗原 结核性纯化蛋白衍生物 葡萄球菌毒素 同种异体细胞
3. 组织相容性抗原（MHC）
成熟B细胞表面富含MHC-Ⅰ类和 MHC-Ⅱ类抗原。MHC-Ⅱ类对B细胞 的抗原提呈功能即在T-B细胞间相互作 用上起重要作用。
4. 簇分化抗原（cluster of differentiation, CD） B细胞表面有CD5、CD11、CD19、
CD20、CD21、CD22、CD23等分化抗原。 健康成年人外周血CD19、CD20阳性B
健康成年人外周血NK细胞占淋巴细 胞总数的8%~15%。
NK细胞表面标志的检测
目前临床上常采用三色荧光标记单
克隆抗体标记NK细胞，在流式细胞仪 上进行计数分析。
T、B及NK细胞表面标志的比较
淋巴细胞及其亚群检测的临床意义ppt课件
淋巴细胞具有多种功能，包括细胞免疫、体液免疫和信号传 导等。它们通过释放细胞因子、抗体和其他化学物质来调节 免疫反应，并与其他免疫细胞相互作用，共同维护机体的免 疫平衡。
淋巴细胞的分类和特点
淋巴细胞主要包括T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞等。T淋巴细胞主要 负责细胞免疫，B淋巴细胞主要负责体液免疫，NK细胞主要负责非特异 性免疫。
VS
跨学科合作
加强免疫学、肿瘤学、病理学等多个学科 之间的合作，推动淋巴细胞亚群检测与其 他生物标志物的联合应用研究，以实现更 广泛的临床应用和转化。
THANKS
案，确保患者的安全和疗效。
感染性疾病的辅助诊断
• 感染性疾病是指由病原体感染引起的疾病，如细菌、病毒、真菌等引起的感染 。淋巴细胞亚群检测可以为感染性疾病的辅助诊断提供有价值的信息。
• 在感染性疾病中，淋巴细胞亚群检测可以反映机体对病原体的免疫应答反应。 通过检测不同淋巴细胞亚群的数目和功能变化，可以了解感染的严重程度、病 程进展和预后情况。这些信息有助于医生制定合适的治疗方案，提高感染性疾 病的治愈率。
免疫组织化学检测是一种利用抗原-抗体反应原理，对组织 或细胞内的抗原进行定位和定性分析的方法。通过免疫组 织化学检测，可以了解淋巴细胞亚群的分布和表达的分子 标志物，进而评估其在疾病发生和发展中的作用。
免疫组织化学检测具有高特异性、高灵敏度和可定量分析 等优点，因此在病理学诊断和研究中广泛应用。
基因表达谱检测
淋巴细胞及其亚群检测的临床意义
$number {01} 汇报人：可编辑
2024-01-11
目录
• 淋巴细胞概述 • 淋巴细胞亚群的检测方法 • 淋巴细胞亚群检测的临床意义 • 淋巴细胞亚群检测的未来展望
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第三节
B细胞表面标志的检测
B细胞活化后转化为浆细胞， 分泌抗体，执行体液免疫的功能。 B细胞表面有：CD 19、 CD20、 CD21、 CD22和CD23等 分化抗原。健康成人外周血 CD19、 CD20阳性的B细胞约占 淋巴细胞总数的8%~15%。
一、 B细胞表面标志的检测 B细胞表面有膜免疫球蛋白 （SmIg）、Fc受体、补体受体、EB 病毒受体和小鼠红细胞受体等标志， 其中SmIg 为B细胞所特有，是鉴别B 细胞的可靠指标。 1、 SmIg的检测－－常用间接免疫荧 光法
B细胞经荧光标记的抗体染色， 细胞膜表面呈现的荧光形式可有 多种： （1）呈环状均匀分布 （2）集中在某些部位呈斑点状 （3）集聚在一个部位呈帽状 （4）因被吞饮入胞质而膜上无 荧光着色。
这些现象的出现是由于淋巴细胞膜 由双层类脂组成，上嵌有蛋白分子， 在体温条件下膜呈半液体状，镶嵌 物能在其中移动。当SmIg抗体发生 结合时，由于抗血清为双价，使 SmIg出现交联现象，这种抗原抗体 复合物可连成斑点状和帽状，时间 一长，帽状结合物可脱落或被吞饮 而消失。因此染色后必须在30min 进行观察。
第二十一章
淋巴细胞标志 和功能的检测
何印蕾
概述 人体内的淋巴细胞分为T细胞、 B细胞和包括NK细胞为代表 的第三群细胞。淋巴细胞及其 亚群的检测是判断机体细胞免 疫水平的重要指标。
第一节 T细胞表面标志的检测 一、特异性抗原的检测
T细胞表面主要CD抗原及其特异性
CD抗原 CD2 CD3 CD4 CD8 CD25
（2）免疫细胞化学法 通常用酶免疫检测法，如生 物素-链霉素系统试剂作ABC法 染色。该方法可用普通显微镜观 察，凡呈棕黄色的细胞为相应的 CD抗原阳性细胞，计数其占总 淋巴细胞的百分率。
（3）抗体致敏的细胞花环法
用相应的CD单克隆抗体致敏醛 化的红细胞作为指示物，它与受检 的细胞混匀后，置室温片刻，低速 离心，室温2小时或4 ℃过夜，取样 涂片，瑞氏染色镜检。凡受检细胞 周围粘有3个或3个以上红细胞即为 花环形成细胞，计数200个淋巴细胞 的花环细胞数，并计算花环形成率。
Ea(活性)花环检测：将淋巴 细胞和SRBC按1：4混合， 温育半小时~1小时，取样涂 片镜检，计数花环形成率即 为Ea花环。正常人约为 20%~40%。Ea花环细胞比 E花环细胞更能反映受检者 的细胞免疫水平。
第二节 T细胞功能的检测 一、 T细胞增殖试验（ T细胞转化试验） T细胞在体外受到刺激物作用下，细 胞代谢和形态相继发生变化，表现为短 时间内细胞表面电荷即起变化，数小时 后细胞内酶活化，在24h~48h细胞内蛋 白质和核酸合成增加，从而产生一系列 增殖的变化，细胞变大，浆扩大，出现 空泡、核仁明显，染色质疏松→转化为 淋巴母细胞。
2、 Fc受体的检测
B细胞表面的IgG Fc受体段结 合的受体，极易与抗原抗体复合物 中的抗体Fc段牢固结合，故用相就 抗体致敏的红细胞作指示物，在一 定条件下形成EA花环。即：致敏的 红细胞（EA）+LC →B细胞的Fc受 体与EA结合→形成EA花环。
花环法简便易行，不需特殊仪 器，试剂相对便宜，是较经典 的T淋巴细胞检测方法，但影 响因素较多，个人主观性较强， 结果不太稳定，各实验室间的 检测结果可比性较差。
2、特异性受体的检测－ห้องสมุดไป่ตู้E花环试验
原理：T细胞表面有SRBC受 体，可以与SRBC形成花环。 实验：淋巴细胞与SRBC按一定 比例(1:10)混合→4℃2小时或过夜 →取样涂片染色、镜检计数E花 环数，算出总花环形成率。 正常值为60%~80%。
常用方法有： 1、形态检查法 LC+肿瘤细胞→涂片，瑞氏染色→镜检 →计数残留的肿瘤细胞数→计算LC抑制 肿瘤细胞生长的抑制率。
抑制率%
﹦
对照组平均残留 的肿瘤细胞数
﹣
实验组平均残留 的肿瘤细胞数
对照组平均残留的肿瘤细胞数
×100%
2、同位数法 常用125I－UdR掺与法或51Cr释放率表示T细胞的细 胞毒性
特
异
性
E受体、全部T细胞和部分NK细胞 成熟T细胞 T（辅助/诱导）细胞、M、HIV受体 T（杀伤/抑制）细胞、NK细胞的亚群 活化T细胞、IL－2受体
（1）间接免疫荧光法 是将分离获得的外周血单个 核细胞分别与抗相应CD的单克隆 抗体结合后，洗去游离的抗体， 继而加入荧光素标记的抗小鼠IgG 抗血清，温育，取样制片，荧光 显微镜观察并计数，求出相应CD 抗 原阳性的T淋巴细胞的百分率。
淋巴细胞转化试验可以通过形 3 态学观察计数、也可以用 H －TdR掺入法检测细胞内 DNA合成量的增加，据此判 断出淋巴细胞对有关刺激的反 应性与功能状态。
体 外 引 起 淋 巴 细 胞 转 化 的 刺 激 物
非抗原性刺激物：植物血凝素 （PHA）、刀豆素A(ConA）、美 洲商陆（PWM）、脂多糖 （LPS），通称为促有丝分裂原。 PHA和ConA刺激T细胞转化； LPS刺激B细胞转化；PWM可刺 激T和B细胞转化 抗原性刺激物：破伤风类毒素、 链球菌激酶、纯化蛋白衍生物、 白色念珠菌等。
1、形态法 方法：外周血+PHA→混匀，37℃72小时→ 取培养液涂片染色、镜检，分别计数转化细 胞（淋巴母细胞、过渡型母细胞和核有丝分 裂相细胞）和成熟的淋巴细胞，共计数200个 细胞。并计算转化率。 转化的淋巴细胞数 转化率﹦
×100%
转化的淋巴细胞数+未转化的淋巴细胞数
正常成人转化率为：60%~80%。﹤50%视为降低
2、同位数法 方法：测定管:血+PHA →5%CO2，37℃，56h 对照管:血
→+3H－TdR →将细胞收集于玻璃纤维膜→ 液体闪烁仪，记录每分钟脉冲数（cpm)→计 算刺激指数（SI）。
SI=测定管cpm值/对照管cpm值
二、T细胞介导的细胞毒试验
T细胞介导的细胞毒性（LMC） 是细胞毒性细胞（CTL）的特性，凡 致敏的T细胞再次遇到相应靶细胞抗 原，均可表现出对靶细胞的破坏和溶 解作用，它是评价机体细胞免疫水平 的一种常用指标，特别是测定肿瘤患 者CTL杀伤肿瘤的能力，常作为判断 预后和观察疗效的指标之一。