实验二 微生物接种技术
实验二微生物的分离、纯化和接种
实验二微生物的分离、纯化和接种微生物的分离、纯化1、目的要求1.1了解微生物分离和纯化的原理1.2掌握常用的纯化分离微生物的方法2、基本原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
本实验采用平板分离法：该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化。
其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、pH值、温度和溶解氧等要求，或者加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
微生物在固体培养基生长形成的单个菌落可以是一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
获得单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术来完成。
而纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。
本实验将在混合有几种微生物菌液中分离纯化出两种微生物来。
3、实验材料3.1培养基肉汤培养基（固体）。
3.2溶液或试剂盛4.5ml无菌水的试管，其中有一只盛有玻璃珠。
3.3仪器或其他用具无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，无菌培养皿，涂布器等。
4流程倒平板制备梯度稀释液涂布（或划线法）培养挑单菌落保存。
5、步骤5.1平板划线分离法5.1.1倒平板倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拔出，试管或瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15ml,加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后置于桌面上，待凝固后即成平板(教材p367图13-14)。
并用记号笔标明培养基名称、菌液编号和试验日期。
5.1.2划线在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取菌悬液一环在平板上划线(教材p367图13-15)。
划线的方法很多，但无论采用哪种方法，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成单个菌落。
实验二微生物的分离、纯化和接种
实验二微生物的分离、纯化和接种微生物的分离、纯化1、目的要求1.1了解微生物分离和纯化的原理1.2掌握常用的纯化分离微生物的方法2、基本原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
本实验采用平板分离法：该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化。
其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、pH值、温度和溶解氧等要求，或者加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
微生物在固体培养基生长形成的单个菌落可以是一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
获得单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术来完成。
而纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。
本实验将在混合有几种微生物菌液中分离纯化出两种微生物来。
3、实验材料3.1培养基肉汤培养基（固体）。
3.2溶液或试剂盛4.5ml无菌水的试管，其中有一只盛有玻璃珠。
3.3仪器或其他用具无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，无菌培养皿，涂布器等。
4流程倒平板制备梯度稀释液涂布（或划线法）培养挑单菌落保存。
5、步骤5.1平板划线分离法5.1.1倒平板倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拔出，试管或瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15ml,加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后置于桌面上，待凝固后即成平板(教材p367图13-14)。
并用记号笔标明培养基名称、菌液编号和试验日期。
5.1.2划线在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取菌悬液一环在平板上划线(教材p367图13-15)。
划线的方法很多，但无论采用哪种方法，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成单个菌落。
微生物的分离、接种和培养技术
微生物的分离、接种和培养技术一、实验的目的和内容目的：掌握微生物接种和分离纯化技术，掌握无菌操作技术。
内容：用平板划线法分离微生物；学习斜面接种及穿刺接种等无菌操作技术。
二、基本原理在自然界中，各种微生物是在互为依赖的关系下共同生活的。
因此，为了取出特定的微生物进行纯培养，必须从中把他们分离出来。
微生物接种技术是进行微生物实验和相关研究的基本操作技能。
无菌操作是微生物接种技术的关键。
接种是将微生物或微生物悬液引入新鲜培养基的过程。
由于实验目的、培养基种类及实验器皿等不同，所用接种方法不尽相同。
斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种操作均以获得生长良好的纯种微生物为目的。
分离培养微生物时，要考虑微生物对外界的物理、化学等因素的影响。
即选择该类微生物最适合的培养基和培养条件。
在分离、接种、培养过程中，均需严格的无菌操作，防止杂菌侵入，所用的器具必须经过灭菌，接种工具无论使用前后都要经过灭菌，且在无菌室或无菌箱中进行。
三、材料及器材（一）菌种：大肠杆菌、枯草杆菌，金黄色葡萄球菌，酵母菌。
（二）培养基：肉汤培养基试管斜面，肉汤半固体培养基，肉汤固体培养基试管斜面，肉汤固体培养基平板，查氏培养基试管斜面，查氏培养基平板。
易（三）仪器及其他工具：接种环，接种针，接种钩，镊子，酒精灯，火柴，酒精棉，试管架，标签纸，恒温培养箱等。
四、方法与步骤（一）接种。
1、试管菌种转接：试管细菌菌种转接主要用于菌种的活化、分离、纯化。
（1）将菌种试管与待接种的试管培养基依次排列，挟于左手的拇指与其他四指之间，用右手的无名指与小指和手掌边拔出棉塞并挟住。
（2）置试管口于酒精火焰附近。
（3）将接种工具垂直插入酒精火焰中烧红，再横过火焰3次，然后再放入有菌试管中，在管壁上停留片刻待其冷却。
（4）取少许菌种置于另一支试管中，按一定的接种方式把菌种接种到新的培养基上。
（5）取出接种工具，试管口和棉塞进行火焰灭菌。
（6）重新塞上棉塞。
（7）烧死接种工具上的残余菌，把试管和接种工具放回原处。
实验微生物接种技术讲解
实验微生物接种技术讲解实验微生物接种技术讲解微生物接种篇一：实验微生物接种技术一、目的：学习微生物工作的基本接种方法，建立纯培养技术中的“无菌”概念，掌握无菌操作技术。
二、原理：所谓接种就是将一定量的纯种微生物在无菌操作条件下转移到另一已灭菌，并适宜于该菌生长繁殖所需的培养基上的过程。
本实验要求严格进行无菌操作，一般是在无菌操作台或在实验室内火焰旁进行。
根据不同的实验目的和培养方式，可以采用不同的接种工具和接种方法。
三、实验材料：斜面培养基、液体培养基、平板培养基、记号笔、酒精灯、接种针、消毒酒精、涂布棒等。
四、操作步骤（一）无菌操作菌种分离或移接工作应在无菌环境中进行，接种室、接种箱或超净工作台是常用的接种环境。
用前先清洁好卫生，再进行消毒处理。
可用紫外线灯和甲醛熏蒸的双重作用，或用3%来苏尔及其他表面消毒进行喷雾。
操作者的手应先用肥皂洗净，再用酒精棉球消毒；整个操作过程都要靠近酒精灯火焰；接种工具在用前和用后必须在灯焰上灭菌；棉塞不得乱放，操作中只能夹在手上；不能有跑、跳等力度大的动作，以免引起空气大振动而增加染菌机会。
（二）接种方法（1）斜面接种：从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面管的方法。
此法用于好气性微生物的接种。
左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。
用右手先将棉塞拧转松动，再拿接种环，用右手的小指、无名指和手掌拨下棉塞并夹紧，同时将管口在火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部，沿斜面划曲线或直线。
图1.斜面接种示意图（2）液体接种：由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。
操作与上法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。
如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种。
（3）穿刺接种：用接种针挑取菌种后，插入深层固体培养基内，（不要刺到底部），再沿原路拔出，此法用于厌气性细菌接种、检查细菌的运动能力。
微生物的接种分离和纯培养
穿刺接种技术：用接种针从菌种斜面上挑取 少量菌体并竖直穿刺到半固 体培养基中；
接种无菌操作步骤
1. 将菌种斜面和待接种新鲜斜面夹在左手 的食指、中指和无名指之间，大拇指按在两 只试管中间。右手旋松棉塞，便于拔出； 2. 右手拿接种环，竖直伸入火焰中，环端 及伸入试管中部分均充分灭菌；
I
冷却至 45℃左右
每皿约倒入15ml
肉汤培养基
II
III
0.2ml 0.2ml
0.2ml
微生物的计数
血球计数法 平板活菌计数法
计繁殖数法只适宜于单细胞状态的微生物 或丝状微生物产生的孢子
血球计数法
一、实验原理
血球计数器是一特制的厚载玻片，上面 刻有一定面积的方格，将盖玻片盖上后，由 于两者之间存在着距离使之形成一定容积的 小室。滴入待测样品后，使样品均匀充满小 室，在显微镜下计算小室内的菌数，换算成 单位体积的样品中所含的菌数。
度。
思考题
1. 微生物的纯种分离通常采用那些方法，并说明个 方法的特点。
2. 什么叫微生物的污染？如何防止？ 3. 从两种方法计数得出的菌液浓度是否一致？分析
误差产生的原因，由此比较一下两者的优缺点及 各自的适用范围。 4. 平板活菌计数中，为何选择生长有25～250个菌 落的平板？
碰到火焰，以免烧死菌体 6. 血球计数器要洁净干燥，滴入菌液时在盖玻片与
载玻片间不能有气泡 7. 血球计数时显微镜光线不宜太亮
实验安排（三人一组）
斜面接种：每组三支 液体接种：每组三支（大肠、四联、枯草各一支） 穿刺接种：每组二支（四联一支、变形一支） 平板划线分离：每人划一块平板（混合菌液) 稀释分离：I、II、III各一块平板（混合菌液) 血球计数：写出小格数目，并算出酵母菌液
微生物的接种技术
（二）穿刺接种
用接种针挑取菌种（针必须挺直），自培养基的 中心垂直地刺入半固体培养基中，直至接近管底， 但不要穿透，然后沿原穿刺线将针拔出，塞上试管 塞，烧灼接种针。
五、实验结果 1、待接种菌种培养长出后，看划线是否标准 2、观察穿刺接种生长状态 六、思考题 1、什么是无菌操作 2、接种时应注意的问题有哪些
实验七 微生物的接种技术
Hale Waihona Puke 一、实验目的熟悉微生物的无菌接种技术和方法
二、实验原理
微生物接种是将一种微生物移接到另一灭过菌 的新鲜培养基中，使其繁殖生长的过程。
方法有：斜面接种、液体接种、平板接种、穿 刺接种等。
无菌操作：培养基灭菌后，用灭过菌的无菌工 具将含菌材料接种于灭菌培养基上的过程。
三、实验材料 1、菌种：大肠杆菌（Ec） 2、培养基：营养琼脂斜面培养基、
4、右手拿接种环通过火焰烧灼灭菌，在火焰边用 右手的手掌边缘和小指/小指和无名指分别夹持 试管帽，将其取出，并迅速烧灼管口。
5、将灭菌的接种环伸入菌种试管内，先将环接触试 管 内壁或未长菌的培养基，达到冷却的目的，然后再 挑取少许菌苔。将接种环退出菌种试管，迅速伸入 待接种的斜面试管，用环在斜面上自试管底部向上 端轻轻地划直线，勿将培养基划破，也不要使环接 触管壁或管口。
牛肉膏蛋白胨半固体培养基 3、器材：接种环、接种针、酒精灯
四、操作步骤
（一）斜面接种
1、在斜面试管上，用记号笔写上 将接种的菌名、日期和接种者；
2、点燃煤气灯；
3、将菌种试管和待接种的斜面试 管，用大拇指和食指、中指、无 名指握在左手中，并将中指夹在 两试管之间，使斜面向上，成水 平状态，在火焰边用右手松动试 管塞，以利于接种时拔出。
微生物的无菌操作及接种技术
2、常用的接种方法
划线接种
目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌、活菌计数。
方法： 分区划线法：适用于含菌量较多的标本 连续划线法：适用于含菌量较少的标本
01
03
02
2、常用的接种方法
2、常用的接种方法
划线接种
2、常用的接种方法
分区划线法
第一区划线
灭菌接种环
第二区划线
斜面接种
拔管塞： 用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)
斜面接种
取菌: 接种环冷却，轻沾取少量菌体或胞子，然后将接种环移出菌种管，注意不要使接种环碰到管壁，取出后带菌接种环不可通过火焰。
接种:
斜面接种
在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入待接斜面管。从斜面培养基底部向上作“Z”形来回密集划线，勿划破培养基。 有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。
微生物无菌操作及接种技术
一、微生物无菌操作技术
无菌操作技术：指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。
一、微生物无菌操作技术
接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀
一、微生物无菌操作技术
原理： 无菌技术：指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。 接种：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程。 微生物无菌操作技术与接种技术
※穿刺接种
（4）拔出棉塞 （5）取菌：用冷却接种针的针尖沾取少量菌种 （6）穿刺：将接种针自培养基中心平稳、快速垂直刺入培养基，至接近试管底部，然后沿接种线拔出 （7）塞上棉塞 （8）接种针灼烧灭菌 2、常用的接种方法 ※穿刺接种
微生物接种方法分区划线法的技巧和注意事项
微生物接种方法分区划线法的技巧和注意事项下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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微生物的无菌操作及接种技术
无菌环境的要求与保持
2、超净工作台
超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以 保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程 度的保护以防污染并保护操作者。
原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空 气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分， 现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。
பைடு நூலகம்
垂直流超净工作台
垂直流超净工作台 水平流超净工作台
无菌环境的要求与保持
超净台的使用与维护
风速保持在0.32-0.48米/秒 使用前打开紫外灯照射40~60min 开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精或0.5%过氧乙
酸喷洒擦拭消毒工作台面。 使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭，请用含水棉布檫拭； 请保持超净台整洁、干燥，不要堆积杂物； 使用完毕，关闭煤气开关或酒精灯； 使用完毕后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照
• 与斜面法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使 环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上棉 塞再轻轻摇匀。 • 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管 接种
2、常用的接种方法
※ 斜面接种
1) 标记：接种前在试管上注明菌名、接种日期、接种人姓名 2) 点燃酒精灯。 3) 接种： （1）手持试管 将菌种管和待接斜面管用大姆指和其他四指握
在左手中，中指位于两管之间。斜面向上，尽量放平。 （2）旋松管塞 （3）接种环灼烧灭菌
※ 斜面接种
（4）拔管塞： 用右手的无 名指、小指和手掌边先后 取下菌种管和待接试管的 管塞，让试管口缓缓过火 灭菌(切勿烧得过烫)
实验报告细节接种
一、实验目的1. 学习微生物接种的基本原理和方法。
2. 掌握无菌操作技术，确保实验结果的准确性。
3. 熟悉微生物培养过程中的注意事项，提高实验技能。
二、实验原理微生物接种是将一定量的纯种微生物在无菌操作条件下转移到另一已灭菌的培养基上的过程。
无菌操作是保证实验结果准确性的关键，接种方法的选择应根据实验目的和微生物特性进行。
三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
2. 培养基：LB培养基、PDA培养基等。
3. 仪器：无菌操作台、酒精灯、接种环、接种针、试管、培养皿等。
四、实验步骤1. 无菌操作台准备：提前清洁无菌操作台，用紫外线灯消毒20分钟。
2. 菌种复苏：将保存的菌种从冰箱取出，用接种环在菌种管中轻轻挑取少量菌落，置于无菌试管中，加入适量的无菌水，充分振荡混匀。
3. 培养基制备：按照实验要求，配制相应的培养基，分装于试管或培养皿中，高温高压灭菌。
4. 接种操作：（1）斜面接种：将无菌接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌，待冷却后挑取适量菌液，沿斜面管壁涂抹，使菌液均匀分布在斜面上。
（2）平板接种：将无菌接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌，待冷却后挑取适量菌液，滴加于平板中央，用无菌涂布棒均匀涂布。
（3）液体接种：将无菌接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌，待冷却后挑取适量菌液，加入无菌试管中的培养基中，充分振荡混匀。
5. 培养观察：将接种后的试管和培养皿置于适宜的培养箱中，观察菌落生长情况，记录实验数据。
五、实验结果与分析1. 斜面接种：菌落生长良好，菌落形态、大小、颜色等特征符合实验要求。
2. 平板接种：菌落生长良好，菌落形态、大小、颜色等特征符合实验要求。
3. 液体接种：菌液澄清，无沉淀物，菌落生长良好。
六、实验结论1. 通过本次实验，掌握了微生物接种的基本原理和方法。
2. 无菌操作技术在实验中至关重要，可以有效避免污染，保证实验结果的准确性。
3. 掌握了不同接种方法的特点和适用范围，为后续实验提供了基础。
微生物标本接种(两篇)2024
引言概述微生物标本接种是一项重要的实验室技术，它在微生物学研究、医学诊断和食品工业等领域中起着关键作用。
本文将继续介绍微生物标本接种的相关内容，包括无菌技术、常用标本接种方法、优化接种条件、接种后的菌落观察与鉴定，以及相关的规范要求。
通过本文的阐述，读者将进一步了解微生物标本接种的重要性以及操作技巧。
正文内容一、无菌技术1.理解无菌技术的意义和目的a.防止外源性微生物污染b.保证实验结果的准确性2.熟悉无菌技术的基本要求a.选择适当的工作环境与设备b.采取适当的个人防护措施c.消毒操作的重要性与方法二、常用标本接种方法1.心形接种法a.标本接种器的选择与使用b.接种斜面固体培养基的操作步骤c.控制接种量的技巧2.点菌接种法a.接种环的选择与使用b.点菌接种的操作流程c.避免混合样品的方法3.涂片接种法a.特定细菌的涂片接种方法b.真菌与酵母菌的涂片接种注意事项c.涂片的热固化与染色技巧三、优化接种条件1.温度控制的重要性a.理解不同微生物的生长温度要求b.设定合适的培养温度2.湿度和氧气的影响a.理解湿度对微生物生长的影响b.确保适当的氧气供应3.营养物质的选择与配比a.确定微生物所需的营养物质b.确保培养基的合理配比四、接种后的菌落观察与鉴定1.菌落形态的观察与描述a.形态特征的分类与测量b.菌落颜色的描述与分析2.镜检观察技巧a.镜检与染色的操作流程b.不同染色方法的选择与应用3.菌种鉴定的基本步骤a.生理生化特性的鉴定b.分子生物学方法的应用五、规范要求与注意事项1.实验室安全与操作规范a.安全规章制度的遵守b.废物处理与消毒措施的要求2.实验记录与数据分析a.正确记录实验数据与结果b.数据的统计与分析方法3.质量管理与质控措施a.核心实验室的质量管理要求b.质控措施的实施与监督总结微生物标本接种是微生物学研究和医学诊断中至关重要的步骤。
通过本文的介绍，我们了解了无菌技术的重要性以及常用的标本接种方法。
微生物常用的接种方法
微生物常用的接种方法首先，最常见的接种方法之一是平板接种。
平板接种是将微生物接种在富有营养物质的平板培养基表面上，通过均匀涂抹的方式使微生物均匀分布在培养基表面。
这种方法适用于对微生物营养需求较高的情况，可以有效地促进微生物的生长和繁殖。
在进行平板接种时，需要注意使用无菌技术，避免外界的污染对实验结果的影响。
其次，液体接种是另一种常用的接种方法。
液体接种适用于对微生物生长环境有一定要求的情况，可以提供更加精确的实验条件。
在液体接种时，需要将微生物接种在含有适当营养物质的培养基中，通过摇床或培养箱等设备进行培养。
这种方法可以更好地模拟微生物在自然环境中的生长状态，对于一些特殊微生物的研究具有重要意义。
另外，还有一种常用的接种方法是斜面接种。
斜面接种是将微生物接种在培养基斜面上，通过均匀涂抹的方式使微生物均匀分布在斜面上。
这种方法适用于对微生物的形态和生长特性有一定要求的情况，可以更好地观察微生物的生长情况和形态特征。
在进行斜面接种时，需要注意斜面的倾斜角度和培养基的均匀涂抹，以保证实验的准确性和可靠性。
除了上述常见的接种方法外，还有一些其他特殊的接种方法，如深层接种、滴定接种等，它们适用于特定的研究需要，可以根据实验的具体要求进行选择和应用。
总的来说，微生物常用的接种方法包括平板接种、液体接种、斜面接种等多种形式，科研工作者可以根据实验的具体要求选择合适的接种方法。
在进行接种时，需要注意使用无菌技术，避免外界的污染对实验结果的影响。
通过合理选择和应用接种方法，可以更好地促进微生物的研究和实验，为微生物学领域的发展做出更大的贡献。
微生物纯种分离,培养及接种技术实验原理
微生物纯种分离,培养及接种技术实验原理微生物纯种分离、培养及接种技术是微生物学中最基本的实验技术之一。
其目的是从混合的微生物菌群中分离出单一的微生物菌落，并在适宜的培养条件下进行纯化和生长，以获得纯种微生物。
一、实验器材和试剂1.灭菌针2.毛细胞计数板3.显微镜4.平板接种器、针头5.无菌匀浆棒、吸管6.细菌培养基7.消毒液二、实验步骤1. 样品处理及制备首先需要选择一份待测试的样品，包括土样、水样、空气、食品等，然后将样品采集到无菌容器中，再将其送到实验室。
在进行样品处理之前，需要先进行简单的初步处理，将样品进行稀释或者过滤，将其中的杂质和大颗粒物去除，以利于后续实验的操作。
接下来需要进行制备培养基，根据不同的微生物种类，需要选择适当的培养基进行培养。
通常情况下，我们可以使用凝胶培养基、液体培养基、甜菜汁培养基等，以满足微生物在不同环境下生长所需的营养物和成分。
2.分离纯化分离纯化是该实验的关键步骤。
将经过预处理的样品移到无菌试管中，打开试管口，加入适量的制备好的培养基，然后利用匀浆棒或吸管将混合物均匀混合。
然后利用平板接种器将混合物接种到培养基平板上，使其密切接触。
然后将接种好的平板置于恒温箱中，以利于微生物的生长和营养物质的自我繁殖。
在接种后2-7天内，不同类型的微生物将在培养基平板上生长出不同的菌落，每一种菌落都代表一种单一的微生物。
将这些菌落分离提取，并再次进行培养，就能得到单纯的微生物菌种。
3.纯种微生物菌种接种在获得单纯的微生物菌种之后，需要将其再次接种到培养基中进行培育。
将相应体积的纯种菌种接种到培养基平板上，使其能够生长繁殖。
在接种后约24小时内，微生物将在培养基中生长出许多菌落。
根据菌落的特征和形态，可以对不同的微生物进行鉴定和分类。
如果需要进行更加深入的分析，可以对微生物菌种进行进一步培养、萃取定量和测序等工作，以获取更多的相关信息。
三、实验注意事项1. 实验前需要保证实验室内部环境和仪器均为无菌状态。
微生物常用的接种方法
微生物常用的接种方法
微生物的接种是微生物学实验中非常重要的一环，它直接关系到实验结果的准确性和可重复性。
在微生物学实验中，常用的接种方法有涂布法、点接法和扩散法。
首先，涂布法是微生物学实验中最常用的接种方法之一。
使用涂布法进行接种时，首先需要将待接种的微生物悬液均匀涂布在富营养培养基的表面上，然后利用消毒的玻璃棒或铲子将微生物均匀地涂布在培养基表面上。
这种接种方法适用于对微生物数量进行定量分析的实验，如菌落计数等。
其次，点接法是另一种常用的微生物接种方法。
使用点接法进行接种时，需要利用消毒的吸管或者铲子，将微生物悬液均匀地滴在富营养培养基的表面上，形成一个个小圆点。
这种接种方法适用于对微生物的单菌种分离和纯化，以及进行微生物的生长曲线实验等。
最后，扩散法是微生物学实验中常用的接种方法之一。
使用扩散法进行接种时，需要将待接种的微生物悬液均匀地涂布在富营养培养基的表面上，然后利用消毒的玻璃棒或者铲子在培养基表面上
进行扩散，使得微生物悬液均匀地分布在培养基表面上。
这种接种方法适用于对微生物的抗生素敏感性实验和微生物的产酶产毒实验等。
总之，微生物学实验中常用的接种方法有涂布法、点接法和扩散法。
不同的接种方法适用于不同类型的微生物学实验，选择合适的接种方法能够提高实验的准确性和可重复性，从而得到更加可靠的实验结果。
希望本文所述的接种方法能够对微生物学实验的进行有所帮助。
实验2、 LB培养基制备及大肠杆菌的接种
6. 注意保持无菌操作；
八、思考题
1. 为什么第一次划线前要灼烧接种针？为什么其他每次划 线之前都要灼烧接种针？ 2. 在灼烧接种针之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 3. 在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种针吗？为什么？
4. 为什么每次划线操作总是从上一次划线的末端开始？
四、实验方法
平板划线分离法 细菌的接种方法有很多种，如划线法、涂布法、倾注法、 斜面接种法、液体培养基接种法、螺旋接种法等。 平板划线分离法主要用于菌种分纯，获得单菌落。
五、实验步骤 培养基灭菌 制作平板 扩大培养 划线分离
LB液体培养基、LB固体培养基、培养皿高压灭 菌。 超净工作台中，将灭菌后冷却到60℃左右的LB 固体培养基倒入灭菌培养皿中，敞盖冷却，备 用。 将大肠杆菌接种到LB液体培养基中，于37℃摇 床中震荡培养12h。 以接种环取震荡培养后的菌液，在固体培养基 上划线，封口。培养皿倒置与37℃的恒温培养 箱中培养12~24h，观察划线末端的菌落生长情 况；用接种环挑取单菌落，用划线法接种于斜 面上，在37℃的恒温培养箱中培养24h。
了解LB培养基的配制方法； 掌握平板划线分离法的操作方法；
培养无菌观念，巩固无菌操作技术。
二.、实验原理
平板划线分离法：是指把混杂在一起的微生物或同一微 生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过 分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养 后生长繁殖成单菌落。
原理：通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作， 将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划 线后，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子 细胞群体。
培养基灭菌培养基灭菌制作平板制作平板扩大培养扩大培养划线分离划线分离菌种保存菌种保存lb液体培养基lb固体培养基培养皿高压灭超净工作台中将灭菌后冷却到60左右的lb固体培养基倒入灭菌培养皿中敞盖冷却备将大肠杆菌接种到lb液体培养基中于37摇床中震荡培养12h
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实验二微生物接种技术
一、目的
微生物接种技术就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。
了解学习灭菌操作技术；掌握斜面接种技术。
二、原理
接种就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）（如图3-1）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。
接种就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。
我们要想得到大量的菌种，适应生产，科研和教学要求，就要进行微生物的接种，扩大菌种数量。
接种因使用不同容器、不同的培养基，达到不同的目的，而有不同的接种方法，但是它们的基本要求是相同的。
通常接种都应在空气经过消毒灭菌过的“接种室”、或接种箱或超净工作台内进行。
三、材料、试剂与器具
1．材料苏云金杆菌斜面菌种，牛肉膏蛋白
胨斜面培养基。
2．试剂 75%酒精或1：50的新法尔天水溶
液。
3．超净工作台，接种针（环），接种工具
（如图3-1）、酒精灯等。
图3-1 接种工具
A.接种环；
B.接种针；
C.接种钩；
四、操作步骤
（一）准备工作
1．接种或接种室使用前半天先擦洗干净，然后每立方米体积用5~10毫升福尔马林盛在容器中加热熏蒸或者是用1/10的福尔马林重量的高锰酸钾加到盛有福尔马林的容器中，不用加热，亦可进行熏蒸；也可用5%的石炭酸喷务灭菌；用紫外灯照射
20~30min。
也可达到灭菌的目的。
应注意，要把接种时要所需的用具（如接种针（环），酒精灯等）及培养基放入接种箱（室）一起灭菌消毒，但是菌种不能放入，以免死。
超净工作要预先通风，紫外线照射30min方可使用。
2．进入接种室前先把手洗净，再用75%酒精或新洁尔灭擦两手，菌种试管表面同样要用酒精或新洁尔灭抹擦后才放入接种室（箱内）。
（二）接种技术
1、斜面菌种接种技术（从斜面培养基上的菌种接种至另一新的斜面培养基上的方法）。
（1）准备工作就绪后，点然酒精灯。
（2）将菌种和斜面培养基的两支试管用大拇指和其他四指握在左手中，使中指拉于两试管之间的部分，斜面向上，并使它们拉于水平位置，也可将试管放在左手掌中，用手指托住试管。
（3）先将棉塞用右手拧转松动，便以接种时拔出。
（4）右手拿接种环（拿的方法就和拿钢笔一样），在火焰上将环的部分烧红灭菌。
环以上凡是在接种时可能进入试管的部分，均应用火烧过（如图3-2）。
以下操作都要把试管口靠近火焰旁进行。
（5）用右手小指、无名指和手掌拔掉棉塞（如图3-2）。
（6）用火焰灼烧管口，灼烧时应不断转动试管口（靠手腕的动作，使试管口沾染的小量菌得以烧死）。
（如图3-2）。
（7）将烧过的接种针（环）触动没有长菌的培养基部分，使其冷却，以免烧死被接种的菌体，然后轻轻接触菌体，取出少许，慢慢将接种针（环）抽出试管（如图3-2）。
（8）迅速将接种针（环）在火焰旁无菌区伸进另一试管，在培养基斜面上轻轻划线，在上面接细菌，划线时要由底部划到顶部，由上而上，划线可划之字形，或划几条直线，但都不要把培养基划破，也不要使菌种沾污管壁（如图3-2）。
（9）将接种针（环）抽出，灼烧试管口，并在火焰旁将棉塞塞上。
塞棉塞时，不要用试管去迎棉塞，以免试管在运动时纳入不洁空气（如图3-2）。
（10）把针（环）在火焰上再灼红灭菌，放下接种钟（环）后，再腾出手来将塞塞紧。
（如图3-2）。
（11）全部培养基接种完毕后，要将试管斜面培养基包扎好，并标明姓名、时间和菌种名称；整理好接种室（箱）的台面，搞好清洁卫生。
2、液体接种技术（由斜面菌接入液体培养基内或液体菌种接入液体培养基）
（1）准备工作和操作方法与前相同，但可使试管向上略斜，以免培养液流出。
（2）将取得菌种的接种环送入液体培养基时，可使环在液体表面与管壁接触的部分轻轻摩擦。
接种后塞棉塞，将试管在手掌中轻轻摇动，使菌体在培养基中分散开来。
（3）由液体菌种接种液体培养基时，接种用无菌滴管或移液管，接种量通常为培养液体积的1/10。
无菌操作的注意事项与前相同，只是移液管不同于接种针，系由玻璃做成，它不能在火焰上灼烧，接种前在火焰上迅速通过一两次即可。
3、穿刺接种技术（深层柱形固体培养基的接种技术）（如图3-3）
（1）取两支新鲜半固体牛肉膏蛋白胨深层柱状培养基，做好标记（写上菌种名、接种日期和接种人等）。
（2）接种的方法是，用接种针沾取少量待接菌种，然后从柱状培养基的表面中心穿入其底部（但不要穿透），然后沿原刺入路线抽出接种针，注意接种针不要移动。
以上接好种的材料置于30℃下培养24~48h。
图3-3 穿刺接种技术
五、注意事项
1、菌种取出后，接种针（环）不要通过火焰、以免烧死菌体。
2、斜面接种时，不要使接种针（环）的碰到管壁；不要划破培养基，但也不能在试管空间划，一定要接触到斜面表面上划线接种。
3、接种前的准备和接种过程都要有无菌概念。
六、实验报告
培养后取出试管，观察划线接种效果、菌种生长情况，检查是否有杂菌生长，评价无菌操作的效果。
七、思考题
微生物接种时，通过哪些措施可防止杂菌污染？
如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！。