同步荧光光谱法共79页文档
同步荧光光谱
同步荧光光谱同步荧光光谱是一种光谱技术，它通过同时扫描激发和发射两个单色器波长来获得荧光物质的光谱信息。
这种技术可以提供关于荧光物质的结构、分子间的相互作用以及环境因素等方面的信息，因此在生物、化学、物理和环境科学等领域有着广泛的应用。
同步荧光光谱的基本原理是：当荧光物质受到激发后，它会发射出荧光，而荧光的波长和强度会受到激发波长和周围环境的影响。
通过同时改变激发和发射单色器的波长，可以得到一系列的荧光光谱数据，这些数据可以用于分析荧光物质的光谱特性和分子结构。
相比传统的荧光光谱技术，同步荧光光谱具有以下优点：1.简化谱图：由于同时扫描激发和发射波长，可以得到更为清晰和简单的荧光光谱图，有助于提高分析的准确性和可靠性。
2.提高选择性：通过选择适当的激发和发射波长范围，可以对特定荧光物质进行选择性测定，从而提高测定的灵敏度和特异性。
3.减少干扰：在某些情况下，同步荧光光谱可以减少背景荧光的干扰，从而提高测定的信噪比。
4.获取更多信息：同步荧光光谱可以提供关于荧光物质的结构、分子间的相互作用以及环境因素等方面的信息，有助于深入了解荧光物质的性质和行为。
同步荧光光谱的应用范围非常广泛，例如在生物医学领域中，可以用于研究生物分子的结构和功能，检测生物分子之间的相互作用，以及研究细胞和组织的代谢过程等；在环境科学领域中，可以用于检测水体中的有机污染物、重金属离子等有害物质，研究环境中的光化学反应等；在化学和物理领域中，可以用于研究荧光染料、荧光探针等荧光物质的光谱特性和分子结构等。
总之，同步荧光光谱是一种非常有用的光谱技术，它可以提供关于荧光物质的光谱信息和分子结构等方面的信息，有助于深入了解荧光物质的性质和行为。
随着科技的不断进步和应用需求的不断增长，同步荧光光谱将会得到更广泛的应用和发展。
荧光光谱分析法课件
通过观察化学反应过程中荧光强度的变化，可以了解反应过程中各组分的浓度变化，从而推算出反应速率常数和 反应机理等信息。
利用荧光光谱法研究化学反应的动力学过程
2. 在不同时间点测量荧光 光谱并记录数据。
1. 选择适当的荧光标记的 化学反应体系。
实验步骤
01
03 02
利用荧光光谱法研究化学反应的动力学过程
总结词
荧光光谱法可用于研究生物大分子间的相互作用，如蛋白质蛋白质、DNA-蛋白质等相互作用。
详细描述
荧光光谱法通过观察荧光标记的生物大分子在相互作用前后 的光谱变化，可以了解生物大分子间的结合方式、亲和力以 及作用机制等信息。
利用荧光光谱法研究生物大分子的相互作用
实验步骤
1
2
1. 将荧光标记的生物大分子进行纯化和制备。
荧光光谱分析法课件
目录 CONTENT
• 荧光光谱分析法概述 • 荧光光谱分析法的基本原理 • 荧光光谱分析法的实验技术 • 荧光光谱分析法的数据处理与分
析 • 荧光光谱分析法的实验案例 • 荧光光谱分析法的展望与未来发
展
01
荧光光谱分析法概述
定义与原理
定义
荧光光谱分析法是一种基于物质吸收 光能后发射荧光特性进行物质成分和 结构分析的方法。
激发态的衰变
电子从激发态返回基态时，以辐射或非辐射方式释放能量，产生荧 光光谱。
荧光光谱的产生机制
荧光光谱是由分子吸收光能后，通过内部转换、振动弛豫和辐射跃 迁等过程产生的。
荧光光谱的组成与特征
荧光光谱的组成
荧光光谱由发射峰、激发峰和斯托克斯位移组成。
荧光光谱的特征
荧光光谱的特征与分子结构、环境因素和激发波长等有关，可用于分析分子的 结构和性质。
荧光光谱法
• 2、被激发到第一电子激发态的各个振动能 级的分子，通过无辐射跃迅降落到第一电 子激发态的最低振动能级；
• 3、降落到第一电子激发态的最低振动能级
的分子，继续降落到基态的各个不同振动
的耗散常使一部分吸收能丧失，剩余荧光 能强烈发光的分子几乎都是通过吸收π→π*跃迁而到达电子激发态的。
主要是指它比起其它方法来说应用范围还不够广泛。 大多数的分子在吸收了光而被激发至第一或以上的电子激发态的各个振动能级之后，通常急剧降落至第一电子激发态的最低振动能级
的能量比吸收的能量小，因此荧光在更长 ，在达一过程中它们和同类分子或其它分子碰撞而消耗了相当于这些能级之间的能量，因而不发出光，即无辐射跃迁。
d. 根据Frankcondon原理，电子跃迁过程中 核的相对位置不变（近似的），若吸收光 谱中某一振动带的跃迁几率最大，则在荧 光发射光谱中，其相反跃迁的几率也应最 大(说明高峰对高峰，低峰对低峰）非镜 像对称的峰出现，则表示有散射光或杂质 存在。
二、产生荧光的过程和条件
• 荧光物质产生荧光的过程可以分为这样四 个步骤：
2、被激发到第一电子激发态的各个振动能级的分子，通过无辐射跃迅降落到第一电子激发态的最低振动能级； 谱并无变化，这是动态猝灭的一个例子。
• 4、到达基态的各个不同振动能级的分子， 吸收光谱和荧光光谱能级跃迁示意图
分子的寿命和猝灭剂的浓度限制。 ——用石英制成，形状:正方形、长方形、圆形的。
再通过无辐射跃迁最后回到基态的最低振 能区分I、I0讯号的微小差别，故在低A时
在荧光法中，灵敏度与该物质激发时的ε及
2024年荧光光谱法PPT课件
K' ( I 0
I e2.3cl 0
)
2.3K'I0 c（l cl ≤ 0.05，即稀溶液）
kc 定量基础 50 第50页/共57页
分析方法
荧光强度的灵敏度取决于检测器的灵敏度
改进光电倍增管和放大系统
灵敏度极高 vs
紫外-可见分光光度法：A(-log(I/I0))-c关系
放大光强信号时 入射光和投射光同时放大
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荧光分光光度计
3. 样品 池 • 低荧光的玻璃或石英 • 方形—散射光较少 • 90o测量—消除入射光的背景干扰
42
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荧光分光光度计
4. 检测器 • 主要：光电倍增管 • 其他：二极管阵列（色谱）、电荷转移（电泳） • 冷却—改善信噪比S/N
43
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分析方法
荧光 吸收光能 物质
受到 释放能量 激发
发射 荧光
溶液荧光强度与 吸收光能程度 有关
荧光效率
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分析方法
1. 荧光强度与浓度的关系 荧光强度正比于被荧光物质吸收的光强度：
F K'(I0 I )
L-B定律：
I I010cl
F K'(I0 I )
K'(I0 I010cl )
否 则 能量以无辐射跃迁形式释放（内转换 与外转换的速度很快） →无荧光发射
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基本原理
2. 影响荧光强度的结构因素 （内部因素）
1）跃迁类型 2）共轭效应（长共轭结构） 3）刚性结构与共平面性效
应 4）取代基效应
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基本原理
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51、山气日夕佳，飞鸟相与还。 52、木欣欣以向荣，泉涓涓而始流。
53、富贵非吾愿，帝乡不可期。 54、雄发指危冠，猛气冲长缨。 55、土地平旷，屋舍俨然，有良田美 池桑竹 之属， 阡陌交 通，鸡 犬相闻 。
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基
谢
同步荧光光谱法讲课文档
c
二、同步扫描仪器设备
1、固定波长的荧光光谱的获得 对于以光栅为单色器的荧光分光光度计，只
要分别设置激发和发射两个单色器所需的起始 波长，并使它们以同样的速率进行扫描，便可 进行固定波长同步扫描荧光测定。
2、固定能量同步扫描
是非线性的可变角同步扫描，需通过微处理机 控制而加以实现。
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对于相灵敏检测器
F (,D ) k( F )c o D s )(
F ( ) — 稳态荧光光谱 D — 检测角度
在不同相角 D 测定荧光光谱，称为相
灵敏荧光光谱，即为在固定时间的荧 光光谱。
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若样品溶液中含有 A、B 两种荧光体，它们 的荧光寿命分别为A和B。
氘灯激发 测定荧光强度—时间曲线
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（1）测定荧光衰变曲线
Al – R Ga – R
10.8ns 4.3ns
6.5ns
可利用上述两个荧光化合物的差异对它 们进行同时测定。
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（2）计算含量
铝配合物和镓配合物的衰变 曲线
铝配合物和镓配合物的对 数衰变曲线
比较（1）和（4）的荧光强度得Al的含量 比较（2）和（5）的荧光强度得Ga的含量
30nmor 70nm 的二阶导数同步荧光可对
Trp 和 Tyr 分辨
50nm 同步荧光可对Trp、Tyr、Phe分辨
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（4）维生素B1、B2混合物中维生素B1的测定 用铁氰化钾将B1氧化硫胺荧
50nm
（5）尿液中肾上腺素和去甲肾上腺素的同时测定
10n0m
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总结：