生殖毒性试验流程及意义
一般生殖毒性试验方法原则
03
观察指标
生殖器官指标
睾丸和卵巢
观察其重量、大小、质地 及形态，以及生殖细胞的 发育和成熟情况。
前列腺和精囊
观察其大小、质地及形态， 以及分泌物的性状和量。
阴茎和阴囊
观察其大小、质地及形态， 以及睾丸的位置和活动情 况。
生殖生理指标
性激素水平
检测血清中性激素（如睾酮、雌 二醇）的水平，以评估生殖系统 的功能。
未来展望
随着人类对生殖健康的重视程度不断提高，生殖毒性试验 将进一步向着更加科学、准确、可靠的方向发展，为保障 人类生殖健康提供更加有力的支持。
02
试验设计
试验动物选择
01
02
03
首选啮齿类动物
如大鼠和小鼠，因为它们 具有与人类相似的生殖生 理特征。
考虑物种差异
不同物种对生殖毒性的反 应可能存在差异，因此需 谨慎选择。
02
通过测量胎儿的生长参数（如双顶径、股骨长度等）以及观察
胎儿的器官发育情况，以评估胎儿的生长和发育状况。
胎儿行为和生理功能
03
通过观察胎儿的行为（如胎动）和生理功能（如呼吸运动），
以评估胎儿的健康状况。
出生后发育指标
生长和发育
观察新生儿的生长曲线、行为活动以及感知觉发展等情况，以评 估其生长发育状况。
试验周期
短期试验
通常为30天，用于初步评估生殖毒性。
中期试验
通常为90天，用于进一步评估生殖毒性及其潜在 机制。
长期试验
通常为180天或更长，用于全面评估生殖毒性及其 对后代的影响。
对照组设置
Hale Waihona Puke 空白对照组不给予任何受试物，用于评估基础生殖功能。
第九章 生殖毒性和发育毒性及其评价
人类先天缺陷的原因
1、遗传因素 2、环境因素 3、原因不明的因素 我国将9月12日定为“中国预防出生缺陷日”
第一节 生殖毒性和发育毒性的基本概念
一、孕体的主要发育阶段
孕体：卵子受精后不断发育直至出生为止，都称为 孕体。 孕体的主要发育阶段： 1、着床前期
2、胚泡着床、植入和原肠形成
3、器官形成期：胚胎发育的关键期 结构畸形的敏感期
第九章 生殖毒性和发育毒性及 其评价
概述
生殖发育
生殖细胞发生、受精、着床、植入、 胚胎形成、胚胎发育、器官发生、分娩 和哺乳 （新生儿期、哺乳期直至性成熟 期）
生殖毒性：生殖毒性试验 发育毒性：发育毒性试验
检验受试物或其 代谢产物对成年哺 乳动物的生殖功能 和生育力的影响
研究外源化学物 对胚胎发育、胎仔 发育以及出生幼仔 发育的影响
4、胎儿期
二、生殖毒性
生殖毒性：指对雄性和雌性生殖功能或能力的损害和 对后代的有害影响。 妊娠期、妊娠前期、哺乳期
三、发育毒性
发育毒性：指在到达成体之前诱发的任何有害影响， 包括在胚胎期和胎儿期，以及在出生后诱发或显示的 影响。
具体表现： 1、生长迟缓 2、结构异常：致畸作用 3、功能缺陷 4、发育生物体死亡：流产、死产、死胎
10只孕鼠继续接触受试物至分娩 和哺乳结束
分娩后，幼仔体重、性别、有 无畸形
4d后 调整到相同幼仔数
称第4、7、14、21日体重， 记录成活情况
（二）第二阶段——致畸作用和胚胎毒性的评定 （三）第三阶段——围产期及出生后发育情况试验
二、两代生殖毒性试验 （一）实验程序
（二）结果评定 受孕率=妊娠雌性动物数÷交配雌性动物数×100% 妊娠率=妊娠出生活胎的鼠数÷受孕的鼠数×100% 出生活仔率=出生活仔鼠数÷胎仔总数×100% 出生存活率=出生后4d仔鼠存活数÷胎仔总数×100% 哺乳存活率=21d断乳时的仔鼠存活数÷胎仔总数×100% 三、人群调查
药物生殖毒性研究
• 白鼬：
• 如果不采用特殊的管理系统，只能季节性 繁殖（其成功与否主要取决于人和动物的 相互影响），历史背景资料不足。
• 仓鼠：
• 静脉给药虽非不可能，但相当困难，会将 受试物存于颊部小囊中而影响实际给药量
• 攻击性非常强
• 对肠道功能紊乱敏感，对许多受试物有过 度敏感的致畸反应，胎仔小。
• 犬：
终末检查：
•-剖检所有亲代动物
•-保存肉眼观察出现异常的器官，必要时进行 组织学检查，同时保留足够的对照组动物的 相应器官以便比较
•-保存所有动物的睾丸、附睾或卵巢、子宫， 必要时进行组织学检查，根据具体情况进行 评价
•-建议计数附睾中的精子数并进行精子活力检 查
胚胎-胎仔发育毒性试验（II段）
• 此外，还应进行第二种动物胚胎-胎仔发育
• 两段试验设计（啮齿类动物）
• 最简单的两段试验设计为生育力试验和围 产期试验。
• 目前研究认为，如果受试物在动物中的暴 露量达到人体暴露量以上的足够范围时， 围产期试验中并未发现其对产前发育有影 响，那么在大多数情况下，再进行胎仔检 查也不能显著改变其危险性评价的结果。
• 终末检查： • -剖检所有成年动物 • -保存肉眼观察出现异常的器官，必要时进
行组织学检查，同时保留足够的对照组动 物相应器官以便比较 • -计数黄体数，活胎、死胎、吸收胎并计算 着床数 • -胎仔体重，胎仔顶臀长 • -胎仔异常（包括外观、内脏、骨骼）
• 胎仔骨骼检查
围产期毒性试验（III段）
• 低剂量应为生殖毒性方面的NOAEL。 • 高剂量与低剂量间根据具体情况可设计1～
2个剂量，以观察可能的剂量反应关系。
• 4.2 给药途径 • 一般情况下，给药途径应与临床拟用途径
生殖毒性试验与评定
生殖毒性试验的目的在于了解外源化学物及其代 谢产物对机体成年哺乳动物的生殖功能和生育力 的影响。
多代繁殖试验在整个生命期内接触受试化学物， 更符合人类实际生活中长期低剂量接触食品添加 剂、微量重金属、农药及环境污染物的情况。
（1）试验方法原则
生殖毒性试验多用性成熟大鼠，也可用小鼠或家 兔。大鼠自然受孕率较小鼠为高，较为理想。 一般设三个剂量组，另设对照组。
一、 生殖毒性试验与评定 二、发育毒性试验与评定
一、生殖毒性试验与评定
外来化合物对生殖过程的损害作用，即生殖毒性。 生殖毒性可发生于妊娠期，也可发生于妊娠前期和 哺乳期。 生殖毒性试验主要研究外来化合物对生殖细胞发生、 卵细胞受精、胚胎形成、妊娠、分娩和哺乳过程的 损害及其评定。过去也称为繁殖试验。
幼仔出生存活率= ———————————×100%
分娩时出生幼仔数
4．幼仔哺乳成活率反映雌性动物授乳哺育幼 仔的能力。
21天断奶幼仔存活数
幼仔哺乳成活率= —————————×100%
出生后4天幼仔存活数
（四）结果判定
将试验组动物各项观察指标统计结果与对照组动 物进行比较，如试验动物在交配、妊娠、幼仔存 活、幼仔发育（哺育）等方面受到影响，则说明 受试物对动物繁殖功能有损害作用。
发育毒性研究的目的是通过计数胚胎或胎仔 吸收或死亡数，测量胎仔的重量和性别比， 检查外观、内脏和骨骼的形态，来识别受试 物有无对胚胎或胎仔的致死、致畸或其他毒 性作用。
变异：是由遗传和遗传外因素控制的外观变化，或 由于分化改变而引起的中途歧异。
2. 发育毒性的表现
① 生长迟缓 即胚胎与胎仔的发育过程在外来化合物影响下，较正常的 发育过程缓慢。 ② 致畸作用 由于外来化合物干扰，活产胎仔胎儿出生时，某种器官表 现形态结构异常。致畸作用所表现的形态结构异常，在出 生后立即可被发现。
两代生殖发育毒性试验方法
推荐采用经口方式（包括饲料、饮水和灌胃），除非其它暴露途径（经皮或吸入）更为合适。
8剂量和分组
常规剂量设计
通常情况下,设置3个剂量组和1个溶媒对照组。剂量水平的选择应参考已有毒理资料，如非妊娠动物的TK数据 ，受试物的血乳屏障透过率，人体暴露估计等。在有TK数据的情况下，相关资料表明受试物具有剂量依赖饱和特征 ，且人体暴露量远低于饱和剂量，设置受试物高剂量时选择动力学曲线向非线性转变的拐点比较适合，可避免出现 饱和。在缺乏TK数据支持的情况下，剂量水平的选择应基于受试物的毒性，如高剂量应产生一定程度的全身毒性， 但不致死或造成动物严重的痛苦。
解剖与病理
F。在解剖当日早上完成体重测量后，制作雌鼠阴道涂片以确定动情周期，便于结合卵巢的组织病理结果分析。 解剖时大体观察所有组织脏器，尤其应重点关注生殖系统，并记录所有大体观察异常情况和子宫着床痕数量。以下 脏器在完成肉眼观察后应称重，成对的脏器需单独称重。
子宫、卵巢；
睾丸、附睾（整体和尾部）；
动物的准备和饲养
动物抵达实验设施后，应有不少于5天的环境适应期。实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。选用标准配 合饲料，饮水不限制。但应注意饮食和垫料中植物雌激素的含量，避免影响某些生殖终点。所用批次饲料留样并适 当保存至报告完成，以便在某些情况下进行回溯分析。
动物交配前可以多只动物饲养于一笼，雌性动物交配成功后（检查到阴栓或阴道涂片阳性）应单笼饲养于含垫 料的笼具内，其所产Fl代同笼饲养至离乳。离乳后的Fl代应按组别、性别分笼饲养，如有合理理由亦可单笼饲养。
在出生后第4天，通过随机选择调整窝的大小，尽可能达到每窝每性别5只，若难以达到，做部分调整也可接受 （例如：4只雌性和6只雄性）。窝的标准化不宜以体重及肛殖距（AGD）为依据。
生殖毒性试验流程及意义
啮齿类动物生殖毒性I、II、III段实验流程及意义1.概述生殖毒性试验（Reproductive toxicity study）是通过动物试验反映受试物对哺乳动物生殖功能和发育过程的影响，预测其可能产生的对生殖细胞、受孕、妊娠、分娩、哺乳等亲代生殖机能的不良影响，以及对子代胚胎-胎儿发育、出生后发育的不良影响。
包括：生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）、胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）、围产期毒性试验（III 段）。
生殖毒性试验中，为方便实验一般可将一个完整生命周期过程分成以下几个阶段如下图所示：图1. 动物生命周期划分A. 从交配前到受孕（成年雄性和雌性生殖功能、配子的发育和成熟、交配行为、受精）。
B. 从受孕到着床（成年雌性生殖功能、着床前发育、着床）。
C. 从着床到硬腭闭合（成年雌性生殖功能、胚胎发育、主要器官形成）。
D. 从硬腭闭合到妊娠终止（成年雌性生殖功能、胎仔发育和生长、器官发育和生长）。
E. 从出生到离乳（成年雌性生殖功能、幼仔对宫外生活的适应性、离乳前发育和生长）。
F. 从离乳到性成熟（离乳后发育和生长、独立生活的适应能力、达到性成熟的情况）。
各段试验研究阶段如下：生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）：A-B胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）：C-D围产期毒性试验（III段）：C-F1一般试验设计简介1.1受试物生殖毒性试验的受试物应能充分代表临床研究受试物或上市药品。
1.2实验动物首选啮齿类动物为大鼠。
在胚胎-胎仔发育毒性研究中，一般还需要采用第二种哺乳动物，家兔为优先选用的非啮齿类动物。
1.3给药1. 3.1计量选择：至少应设三个剂量组，必要时可增加剂量组。
高剂量：应出现一些轻微的母体毒性反应，或为最大给药量/最大耐受量。
低剂量：应为生殖毒性方面的“未观察到不良反应的剂量（NOAEL）”。
1.3.2给药途径：给药途径应与临床拟用途径一致（不用腹腔注射途径，因腹腔注射会对胎儿及子宫产生直接影响）。
三阶段生殖试验设计
三阶段生殖试验设计引言三阶段生殖试验设计是一种综合性试验方法，通过不同阶段的生殖试验来评估某种新药物或化学物质对生殖系统的影响。
本文将探讨三阶段生殖试验设计的原理、应用、方法以及其在药物研发中的意义。
三阶段生殖试验设计原理三阶段生殖试验设计基于生殖毒性的评估需要建立三个阶段的试验：生殖前期试验、生殖期试验和生殖后期试验。
每个阶段的试验都具有不同的目的和要求，旨在全面评估药物或化学物质对生殖系统的潜在影响。
1. 生殖前期试验生殖前期试验主要包括生育能力和生殖毒性筛选试验。
通过测定动物对药物或化学物质的生育能力以及对生殖系统的初步损伤程度，评估其对生殖功能的影响。
2. 生殖期试验生殖期试验是对药物或化学物质在胚胎和胎儿发展过程中的影响进行评估。
通过观察胚胎发育和胎儿成长等指标，判断药物或化学物质对胚胎发育是否具有潜在毒性。
3. 生殖后期试验生殖后期试验主要评估药物或化学物质对生殖能力和后代健康的潜在影响。
通过观察后代的生育能力、性腺功能以及生殖系统病理学等指标，综合评价药物或化学物质的生殖毒性。
应用与意义三阶段生殖试验设计在药物研发和环境毒理学等领域具有重要意义。
1. 药物研发在新药物研发过程中，三阶段生殖试验设计用于评估药物对生殖系统的安全性。
通过该设计，可以有效发现生殖毒性，同时也为药物的合理临床应用提供了科学依据。
2. 环境毒理学三阶段生殖试验设计也广泛应用于环境毒理学研究中，用于评估化学物质对生物繁殖能力和生殖健康的潜在影响。
这对于保护环境和人类健康具有重要意义。
三阶段生殖试验设计的方法和步骤三阶段生殖试验设计的方法和步骤主要包括试验动物选择与饲养、试验组织与数据采集、数据分析与结果解读等。
1. 试验动物选择与饲养选择适合的试验动物根据试验目的和标准选择，如小鼠、大鼠或其他适宜的实验动物。
饲养试验动物需要提供适宜的环境和饲料，确保其生活质量。
2. 试验组织与数据采集根据不同阶段的试验设计，设计相应的试验组织和数据采集方式。
生殖毒性试验 繁殖试验流程
生殖毒性试验繁殖试验流程英文回答：Reproductive toxicity testing is a crucial step in assessing the potential adverse effects of chemicals on reproductive health. It involves conducting reproductive studies to evaluate the effects of a substance on fertility, embryonic development, and overall reproductive function. The reproductive testing process typically consists of several phases and endpoints.Firstly, the initial phase involves determining the appropriate species for testing. This is crucial asdifferent species may exhibit different sensitivities to reproductive toxicants. For example, rats and rabbits are commonly used in reproductive toxicity testing due to their similarities to humans in terms of reproductive physiology.Once the species is selected, the next step is to determine the appropriate dose levels for testing. This isdone by conducting a dose range-finding study, where different doses of the test substance are administered to animals to determine the dose levels that produce observable effects without causing excessive toxicity. For instance, if a chemical is known to cause reproductive toxicity at high doses, the dose range-finding study helps identify the appropriate lower doses to be used in the main reproductive toxicity study.After determining the dose levels, the main reproductive toxicity study is conducted. This study typically involves exposing animals to the test substance for a specific duration, usually throughout the reproductive cycle. The animals are then monitored for various reproductive endpoints, such as mating behavior, fertility, gestation length, and litter size. For example, in a rat reproductive toxicity study, male and female rats are exposed to the test substance and then allowed to mate. The number of successful pregnancies and the number of live births are recorded to assess the potential effects of the test substance on reproductive function.In addition to evaluating fertility and reproductive performance, reproductive toxicity testing also includes assessing the effects on embryonic and fetal development. This is typically done by examining the offspring for any external or internal abnormalities and measuring parameters such as body weight, organ weights, and skeletal development. For instance, if a test substance is suspected to cause developmental abnormalities, the offspring from the reproductive toxicity study are examined for any physical malformations or growth retardation.Overall, reproductive toxicity testing is a comprehensive process that involves careful planning, execution, and analysis of data to assess the potential effects of chemicals on reproductive health. It isessential for ensuring the safety of chemicals and protecting human and environmental health.中文回答：生殖毒性试验是评估化学物质对生殖健康的潜在不良影响的重要步骤。
生殖毒性试验 繁殖试验流程
生殖毒性试验繁殖试验流程英文回答：Reproductive toxicity testing is an essential component of safety assessment for chemicals and pharmaceuticals. It aims to evaluate the potential adverse effects of a substance on reproductive organs and processes, including fertility, pregnancy, and development of offspring. The reproductive toxicity testing typically includes a range of studies, such as fertility assessment, mating and gestation studies, and developmental toxicity studies.The reproductive toxicity testing process usuallystarts with a screening study to determine the general reproductive effects of the substance. This may involve exposing male and female animals to different doses of the substance and monitoring their reproductive parameters, such as mating behavior, fertility, and pregnancy outcomes. The screening study helps to identify any potential reproductive effects and establish dose levels for furtherstudies.Following the screening study, more detailed reproductive toxicity studies are conducted. These studies often involve exposing animals to the substance during specific stages of reproduction, such as pre-implantation, organogenesis, or lactation. The effects on fertility, pregnancy, and development are carefully monitored and assessed. For example, in a developmental toxicity study, pregnant animals are exposed to the substance and evaluated for any adverse effects on fetal growth, development, and survival.In addition to the reproductive parameters, other endpoints such as hormonal changes, histopathological examination of reproductive organs, and genetic toxicity may also be evaluated. These endpoints provide valuable information on the mechanisms of reproductive toxicity and help in the overall risk assessment of the substance.Reproductive toxicity testing is guided byinternational guidelines, such as those developed by theOrganization for Economic Co-operation and Development (OECD). These guidelines provide standardized protocols and criteria for conducting and interpreting the results of reproductive toxicity studies. Compliance with these guidelines ensures the reliability and comparability of the data generated across different laboratories and countries.中文回答：生殖毒性试验是化学品和药物安全评估的重要组成部分。
药物毒理学生殖毒性试验26 (2)
药物毒理学生殖毒性试验26
药物毒理学的生殖毒性试验可以通过以下的方式进行：
1. 动物试验：常用的动物模型包括小鼠、大鼠、兔子等。
将药物以不同剂量进行口服或注射给予实验动物，观察药
物对动物生殖系统的影响，包括配子形成、生殖腺发育、
性激素水平等指标的变化。
2. 特殊试验：一些特殊试验可用于评估药物的生殖毒性。
例如，通过观察药物对雌性动物的妊娠情况、胚胎发育情
况以及幼儿存活率等指标来评估药物对生殖系统的影响。
3. 体外试验：某些实验也可以在离体细胞培养系统中进行。
例如，使用精子、卵子或培养的胚胎细胞来测试药物对生
殖细胞的影响。
无论采用何种方法，研究人员都应遵守伦理和法律要求，确保试验过程和结果的可靠性和准确性。
生殖和发育毒性试验与评定
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（2）试验方法
①三代两窝生殖试验
大鼠断奶或出生8周后，开始喂受试物或以其 它方式与受试物接触，共进行8～12周，即直到 性发育成熟，相当出生后4个月左右。每周至少 称体重一次，记录进食量并观察有无中毒症状或 死亡。
亲代动物（F0）所生仔鼠为第一代（F1）。出生后应检查每窝幼仔数、死 亡数以及肉眼可见幼仔畸形。出生后第4天和第21天逐个称取重量，仔鼠 断奶后，母鼠休息10天，再与雄鼠交配一次，并生出第二窝仔鼠，亲代共 生出仔鼠两窝，分别为F1a和F1b。F1b出生后，将雄性亲鼠淘汰，雌性亲 鼠继续喂受试物，直至F1b出生后21天断奶为止。F1a断奶后观察其发育情 况，不再喂受试物。F1b断奶后，继续接触受试物8 ～12周，直到性发育 成熟，选出雌雄各16～20只，按前法进行交配。F1b所产第一窝幼仔为F2a， F2a断奶后，其母鼠F1b休息10天，再次交配，所生幼仔为F2b，F2b断奶后， 将F1b淘汰。F2b交配处理方法与F1b相同。但F2b也可只交配一次，所产仔 鼠为F3a，不再进行第二次交配，试验结束。
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生殖和发育毒性试验与评定
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一、 生殖毒性试验与评定 二、发育毒性试验与评定
一、生殖毒性试验与评定
外来化合物对生殖过程的损害作用，即生殖毒性。 生殖毒性可发生于妊娠期，也可发生于妊娠前期和 哺乳期。 生殖毒性试验主要研究外来化合物对生殖细胞发生、 卵细胞受精、胚胎形成、妊娠、分娩和哺乳过程的 损害及其评定。过去也称为繁殖试验。
生殖毒性试验实验报告
生殖毒性试验实验报告生殖毒性试验实验报告一、实验目的及原理本实验旨在评估一种化合物对生殖系统的毒性，并确定其对生殖功能的影响。
常用的生殖毒性试验包括两个主要指标：生殖细胞的质量和数量。
二、实验材料及仪器实验材料包括化合物样品、试验动物（小鼠），实验所需的饲料和水。
实验仪器包括鼠笼、标定尺、显微镜和计算器。
三、实验步骤1. 将小鼠分为对照组和实验组，每组10只。
2. 将实验组小鼠投喂化合物样品，对照组小鼠只投喂普通饲料。
3. 每日观察小鼠的一般活动情况，记录体重变化。
4. 两个月后，将小鼠处死，取出生殖器官。
5. 观察和记录雄性小鼠睾丸的质量和大小，雌性小鼠卵巢的质量和大小。
6. 取雄性小鼠精液，观察和记录精子数量和活力。
7. 用统计分析软件对实验结果进行分析。
四、实验结果实验组小鼠在实验期间没有明显的一般活动情况异常，体重也与对照组小鼠相似。
在观察雄性小鼠睾丸时，实验组睾丸的质量和大小与对照组相比没有明显差异。
而观察雌性小鼠卵巢时，实验组卵巢的质量和大小也与对照组相似。
取出的雄性小鼠精液中，实验组精子数量与对照组相比并无明显差异。
然而，实验组精子的活力明显低于对照组。
五、实验讨论根据实验结果可以得出结论：这种化合物对雄性小鼠的生殖系统没有明显的影响，但对雌性小鼠的卵巢和精子的活力有一定的抑制作用。
然而，该实验结果仅基于小鼠的数据，不能直接适用于人类。
进一步的研究还需要考虑剂量效应、暴露时间和人群密度等因素，以更好地评估该化合物的生殖毒性。
六、实验结论根据本次实验的数据和讨论，可以初步得出结论：该化合物对雄性小鼠的生殖系统无明显影响，但对雌性小鼠的卵巢和精子活力有一定的抑制作用。
然而，由于本次实验是以小鼠为模型，具体的生殖毒性还需要更多的研究和验证。
七、致谢感谢本次实验的指导老师和实验室的同学们的帮助和支持。
生殖毒性试验流程及意义
啮齿类动物生殖毒性I、II、III段实验流程及意义1.概述生殖毒性试验（Reproductive toxicity study）是通过动物试验反映受试物对哺乳动物生殖功能和发育过程的影响，预测其可能产生的对生殖细胞、受孕、妊娠、分娩、哺乳等亲代生殖机能的不良影响，以及对子代胚胎-胎儿发育、出生后发育的不良影响。
包括：生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）、胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）、围产期毒性试验（III 段）。
生殖毒性试验中，为方便实验一般可将一个完整生命周期过程分成以下几个阶段如下图所示：图1. 动物生命周期划分A. 从交配前到受孕（成年雄性和雌性生殖功能、配子的发育和成熟、交配行为、受精）。
B. 从受孕到着床（成年雌性生殖功能、着床前发育、着床）。
C. 从着床到硬腭闭合（成年雌性生殖功能、胚胎发育、主要器官形成）。
D. 从硬腭闭合到妊娠终止（成年雌性生殖功能、胎仔发育和生长、器官发育和生长）。
E. 从出生到离乳（成年雌性生殖功能、幼仔对宫外生活的适应性、离乳前发育和生长）。
F. 从离乳到性成熟（离乳后发育和生长、独立生活的适应能力、达到性成熟的情况）。
各段试验研究阶段如下：生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）：A-B胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）：C-D围产期毒性试验（III段）：C-F1一般试验设计简介1.1受试物生殖毒性试验的受试物应能充分代表临床研究受试物或上市药品。
1.2实验动物首选啮齿类动物为大鼠。
在胚胎-胎仔发育毒性研究中，一般还需要采用第二种哺乳动物，家兔为优先选用的非啮齿类动物。
1.3给药1. 3.1计量选择：至少应设三个剂量组，必要时可增加剂量组。
高剂量：应出现一些轻微的母体毒性反应，或为最大给药量/最大耐受量。
低剂量：应为生殖毒性方面的“未观察到不良反应的剂量（NOAEL）”。
1.3.2给药途径：给药途径应与临床拟用途径一致（不用腹腔注射途径，因腹腔注射会对胎儿及子宫产生直接影响）。
生殖毒理学
生殖毒理学
1.掌握生殖毒理学的基本概念及化学物质对生殖过程的损害作用；
生殖毒理学：研究化学物对于人类生殖过程的毒性作用规律及其评定的一门学科。
研究化学毒物抑制或干扰卵子和精子生成机制和对后代发育的不良作用，为安全性评价与预防提供依据。
生殖毒性(reproduction toxicity):化学毒物对生殖系统产生的不良效应。
包括：⑴生育力与一般生殖行为；⑵致畸性；⑶对孕后期及哺乳（围生期/出生后）期母体和新生儿的不良效应。
化学物质对生殖过程的损害作用：对雄性生殖系统的毒作用—雄性生育力涉及三个环节：精子发生、精子向雌性生殖道释放（精液的产生、性欲、勃起、射精）、受精
2.生殖毒性评价方法
外来化合物的生殖毒性评价包括实验研究和人群调查
（一）实验研究—繁殖试验
1.试验程序
A.一代繁殖试验
针对多数限于短期服用，而且半减期相当短的治疗药物的生殖毒性评价
B .多代繁殖试验
针对长期接触的过程中很可能会在体内提高浓度或含量的化学物
两代繁殖试验
三代繁殖试验
能育性评价连续繁殖试验（FACB）
（三）流行病学调查方法。
生殖毒性评价
• 给药途径：药物拟用给药途径或灌胃、自由摄取， 但不宜用腹腔注射。 • 给药时间：于胚胎器官形成期连续给药。 • 大鼠：孕后6-15天 • 小鼠：孕后6-15天 • 家兔：孕后6-18天 • 对照：必须设溶剂对照，必要时设阳性对照。可 供选择的阳性对照物有敌枯双（0.5-1.0mg/kg体 重），五氯酚纳（30 mg/kg /体重）阿斯匹林 （250-300 mg/kg ）及维生素A(25 000-40 000IU) 等.
• （三）围产期毒性实验 • 目的：评价化学物于孕后期至பைடு நூலகம்乳期之间对孕鼠 /哺乳鼠和胎儿/新生仔的潜在不良影响
• 动物：通常用小鼠、大鼠或家兔，每组孕鼠1520只，家兔8-12只 • 剂量与给药途径：与一般生殖毒性试验同
给药时间：大、小鼠于妊娠第15天开始给药，至 分娩后21天（小鼠）和28天（大鼠），家兔于妊 娠后22天开始给药，至分娩后31天。
• （二）致畸试验 • 目的：预测环境有害物质对人体的胚胎毒性及致 畸性 • 原理：母体在受孕期间受到可通过胎盘屏障的某 种有害物质作用，影响胚胎的器官分化与发育， 导致结构和机能的缺陷，出现胎儿畸形。在受孕 动物的胚胎着床后，并已开始进入细胞及器官分 化期时投以受试物，可检出该物质对胎儿的致畸 作用。 • 动物：首选性成熟大鼠（Wistar 或S.D)，80—90 只，雌、雄各半，鼠龄 90—100d，体重雄180g, 雌150g
一般生殖毒性试验 致畸试验 围产期毒性试验 繁殖实验 •
‘
• （一）一般生殖毒性试验 • 目的：评价化学毒物对生殖细胞（雌、雄）、 胚胎、胎儿的影响 • （以下引自新药临床前研究指导原则汇编— —药学、药理学、毒理学） • 动物：多用大鼠，雌、雄各20只 • 如必要可用家兔，避孕药还需用猴子试验。 • 剂量与给药途径：根据亚急性毒性试验结果 和毒代动力学试验数据设定 • 至少两个剂量组，高剂量组可产生轻微毒性 反应，给药途径原则上与临床拟用途径同。
药物毒理学之生殖毒性实验
生殖毒性试验：所用药物至少应有二至三种剂量并设对照组，高剂量可产生轻度毒性反应，低剂量应为拟议中的治疗量的某些倍量。
给药途径原则上与推荐临床应用的给药途径相同，口服制剂应用灌胃法。
（１）一般生殖毒性试验动物：一种或一种以上试验动物，如用小鼠或大鼠每组雌雄各２０只以上。
给药时期：选择性成熟的动物，交配前雄性动物连续给药６０天以上，雌性动物连续给药１４天。
雌性动物在确定已经交配后继续给药至多数胚胎器官发生期。
检查：给药的雌性动物与给药的雄性动物同笼交配过夜后，以适当方法检查其交配成功与否（阴栓或精子的有无）。
同笼饲养期限最多两周。
必要时给药动物可以和非给药动物分别交配，已交配的雌性动物，推定其妊娠末期及时解剖，观察妊娠的确立、胎儿的吸收和死亡及子宫内活胎的发展情况，并进行形态学检查（性别、外表及内部器官的形态学观察及骨骼透明染色标本的检查），必要时进行组织学和组织化学的详细检查。
给药的雄性动物及未交配上的雌鼠均作剖检，必要时进行病理组织学检查。
（２）致畸胎试验动物：至少一种动物，一般采用小鼠或大鼠，每组１５—２０只孕鼠，家兔每组８—１２只孕兔。
剂量：至少有二至三种剂量，并另设对照组，高剂量可有轻度毒性反应，低剂量应为拟议中的治疗量的某些倍量。
给药途径：原则上与推荐临床应用的给药途径相同，口服制剂应用灌胃法。
给药时期：胚胎的器官形成期。
检查：全部动物在妊娠末期剖检，观察妊娠的确立，有无死胎和吸收胎及子宫内活胎的发育情况，并进行形态学检查（性别、外表及内部器官的形态学观察及骨骼透明染色标本的检查），必要时进行组织学和／或组织化学的详细检查。
某些新药需要观察其对子代的影响。
动物数应相应增加孕鼠１０只，使其自然分娩，观察其下一代直至成年。
检查新生动物的存活、生长及发育情况，包括行为、生殖功能及其他异常症状。
必要时还可对给药的雌性动物长期观察其生殖、受孕、分娩及次子代的情况。
结果处理：将数据汇总成表，尽量将全部观察的结果采用恰当的统计学方法分析及评价。
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啮齿类动物生殖毒性I、II、III段实验流程及意义
1.概述
生殖毒性试验（Reproductive toxicity study）是通过动物试验反映受试物对哺乳动物生殖功能和发育过程的影响，预测其可能产生的对生殖细胞、受孕、妊娠、分娩、哺乳等亲代生殖机能的不良影响，以及对子代胚胎-胎儿发育、出生后发育的不良影响。
包括：生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）、胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）、围产期毒性试验（III段）。
生殖毒性试验中，为方便实验一般可将一个完整生命周期过程分成以下几个阶段如下图所示：
图1. 动物生命周期划分
A. 从交配前到受孕（成年雄性和雌性生殖功能、配子的发育和成熟、交配行为、受精）。
B. 从受孕到着床（成年雌性生殖功能、着床前发育、着床）。
C. 从着床到硬腭闭合（成年雌性生殖功能、胚胎发育、主要器官形成）。
D. 从硬腭闭合到妊娠终止（成年雌性生殖功能、胎仔发育和生长、器官发育和生长）。
E. 从出生到离乳（成年雌性生殖功能、幼仔对宫外生活的适应性、离乳前发育和生长）。
F. 从离乳到性成熟（离乳后发育和生长、独立生活的适应能力、达到性成熟的情况）。
各段试验研究阶段如下：
生育力与早期胚胎发育毒性实验（I段）：A-B
胚胎—胎仔发育毒性试验（II段）：C-D
围产期毒性试验（III段）：C-F
1一般试验设计简介
1.1受试物
生殖毒性试验的受试物应能充分代表临床研究受试物或上市药品。
1.2实验动物
首选啮齿类动物为大鼠。
在胚胎-胎仔发育毒性研究中，一般还需要采用第二种哺乳动物，家兔为优先选用的非啮齿类动物。
1.3给药
1. 3.1计量选择：至少应设三个剂量组，必要时可增加剂量组。
高剂量：应出现一些轻微的母体毒性反应，或为最大给药量/最大耐受量。
低剂量：应为生殖毒性方面的“未观察到不良反应的剂量（NOAEL）”。
1.3.2给药途径：给药途径应与临床拟用途径一致（不用腹腔注射途径，因腹腔注射会对胎儿及子宫产生直接影响）。
1.4对照组
应设赋形剂对照组。
当赋形剂可能产生作用或影响受试物的作用时，应另设空白对照组。
二、生育力与早期胚胎发育毒性试验（I段）
生育力与早期胚胎发育毒性试验是对雌雄动物由交配前到交配期直至胚胎着床给药，以评价受试物对动物生殖的毒性或干扰作用（生殖细胞接触药物后对受胎能力、生殖系统及子代有无不良影响）。
评价内容包括配子成熟度、交配行为、生育力、胚胎着床前阶段和着床等。
研究阶段包括生命周期的 A 阶段和B 阶段如下图所示：
图2. 生育力与早期胚胎发育毒性试验研究阶段示意图*
注*：引自《生殖毒性发育试验设计和实施中应该注意的问题》，作者：常艳
1.试验流程如下图所示：
图3. 生育力与早期胚胎发育毒性试验流程图
2.试验流程图解：
2.1 分组及饲养：首先雌鼠、雄鼠分别按体重随机分为给药组和对照组，常规饲养，每天观察并记录动物体征和死亡情况；
2.2给药期：
雄鼠：交配前给药4-10周，给药期持续整个交配期，至处死；
雌鼠：交配前两周开始给药，并持续至胚胎着床（GD6-GD7）；
2.3阴道涂片检查：合笼交配前2周须每天对雌鼠进行阴道涂片检查，观测每只雌鼠的性周期变化，以检查其是否对交配和交配前时间有影响；
2.4合笼：雌鼠、雄鼠1：1合笼交配，交配期2周。
交配结束后雌鼠、雄鼠分别
进行不同处理：
雄鼠：交配成功后即可处死，并进行剖检，保存睾丸、附睾、异常组织器官；
检测项目主要包括：附睾精子计数、精子活力检查、精子畸形检查；
统计项目：摄食量、体重、生育率；
雌鼠：未交配成功的雌鼠：交配结束后处死；
交配成功孕鼠：每天观察并记录体征、死亡情况；每3天测定体重、摄
食量；并于GD13-GD15日处死，进行剖检。
保存子宫、卵巢及异常组
织器官；
检测项目：计数黄体数、活胎、死胎、吸收胎数，并计算着床数；
统计项目：摄食量、体重、受孕率、妊娠率、着床前丢失率、着床后丢失率；
三、胚胎-胎仔发育毒性试验（II段）
胚胎-胎仔发育毒性试验是研究妊娠动物自胚胎着床至硬腭闭合给药，评价药物对妊娠动物、胚胎及胎仔发育的影响。
实验动物包括大鼠和家兔。
评价内容包括妊娠动物较非妊娠雌性动物增强的毒性、胚胎-胎仔死亡、生长改变和结构变化等。
研究阶段主要包括生命周期的 C 阶段至 D 阶段如下图所示：
图4. 胚胎-胎仔发育毒性试验研究阶段示意图*
注*：引自《生殖毒性发育试验设计和实施中应该注意的问题》，作者：常艳
1.试验流程如下图所示：
图5. 胚胎-胎仔发育毒性试验流程图
2.实验流程图解：
2.1制备孕鼠/孕兔，并按体重平均分为给药组和对照组，常规饲养，每3天测定摄食量、体重；每天观察并记录体征、死亡情况；
2.1给药期：给药期设定在怀孕动物胚胎着床至硬腭闭合期。
孕鼠给药期：
GD6-GD15；孕兔给药期：GD6-GD18；
2.3剖检：动物饲养至分娩前处死，剖腹取仔。
孕鼠剖检日期：GD20/GD21；家兔剖检日期：GD28/GD29；
母鼠/母兔：进行大体尸检观察胎盘是否异常；保存异常组织器官；计数：黄体数、活胎、死胎、吸收胎；计算：摄食量、体重、着床数；
胎仔：胎仔清洗干净后分别测定每只胎仔体重、顶臀长，并进行大体外观检查。
该过程以后胎鼠与胎兔处理是有区别的。
胎鼠：50%胎仔制作骨骼标本，进行骨骼检查；50%胎仔制作内脏标本，进行内脏检查；胎兔：全部胎兔首先进行剖检，进行内脏检查，然后将剖检后胎兔剥离皮肤组织，并剔除脂肪，全部制作成骨骼标本，进行后期骨骼检查。
四、围产期毒性试验（III段）
围产期毒性试验是检测从胚胎着床到幼仔离乳给药对妊娠/哺乳的雌性动物以及胚胎和子代发育的不良影响；
评价内容包括妊娠动物较非妊娠雌性动物增强的毒性、出生前和出生后子代死亡情况、生长发育的改变以及子代的功能缺陷，包括F1代的行为、性成熟和生殖功能。
研究阶段包括生命周期中的 C 阶段至 F 阶段如下图所示：
图6. 围产期毒性试验研究阶段示意图*
注*：引自《生殖毒性发育试验设计和实施中应该注意的问题》，作者：常艳
1.试验流程如下图所示：
图7. 围产期毒性试验流程图
2. 试验流程图解：
2.1制备孕鼠，按体重平均分为给药组和对照组，饲养至分娩，该阶段为怀孕期，每天对孕鼠进行体征及死亡情况观察；每3天进行体重、摄食量测定；
2.1给药期：设定在胚胎硬腭闭合至哺乳结束期，一般为孕鼠怀孕15日至子鼠离乳（GD15-PND21）进行给药。
2.3分娩：孕鼠一般于GD21-GD23分娩；在大鼠分娩结束后进行观察（不能打扰其分娩，以免产生食仔现象），计数死胎数、活胎数、雌胎仔数和雄胎仔数；计算F1代大鼠畸形率、成活率、性别比例；对胎鼠进行外观畸形检查，并分别测定每窝雌、雄胎仔总体重；后进入哺乳阶段。
2.3哺乳期：P代大鼠：每天进行体征及死亡情况观察；每3天进行体重、摄食量测定，饲养至离乳；
F1代胎鼠：每天计数雌、雄胎鼠数量；每3天分别测定雌、雄胎鼠总体重；于PND4进行窝仔数调整（减少由于每窝胎仔数目不同而产生的对胎鼠身体发育等指标的影响）；哺乳期至离乳后还需根据身体发育、反射发育等检测指标日程安排对F1代胎鼠进行身体发育检测和反射发育检测；
2.4离乳：F1代大鼠于PND21离乳，代表哺乳期结束。
此时对P代雌鼠及F1代大鼠分别进行相应处理：
P代大鼠：哺乳期结束后（PND21）进行大体剖检；保存:异常组织器官；统计摄食量、体重、哺乳成活率；
F1代大鼠：每窝留存雌、雄仔鼠各1只，数量不够时同剂量组仔鼠补齐，饲养至性成熟。
该阶段每天观察并记录F1代大鼠体征、死亡情况；每周测定摄食量、体重；据F1代仔鼠行为指标检测日程安排进行转棒试验和穿梭箱试验。
2.5F1代大鼠合笼交配：F1代大鼠性成熟后同剂量组雌鼠与雄鼠1:1配对，合笼
交配，交配期为2周。
交配结束后对雄鼠、雌鼠分别进行相应处理：F1代雄鼠：处死，计算生育率；
未孕雌鼠：处死，并进行大体剖检，保存异常组织器官；
孕鼠：饲养至胚胎硬腭闭合（GD13-GD15），怀孕期每天观察并记录F1代孕鼠体征、死亡情况，每3天测定摄食量、体重；
2.6 F1代雌鼠于GD13-GD15处死，大体尸检，检查有无胎盘异常，保存异常组织器官；计数黄体数、活胎、死胎、吸收胎数；计算摄食量、体重、妊娠率；活胎率、死胎率、着床前丢失率、着床后丢失率；。