常用限制性内切酶和DNA聚合酶外文字符的规范编排
分子生物学实验常用工具酶总结
现代分子生物学实验手册工具酶基因工程：在人工可以控制条件下，将基因剪切或重新组合，再导入另一生物体内，使这些基因在其中表达并遗传下去的一门技术。
核心：对基因进行人工切割、连接和重新组合，构建重组DNA。
工具酶：在基因工程的重组DNA过程中，所需要用到的酶的统称。
一、限制性内切酶（restriction endonuclease）主要功能：对外源性的双链DNA进行切割、水解，不允许外源性DNA存在于细菌自身细胞内。
（这种酶能对在自身细胞内存在的DNA种类给予限制——限制性内切酶）限制-修饰系统：合成限制性内切酶的细胞，其自身的DNA不受酶的切割，这是因为细菌细胞还会合成一种修饰酶，可以对自身DNA进行修饰，即改变DNA 原来具有的可以被限制性内切酶识别的核酸顺序结构，从而不被限制性内切酶识别及切割、水解。
保护自身遗传物质稳定的机制。
限制性内切酶：从原核生物中发现的，约600种，可识别108种不同的特定DNA顺序。
以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键，产生DNA片段的5’端为P，3’端为- OH。
命名：获得该酶的细菌属名的第一个字母（大写）+该菌种名的前两个字母(小写)+株系的字母（小写）或数字+罗马数字（同一株菌种不同内切酶的编号）例：细菌属名细菌种名菌株名称限制酶名称Arthrobacter luteus Alu I Escherichia coli RY13Eco R IH Ham H IBacillus amyloliquefaciensHaemophilus influenzae Rd Hin d III（一）三种常用内切酶1. I型限制性内切酶同时兼有切割DNA的功能和修饰酶的修饰功能。
在酶的识别位点上，若DNA两条链菌没有发生甲基化，则行使内切酶的功能，对DNA进行切割，同时转变成ATP酶。
若DNA双链中有一条链已发生甲基化，则此类酶显示修饰酶的作用，对另一条DNA进行甲基化修饰，然后在行切割功能。
基因工程常用的工具酶
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识别序列呈典型的旋转对称型回文结构
EcoR I的切割位点
EcoR I的识别序列
5‘ … G C T G A A T T C G A G … 3’ 3‘ … C G A C T T A A G C T C … 5’
回文结构:两条核苷酸链的核酸序列呈双重旋转对称排列的 DNA双螺旋结构
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第三节 DNA聚合酶
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DNA聚合酶：能够催化DNA复制和修复DNA分子损伤 的一类酶
❖作用特点
能够把脱氧核苷酸分子连续的加到DNA分子引物链的3’-OH末端，催 化核苷酸的聚合
❖作用条件
➢ 脱氧核苷酸原料：四种脱氧核苷三磷酸dNTP（dATP、dTTP、 dCTP、dGTP）
属名
种名
株名
Haemophilus influenzae d
HindΙ、 HindⅡ、 Hind Ⅲ
不同限制修饰系统
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三、Ⅱ型限制酶的特性-识别序列
识别双链DNA分子中特定的4 - 8对核苷酸序列
EcoR I的切割位点
EcoR I的识别序列
5‘ … G C T G A A T T C G A G … 3’ 3‘ … C G A C T T A A G C T C … 5’
5‘ HO 3‘ HO
T4-PNP
5‘ p 3‘ HO
OH 3‘ OH 5‘
Mg2+ pppATP（g-32P-ATP）
OH 3‘
5‘ HO
BAP / CIP
常见限制性内切酶识别序列
常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)（BamHI、EcoRI、HindII I、NdeI、XhoI等）Time：2009-10-22 PM 15:38Author:bioerHits: 7681 times在分子克隆实验中，限制性内切酶是必不可少的工具酶。
无论是构建克隆载体还是表达载体，要根据载体选择合适的内切酶（当然，使用T 载就不必考虑了）。
先将引物设计好，然后添加酶切识别序列到引物5' 端。
常用的内切酶比如Bam HI、EcoRI、HindII I、NdeI、XhoI等可能你都已经记住了它们的识别序列，不过为了保险起见，还是得查证一下。
下面是一些常用的II型内切酶的识别序列，仅供参考。
先介绍一下什么是II型内切酶吧。
The Type II restri ction system s typica lly contai n indivi dualrestri ction enzyme s and modifi catio n enzyme s encode d by separa te genes. The Type II restri ction enzyme s typica lly recogn ize specif ic DNA sequen ces and cleave at consta nt positi ons at or closeto that sequen ce to produc e 5-phosph atesand 3-hydrox yls. Usuall y they requir e Mg 2+ ions as a cofact or, althou gh some have more exotic requir ement s. The methyl trans feras es usuall y recogn ize the same sequen ce althou gh some are more promis cuous. Threetypesof DNA methyl trans feras es have been foundas part of Type II R-M system s formin g either C5-methyl cytos ine, N4-methyl cytos ine or N6-methyl adeni ne.酶类型识别序列ApaIType II restri ctionenzyme5'GGGCC^C 3'BamHIType II restri ctionenzyme5' G^GATCC3'BglIIType II restri ctionenzyme5' A^GATCT3'EcoRIType II restri ctionenzyme5' G^AATTC3'HindII IType II restri ctionenzyme5' A^AGCTT3'KpnIType II restri ctionenzyme5' GGTAC^C 3'NcoIType II restri ctionenzyme5' C^CATGG3' NdeIType II restri ctionenzyme5' CA^TATG 3'NheIType II restri ctionenzyme5' G^CTAGC3'NotIType II restri ctionenzyme5' GC^GGCCGC 3'SacIType II restri ctionenzyme5' GAGCT^C 3'SalIType II restri ctionenzyme5' G^TCGAC3' SphIType II restri ctionenzyme5' GCATG^C 3'XbaIType II restri ctionenzyme5' T^CTAGA3'XhoIType II restri ctionenzyme5' C^TCGAG3'要查找更多内切酶的识别序列，你还可以选择下面几种方法：1. 查你所使用的内切酶的公司的目录或者网站；2. 用软件如：Primer Premie r5.0或Bioe dit等，这些软件均提供了内切酶识别序列的信息；3. 推荐到NEB的REBA SE数据库去查（网址：http://rebas/rebase/rebase.html）当你设计好引物，添加上了内切酶识别序列，下一步或许是添加保护碱基了，可以参考：NEB公司网站提供的关于设计PC R引物保护碱基参考表下载（也可见图片）双酶切buf fer的选择（MBI、罗氏、NEB、Prom eg a、Takara）再给大家推荐一种新的不需要连接反应的分子克隆方法，优点包括：①设计引物不必考虑选择什么酶切位点；②不必考虑保护碱基的问题；③不必每次都选择合适的酶来酶切质粒制备载体；④而且不需要D NA连接酶；⑤假阳性几率低（因为没有连接反应这一步，载体自连的问题没有了）。
NEB常用酶介绍
NEB常用酶介绍NEB（New England Biolabs）是一家生物技术公司，专注于酶和相关试剂的研发和生产。
该公司开发了许多常用酶，其中一些被广泛应用于分子生物学和生物技术领域。
下面是一些常见的NEB酶的介绍。
1. 限制性内切酶（Restriction Enzymes）：限制性内切酶是一类能够识别特定DNA序列并在特定位点切割DNA的酶。
NEB生产了许多常见的限制性内切酶，如EcoRI、HindIII、BamHI等。
这些酶在DNA分析、克隆以及基因组工程等领域中广泛应用。
2. DNA连接酶（DNA Ligases）：DNA连接酶能够将两条DNA分子连接起来，形成一个连续的DNA链。
NEB提供了多种DNA连接酶，如T4 DNA连接酶、Quick DNA连接酶等。
这些酶在DNA克隆和结构修复等实验中起到至关重要的作用。
3. 反转录酶（Reverse Transcriptases）：反转录酶能够将RNA模板逆转录合成DNA，从而产生相应的cDNA。
NEB开发了多种反转录酶，如M-MuLV反转录酶、AMV反转录酶等。
这些酶广泛应用于转录组学、基因表达研究以及RT-PCR等实验中。
4. 核酸聚合酶（DNA Polymerases）：核酸聚合酶是一类能够在DNA合成过程中将新的核苷酸单元加入到已存在的DNA链上的酶。
NEB提供了多种高质量的核酸聚合酶，如Phusion DNA聚合酶、Taq DNA聚合酶等。
这些酶在PCR、DNA扩增和DNA测序等实验中被广泛使用。
5. 电泳酶（Nucleases）：电泳酶能够在DNA或RNA的特定位置切割核酸链。
NEB生产的电泳酶包括RNase A等。
这些酶广泛应用于核酸纯化、RNA降解实验以及电泳分析中。
6. 磷酸二酯酶（Phosphatases）：磷酸二酯酶能够催化磷酸二酯键的水解反应，从而使DNA或RNA失去3'末端的磷酸基团。
NEB提供了多种磷酸二酯酶，如CIP碱性磷酸酯酶等。
基因工程中常用的三种工具酶
一、限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）1．定义：凡能识别和切割双链DNA分子内特定核苷酸序列的酶，也称为限制酶（restriction enzyme，RE）。
2．类型：来自原核生物，有三种类型。
Ⅰ型：兼具甲基化修饰和ATP参与的核酸内切酶活性，随机切割。
Ⅱ型：大多能特异识别4～6个核苷酸序列（回文结构），最大识别序列为8个核苷酸，如SfiI、NotI；但有近10种Ⅱ型限制酶的识别序列为非回文结构，如SfaNI、MnlI等，Ⅱ型限制酶均可作为基因工程的工具酶。
另有一些来源不同的限制酶的识别位点是相同的核苷酸序列，将这类酶特称为同工异源酶（isoschizomers）或同裂酶。
同工异源酶切割产生相同的末端；有一些同工异源酶对于切割位点上的甲基化碱基的敏感性有所差别，故可用来研究DNA 甲基化作用，如SmaI和XmaI；HpaII和MspI；MboI和Sau3AI是成对的同工异源酶；其中HpaII和MspI是一对同工异源酶，其识别位点是CCGG。
与同工异源酶对应的一类限制酶，它们虽然来源各异，识别序列也各不相同，但都产生出相同的粘性末端，称为同尾酶（isocaudamers）。
常用的限制酶BamHI、BclI、BglII、Sau3AI和XhoII就是一组同尾酶，它们切割DNA之后都形成由GATC4个核苷酸组成的粘性末端。
显而易见，由同尾酶所产生的DNA片段，是能够通过其粘性末端之间的互补作用而彼此连接起来的，因此在基因克隆实验中很有用处。
但必须指出，由两种同尾酶消化产生的粘性末端，重组之后所形成的序列结构再不能被原来的任何一种同尾酶所识别。
Ⅲ型：功能基本同Ⅰ型，但为特定位点切割。
三种限制酶的区别如下表所示：Ⅰ型Ⅱ型Ⅲ型DNA底物dsDNA dsDNA dsDNA辅助因子Mg2+,A TP,SAM Mg2+ Mg2+,A TP识别序列特异特异特异切割位点非特定（于识别序列前后100~1000bp范围之内）特定（切割于识别序列之中或近处，固定位点）特定（切割点在识别序列后25~75bp处）与甲基化作用的关系内切酶蛋白同时具有甲基化酶的作用酶蛋白不具有甲基化作用内切酶蛋白同时具有甲基化酶的作用3．命名：第一个字母取自产生该酶的细菌属名，用大写；第二、第三个字母是该细菌的种名，用小写；第四个字母代表株。
《DNA 重组技术的基本工具》 讲义
《DNA 重组技术的基本工具》讲义DNA 重组技术，也被称为基因工程，是现代生物技术的核心之一。
它让我们能够在分子水平上对生物的遗传物质进行操作和改造，为人类带来了许多前所未有的机遇和可能性。
而要实现 DNA 重组，就离不开一系列的基本工具，下面我们就来详细了解一下这些工具。
一、限制性内切酶限制性内切酶，简称限制酶，是 DNA 重组技术中最重要的工具之一。
它就像是一把极其精准的“分子剪刀”，能够识别特定的核苷酸序列，并在特定的位点将 DNA 分子切断。
限制酶具有高度的特异性，每种限制酶只能识别和切割特定的DNA 序列。
这些特定的序列通常被称为识别序列或识别位点，它们具有回文结构，即从两条链的 5'端向 3'端读取，序列是相同的。
例如，EcoRⅠ限制酶识别的序列是 5'GAATTC-3'，切割位点在 G和 A 之间。
当限制酶作用于 DNA 分子时，会产生两种类型的末端：黏性末端和平末端。
黏性末端是指被限制酶切割后，产生的两条链的末端具有互补的单链突出部分。
这种末端很容易通过碱基互补配对重新连接起来，这在DNA 重组中非常重要。
平末端则是指切割后产生的两条链的末端是平齐的，相对来说，连接起来的难度稍大一些。
限制酶的发现和应用，为 DNA 重组技术的发展奠定了基础。
通过使用不同的限制酶，可以将不同来源的 DNA 片段切割成具有相同末端的片段，从而为后续的连接创造条件。
二、DNA 连接酶有了限制酶把 DNA 分子切割开，还需要有“胶水”把它们粘起来，这就是 DNA 连接酶的作用。
DNA 连接酶能够将两个具有互补黏性末端或平末端的 DNA 片段连接在一起，形成一个完整的 DNA 分子。
在连接过程中，DNA 连接酶催化相邻核苷酸之间形成磷酸二酯键，从而实现 DNA 片段的连接。
常见的 DNA 连接酶有两种：T4 DNA 连接酶和大肠杆菌 DNA 连接酶。
T4 DNA 连接酶既能连接黏性末端，也能连接平末端，但连接平末端的效率相对较低；大肠杆菌 DNA 连接酶则只能连接黏性末端。
基因工程试题及答案解析
基因工程试题及答案解析一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶是：A. 蛋白酶B. DNA聚合酶C. 核糖核酸酶D. 限制性核酸内切酶答案：D2. 基因工程中，用于将目的基因导入植物细胞的方法是：A. 电穿孔法B. 显微注射法C. 农杆菌转化法D. 脂质体介导法答案：C3. 下列哪项不是基因工程的基本步骤？A. 目的基因的获取B. 基因表达载体的构建C. 目的基因的扩增D. 目的基因的检测与鉴定答案：C二、填空题1. 基因工程中，常用的运载体有____、____和____。
答案：质粒、噬菌体、动植物病毒2. 基因工程中，常用的筛选标记基因有____、____和____。
答案：抗性基因、荧光蛋白基因、酶基因三、简答题1. 简述基因工程的应用领域。
答案：基因工程的应用领域包括农业、医学、工业、环境保护等。
在农业中，基因工程可以用于培育抗病、抗虫、抗旱等性状的作物；在医学领域，基因工程可以用于生产重组蛋白药物、基因治疗等；在工业上，基因工程可以用于生产酶、疫苗等；在环境保护方面，基因工程可以用于生物修复、污染物降解等。
2. 基因工程中，如何确保目的基因在宿主细胞中正确表达？答案：确保目的基因在宿主细胞中正确表达需要考虑以下几个方面：首先，目的基因需要有合适的启动子和终止子，以确保其在宿主细胞中得到正确转录和终止；其次，需要考虑目的基因的密码子偏好性，以确保其在宿主细胞中能被高效翻译；再次，需要考虑目的基因的稳定性，避免其在宿主细胞中被降解；最后，还需要考虑目的基因产物的后翻译修饰和定位。
四、论述题1. 论述基因工程在医学领域的应用及其可能带来的伦理问题。
答案：基因工程在医学领域的应用主要包括生产重组蛋白药物、基因治疗、疾病诊断和基因疫苗等。
重组蛋白药物可以用于治疗糖尿病、侏儒症等疾病；基因治疗可以用于治疗遗传性疾病；疾病诊断可以通过基因检测来实现；基因疫苗可以用于预防某些遗传性疾病。
然而，基因工程的应用也带来了伦理问题，如基因隐私权、基因歧视、基因治疗的安全性和有效性等。
外文字符使用规范
外文字符使用规范1 须写成斜体的外文字符(1)生物学中拉丁学名的属名和种名(包括亚属、亚种、变种)应斜体，例如大肠杆菌Escherichia coli、幽门螺杆菌Heliobacter pyfor、毛冬青Ilex pubescens Hook. et Arn.var. glabra H. T. Chang等。
(2)各种基因的缩写符号应斜体(基因表达产物缩写符号应写成正体)。
(3)限制性内切酶缩写符号中前3个字母应斜体，例如Hin dⅢ(来自流感嗜血杆菌Rd株,Haemophilus influenzae)、Eco RⅠ（来自大肠杆菌，Escherichia coli）、Bam HⅠ、SalⅠ等。
(4)各种统计学符号应斜体，例如样本数n、均数x－、样本差s、t检验、F检验、概率P、相关系数r（注意r、r2、R、R2的区别）等。
(5)各种物理量的量符号应斜体(pH用正体除外)，例如温度t（注：摄氏温度，单位℃。
热力学温度为T，单位K）长度L(l)、面积A(或S)、体积V、速度v、质量m、时间t、压力p、相对分子质量M r、物质的量浓度c B等。
(6)化学中表示旋光性、分子构型、构象、取代位元素等的符号应斜体。
这一类符号后常须加半字线“-”。
如反式trans-、顺式cis-、n-(normal，正)、o-(ortho，邻位)、p-(para，对位)、d-(dextro，右旋)、l-(levo，左旋)、ap-（反叠构象）、sp-（顺叠构象）、Z-（双键的顺异构）O-(oxygen，氧)、N-(nitrogen，氮)，例如n-butyl acetate(醋酸正丁酯)、、d-amphetamine(右旋苯丙胺)、l-dopa(左旋多巴)、o-cresol(邻-甲酚)、p-aminosalicylic acid(对氨基水杨酸)N-methylacetanilide(N-甲基乙酰苯胺)、3-O-methy1-adrenaline(3-O-甲基肾上腺素)。
分子生物学试卷（含答案）
第1页（共4页）分子生物学试卷姓名：姓名：__________ __________ __________ 考试时间：考试时间：考试时间：_______ ___ _______ ___试卷满分 100 分，考试时间 60 分钟；书写要工整、清楚、标点符号使用正确。
题型填空题判断题单选题名词解释简答题论述题总分得分一、填空题，根据题意，将正确答案补充完整(本大题满分20分,每小题2分)1. 1. 反式作用因子可划分为反式作用因子可划分为反式作用因子可划分为( ()、组织特异性转录因子和( )三类。
2. 2. 分子克隆中常用的工具酶有分子克隆中常用的工具酶有分子克隆中常用的工具酶有( ()、( )、( )、( )。
3. 3. 常用的核酸探针包括常用的核酸探针包括常用的核酸探针包括( ()、( )和( )。
4. 4. 限制性核酸内切酶的作用特点是识别位点的限制性核酸内切酶的作用特点是识别位点的限制性核酸内切酶的作用特点是识别位点的DNA DNA DNA序列呈二重旋转对称，即具有序列呈二重旋转对称，即具有( )、切割、切割DNA DNA DNA均产生含均产生含均产生含( ( )和3'-3'-羟基的末端、错位切割产生具有羟基的末端、错位切割产生具有羟基的末端、错位切割产生具有5'-5'-5'-或或3'-3'-突出的粘性末端；而沿对称轴切割双链突出的粘性末端；而沿对称轴切割双链突出的粘性末端；而沿对称轴切割双链DNA DNA DNA产生平头末端，也称产生平头末端，也称产生平头末端，也称( ()、少数不同的限制酶可识别和切割相同的同的限制酶可识别和切割相同的( ( )。
5. 5. 顺式作用元件按功能可划分为顺式作用元件按功能可划分为顺式作用元件按功能可划分为( ()、( )、( )和( )。
6. 6. 影响影响影响PCR PCR PCR的因素有的因素有的因素有( ( )、( )、耐热、耐热DNA DNA DNA聚合酶活性和用量、聚合酶活性和用量、聚合酶活性和用量、( ()、( )、PH PH、温度、、温度、、温度、( ()。
基因工程中工具酶.限制酶的应用ppt课件
以其功能可分为三大类：核酸降解酶类、核酸合 成酶类、核酸修饰酶类
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第一节
限制性核酸内切酶和DNA片段化（九个问题）
一、限制性内切酶的发现 二．核酸内切限制酶的类型 及切割频率 三．核酸内切限制酶的命名原则 四.Ⅱ型核酸限制性内切酶的基本特性 五．影响核酸内切限制酶活性的因素（5点+1） 六. 限制性内切酶反应的终止 七、限制酶消化反应的步骤 八. 使用限制酶的注意点（4点） 九、DNA的片段化
核酸内切限制酶的类型及切割频率1类型特性iiiii型3种不同的亚基单链多肽2种不同的亚基徐师大屈艾老师制作11切割位点距离识别位点的情况在距寄主特异性位点至少1000bp地方可能随机地切割位于寄主特异性位点内或其两侧距寄主特异2426bp处甲基化作用识别未甲基化的序列进行核酸内切酶切割序列特异的切割不是dna克隆中的用处无用十分有用用处不大徐师大屈艾老师制作122切割频率是指某限制性核酸内切酶在dna分子中预期的切割概率
位于寄主特 异性位点内 或其两侧
寄主特异性 的位点
距寄主特异 性位点3，端 24~26bp处
寄主特异性 的位点
识别未甲基 能
能
能
化的序列进
行核酸内切
酶切割
序 列 特 异 的 不是
是
是
切割
DNA 克 隆 中 无用 的用处
徐师大-屈艾老师制作
十分有用
用处不大
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2、切割频率
---是指某限制性核酸内切酶在DNA分子 中预期的切割概率。有了它，又知道DNA序 列的长度，就可以估算该限制性核酸内切酶 在某种DNA分子中的切点数N。
生物重组dna技术的基本工具
生物重组DNA技术是利用基因工程方法对DNA分子进行重新组合和修改的技术。
下面是生物重组DNA技术中常用的基本工具：限制性内切酶（Restriction Enzymes）：这些酶能够识别DNA的特定序列，并在该序列上切割DNA分子。
限制性内切酶可以用于切割目标DNA和载体DNA，以便进行重组。
DNA连接酶（DNA Ligase）：这种酶能够将两条DNA分子的断裂末端连接在一起，形成一个完整的DNA分子。
DNA连接酶用于将目标DNA片段与载体DNA片段连接起来，构建重组DNA。
DNA聚合酶（DNA Polymerase）：DNA聚合酶能够在DNA模板上合成新的DNA链。
在重组DNA技术中，DNA聚合酶可用于扩增目标DNA片段，进行PCR（聚合酶链式反应）等操作。
电泳装置（Electrophoresis Apparatus）：电泳装置用于将DNA分子按照大小进行分离和纯化。
通过电泳，可以根据目标DNA的大小和电荷特性对其进行分离和检测。
载体（Vector）：载体是用于携带和复制重组DNA的DNA分子，如质粒或病毒。
载体提供了重组DNA在细胞中复制和表达的环境。
转化（Transformation）：转化是将重组DNA导入目标细胞中的过程。
通过转化，重组DNA 可以被细胞摄取并稳定地存在于细胞内。
DNA测序技术（DNA Sequencing）：DNA测序技术用于确定DNA分子的核酸序列。
它是生物重组DNA技术中重要的工具，可用于验证重组DNA的正确性和准确性。
这些基本工具在生物重组DNA技术中起着关键的作用，使研究人员能够对DNA进行精确的操作和修改，从而实现基因的克隆、重组和表达。
基因工程中常用术语的命名规则
基因工程中常用术语的命名规则肖业臣 魏剑波(华南农业大学蚕丝科学系广东广州510642)1 基因的命名基因符号最初用英文的第1个字母的大写表示。
例如,T代表苏氨酸,T+代表苏氨酸合成酶野生型基因, T-代表苏氨酸合成酶缺陷型基因。
但随着基因数目的增多及众多突变类型的出现,这一套符号已经不够用了。
1906年,M.D e m erec等提出了一套新的基因命名规则:1)每个基因座位用3个小写斜体字母表示,这3个字母来自说明基因特性单词的前3个字母;2)表型相同基因不同的突变型,用3个字母后面加了1个大写字母表示;3)同一基因的不同突变位点用基因符号后面所加的阿拉伯符号表示,如果突变位点所属的基因还不确定,那么大写字母用一短线代替。
根据以上命名规则,组氨酸合成酶基因用h is表示,各个组氨酸合成酶基因用h is A、h is B表示;色氨酸合成酶基因用trp表示,各个色氨酸合成酶基因用trpA、trpB等表示,基因trpA的各个突变型分别用trpA23、trpA46表示。
如果一些基因的特性无法用1个词来表示,就要用2个或3个词的前3个首写字母来表示。
例如,R p l表明基因与核糖体的大亚基有关(由ribo s om al p ro tein large 3个单词的首字母组成)。
R p s则表明基因与核糖体的小亚基有关(由ribo s om al p ro tein s m all3个单词的首字母组成);ri m则与核糖体的装配、成熟有关(由ribo s o2 m al modificati on2个单词的首字母组成)。
表示突变型基因的符号,应该在座位符号右上角加上“+”或“-”来表示。
例如h is A-表示组氨酸缺陷型基因,h is A+表示相应的野生型基因,与链霉素抗药型有关的基因座位称为strR(或str2r),敏感的野生型基因是strS(或str2s)。
另外还有一些常见的基因符号代表特定的意义,譬如,inc代表不亲和性;rep代表复制;tra代表转移;fin代表致育抑制;o ri代表复制起点;D am代表DNA腺嘌呤甲基化酶等等。
基因工程考研题库
基因工程考研题库基因工程是一种利用分子生物学技术，按照人们的意愿，将一种生物的基因转移到另一种生物体内，从而改变其遗传特性的技术。
它在农业、医学、工业和环保等领域都有广泛的应用。
下面，我们来探讨一些基因工程考研题库中可能会涉及的问题。
1. 基因工程的定义和基本原理基因工程，又称为DNA重组技术，是指通过人工手段将一种生物的基因导入到另一种生物的基因组中，使其获得新的遗传特性。
其基本原理包括：目的基因的获取、载体的构建、目的基因的导入、目的基因的表达和检测。
2. 基因工程中常用的工具酶基因工程中常用的工具酶主要有限制性内切酶、连接酶和DNA聚合酶。
限制性内切酶能够识别特定的DNA序列并在特定位点切割DNA，连接酶可以将切割后的DNA片段连接起来，而DNA聚合酶则用于合成新的DNA 链。
3. 基因工程的载体基因工程中常用的载体有质粒、病毒载体和人工染色体。
质粒是细菌中常见的小型环状DNA分子，可以作为外源基因的载体；病毒载体则利用病毒的复制机制来传递基因；人工染色体则是通过人工构建的染色体结构来携带外源基因。
4. 目的基因的导入方法目的基因的导入方法主要有转化、转染和显微注射。
转化和转染通常用于微生物和植物细胞，而显微注射则常用于动物细胞。
5. 转基因生物的安全性问题转基因生物的安全性问题一直是公众关注的焦点。
这包括转基因生物对环境的潜在影响、对人类健康的潜在风险以及转基因产品在伦理和法律上的问题。
6. 基因治疗的原理和应用基因治疗是指将正常基因或经过修饰的基因导入到患者的细胞中，以治疗或预防疾病。
基因治疗在治疗遗传性疾病、癌症和某些病毒感染方面显示出巨大的潜力。
7. 基因工程在农业中的应用基因工程在农业中的应用主要体现在转基因作物的培育上。
通过基因工程，可以培育出抗病虫害、抗逆境、高产和品质优良的作物品种。
8. 基因工程在医学中的应用基因工程在医学中的应用包括生产重组蛋白药物、基因疫苗、基因诊断和基因治疗等。
bamh1标准写法
bamh1标准写法BamHI是一种限制性内切酶，用于DNA的切割。
它识别并切割具有特定核酸序列的DNA链。
下面是关于BamHI的标准写法的解释：1. 命名，BamHI的命名来源于它最初是从Bacillus amyloliquefaciens H株中分离出来的。
"Bam"代表Bacillus amyloliquefaciens，"H"代表株系。
2. 酶的来源，BamHI是从Bacillus amyloliquefaciens H株中分离出来的。
这种细菌产生BamHI酶作为一种防御机制，用于保护自身免受病毒的侵害。
3. 酶的识别序列，BamHI酶识别和切割的DNA序列为5'-GGATCC-3'。
这个序列是六个碱基长的，其中"G"代表鸟嘌呤（Guanine），"A"代表腺嘌呤（Adenine），"T"代表胸腺嘧啶（Thymine），"C"代表胞嘧啶（Cytosine）。
4. 切割方式，BamHI酶切割DNA时，将DNA链在识别序列的特定位置切断，形成两个不同的片段。
切割后的两个片段的末端通常是粘性末端（sticky ends），意味着它们的末端序列互补并能够通过互补配对重新连接。
5. 切割产物，BamHI酶切割DNA后，产生的两个片段的长度取决于切割位置。
这些片段可以进一步用于DNA重组、克隆、测序等分子生物学实验。
6. 酶的储存和使用条件，BamHI酶在-20摄氏度储存稳定。
在实验室中，常规使用时，需要将酶与特定的缓冲液和辅助酶一起加入到DNA反应体系中，以确保最佳的酶活性和切割效果。
总结起来，BamHI是一种限制性内切酶，它识别并切割DNA中的5'-GGATCC-3'序列，产生粘性末端的切割产物。
这种酶在分子生物学实验中被广泛应用于DNA的切割、克隆和重组等研究领域。
基因工程工具酶
(1) mRNA转录成cDNA
(2) 以ssDNA或RNA为模板合成杂交探针
末端转移酶(terminal transferase)
1. 取自小牛胸腺
2. 催化脱氧核苷酸与DNA的3`-OH结合
引物或底物是带有3`-OH基的ssDNA或带有突出的双链DNA。不要求模 板。
3.两种反应：
Mn2+ 或Mg2+
连接酶操作要点
• T：多数内切酶产生的粘性末端的Tm值在15℃以下,然而保 持连接酶活性的最适温度却是37℃, 因此最适温度是粘性 末端的Tm值和连接酶最适温度的折衷。经常采用16℃（416℃）。
• DNA concentrations：外源片段浓度比载体DNA浓度高10-20 倍
• 防止环化：碱性磷酸酶预先处理质粒载体 • Time:O/N better • 平端连接:加大酶量
（3） 粘端可重新通过氢键配对
• 4. 特殊性质
Eco R1切割
Ⅱ型核酸内切酶的特殊性质
• 1、同位酶：
识别相同序列，但切割位点不一样的酶 ( 如Sma I 和 Xma I )
• 2、同尾酶:
识别位点不同，但切割出相同的末端序列 （Bam H I 和 Bcl I)；
• 3、同裂酶：
识别位点和切割位点都相同的酶（Hpa I 和 Hin c Ⅱ )；
用途： （1）从DNA片段上除去5‘磷酸以防自身连接。 （2）在放射性标记DNA 5‘末端前，除去磷酸。
核酸酶 Bal 31
具两种活性：
(1)双链特异外切酶活性；从dsDNA的3`和5`切 除寡核苷酸或单核苷酸；EGTA(乙二胺四乙酸)
可终止反应
(2)单链特异内切酶活性：专门从单链DNA切除 带有5`末端的单链核苷酸和寡核苷酸(类似于核 酸酶S1的单链特异性核酸内切酶活性)
常用限制性内切酶和DNA聚合酶外文字符的规范编排
常用限制性内切酶和DNA聚合酶外文字符的规范编排一、限制性内切酶限制酶的命名，1973年由Smith和Nathans提出：用属名的头1个字母和种名的头2个字母，组成3个字母的略语,表示寄主菌的物种名称；如有菌株名，再加上一个字母，即第4个字母表示菌株；1种特殊的菌株，具有几个不同的限制与修饰体系，则以罗马数字表示在该菌株中发现某种酶的先后次序。
例如：Eco R I, 第1个大写字母E为大肠杆菌Escherichia coli的属名的第1个字母；第2、3两个小写字母co为其种名的2个字母；第4个字母大写R表示所用大肠杆菌的菌株编号。
再如，流感嗜血菌（Haemophilus influenzae）用Hin表示。
例如，从流感嗜血杆菌d株（Haemophilus influenzad d）中先后分离到3种限制酶，则分别命名为Hin d I、Hin d Ⅱ和Hin d Ⅲ。
限制性内切酶符号前3个字母为其来源菌株的拉丁名缩写形式，根据现有的外文字符使用规范，“生物学中属以下（含属）的拉丁文学名要用斜体字母”表示，所以，前3个字母用斜体形式编排。
第4个字母表示菌株，一般表示菌株的字母都用正体形式。
二、耐热DNA聚合酶DNA聚合酶是PCR反应的重要工具。
同限制性内切酶命名方法类似，耐热DNA聚合酶也与其来源菌名称有关。
例如：Taq DNA聚合酶、Pfu DNA聚合酶、Tth DNA聚合酶等，前3个字母都是表示来源于生物的，第1个字母是其来源生物的属名的首字母，第2、3个字母是其种名前的2个字母。
因此，这3个字母都应该用斜体，并且首字母要用大写；因为Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌（Thermus aquaticus）yT1株分离提取的，Pfu DNA聚合酶是来自耐热菌Pyrococcus furiosus的一种DNA聚合酶，Tth DNA聚合酶是来自嗜热细菌Thermus thermophilus的一种DNA聚合酶。
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常用限制性内切酶和DNA聚合酶外文字符的规范编排
一、限制性内切酶
限制酶的命名，1973年由Smith和Nathans提出：用属名的头1个字母和种名的头2个字母，组成3个字母的略语,表示寄主菌的物种名称；如有菌株名，再加上一个字母，即第4个字母表示菌株；1种特殊的菌株，具有几个不同的限制与修饰体系，则以罗马数字表示在该菌株中发现某种酶的先后次序。
例如：Eco R I, 第1个大写字母E为大肠杆菌Escherichia coli的属名的第1个字母；第2、3两个小写字母co为其种名的2个字母；第4个字母大写R表示所用大肠杆菌的菌株编号。
再如，流感嗜血菌（Haemophilus influenzae）用Hin表示。
例如，从流感嗜血杆菌d株（Haemophilus influenzad d）中先后分离到3种限制酶，则分别命名为Hin d I、Hin d Ⅱ和Hin d Ⅲ。
限制性内切酶符号前3个字母为其来源菌株的拉丁名缩写形式，根据现有的外文字符使用规范，“生物学中属以下（含属）的拉丁文学名要用斜体字母”表示，所以，前3个字母用斜体形式编排。
第4个字母表示菌株，一般表示菌株的字母都用正体形式。
二、耐热DNA聚合酶
DNA聚合酶是PCR反应的重要工具。
同限制性内切酶命名方法类似，耐热DNA聚合酶也与其来源菌名称有关。
例如：Taq DNA聚合酶、Pfu DNA聚合酶、Tth DNA聚合酶等，前3个字母都是表示来源于生物的，第1个字母是其来源生物的属名的首字母，第2、3个字母是其种名前的2个字母。
因此，这3个字母都应该用斜体，并且首字母要用大写；因为Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热
菌（Thermus aquaticus）yT1株分离提取的，Pfu DNA聚合酶是来自耐热菌Pyrococcus furiosus的一种DNA聚合酶，Tth DNA聚合酶是来自嗜热细菌Thermus thermophilus的一种DNA聚合酶。