Cellometer细胞计数分析仪

获得信息有限
16
Vision- 工作原理?
明场图像
Vision 计数总细胞数，荧光细胞，细胞大小及荧光强度。
Βιβλιοθήκη Baidu
荧光图像
=Fl+
=Fl-
How does it work…
~20uL sample
Add 20uL sample+20uL fluorescent dye
Pipette 20µL of sample into disposable counting chamber
成团细胞计数
LNCAP
Raw image
Counted
MCF7
形态不规则细胞计数
RD cells
性能（CV%）：
2%-5% 举例： Jurkat:2.27% YAC-1:3.17% H460:5.57% SW620:2.79%
25 20 15 CV% 10 5 0
Jurkat YAC-1 K562 H460 SW620 Hut102
安全性差 Biohazard exposure Highly laborious process for highly skilled employees
Cellometer 系列自动细胞计数仪
Auto T4
Auto X4
Vision
工作原理
基于图像分析技术的细胞计数 方法。与手动计数相似，细胞 悬液在细胞计数板中平铺为一 薄层，摄取的高分辨率显微图 像由软件分析并获得计数结果。
多个样品直方图
细胞大小分布
直方图应用：PBMC中分离DC细胞
Human PBMC DC Matured from PBMC
Cell Type #1: Matured DC Concentration: 2.3 x 106/ml Mean Diameter: 13.0 µ m
Cell Type #2: Small cells in PBMC Concentration: 2.7 x 106/ml Mean Diameter: 5.9 µ m
AO Stain
Adipocyte Adipocyte
Lipid Droplet
应用:表面标志物分析(调亡)
应用背景: 研究者经常应用一些荧光标签 来识别特异性细胞,从而研究细 胞表面的一些特性. 调亡是表面标志物分析中一个 非常大的应用领域. 常用方法: 荧光显微镜 流式
FITC labeled antibodies bind to surface markers
操作简便，快速：三步完成
1. 加样
2. 插入计数板
3. 获取数据
细胞存活率，活细胞浓度分析：
（绿色显示活细胞，红色为死细胞）
检测结果：
总细胞浓度 活细胞计数 细胞存活率（台盼兰染色） 细胞直径均值 细胞大小直方图
去除碎片等背景
Cell count verification: Green outline: live cells
Cellometer
Hemocytometer
细胞浓度检测（与手动计数比较）
细胞浓度与存活率（倍比稀释）
Cellometer Vision
标准细胞计数仪全部功能+ 荧光检测
•非流式、多模式成像系统: •明场 + 荧光 •最多2个荧光通道 • 多种滤光片可供选择
•计数板: •20uL 样品 •无需清洗、维护 •无堵塞
Insert chamber in Cellometer Output data generated instantly
One click to generate more data
18
Vision 结果分析：
Automatically save all results in a data table Fluorescence intensity distribution
Nexcelom cellometer细胞计数仪
Nexcelom 公司:
• Lawrence, MA • Founded in 2002
Nexcelom is located in a refurbished textile mill on the banks of the Merrimack River
PBMC
platelets
PBMC
应用：酵母计数
应用背景: 酵母广泛应用于酿酒、生物燃 料的领域，由于其具有直径 小、出芽（budding)等特性， 常用方法计数比较困难。
常用方法: 手动计数
荧光染料： PI Oxonol
部分客户：
市场：
• Auto T4 • Auto X4（Auto 2000) • Vision
AO Stain
无须裂解红细胞
应用:脂肪细胞计数
应用背景: 脂肪细胞中经常会有悬浮的脂 滴,而且易碎,所以人工计数非常 困难.AO标记后,可以非常容易 地利用荧光计数脂肪细胞. 应用领域: 代谢性疾病研究 糖尿病研究 常用方法: 手动计数 重金属(有毒废物)染色,Coulter Counter计数 Vision是首台可以对新鲜分离脂 肪细胞自动计数的仪器,同时也 可以得到脂肪细胞的大小.
NEW:Vision CBA
(cell based analyzer)
米勒康胜(MillerCoors)
Auto T4
计数面积
血球计数板 细胞计数板 CHT4
1
2 A B
4
3
Total area counted: A+B A+B is equivalent to (1+2+3+4)
Total area counted: 1+2+3+4 Concentration= (Total count/4)x104 (cells/ml)
血球计数板计数： 1 2
4
3
结果不准确 Miscounts/ not counting enough Loading errors Not traceable
费时、费力 Counting/Recording Calculations Washing/Drying
数据有限 No size measurements Cannot save cell images/data
荧光检测：
Cellometer Vision
荧光显微镜 操作简便 细胞计数，存活率，细胞大小及浓度检测 经济（仪器，耗材） 无需维护 灵活性-自动细胞计数到荧光分析 节省其他仪器用于更重要的研究 操作简单，但无定量分析 读数快速 (~60 seconds)
流式细胞计数仪 使用成本高 操作复杂 耗时 需要加样装置
应用：ＰＩ标记检测细胞存活率
PI Stain
应用背景： 碘化丙啶可以特异性标记死细 胞ＤＮＡ，用来检测细胞存活 率 常用检测方法： 荧光显微镜 流式
Dead
Dead
Live
Vision 可以定量分析ＰＩ标
记细胞存活率检测结果
应用：全血样品中直接计数白细胞浓度
应用背景： 由于全血中红细胞浓度很高， 不能直接在镜下计数白细胞， 研究人员利用Acridine Orange (AO)来特异性标记全 血中的ＷＢＣ，也可以用于分 离效果不是很好的ＰＢＭＣ样 品． 应用领域： 免疫学及疫苗研究 常用方法： 裂解红细胞，但此种方法易造 成白细胞损害，尤其对于细胞 数目很低的病人样品
与手动计数比较：

简便且快速（3步，30s/样）； 小型化 ； 全自动操作，避免人为误差，确保实验的可重复性； 形态学观察，数据及图像的存储； 样品无需稀释（2.5×105-1×107 细胞/mL）； 无需洗涤，不会出现堵塞和交叉污染问题； 无需额外试剂和步骤。
细胞大小直方图
• • • • • •
GFP 转染 PI 存活率检测 直接计数WBC/PBMC ，无须裂解 脂肪细胞计数与大小检测 调亡标志物分析 肝细胞计数
• 酵母计数(Auto X4)
应用：GFP 转染
应用背景：研究者应用ＧＦＰ 检测细胞接受外源基因的 效率． 常用方法： 荧光显微镜 流式 凝胶电泳
Vision 可以在60秒内检测转 染效率.
Cell size histograms
Automatically save cell images
Size vs. intensity scatter plot Export all data to Excel
Concentration calculator
可更换滤光片组件:
Cellometer Vision 应用：
Vision提供更加简便,快速的定量
检测细胞表面标志物的方法．
应用：原代肝细胞计数
首次实现原代肝细胞存活率的自动检测
AO & PI Stain
Live
Live
Dead
Live AO
Dead PI
应用：PBMC计数
Using fluorescent stains for accurate concentration and viability: •Fresh PBMCs •Splenocytes •WBCs in whole blood •BAL •Primary hepatocytes