细菌的分离与鉴定共37页
高温大曲中微生物的分离与鉴定
高温大曲中微生物的分离与鉴定刘效毅;郭坤亮;辛玉华【摘要】The diversity of microbes in high-temperature Maotai-flavor Daqu was analyzed by traditional separation and culture method and modern molecular biological method.147 microbial strains were separated successfully,among them,97 strains were bacteria includingBacillus,Actinomycetes,Staphylococcus,and Micrococcus,and the other 50 strains were mould including Penicillium,Aspergillusfumigatus,Mucor,Alternaria,Phoma,Chaetomium globosum,Eurotium,and Monascus.The research results further proved the diversity of microbes in high-temperature Daqu.（Tran.by YUE Yang）%采用传统分离培养方法和现代分子生物学方法,对酱香型白酒高温大曲中微生物的多样性进行研究分析。
从酱香型白酒高温大曲中分离出147株微生物,其中97株为细菌,包括芽孢杆菌、放线菌、葡萄球菌、微球菌4类;50株霉菌,包括青霉、曲霉、毛霉、交链孢霉、茎点霉菌、球毛壳、散囊菌、红曲霉8类,研究结果表明,高温大曲中的微生物具有高度的多样性。
【期刊名称】《酿酒科技》【年(卷),期】2012(000)006【总页数】4页(P52-55)【关键词】酒曲;微生物;鉴定;生理生化特性;16S;rRNA基因;ITS【作者】刘效毅;郭坤亮;辛玉华【作者单位】贵州大学生命科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学生命科学学院,贵州贵阳550025;中国科学研究院微生物所,北京100101【正文语种】中文【中图分类】Q93-3;TS261.1茅台酒是高温大曲酱香型白酒的典型代表，以用曲量大，制曲温度高为特点。
盐碱土壤中耐盐细菌的分离与鉴定
山东农业科学 2008,9:49～50,54Shandong Agricultural Sciences收稿日期:2008-05-30基金项目:山东省科技攻关重点项目(项目编号:2005GG3209057)作者简介:张广志(1978-),男,山东临朐人,硕士,主要从事农业微生物与生物技术等方面的研究。
3通讯作者盐碱土壤中耐盐细菌的分离与鉴定张广志1,周红姿1,杨合同1,23,赵晓燕1(11山东省科学院中日友好生物技术研究中心,山东省应用微生物重点实验室,山东济南 250014;21山东省科学院生物研究所,山东济南 250014) 摘 要:从盐碱土壤中分离筛选耐盐菌株12株,经鉴定分别为假单胞菌属(Pseudo m onas ),黄杆菌属(Flavobacterium ),盐单胞菌属(Halo m onas ),微球菌属(M icrococcus )和芽孢杆菌(B acillus )。
各菌株均耐盐至10%,且对小麦、番茄、辣椒和黄瓜没有潜在致病性。
关键词:耐盐细菌;分离;鉴定;耐盐性中图分类号:S154138+1 文献标识号:A 文章编号:1001-4942(2008)09-0049-03Isol ati on and I denti fi cati on of Halotolerant Bacter i afro m Salt -soda SoilZHANG Guang -zhi 1,ZHOU Hong -zi 1,Y ANG He -t ong1,23,Z HAO Xiao -yan1(11S I NO -Japanese Friendship B iotechnology Research Center of Shandong A cade m y of Sciences,Shandong Provincial Key L ab for A pplied M icrobiology,J inan 250014,China;21Institute of B iology,Shandong A cade m y of Sciences,J inan 250014,China )Abstract 12hal ot olerant bacteria were is olated fr o m salt -s oda s oil and identified t o bel ong t o Pseudo 2m onas,F lavobacterium ,Halo m onas,M icrococcus and B acillus res pectively .Every strain had the t olerance upt o 10%NaCl and no potential pathogenicity t o wheat,t o mat o,hot pepper and cucu mber .Key words Hal ot olerant bacteria;Is olati on;I dentificati on;Salt t olerance 我国盐碱地面广量大,改造治理及合理开发利用这些资源是我国农业可持续发展的重要途径之一,也对改善生态环境,推动区域经济、社会和生态可持续发展具有特别重要意义[1]。
细菌的分离、培养和鉴定ppt课件
Hale Waihona Puke 病料在接种培养基后，经过一段时间，应检查其 生长状况。首先用肉眼检查有无细菌生长；若有， 则需进一步检查菌落是否纯一。形态特征包括： 大小、形状、突起或扁平、凹陷、边缘（光滑、 波形、锯齿状、卷发状等）、颜色（红色、灰白 色、黄色等）、表面（光滑、粗糙等）、透明度 （不透明、半透明、透明等）和粘度等
细菌的分离、培养与鉴定
王欣欣
一、细菌的分离
1、从混杂微生物中获得单一菌株纯培养的 方法称为分离。 2、分离的目的在于从被检材料中、或者从 污染的众多杂菌中分离出纯的病原菌。
1)病料采集
病料：疑似细菌性疾病的水产养殖动物 以鱼为例，常见症状：体色发黑，体表溃 烂、充血、粘液增多，鳃、鳍破损，内脏 红肿，腹水，眼球凸出或浑浊，肛门红肿 等等。 活体病料→应考虑病原在疾病发展过程中 的部位（上述症状） 病料死后→应立即采集，越早越好
生化鉴定管
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养 基质的分解能力也不一样，因而代谢产物 或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用
ATB Expression：自动化微生物鉴 定和药敏分析系统
分子生物学技术
分子生物学鉴定目前比较流行的主要是核 酸检测技术, 包括基因测序、指纹图谱技术、 基因探针技术、聚合酶链反应( PCR)、GC 含量测定等。
培养基的种类 ① 基础培养基：含有一般细菌生长繁殖需要的基本营养物
质；可作为一些特殊培养基的基础成分（普通营养琼脂） ② 加富培养基：在基础培养基中加入某些特殊营养物质
（如血液/血清、酵母浸膏或生长因子等）；用以培养对 营养要求高的微生物（2216E） ③ 选择培养基：利用细菌对某种或某些化学物质的敏感性 不同；在培养基中加入这类物质，利于所需分离的细菌生 长，而抑制不需要的细菌生长，从而达到分离某种微生物 的目的。（中国科学院海洋研究所专利：一种定量检测鳗弧 菌的选择性培养基及其制备）【利用鳗弧菌对氨苄青霉素的抗性 】 ④ 鉴别培养基：是一类含有某种特定化合物或试剂的培养 基。某种细菌在这种培养基上培养后，产生某种代谢产物， 能与这种特定化合物或试剂发生某种明显的特征性反应； 从而达到区分不同的微生物。（TCBS）
微生物实验10水中大肠菌群数的测定
实验九水中大肠菌群数的测定一、目的要求学习大肠菌群数的检测原理和方法。
二、实验材料1.样品：水样2. 培养基：乳糖胆盐发酵管(单料及双料)，伊红美兰琼脂(EMB)平板，乳糖发酵管。
3. 其他：显微镜，酒精灯，无菌吸管(10m1、1m1)，接种环，载玻片等三、基本原理水中的病原菌多数来源于病人和病畜的粪便。
由于病原菌的数量少，检测过程复杂，因此，直接测它们的存在是非常困难的专业化工作。
由于大肠菌群在粪便中数量大，在体外存活时间与肠道致病菌相近，且检验方法比较简便，因此一般采用测定大肠菌群或大肠杆菌的数量来作为水被粪便污染的标志。
如果水中大肠菌群的菌数超过一定的数量，则说明此水已被粪便污染，并有可能含有病原菌。
大肠菌群的定义是指一群好氧和兼性厌氧、革染氏阴性、无芽孢的杆状细菌，并能在乳糖培养基中，经37℃24~48h培养能产酸产气。
我国规定每升自来水中大肠菌群不得超过3个。
检测大肠菌群的方法有稀释培养法和膜滤法两种，其中稀释培养法是标准分析法，为我国大多数卫生单位和水厂所使用。
它包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
四、方法与步骤1.采样：取100ml磨口带塞玻璃瓶，包扎后，干热灭菌备用。
取自来水样时，至少应先放水5min，以冲去龙头口所带的微生物，获得主流管中有代表性的水样。
取样时，用右手握瓶，左手启开瓶塞，用覆盖瓶口的纸托住瓶塞，收集样品后，连同覆盖纸一起将瓶口塞好，并用线绳在原处扎好。
注意手指不得触及瓶口内部。
在静水中取样时，先用右手揭去塞子，瓶口朝下浸入水下约30cm处，然后将瓶子反转过来，待水注满后，取出塞好瓶口。
如果水在流动，瓶口必须迎着水流，以免手上的细菌被水冲进瓶子。
2.水样放置过程中，内含的细菌数目和类型会发生变化，所以要求水样品应于6~10℃贮存，并不超过6h。
3.初发酵试验：吸取待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，10ml接种量采用双料发酵管，而lml及lml以下接种量采用单料管。
纳豆菌的分离筛选与鉴定
纳豆菌的分离筛选与鉴定钱泽栋;张佑红;卢育兵;朱丽娜;田莉【摘要】采用酪蛋白平板初筛,从日本北海道生产的纳豆食品中筛选出5株产纳豆激酶的菌株,分别编号XD1～5;再采用纤维蛋白平板复筛,通过比较透明圈大小筛选得到高产纳豆激酶菌株XD2,并通过16 S rDNA基因序列对其进行鉴定.结果表明,5株菌株均能产纳豆激酶并能分解纤维蛋白,其中,菌株XD2所产纳豆激酶的酶活最高,为989.3 U·mL-1;16 S rDNA基因序列鉴定菌株XD2为枯草芽胞杆菌.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2018(035)008【总页数】4页(P41-44)【关键词】纳豆;纳豆激酶;筛选;鉴定【作者】钱泽栋;张佑红;卢育兵;朱丽娜;田莉【作者单位】武汉工程大学环境生态与生物工程学院,湖北武汉 430074;武汉工程大学环境生态与生物工程学院,湖北武汉 430074;武汉工程大学环境生态与生物工程学院,湖北武汉 430074;武汉工程大学环境生态与生物工程学院,湖北武汉430074;武汉工程大学环境生态与生物工程学院,湖北武汉 430074【正文语种】中文【中图分类】TQ924;Q939.97纳豆是日本的传统食品，距今已有2000多年历史,纳豆是日本普通家庭日常生活必不可少的食物之一，并且被大力推广[1]。
纳豆含有丰富的营养成分，如各种氨基酸、蛋白质等，具有溶栓作用，还有药用价值[2]。
血栓性疾病严重威肋人类的生命，世界每年死于血栓性疾病的人数高达1 500万以上[3]。
各国积极研发相关溶栓类药物，纳豆激酶具有安全性好、成本低、作用迅速、纤溶活性强等众多优点[4]，受到广泛关注。
1987年，Sumi等[5]首次在纳豆中提取出纳豆激酶，发现纳豆激酶能够溶解血栓纤维蛋白。
2002年，Milner等[6]发现,纳豆激酶是200多种具有纤溶作用物质中最具潜力的纤溶蛋白酶。
赵仲麟等[7]从我国黑豆中筛选出一株纳豆激酶生产菌株，酶活为509.64 IU·mL-1。
产纤维素酶细菌的分离筛选与鉴定
产纤维素酶细菌的分离筛选与鉴定吴自祥;张天亮;杨润霞;贾晓蕊;万学瑞;马亚茹;王艳;吴润;王川;魏姣;刘磊;张小丽【摘要】通过筛选获得高产纤维素酶细菌菌株,为纤维素酶制剂研制及纤维素酶工程菌构建提供试验材料.采用刚果红平板从牛羊粪便及腐败的玉米秸秆和木屑中分离产纤维素酶菌株,以DNS法测定酶活,根据酶活复筛产纤维素酶分离菌株;观察分离菌株的形态、染色与培养特性;应用16S rDNA通用引物扩增菌株基因组DNA,测序结果提交GenBank数据库进行Blast比对分析和相似性搜索,作出复筛菌株种的鉴定.结果表明:分离获得16株纤维素酶产量较高的细菌菌株,均为革兰氏阳性菌,菌体呈短杆状、具中央芽孢,经16S rDNA序列比对分析和相似性搜索,鉴定为10株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、6株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens).%In order to provide bacteria for development of cellulase preparations and cellulase engineering,the high-yield cellulase bacteria strains were screened.Separate cellulase producing strains isolated from cow or sheep dung and putrid maize straws or wood chips with Congo red plate to screen cellulase producing strains through the determination of enzyme activity with DNS assay,and observe its shape,dyeing and cultural characteristics.16S rDNA universal primers were applied to amplify genomic DNA of the strain,and to identify the species of rescreening strains.The result indicated that the isolated 16 bacterial strains with higher cellulase production were gram positive,short rod and central spores.In which,10 strains were Bacillus subtilis,6 strain were Bacillus amyloliquefaciens.【期刊名称】《草原与草坪》【年(卷),期】2017(037)002【总页数】6页(P7-11,19)【关键词】纤维素酶;16SrDNA;分离;鉴定;枯草芽孢杆菌;解淀粉芽孢杆菌【作者】吴自祥;张天亮;杨润霞;贾晓蕊;万学瑞;马亚茹;王艳;吴润;王川;魏姣;刘磊;张小丽【作者单位】甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070;甘肃农业大学动物医学学院,甘肃兰州 730070【正文语种】中文【中图分类】Q939.99随着世界经济的快速发展，能源需求量急剧上升，为了实现可持续发展，世界各国均在寻求新的替代能源，如风能、核能、太阳能、生物质能等等。
细菌的分离培养技术
细菌的分离培养技术一、常用培养基的制备（一）肉膏汤培养基 (broth medium)1、成分牛肉浸膏3～5g 蛋白胨10g 氯化钠5g 蒸馏水1000ml2、制法(1)于1000ml蒸馏水中加入上述成份，混合加热溶解。
(2)调整pH为7.4～7.6，煮沸3～5min，用滤纸过滤。
(3)分装于适当容器内，高压灭菌103.43Kpa 20min ,置阴暗处或冰箱中贮存备用。
3、用途供一般细菌培养之用，亦可制备糖发酵管及琼脂培养基用。
（二）肉浸汤培养基(infusion medium)1、成分⑴新鲜牛肉(去脂绞碎)500g 蛋白胨10g⑵氯化钠5g 蒸馏水1000ml2、制法(1)取新鲜牛肉(兔肉)除去肌键、肌膜及脂肪，切成小块后用绞肉机绞碎或用刀剁碎，置于糖瓷或铝制锅中，每500g碎肉加水1000ml混合后置冰箱中过夜。
(2)次日取出肉浸液，搅拌均匀，煮沸30min并常搅拌以免沉淀烧焦。
如蛋白质已凝固，即停止加温，补足失去水分。
(3)用纱布或绒布挤压过滤，使所有肉汁尽量挤出，再用脱脂棉滤入大三角烧瓶内。
(4)在滤液中加入蛋白胨(10g/L)、氯化钠(5g/L)，再加热使其全部溶解。
(5)调整pH至7.6～7.8，煮沸10min，以滤纸过滤。
(6)分装三角烧瓶，塞好棉塞，再用厚纸将瓶口扎好，高压灭菌103.43KPa 20min，冷却后置阴暗或冰箱中保存备用。
3、用途供作基础培养基用，营养较肉膏汤好。
一般营养要求不高的细菌均能生长。
（三）普通琼脂培养基(agar medium)1、成分牛肉浸膏3～5g 蛋白胨10g 氯化钠5g 琼脂20～25g蒸馏水1000ml2、制法⑴将上述成分置于三角烧瓶中，煮沸使其溶解(须防止外溢)，并补足由于蒸发失去的水分。
⑵趁热调整pH至7.6，以绒布过滤，分装试管或烧瓶内，高压灭菌103.43KPa 15min。
⑶琼脂斜面培养基制法：高压灭菌后，趁琼脂尚未凝固前，将其分装在已灭菌的试管内，斜放在台面上，待凝固后即成琼脂斜面培养基。
细菌的分型及其检测技术PPT课件
过夜增殖噬菌体。分离纯化单斑
3次，至平板噬斑形态大小一致
纯第化11页/共70页
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• （三）噬菌体的增殖、保存
1、噬菌体增殖 液体增殖法：定时加入对数期菌体 固体增殖法：同时加大菌体和噬菌体的浓度 2、去除菌体
细菌滤器法和三氯甲烷法
3、噬菌体的保存
冷藏保存：无需防腐剂，分装后7d，不宜超过4w
冷冻干燥：2年
鉴定时不需活分析细菌在体外培养物中的代谢产物如厌氧菌产生的短链脂肪酸色谱图需氧菌的有机酸色谱图等临床标本中检出和鉴定细菌如检测脑脊液中的乳酸对细菌性脑膜炎做出明确诊断等热裂解气相色谱法鉴定细菌将样品干燥高温裂解碎片色谱图鉴定微生物如沙门菌属十种血清型鉴别高分辨气相色谱法分析冷冻条件下细菌的挥发性有机产物鉴定引起冷冻品腐败的微生物液相色谱法基于混合物中各组分对固定相和流动相亲和力的差异分离组分的
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(二)培养基和抗菌药物纸片
1．抗菌药物纸片：商品化，选择直径为，吸水量为20μl的专用药敏纸片，用逐片 加样或浸泡方法使每片含药量达规定要求。含药纸片密封贮存于超低温冰箱。
2．培养基：水解酪蛋白（M-H）培养基是兼性厌氧菌和需氧菌药敏试验标准培养 基，4℃保存。
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第二节 细菌素分型技术
一、概述
• 细菌素(bacteriocin)
• 是某些细菌产生的蛋白质类抗菌物质，这种物质仅 对与产生菌亲缘关系近的细菌有抗菌作用，而对产 生菌本身不敏感。如大肠菌素、绿脓菌素、蜡样芽 胞杆菌素等。
• 抗生素
• 抗菌素是细菌、真菌等微生物在生长过程中为了生 存竞争需要而产生的化学物质,这种物质可保证其自 身生存,同时还可杀灭或抑制其它微生物。细菌产生 的有多粘菌素、抗菌肽等。
细菌分离培养及鉴定PPT课件
菌落的三个类型：
1.光滑型菌落（Smooth type Colony） ：又称 S型
2.粗糙型菌落（Rough type Colony）：又称R 型
3.粘液型菌落（Mucoid type Colony）又称M 型
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S型菌落
2021/8/21
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D群链球菌 草绿色链球菌
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链球菌鉴定途径
β溶血
杆菌肽
CAMP
S
+
A群链球菌
胆汁七 叶苷
+
B群链球菌
D群链球菌
6.5%NaCl
--
+
非肠球菌 肠球菌
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链球菌鉴定途径
γ溶血
胆汁七 叶苷
+
--
D群链球菌
草绿色链球菌
- 6.5%NaCl +
Aseptic area 10-20cm
外焰 内焰 焰芯
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细菌接种的基本程序
灭菌接种环
杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本
沾取标本
接种
灭菌接种环
杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境
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细菌接种法
• 平板划线接种法：
★目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。 ★方法：
无动力 现象
有动力 现象
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斜面接种法
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接种斜面后菌落生长示意图（菌苔）
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革兰染色
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细菌的分离培养与鉴定PPT课件
精品ppt
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硫化氢产生试验(Production of H2S)
将细菌穿刺接种于醋酸铅培养基中， 37℃培养24h后观察结果。有些细菌能分解 培养基中的含硫氨基酸，生成硫化氢，穿刺 部位呈黑褐色，是为反应阳性。培养基颜色 无变化，则为阴性。
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尿素分解试验(Splitting of urea)
➢ 相邻两区要有重叠区域。 ➢ 结果观察：观察各区的生长情况，并看是
否有单一菌落长出；菌落的形态、颜色、 大小、边缘、透明度都需记录。
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8
平皿送37℃温箱培养24小时 结果(要求)
两种单个菌 落
分四区 无杂菌 琼脂不破
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9
℃
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3.2 细菌的接种
斜面接种法 该法主要用于单个菌落的纯培养、 保存菌种或观察细菌的某些特性。
将细菌接种于尿素培养基中，37℃培养 18～24h。变形杆菌能迅速(2～4h)分解尿素 产生大量的氨，使培养基变碱而呈紫红色， 是为阳性反应。
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实验后处理
将接种针和接种环放入原位，摆放整齐！ 将所有的原菌种管放入自己组的红框试管架
中ห้องสมุดไป่ตู้ 将自己接种的培养物集中在试管架中统一放
入培养箱中37度培养！ 关照明和电扇开关，请勿关实验室总电
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糖发酵试验
不同细菌分解糖类的能力和代谢产物不同。 例如大肠杆菌能发酵葡萄糖和乳糖；而痢疾 杆菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖。即使 两种细菌均可发酵同一糖类，其结果也不尽 相同，如大肠杆菌有甲酸脱氢酶，能将葡萄 糖发酵生成的甲酸进一步分解为CO2和H2， 故产酸并产气；而痢疾杆菌缺乏该酶，发酵 葡萄糖仅产酸不产气。
细菌分离与鉴定方法ppt课件
在干净的培养皿中放一张滤纸，滴上二甲基对本二胺的1%水溶 液，仅使滤纸湿润即可，不可过湿。用白金丝接种环（不可用镍 铬丝）取18～24小时的菌苔，涂抹在湿润的滤纸上，在10s内涂 抹菌苔现红色者这为阳性，(四甲基对本二胺呈蓝色)，10～60s 现红色者为延迟反应，60s以上现红色者不计，按阴性处理。
细菌分离与鉴定方法
—嗜水气单胞菌分离鉴定
分离方法
细菌的生长状况观察
氧化酶试验
AHM鉴别培养
吲哚试验
革兰氏染色法
糖发酵试验
脱脂奶平板试验（酪蛋白胨可化编试辑课验件 ）
1
分离方法
用途:
• 在检查含两种或两种以上的待检材料（如肝、脾、肾、 心、肌肉等）中的某种细菌时，须先将待检材料进行 分离培养。常用的分离培养方法是琼脂平皿分区划线 法，是借划线将混杂的细菌在琼脂平皿表面分散开来， 使个别的细菌能固定在某一点，经培养生长繁殖后形 成单个菌落，以达到分离获得纯种细菌的目的。
可编辑课件
2
分离方法
具体操作方法如下：
• 点燃酒精灯，右手执笔式握持接种环（见图1），在酒精灯火焰上烧灼接种环， 待冷，取待测菌液一环。
• 左手抓握琼脂培养基平皿，用手掌将平皿的底固定，用手指将平皿的盖略抬
起一些，进行接种（见图2）。或者，将平皿的盖留在实验台上，尽量直立平
皿靠近酒精灯火焰，右手持接种环在琼脂表面的一端（即1区，约占整个平皿
• （1）取载玻片一张，试净。
• （2）用灭菌的接种环取生理盐水一滴，放于载玻片的中央（如被检材料是液体，可 不加生理盐水）。
• （3）左手斜持菌种管，右手将菌种管棉塞稍加转动，以便拔下。
• （4）右手持接种环，经火焰灭菌后，用右手小指拔开菌种管棉塞，管口通过火焰， 用接种环取少量菌（切不可过多）。
沙门氏菌和志贺氏菌的检测
➢ 斜面红色、底层黄色，出现部分黑色或全部黑色 ➢ 斜面红色、底层黄色，无黑色 ➢ 斜面、底层均黄色，出现部分黑色或全部黑色
除沙门菌外，变形杆菌、柠檬酸盐菌、志贺菌等也可 出现上述反应。 • 吲哚试验：阴性
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志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生H2S。 大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生 H2S 。 沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖、蔗糖，大多数产生H2S ， 多数产气。 下面照片所示2-3-4，可能是大肠杆菌、沙门氏菌还是志贺氏菌？
• 方法 将受检血清用生理盐水作倍比稀释，每个稀释度需作 出努力个复管，分别加入等量的伤寒沙门菌O、H抗原及副伤 寒沙门菌甲、乙、丙的H抗原进行试管内凝集，凡血清最高稀 释度出现明显凝集者为凝集将价。
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1）正常凝集价 正常人由于隐性感染或预防接种，血清中通常可含有一定水平的凝集 抗体，正常的凝集价可因不同地区而有差异
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抗原构造
• 菌体抗原（o）：不被乙醇、0.1%石炭酸所破坏。与
特异性抗血清呈颗粒状凝集，形成慢，不易摇散。现 已知有50多种，多数沙门菌含有两种以上的O抗原， 有的O抗原是一种菌独有的，有的是几种菌共有的， 凡含有共同特异性抗原成分的血清型归为一个群，可
将沙门菌化分为42群，按A-Z排列，Z以后的顺序以 O51-O67表示。引起人类沙门菌病的95%以上都在A-
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M抗原：粘液抗原，在菌型鉴定上无特 殊意义。
5抗原：
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4.抵抗力
• 不强，加热60℃1h，或 65℃15~20min即被杀死。在水中能存 活2~3周，在粪便中可存活1~2月。对 胆盐和煌绿等染料有抵抗力。因此可用 于制备沙门菌的选择培养基。
临床常见苛养菌的培养与鉴定
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1.4 肺炎链球菌-药敏分析
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1.4 肺炎链球菌-药敏分析
细菌生长区
E test 塑料 条
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MIC法试验条件
方法 ：微量稀释法直接上机(GP-68）及E-test法 接种物：0.5麦氏标准 孵育 ：35±2℃，5%CO2 ；20-24h
2. 菌落形态：35℃，18～24h培养形成微
小、无色透明、不溶血，呈露滴样小 菌落。 3. 涂片染色：革兰阴性小杆菌，无芽胞。 粘液型菌株有荚膜。
第20页
2.3 流感嗜血杆菌-检测方法
卫星试验 卟啉试验
糖发酵试验
吲哚快速法试验 尿素酶试验
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2.3 流感嗜血杆菌-检测方法
卫星试验
X因子 流感嗜血杆菌与金黄色葡 萄球菌在血琼脂培养基上共 同培养时可见卫星现象，因 葡萄球菌能合成V因子，使 其菌落周围生长的流感嗜血 杆菌菌落较大，远离者则较 小。
面光滑（有些菌株可表现为粘液状）的菌 落;培养48h后，脐凹状菌落。 3. 涂片染色：G+球菌,矛头状 ,成双或链状排 列，尖端向外。
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1.2 肺炎链球菌-生物学性状
1. 荚膜是肺炎链球菌的主要毒力因子之一。
2. 根据荚膜特异性多糖抗原性，分为近90个血清
型，成人致病以1--9型及12型最多，其中3型
症。
3. 常见送检标本类型有痰、咽拭子、尿液、脑脊液、血液、 穿刺液 。
易感人群：小于5岁及大于65岁
4. 肺炎球菌离开人体后很易死亡，痰培养分离率很低。
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1.2 肺炎链球菌-生物学性状
1. 培养条件：CO2环境，哥伦比亚血平板。 2. 菌落形态：18-24h后血平板上形成草绿色
高中生物 第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》课件13 浙科版选修1
①常用的固体培养基:
琼脂固体培养基. ②微生物在固体培养基
表面生长,可以形成
肉眼可见的菌落.
第七页，共38页。
2.培养基内所含的基本物质
• (1)水 • (2)碳源
• (3)氮源
• (4)无机盐
第八页，共38页。
3.培养基内所需的其他条件 • (1)pH值 • 如:培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱
α-固定化酶的使用 α-固定化酶 条件和效果
枯草杆菌
果酒和果醋的制作 果酒:酵母菌+天然 干酵母 果醋:醋化醋杆菌 菌种或醋曲
泡菜的腌制和亚硝 假丝酵母、乳酸菌 天然微生物 酸的测定
植物组织培养
菊花
第二页，共38页。
实验1 大肠杆菌的培养和分离
• 实验目的： • 1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进
的铅笔上，冷却后使培养基形成斜面。
第二十页，共38页。
步骤:
１、配制培养基; 培养基灭菌、器具灭菌
2、冷却，倒平板 (编号,无菌环境操无菌环境操作)
４、划线分离、恒温培养箱培养12~24h
(无菌环境操作)
５、接种斜面,4℃冰箱保存(目的:为了保存菌种)
6、实验完成后，接触过细菌的器皿均应灭菌处理后丢失。
4℃冰箱保存。
视频
6.实验完成后，接触过细菌的器皿均应灭菌处 理后丢弃。 目的：为了防止实验菌残留于接种环而污染环境 和感染实验人员。
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1为了获得纯净的培养物，其关键是防止外来杂菌的入侵 污染： 1）培养皿； 2）培养基； 3）接种过程是无菌的 2请思考：培养基、培养皿、手、接种环分别如何消毒或 灭菌？
细菌的培养和分离
二.接种技术（分离纯化技术）
方法 用具
方法
平板划线法
接种环或接种针
分区划线，形成单细 胞菌落。划线前后和 两次划线之要间灭菌
稀释涂布平板法 移液管，涂布器
将菌液进行梯度稀释 后(每次稀释10倍) ， 取样，用涂布器涂
用途
分离，鉴别
分离，鉴别，计数
梯度（系列）稀释：（1）方法：取样品1ml，放入9ml无 菌水中，每次稀释10倍，重复操作。
第二部分.细菌的培养技术 (分离和计数)
第一节.细菌的培养技术(分离和计数)
一.培养基的配制技术 (一)微生物的营养物质
营养物质
种类
功能
碳 无机： CO2、NaHCO3 提供碳骨架,用于合成 源 有机： 糖类,脂肪,蛋白质 有机物，提供能源物质
氮 无机： 铵盐、硝酸盐、N2 源 有机： 尿素,牛肉膏,蛋白胨
实验４：将突变体ａ1和ａ2一起接种于一般培养基， 数日后出现菌落。 探究实验４中出现菌落的原因(要求：提出问题， 提出假说,设计实验程序，预期实验结果，分析相 应实验结果得出的结论)。
第一节.细菌的培养技术(分离和计数)
(三)固体平板培养基配制程序 1.称量：天平 2.溶解：加热 3.调PH值：PH试纸、NaOH、HCl。 4.包扎灭菌：高压蒸汽灭菌 5.倒平板：培养皿，超净台 6.固体平板培养基应倒置存放
北京地区宠物犬布鲁氏菌的分离与鉴定
北京地区宠物犬布鲁氏菌的分离与鉴定王宁;韩吉寿;吕艳丽;吴清民【摘要】自2012年11月至2013年6月,本实验室对北京市某动物医院送检的疑似患布鲁氏菌病宠物犬的38份血清进行抗体检测,22份阴道分泌物和2份抗凝血进行细菌分离.结果显示,18只宠物犬抗体检测为阳性,并且从5只抗体阳性的宠物犬体内还各分离到一株布鲁氏菌,其中4株为犬种布鲁氏菌,另一株生物型尚待确定.通过调查及临床症状的观察,推测病犬排泄物、流产物或者与病犬交配等可能导致布鲁氏菌病的传播,这为北京市宠物犬布病的流行性调查提供了一定的数据支持.【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2014(036)006【总页数】3页(P490-492)【关键词】宠物犬;犬种布鲁氏菌;分离鉴定【作者】王宁;韩吉寿;吕艳丽;吴清民【作者单位】中国农业大学动物医学院农业部人畜共患病重点开放实验室,北京100193;中国农业大学动物医学院农业部人畜共患病重点开放实验室,北京100193;中国农业大学动物医学院农业部人畜共患病重点开放实验室,北京100193;中国农业大学动物医学院农业部人畜共患病重点开放实验室,北京100193【正文语种】中文【中图分类】S852.61布鲁氏菌病(以下简称“布病”)是由布鲁氏菌引起的人兽共患病，该病流行广泛，不仅影响畜牧业的发展，还直接威胁人类健康和公共卫生安全。
2006年之前将布鲁氏菌属分为6个种19个生物型，即羊种(B.melitensis)1-3型，牛种(B.abortus)1-7和9型，猪种(B.suis)1-5型，绵羊附睾种(B.ovis)、犬种(B.canis)、沙林鼠种(B.neotomae)各1个生物型。
目前增加了4个新种：B.pinipedialis(分自鳍足类)、B.ceti(分自鲸鱼和海豚)、B.microti(分自田鼠)、B.inopinata(分自人)[1]，这4个种尚未分型。
牛种、猪种和羊种布鲁氏菌均可以引起人的布病[2]。