高效液相色谱法测定邻苯二甲酸酯实验报告记录

高效液相色谱法测定邻苯二甲酸酯实验报告记录

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高效液相色谱法测定邻苯二甲酸酯

1553607 胡艺蕾

实验时间：2017年4月1日实验温度：19.0℃

一、实验目的

1、了解高效液相色谱仪的组成及其工作原理和基本操作。

2、对邻苯二甲酸酯进行分离和测定。

3、探究不同流动相及不同流动相比例对流速、柱压、保留时间及分离度的影响。

4、了解液相色谱法定量测定的原理。

二、实验原理

1、实验采用的反相液固吸附色谱法，其分离机理是：当流动相通过吸附剂时，在吸附剂（固体相）表面发生了溶质分子取代吸附剂上的溶剂分子的吸附作用。固体相为非极性分子，如十八烷基键合相，流动相为极性分子。

2、组分分子与吸附剂之间作用力的强弱决定它的保留时间。溶质分子官能团的性质和分子结构的空间效应都会影响其出峰的顺序。本次实验为邻苯二甲酸酯，其分子官能团都相同，但由于DMP其官能团相邻的烷基较小，导致其保留值最小，因此出峰顺序为：DMP(邻苯二甲酸二甲酯)>DEP(邻苯二甲酸二乙酯)>DBP.(邻苯二甲酸二丁酯)。

3、在吸附色谱中，流动相的洗脱能力与溶剂的极性有关，极性越大，洗脱强度也越大。本次实验使用的三个流动相的极性大小为：水>乙腈>甲醇。通常选择二元混合溶剂作为流动相。

4、定量分析中，定量峰与其他峰之间的分离程度称为分离度R:

通常用塔板数n来描述色谱的柱效：

三、实验仪器与试剂

1、仪器

Agilent1260高效液相色谱仪：

脱气机：真空室内半透膜管路，对流动相进行脱气

四元泵：二元泵各控制一种溶剂

可设置的流速范围：0.001–10 mL/min 0.001 mL/min步进

UV检测器：用于检测通过样品后的紫外光

类型：双光束光路设计

光源：氘灯波长范围：190 –600 nm

手动进样器：进样20μL

色谱柱：填料:十八烷（适合中性、弱酸碱）

4.6 ×100mm, 3.5µm

2、试剂

流动相：纯水、甲醇、乙腈

样品：DMP、DEP、DBP

四、实验步骤

1、开启电脑，开启脱气机、泵、检测器等的电源，启动软件。

2、预先脱气（直到导管中无气泡），设定波长：220nm。

3、设定流速、流动相比例等参数，选择合适的流动相。

4、进样阀柄置于“LOAD”，进样针用乙醇洗涤2-3次，取样，进样，将进样阀扳至“INJECT”。

5、保存并处理数据。

五、实验结果

1、样品：DMP1:20水溶液20μL 流动相的比例为：高纯水：30% 乙腈：70% 流速：1.00ml/min

2、样品：DMP1:10水溶液20μL流动相的比例为：高纯水：30% 乙腈：70% 流速：1.00ml/min

3、样品：DMP1:20水溶液10μL 流动相的比例为：高纯水：30% 乙腈：70% 流速：1.00ml/min

比较1和2的峰面积和峰高可以发现，在进量一定时，峰面积和峰高与样品的浓度成正比。比较1和3可发现，在样品浓度相同时，峰面积和峰高与样品的进量成正比。因此我们可以得出结论，峰面积和峰高与加入样品的物质的量成正比，这也是液相色谱法进行定量分析的依据。对这三组数据画出标准曲线：

由标准曲线可以看出：

峰面积和峰高与样品的量基本成线性关系，且峰面积的相关性比峰高的相关性要高，更适合用于定量分析。

y = 1204.9x -129.35

R² = 0.9989

y = 151.31x + 36.69

R² = 0.9976

50010001500200025000.00

0.50 1.00 1.50 2.00 2.50

标准曲线图

峰面积峰高

4、样品：混合样品1:10水溶液20μL 流动相的比例为：高纯水：30% 甲醇：70% 流速：1.00ml/min

计算分离度和塔板数

R12=2.292-1.519/(0.0995+0.1174)/2=7.128 R23=11.259-2.292/(0.3067+0.1174)/2=42.29

n DMP=16*(1.519/0.0995)^2=3.729E3 n DEP=16*(2.292/0.1174)^2=6.098E3

n DBP=16*(11.259/0.3067)^2=2.156E4

5、样品：混合样品1:10水溶液20μL 流动相的比例为：高纯水：30% 乙腈：70% 流速：1.00ml/min

计算分离度和塔板数

R12=5.087 R23=33.59

n DMP=2.415E3 n DEP=1.052E4 n DBP=2.408E4

6、样品：混合样品1:10水溶液20μL 流动相的比例为：高纯水：30% 乙腈：70% 流速：0.70ml/min

计算分离度和塔板数

R DMP=2.781-2.088/(0.1200+0.0993)/2=6.320 R DEP=8.004-2.781/(0.0993+0.2087)/2=33.92

n DMP=16*(2.088/0.1200)^2=3.633E3 n DEP=16*(2.781/0.0993)^2=1.255E4

n DBP=16*(8.004/0.2087)^2=2.353E4

7、样品：混合样品1:10水溶液20μL 流动相的比例为：高纯水：10% 乙腈：90% 流速：