组织切片技术(精品)
组织切片技术

组织切片技术
固定:
组织块大小:1.5×1.5×0.2 CM
固定液>4倍组织体积
1. 酒精固定
纯究竟有较大的收缩力,固定时先用80%酒精固定数小时,然后换95%酒精。
优点:(1)尿酸结晶和糖类,用100%乙醇固定
(2)别的固定液固定后,80%乙醇保存
(3)边固定边脱水
缺点:(1)核染色不良
(2)脂类不行
(3)色素不行
(4)表面发硬,块大不行
2.福尔马林固定
市售为40%甲醛水溶液,应放入小量碳酸钠放置一段时间
福尔马林固定液:40%甲醛溶液1份,水9份
固定数小时后用水洗24小时
优点:克服了乙醇固定的缺点
苦味酸固定
以苦味酸饱和水溶液储存,固定后的组织经酒精脱水即可。
组织切片技术

组织切片技术嘿,朋友们!今天咱来聊聊组织切片技术。
这玩意儿啊,就像是给生物体来了个超级特写!你想啊,咱们要了解一个东西的内部构造,总不能光靠肉眼瞧吧。
这时候组织切片技术就闪亮登场啦!它就像是一把神奇的钥匙,能打开生物体内部那神秘的大门。
把组织切成薄薄的一片,这可不是随便切切就行的哦!这得非常精细,就好比雕刻大师在精心雕琢一件艺术品。
要是切厚了,那可就看不清楚细节啦;要是切歪了,那得到的信息可能就不准确咯。
然后呢,还要给这些切片进行染色。
这染色可重要啦,就像给一幅画上色一样,不同的颜色能突出不同的结构。
染得好,就能让我们一目了然地看清那些细胞啊、组织啊的形态和分布。
接下来就是观察啦!把切片放在显微镜下,哇塞,一个全新的微观世界就展现在眼前啦。
你能看到那些小小的细胞,它们就像一个个小生命在那里活动呢。
你说神奇不神奇?这组织切片技术用处可大了去了。
医生们靠它来诊断疾病,科研人员靠它来探索生命的奥秘。
想象一下,如果没有它,我们对人体的了解能有这么深入吗?那肯定不行啊!咱就说,要是没有组织切片技术,医生怎么能准确判断肿瘤是良性还是恶性呢?又怎么能知道身体里到底哪里出了问题呢?这可关系到人们的健康和生命啊!而且啊,组织切片技术还在不断发展呢。
现在的技术越来越先进,能看到的细节也越来越多。
这就好比我们原来用的是黑白电视,现在换成了高清大彩电啦!所以啊,组织切片技术可真是个了不起的东西。
它就像一个无声的英雄,默默地为我们探索生命的奥秘,为医学和科学的进步贡献着力量。
咱们可得好好感谢它呢!怎么样,现在是不是对组织切片技术有了更深的了解啦?。
植物细胞学分析之组织切片技术

植物细胞学分析之组织切片技术一、试剂(1)卡诺氏固定液:无水乙醇与冰醋酸按体积比为3:1混合配制。
(2)1mol/L盐酸溶液:取浓盐酸(比重1.19)82.5ml,加入蒸馏水917.5ml。
(3)醋酸洋红染液:4-5g洋红,冰醋酸45ml,蒸馏水55ml,先将冰醋酸加入蒸馏水中煮沸,然后将火移去,立刻加入洋红,用玻璃棒搅匀溶化,冷却后过滤即成。
(4)70%酒精;95%酒精。
二、细胞分析方法1.有丝分裂全过程的染色体制片方法步骤:取材-预处理-固定-根尖解离1mol/L HCL-醋酸洋红染色-压片(1)发根挑选每份黑麦种子材料25粒,经流水冲洗,放于培养皿内温水浸泡24h。
置于25℃恒温箱中发根。
待根长到1~2cm时,于适宜时间用蒸馏水洗净,将水吸干,剪取根尖0.5~1cm进行预处理。
为获得尽可能多的分裂相,根尖以上午9~10时剪取为宜。
(2)预处理为了有利于有丝分裂中,染色体的观察和计数,通常要对材料进行不同的预处理。
预处理主要通过抑制和破坏纺锤丝的形成,来获得更多的中期分裂相,同时还可以改变细胞质的粘度,促使染色体缩短和分散,便于压片和观察。
将根尖浸于蒸馏水内,1-4℃低温处理24h。
(3)固定材料经预处理后,用流水冲洗2次,然后投入卡诺液(3份甲醇∶1份冰乙酸)中固定26h,用95%的乙醇洗两次,转入70%乙醇中保存备用(4℃)。
固定的目的是:①迅速防止细胞死亡后的变化,如自溶、腐败等,尽量保持生长状态结构。
②使细胞中的蛋白质、脂肪等成分转变为不溶性物质,以保持生前的形态。
③使组织内各种物质成分产生不同的折光率,便于观察和鉴定。
④使不同组织成分对染料有不同的亲和力,便于染色。
⑤防止细胞过度收缩或膨胀,失去原有的形态结构。
(4)解离常用酸解法:从70%乙醇中取出固定好的根尖,用蒸馏水冲洗后,吸水纸吸干,放入盛有1 mol/L的HCl的1.5ml离心管中,60℃水浴,恒温条件下解离10min。
植物细胞的细胞壁对细胞形态和结构起支撑和保护作用,分生组织的细胞壁结构将分生细胞结合成一个整体,因此在压片之前需要采用适当方法软化或部分分解细胞壁使细胞间易于分离,这一操作称为解离。
病理组织切片制作技术

------------------------------------------ 最新资料推荐------------------------------------病理组织切片制作技术病理组织切片制作技术病理组织切片常用的制作方法有三种。
即石蜡切片法,冰冻切片法和火棉胶切片法。
以石蜡切片法为代表,切片的基本制作过程是:组织取材固定冲洗脱水透明浸蜡组织包埋组织切片展片附贴切片脱蜡染色脱水染片透明封固。
以上基本过程是互相联系的,任何一环节出现问题,都将使整个切片制作归于失败。
因此应细致、耐心、认真负责,并事先做好计划安排。
一、取材采取病料,要刀剪锐利,剪切时不可挤压,扯拉病料,以防人为损伤。
切取的工具要清洁。
采取病料越新鲜越好,一般不超过死后24小时。
应选择病变部与可疑病变部切取,切取时要由表及里,有浅入深并包括周围正常组织一部分。
特殊病料应根据器官的结构特点切取。
管状,囊状和皮肤组织应注意垂直切取(横切)。
带有薄膜的组织,要防止切时薄膜分离和脱落。
切取组织块大小,以1.51.50.3厘米为宜,最厚不宜超过0.5厘米。
组织块病变一面应平整光滑,另一面可不平整,以便包埋时辨认。
切取后,放入事先准备好的装有固定液的磨口玻璃广口瓶中,并做好标记。
二、固定固定的目的是迅速将组织细胞杀死,使细胞中的蛋白质,糖,脂肪等凝固,从而保持与活组织相似的结构状态。
材料取下后,应迅速固定。
固定液数量应为病理组织块的5到20倍。
由于一般把组织块浸入固定液后数小时,固定液渗入组织液的深度只达2至IJ 3厘米。
因此,可以放置冰箱内固定,使组织内酶失去作用,细菌也能停止滋生。
最常用的固定液是10%的福尔马林溶液:使用时,用40%的甲醛饱和水溶液10毫升,加水90毫升配成。
三、冲洗固定后的组织块,应将固定液洗去。
一般均用流水(自来水)冲洗12到24小时左右。
及时冲洗尚有停止固定的作用,防止固定过度,有利于制片染色。
冲洗时如不方便用流水冲洗,也可用较大容器盛装水浸洗,每隔相当时间换水一次。
《组织切片技术》课件

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医学研究
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《组织切片技术》PPT课 件
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概述
通过简明扼要的介绍,本节将定义组织切片技术,并阐明其目的和受众。
组织切片技术的原理和方法
本节将分享组织切片技术的核心原理和关键方法,帮助您更好地理解其运作过程。
大数据处理: 通过分布式计算和优化算法,加速大规模数据的处理和切片生成。 可视化效果: 采用先进的图形渲染技术和交互设计,提升切片的可视化效果和用户体验。
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病理学中的组织切片技术

病理学中的组织切片技术病理学是医学领域中非常重要的一个学科,研究人体各个器官和组织的疾病变化及其发生、发展机制。
而组织切片技术是病理学中的基础操作,是为了观察和诊断疾病而必要的步骤之一。
本文将详细介绍组织切片技术的相关知识和方法。
一、组织切片技术的概述组织切片技术是指将人体组织切割成薄片并染色,以便于病理学家观察。
这项技术已经存在了很长时间,并且随着技术的发展和改进,已经成为了诊断和治疗疾病的重要手段之一。
组织切片技术可以被广泛应用于疾病的研究、诊断和治疗中。
二、组织切片技术的步骤组织切片技术的主要步骤包括取样、固定、脱水、包埋、切片和染色。
下面将对这些步骤进行详细的介绍:1. 取样组织切片的第一步是取样,即从人体组织中取出一小块,以便于后续的操作。
取样的方法根据不同的情况会有所不同,比如在手术中取样,就需要根据病变的部位和特点来选择取样点,而在活检中取样,就需要根据患者的症状和体征来确定取样点。
2. 固定取样后,需要用一种方法把组织中的细胞和结构固定住,以便于后续处理。
目前常用的固定剂是福尔马林,它可以迅速把组织中的蛋白质交联,使其不易变性,从而保持组织形态的完整。
3. 脱水在固定后,需要将组织逐渐从水中转移到酒精、乙醇等脱水剂中,以便于把组织中的水去除,使其硬化。
这是组织切片的关键步骤之一,如果脱水不彻底,切出的组织切片会变形或破损。
4. 包埋将脱水的组织置于熔蜡中,使其被包覆在蜡中。
这么做可以保持组织的形态,并使其更易于切割。
5. 切片蜡包埋后,组织需要被切成薄片。
切片可以使用手工或自动切片机完成,手工切片需要技巧和经验,而自动切片机可以更好地保证切片的厚度和质量。
6. 染色切片完成后,需要对组织进行染色,以便于病理学家对其进行观察。
目前常用的染色剂有血液学染色剂、组织学染色剂以及免疫组化染色剂等。
三、组织切片技术的应用组织切片技术在病理学中有广泛的应用,其中包括:1. 诊断和治疗疾病组织切片技术是病理学家进行诊断和治疗疾病的重要手段之一。
组织切片技术

组织切片技术第一章组织制片概述组织制片技术是观察细胞、组织的生理和病理形态变化的一种主要的方法。
组织化学技术和原位杂交技术都是以组织制片为基础的。
一、制片前的准备工作1.染色缸和标本瓶的清洗用毛刷沾去污粉将染色缸和标本瓶里外擦洗,自来水冲洗干净备用。
金属银或组织化学染色时,器皿更要彻底清洗。
先去污粉洗,再洗液浸泡过夜,再自来水和蒸馏水冲洗。
洗涤液的配制:重铬酸钾300克浓硫酸300毫升蒸馏水3000毫升2.载玻片和盖玻片及其清洗载玻片简称为玻片或载片,一般尺寸为76毫米×26毫米,厚度为1-1.5毫米。
盖玻片一般为正方形或长方形,厚度为0.15-0.5毫米。
最常用的规格为18×18毫米、20×20毫米,还有其它规格的。
煮沸洗涤法: 新旧玻片均可采用。
洗衣粉水浸没玻片,加热煮沸15-20分钟,冷却,自来水冲洗,干净的白棉布或纱布擦干,保存备用。
酒精浸泡擦拭:新的玻片或载片可直接用酒精浸泡、擦拭,保存备用。
洗液浸泡法:要求严格的玻片,可在洗液浸泡后在冲洗干净。
二、制片方法的种类(一)非切片法不用切片机、没有切片手续而制成切片的方法。
常用的有以下几种:1.整体封藏法待制作的材料一般很小或为一薄片状,如无脊椎动物的水螅和草履虫等,脊椎动物的鸡胚和蛙胚等。
这些材料取下后经固定、脱水和染色就可以封藏在玻片内。
2.涂片法主要是液体或半流动性的材料,如血液、精液、细胞学检查、微生物等,直接将材料涂在玻片上,再经固定和染色制成标本。
血液涂片的制作与染色:取一干净载玻片,用左手拇指和食指夹住,然后取一小滴动物血置于载玻片右端,再取另一张边缘光滑的载玻片, 斜置于血滴左侧, 先向右稍移动轻轻触及血滴,使血液沿玻片端展开成线状, 两玻片的角度以30~40°为宜(角度过大血膜较厚,角度小则血膜薄), 轻轻将载玻片向左推进,即涂成血液薄膜,推进时速度要一致,否则血膜成波浪形,厚薄不匀. 待涂片在空气中完全干燥后,将血涂片靠近中央部分的两边(与载玻片短边平行的边)用玻璃铅笔圈上并平放在染色架上进行染色。
组织切片技术PPT72页

2.1.3 组织取材注意事项
1.组织要求离体后30min内浸入固定液,尤其是开展分子生物学研究。 动物放血处死后立即取材,最好在心脏还在跳动时立即取材,马 上投入固定液中;
2.注意防止人为因素的影响 切取组织的刀剪必须锋利,刀要足够长。切分组织块时,不
可来回切割。夹取组织时,镊子要轻,切勿挤压。以免损伤组织; 3.组织块的大小
大多数的生物材料,在自然状态下是不适合显微观察 的,也无法看到其内部结构。因为材料较厚,光线不易透 过,另外由于细胞内各个结构的折射率相差很小,即使光 线可透过,也难以辩明。
组织学技术是教学和科研中常用的方法。组织在经过 固定,脱水,透明,包埋等手续后,用切片机切成较薄的 切片,再经不同的染色就可以显示不同细胞组织的形态及 其中某些化学成份含量的变化,组织切片也便于保存。
混合固定液:是用几种化学试剂,按一定的比例混 合配制而成的,由于各种试剂的优缺点互相弥补,因此 可产生较好的效果。
(1)甲醛固定液:
是一种还原剂,呈酸性,原液浓度为37%~40%,配成 固定液的浓度为4%,习惯上称为10%,配制时取甲醛原液 10ml,加蒸馏水(D.W)或缓冲液至100ml,为甲醛固定液 (10%福尔马林) 。
二甲苯是使用最广泛的一种透明剂,它具有渗透力强, 溶解石蜡量大,又易挥发的优点,其缺点是易使组织收缩, 变硬,变脆,因此透明时间应根据组织块大小及质地酌情 而定
注意事项:
1.使用透明剂时,要随时盖紧盖子,以免空气中的水分 进入。
2.更换每级透明剂,动作要迅速,一方面为了不使材料 块干涸,另一方面能避免吸收湿气。
(3) Bouin’S液
苦味酸饱和水溶液 75ml
甲醛
25ml
冰醋酸
5ml
组织切片技术

组织切片技术注意事项程序步骤1、取材2、固定(固定24h—1W)3、包埋石蜡切片:流水冲洗组织块>>75%酒精1h>>85%酒精1h>>95%酒精1h>>100%酒精(1)1h>>100酒精(2)1h>>二甲苯8-20min>>石蜡2h>>包埋冰冻切片:固定后的组织>>OCT包埋>>切片或-20度保存;液氮中的组织>>转入-20度>>OCT包埋>>切片或保存4、切片切片>>展片(40~50度)>>贴片>>干燥(37度过夜或者50~60度2h)5、HE染色干燥后的切片>>二甲苯(1)10min>>二甲苯(2)10min>>100%酒精(1)1min>>100%酒精(2)1min>>95%酒精1min>>85%酒精1min>>75%酒精1min>>蒸馏水3min>>苏木精染色30s—5min>>自来水涮洗>>蒸馏水>>75%酒精1min>>85%酒精1min>>伊红染色>>85%酒精涮洗>>95%酒精1min>>100%酒精(1)1min>>100%酒精(2)1min>>二甲苯(1)10min>>二甲苯(2)10min>>中性树胶封片6、免疫组化(ABC法)(1)干燥后的石蜡或冰冻切片(冰冻切片需要缓慢复温)脱蜡至水;(2)双氧水(1%浓度左右)封闭内源性过氧化物酶;(3)PBS洗涤3×5min;(4) 5%BSA封闭非特异性结合位点,不洗;(5)滴加适当稀释度的一抗;4度孵育过夜或37度2h;(6)同上洗涤;滴加二抗,37度1h;(7)同上洗涤;滴加ABC复合物,37度1h;(8)洗涤5遍,每次5min;(9)配制显色液(DAB显色试剂盒),显微镜下观察显色;(10)切片浸泡于蒸馏水中终止显色;(11)苏木精复染,脱水,封片。
组织切片技术

第一章实验室基本设备及常用试剂一、基本设备组织学实验室的常用设备,主要有观察组织标本用的显微镜及制作标本用的必要设备、工具等。
(一)显微镜显微镜是观察组织结构的精密仪器。
显微镜的种类很多,功能也各不相同:如相差、荧光、偏振光、倒置及暗视野显微镜等,电子显微镜更给组织学研究开辟了广阔领域。
本章侧重介绍常用和透射光学显微镜的简单结构和光学部分。
1.显微镜的结构显微镜包括机械部分和光学部分。
(1)机械部分1)镜座及镜柱是支持和稳定整个镜体的主要部件,一般多用铸铁铸成。
近年来多改用生铝铸造镜座,功能虽同,但其质轻不稳则不如较重的铸铁。
2)镜臂连在镜柱上短的弯曲部分,提取或移动显微镜时的把握处。
镜臂与镜柱间有活动关节(倾斜关节),可使显微镜向后做一定的倾斜,便于观察时镜筒角度适应座位的高低,但其倾斜角度不会使镜的重心偏移至稳定范围之外。
3)载物台为安置标本的平面台,呈方形或圆形,台的中心有一圆孔,可通过光线。
台上附有一对弹簧夹,以夹持切片;或装有带刻度的推片器移动切片。
4)镜筒附于镜臂上端前方的圆筒,长度一般为160mm。
它是成像元柱的通道,镜筒上端装接目镜,下端装物镜转换器。
5)物镜转换器简称转换器,接镜筒下端,为圆盘状,有3~4个物镜孔。
装物镜于转换器时,低倍、高倍至油镜依次以顺时针方向安装,便于使用。
物镜孔的螺纹和口径是国际统一的,可换用任何国家生产的物镜。
6)调焦轮又称调焦螺旋。
调焦轮有两组,即粗调焦论和细调焦轮。
旋转它们时,有的是调动镜筒,有的是调动载物台,调节焦距使物象清晰。
粗调焦论调节范围较大,每转动一周可使镜筒或载物台升降10mm左右。
细调焦论调节范围较小,每一周,镜筒或载物台上仅有0.1或0.2的升降。
(2)光学部分1)接目镜(目镜),装在镜筒上端,其表面标有放大率5×(5倍)10×(10倍)、16×(16倍)、20×(20倍)、甚至25×(25倍),近年各厂家生产的目镜多为平周(刻有P或Plan等字样),光视野(刻有WF)等。
组织切片技术

鱼肝脏制片1、取材2-3mm厚2、固定卡诺氏固定液固定3-4h;波恩氏液中固定6-10h或者12-24h(时间根据组织块的大小而定)3、洗涤若用卡诺氏固定液固定:则95%乙醇洗2次→70%乙醇中保存若用波恩氏液中固定:70%乙醇洗3次或者5次→70%乙醇中保存4、脱水80%乙醇→90%乙醇→100%乙醇→100%乙醇30min 30min 30min 30min5、透明1/2 100%乙醇+1/2 二甲苯→二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ15min 15min 15min6、透蜡1/2 二甲苯+1/2 石蜡→石蜡Ⅰ→石蜡Ⅱ30min(35-37℃) 30min(56-60℃)30min(56-60℃)7、包埋8、切片9、贴片10、染色二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ→1/2 二甲苯+1/2 100%乙醇→100%乙醇5min 5min 5min 2min→90%乙醇→80%乙醇→70%乙醇→50%乙醇→H2O2min 2min 2min 2min 2min→埃里希氏苏木精→H2O→H2O→1%HCl→H2O→氨水中蓝化→H2O→H2O 15-20min 2.5min 2.5min 几秒1min 3-4min 2.5min 2.5min →1%伊红水溶液→50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇→90%乙醇→100%乙醇1-5min 2min 2min 2min 2min 2min →1/2 二甲苯+1/2 100%乙醇→二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ5min 5min 5min→封藏(树胶或者加拿大树胶)→50℃温箱中烘干植物根、茎、叶1、取材根1-2cm,茎0.5cm 叶子2-4mm2、固定FAA 24h3、洗涤70%乙醇洗涤两次4、脱水80%乙醇→90%乙醇→100%乙醇→100%乙醇1-2h 1-2h 0.5-1h 0.5-1h5、透明1/2 100%乙醇+1/2 二甲苯→二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ1-2h 0.5-1h 0.5-1h6、透蜡1/2 二甲苯+1/2 石蜡→石蜡Ⅰ→石蜡Ⅱ2天(35-37℃) 1h(56-60℃)1h(56-60℃)7、包埋8、切片9、贴片10、染色二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ→1/2 二甲苯+1/2 100%乙醇→100%乙醇→95%乙醇10min 10min 5min 5min 5min →90%乙醇→80%乙醇→70%乙醇→50%乙醇→30%乙醇→H2O 5min 5min 5min 5min 5min 2min →1%番红水溶液→H2O→50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇→90%乙醇2h 几秒10min 10min 10min 10min →95%乙醇→1%固绿(95%乙醇配制)→95%乙醇→100%乙醇10min 30s 几秒5min →1/2 二甲苯+1/2 100%乙醇→二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ5min 5min 5min→封藏(树胶或者加拿大树胶)→50℃温箱中烘干。
组织切片技术

组织切片技术在现代科技发展的背景下,组织切片技术作为一项先进的生物医学研究方法,在细胞学、组织学以及疾病研究等方面发挥着重要作用。
本文将介绍组织切片技术的原理、应用以及未来的发展前景。
一、原理组织切片技术是一种将组织样本切成极薄的切片,以便进行显微镜观察和进一步分析的方法。
它主要包括取样、固定、包埋、切片和染色等步骤。
首先,需要从组织样本中取得足够的细胞或组织。
然后,将样本进行固定,以保持其结构和形态的稳定性。
接下来,将固定的样本进行包埋处理,即将组织样本置于固定液中进行浸渍,再置于石蜡或树脂中固化。
之后,利用显微刀、显微镜或电子显微镜等工具将组织样本切成极薄的切片。
最后,对切片进行染色,以便观察和分析细胞和组织的结构、功能及病理变化。
二、应用组织切片技术在生物医学研究中有着广泛的应用。
主要包括以下几个方面:1. 组织学研究:组织切片技术被广泛应用于组织学研究领域,可以观察和研究各种组织和器官的结构、形态、功能以及病理变化,从而促进对生物体结构和功能的深入了解。
2. 病理诊断:组织切片技术在病理学中扮演着重要的角色。
医生可以通过观察组织切片来诊断疾病,并对患者进行治疗和预后评估。
3. 药物研发:组织切片技术可以用于药物研发中的毒性评估和药物吸收、分布、代谢和排泄等研究。
通过观察组织切片的变化,研究人员可以评估药物对组织和细胞的损伤程度,从而指导药物研发和临床应用。
4. 种植技术:组织切片技术在植物研究中也有广泛应用。
通过观察植物组织切片,可以研究植物的器官结构、细胞构成以及代谢活性等方面的信息,有助于植物遗传改良和种植技术的改进。
三、未来发展随着科学技术的不断发展,组织切片技术也将迎来更广阔的应用前景。
以下几个方面值得关注:1. 自动化和高通量技术:随着自动化和高通量技术的发展,组织切片的速度和效率将大大提高,为更快速地获取更多的组织信息提供了可能。
2. 多重标记技术:利用多重标记技术,可以对组织切片进行多种染色,从而同时观察多个细胞和结构的分布和互动,揭示更深层次的生物过程。
组织切片技术

组织切片技术姓名:许莎班级:生技121学号:组织切片技术是研究生物组织或细胞形态和结构的重要技术,对于促进细胞生物学和遗传学等研究的发展起着重要作用。
最早的制片技术是徒手切片技术,以后发展了利用石蜡进行包埋和切片的制片技术,即石蜡切片技术,该技术由于成本低,操作简单,目前仍在应用,该技术被越来越多的研究工作者应用于发育学、植物细胞学、胚胎学、解剖学等研究领域。
1组织切片技术原理1.1原理组织切片技术是研究组织形态学最常用的一项基本技术,在制作胚胎或组织切片时,由于细胞或组织是柔软的或局部的软硬不均,这样制作厚薄均匀的切片很困难。
为了能清晰地观察到组织结构及细胞形态,必须先经过一系列步骤将组织内渗入某些支持物质,使组织变硬然后利用切片机将组织切成薄片。
根据所用支持剂的种类不同,主要分为石蜡切片、冰冻切片、振动切片、火棉胶切片、塑料切片、碳蜡切片等。
1.2分类1.2.1石蜡切片该技术是最重要、最常用的组织切片技术之一,起始于18世纪。
此法是用石蜡作为包埋剂,将材料经过固定、脱水、透明后包埋在石蜡中,然后连同石蜡用切片机一同进行切片。
石蜡切片的主要优点是不仅可以把材料制成薄的切片,而且还能制成连续切片,这是其他制片技术难以做到的。
它的缺点是操作步骤比较复杂,而且材料在脱水、透明过程中会收缩、变硬、变脆,以致不易切片[1]。
1.2.2冰冻切片冰冻切片是利用干冰或液氮等速冻剂使组织迅速冷冻硬化,将组织在冷冻状态下直接用切片机切片的一项技术。
它实际上是以水为包埋剂,将组织进行冰冻至坚硬后切片的。
由于此法不需要经过各级乙醇的脱水、二甲苯的透明和浸蜡等步骤,因而较适合子脂肪、神经组织和一些组织化学的制片,并作为快速切片的方法应用在临床诊断冰冻切片是酶组织化学和免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法。
此种切片的优点是能较好的保存组织的RNA 稳定性、较完好地保存细胞膜表面和细胞内多种酶活性以及抗原的免疫活性,缺点是需要较高的设备要求;切片较厚,导致组织结构显示欠佳;通常不能进行连续切片。
生物解剖学实验中的组织切片技术

生物解剖学实验中的组织切片技术在生物解剖学实验中,组织切片技术是一项重要的技术手段。
通过组织切片,可以将生物体的组织结构进行细致观察和研究。
下面将介绍组织切片技术的步骤和注意事项。
一、材料准备在进行组织切片实验的时候,需要准备以下材料:1. 组织样本:可以是动物组织、植物组织或人体组织。
要确保样本新鲜且保存良好。
2. 切片刀:选择合适的切片刀能够提高切片的质量。
3. 碘酒:用于消毒和标记切片。
4. 显微镜:用于观察切片的显微结构。
5. 切片贴片:用于固定和保存组织切片。
二、切片步骤1. 样本固定:将组织样本放入含有适当浓度的缓冲液中进行固定。
固定能够保持组织结构的完整性,同时防止样本中的酶活性继续进行。
常用的固定液有福尔马林和氯乙酸。
2. 组织处理:在固定后的组织中,需要去除多余的水分,并使组织透明化。
可以使用甲醛、丙酮等试剂来进行处理。
3. 组织切片:将透明化后的组织放置在切片刀上,用切片刀沿着想要切片的方向进行切割。
要注意刀的角度和切割的速度,以保证切片的质量。
4. 切片贴片:将切好的组织切片用镊子取出,轻轻放在切片贴片上。
要避免切片的叠加和重叠,确保切片的平整和清晰。
5. 切片染色:切片染色是为了增强切片的对比度,使组织结构更加清晰可见。
可使用常见的组织染色剂,如伊红、伊红苏木、溴化乙锐等。
6. 保存和贮存:将染色好的切片放在切片贴片上,用封条封住,放置在保存盒中。
要放置在阴凉干燥的地方,避免阳光直射和湿气的侵蚀。
三、注意事项1. 操作前要熟悉实验步骤,并严格按照操作规程进行。
2. 对于有毒或易燃易爆的试剂,要注意安全操作,避免事故发生。
3. 在操作过程中要保持实验台面的清洁,避免污染样本。
4. 切片刀要保持锋利,切割时可以用适量的甘油润滑刀片。
5. 观察切片时,要调整显微镜的焦距和光线,以获得最佳的观察效果。
通过组织切片技术,可以观察和研究生物体的组织结构,进而了解其功能和生理特征。
这项技术在生物解剖学领域的应用广泛,并且在医学研究、病理诊断等领域也起到了重要的作用。
组织切片技术(精品)

---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------组织切片技术(精品)组织切片技术第一章组织制片概述组织制片技术是观察细胞、组织的生理和病理形态变化的一种主要的方法。
组织化学技术和原位杂交技术都是以组织制片为基础的。
一、制片前的准备工作 1.染色缸和标本瓶的清洗用毛刷沾去污粉将染色缸和标本瓶里外擦洗,自来水冲洗干净备用。
金属银或组织化学染色时,器皿更要彻底清洗。
先去污粉洗,再洗液浸泡过夜,再自来水和蒸馏水冲洗。
洗涤液的配制:重铬酸钾 300 克浓硫酸 300 毫升蒸馏水 3000 毫升 2.载玻片和盖玻片及其清洗载玻片简称为玻片或载片,一般尺寸为76 毫米26 毫米,厚度为 1-1. 5 毫米。
盖玻片一般为正方形或长方形,厚度为 0. 15-0. 5 毫米。
最常用的规格为 1818 毫米、 2020 毫米,还有其它规格的。
煮沸洗涤法: 新旧玻片均可采用。
洗衣粉水浸没玻片,加热煮沸 15-20 分钟,冷却,自来水冲洗,干净的白棉布或纱布擦干,保存备用。
酒精浸泡擦拭:新的玻片或载片可直接用酒精浸泡、擦拭,保存备用。
洗液浸泡法:要求严格的玻片,可在洗液浸泡后在冲洗干净。
1/ 16二、制片方法的种类(一)非切片法不用切片机、没有切片手续而制成切片的方法。
常用的有以下几种:1.整体封藏法待制作的材料一般很小或为一薄片状,如无脊椎动物的水螅和草履虫等,脊椎动物的鸡胚和蛙胚等。
这些材料取下后经固定、脱水和染色就可以封藏在玻片内。
2.涂片法主要是液体或半流动性的材料,如血液、精液、细胞学检查、微生物等,直接将材料涂在玻片上,再经固定和染色制成标本。
血液涂片的制作与染色:取一干净载玻片,用左手拇指和食指夹住,然后取一小滴动物血置于载玻片右端,再取另一张边缘光滑的载玻片, 斜置于血滴左侧, 先向右稍移动轻轻触及血滴,使血液沿玻片端展开成线状, 两玻片的角度以 30~40 为宜(角度过大血膜较厚,角度小则血膜薄), 轻轻将载玻片向左推进,即涂成血液薄膜,推进时速度要一致,否则血膜成波浪形,厚薄不匀. 待涂片在空气中完全干燥后,将血涂片靠近中央部分的两边(与载玻片短边平行的边)用玻璃铅笔圈上并平放在染色架上进行染色。
病理组织切片技术课件

取材
取材是病理组织切片制作的第一步,也是至关重要的一步。 取材时,应选择具有代表性的组织,并注意避免组织自溶和 腐败。同时,要确保取材器械的清洁和消毒,以避免污染和 交叉感染。
取材时,应根据不同的病理类型和病变情况,选择适当的取 材方法和取材量。对于小块病变组织,应尽量取全;对于大 块病变组织,应根据病变特点和部位,选择具有代表性的部 分取材。
固定
固定是病理组织切片制作中不可缺少的一步,其目的是使组织保持其生前的状态 ,防止组织自溶和腐败。常用的固定方法有:甲醛固定法、乙醇固定法和混合固 定法等。
固定液的浓度和固定时间对固定效果有很大影响。一般来说,固定液的浓度越高 、固定时间越长,固定效果越好。但固定时间过长会导致组织变硬,影响切片质 量。因此,应根据具体情况选择适当的固定液和固定时间。
切片质量
切片的质量直接影响到显 微镜观察的结果,因此制 备过程中需要保证切片的 平整、均匀和无气泡。
切片技术分类
01
02
03
04
石蜡切片
将样品包埋在石蜡中,然后进 行切片和染色,是最常用的切
片技术之一。
冰冻切片
将样品快速冷冻后进行切片, 主要用于快速病理诊断。
苏木素-伊红染色
对切片进行染色,以便在显微 镜下观察细胞的形态和结构。
脱水
脱水是病理组织切片制作中非常重要的一步,其目的是去 除组织中的水分,为后续的浸蜡和包埋做准备。常用的脱 水方法有:自然干燥法和人工脱水法等。
脱水液的选择和使用对脱水效果有很大影响。一般来说, 脱水液的浓度越高、脱水时间越长,脱水效果越好。但脱 水时间过长会导致组织变脆,影响切片质量。因此,应根 据具体情况选择适当的脱水液和脱水时间。
H&E染色
《组织切片技术》课件

在生态学研究中,组织切片技术可用于分析生物群落的结构、功能 和演化,了解生物与环境之间的相互作用。
CHAPTER 04
组织切片技术的优缺点
优点
高分辨率
组织切片技术能够提供高分辨率的细胞和 组织结构细节,有助于研究者深入了解细
胞和组织的微细结构。
广泛适用性
组织切片技术适用于各种类型的细胞和组 织,包括动物、植物和微生物,因此具有
解药物对细胞和组织的影响,加速新药的研发进程。
生物医学研究
03
在基础生物学、生理学和病理学研究中,组织切片技术为科学
家提供了深入探究细胞和组织结构和功能的机会。
对未来医学与科技的影响
精准医疗
组织切片技术将有助于实现精准医疗,通过对个体患者的组织切片 进行精确诊断和治疗,提高医疗质量和效果。
医学教育
CHAPTER 05
组织切片技术的发展前景
技术创新与突破
1 2 3
自动化与智能化
通过引入人工智能和机器学习技术,实现组织切 片的自动化识别、处理和分析,提高工作效率和 准确性。
高分辨率成像技术
利用超分辨光学、电子显微等技术,实现组织切 片的超高分辨率成像,为深入研究细胞结构和功 能提供有力支持。
广泛的应用范围。
直观性
通过组织切片,研究者可以直接观察到细 胞和组织的形态、排列和分布情况,有助 于直观地理解细胞和组织的生理功能。
可重复性
组织切片技术是一种成熟的实验方法,具 有较高的可重复性,有利于实验结果的稳 定性和可靠性。
缺点
损伤性
制作组织切片需要对细胞和组 织进行切割,这可能会对细胞 和组织的结构和功能造成一定
观察细胞的大小、形状、染色深浅等特征,分析细胞的类型和功能。
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---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------组织切片技术(精品)组织切片技术第一章组织制片概述组织制片技术是观察细胞、组织的生理和病理形态变化的一种主要的方法。
组织化学技术和原位杂交技术都是以组织制片为基础的。
一、制片前的准备工作 1.染色缸和标本瓶的清洗用毛刷沾去污粉将染色缸和标本瓶里外擦洗,自来水冲洗干净备用。
金属银或组织化学染色时,器皿更要彻底清洗。
先去污粉洗,再洗液浸泡过夜,再自来水和蒸馏水冲洗。
洗涤液的配制:重铬酸钾 300 克浓硫酸 300 毫升蒸馏水 3000 毫升 2.载玻片和盖玻片及其清洗载玻片简称为玻片或载片,一般尺寸为76 毫米26 毫米,厚度为 1-1. 5 毫米。
盖玻片一般为正方形或长方形,厚度为 0. 15-0. 5 毫米。
最常用的规格为 1818 毫米、 2020 毫米,还有其它规格的。
煮沸洗涤法: 新旧玻片均可采用。
洗衣粉水浸没玻片,加热煮沸 15-20 分钟,冷却,自来水冲洗,干净的白棉布或纱布擦干,保存备用。
酒精浸泡擦拭:新的玻片或载片可直接用酒精浸泡、擦拭,保存备用。
洗液浸泡法:要求严格的玻片,可在洗液浸泡后在冲洗干净。
1/ 16二、制片方法的种类(一)非切片法不用切片机、没有切片手续而制成切片的方法。
常用的有以下几种:1.整体封藏法待制作的材料一般很小或为一薄片状,如无脊椎动物的水螅和草履虫等,脊椎动物的鸡胚和蛙胚等。
这些材料取下后经固定、脱水和染色就可以封藏在玻片内。
2.涂片法主要是液体或半流动性的材料,如血液、精液、细胞学检查、微生物等,直接将材料涂在玻片上,再经固定和染色制成标本。
血液涂片的制作与染色:取一干净载玻片,用左手拇指和食指夹住,然后取一小滴动物血置于载玻片右端,再取另一张边缘光滑的载玻片, 斜置于血滴左侧, 先向右稍移动轻轻触及血滴,使血液沿玻片端展开成线状, 两玻片的角度以 30~40 为宜(角度过大血膜较厚,角度小则血膜薄), 轻轻将载玻片向左推进,即涂成血液薄膜,推进时速度要一致,否则血膜成波浪形,厚薄不匀. 待涂片在空气中完全干燥后,将血涂片靠近中央部分的两边(与载玻片短边平行的边)用玻璃铅笔圈上并平放在染色架上进行染色。
①滴加数滴瑞特氏-姬姆萨(Wrights-Giemse)混合染液覆盖已圈血膜,同时记住滴数,染 3-5 分钟。
②滴加等量的蒸馏水后稍加晃动玻片继续染色 5-10 分钟。
③用蒸馏水或自来水冲去染液(注意还要直接冲洗已圈部位),---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 吸水纸吸干或凉干即可观察。
3.撕片法疏松结缔组织和肠系膜等就是采用这种方法。
4.磨片法主要用于含钙盐较多的坚硬的材料,如脊椎动物的牙齿和骨。
5.撕碎法6.压碎法7.印片或触片法(二)切片法使用切片机切片而制成切片的方法。
常用的有以下几种:.石蜡切片法、冰冻切片法、振动切片法、超薄切片法第二章石蜡切片技术第一节取材和固定制作切片的第一步就是把动物杀死,取下需要制作切片的材料。
动物杀死的方法很多。
根据动物的大小、种类及观察目的而定。
例如,青蛙和小鼠等较小的动物可用断头法。
一些较大的动物如兔子和猫等可用空气栓塞法,从耳静脉注射入空气,使动物心脏发生急性空气栓塞,循环障碍,痉挛而死。
此种方法各脏器易瘀血。
也可采用扑杀法。
无论那种方法都应该使动物迅速死亡。
动物杀死后立即取材和固定,否则组织会因失水变形和发生死后变化。
一、取材 1.动物屠宰前应写好程序,准备好刀子、剪子、3/ 16镊子、线、注射器、生理盐水、固定液等。
固定液的量一般为材料的 10---15 倍或稍多。
2.取材注意事项取材的刀、剪要锋利;动作要轻,不可来回切割,不要挤压组织以免损伤内部,先用镊子轻轻夹住,再用剪子或刀子切下,被镊子夹过的部分不要;柔软的组织可取稍大些,固定数小时后再切成小的组织块,继续固定;取材要快;切取的材料应根据需要观察的部位进行选择,考虑好切面的方向。
3.取材的顺序先取容易自溶的组织,骨骼和肌肉后取,依次为心脏、肺、肝、脾、肾、小、大肠、肾上腺、睾丸、卵巢、子宫、脑垂体等。
取肠时可用生理盐水轻轻冲洗肠内容物,然后结扎一端,注入固定液,再结扎另一端,固定 34 小时后再切成小段。
肺脏可用少量固定液自气管或支气管注入,约 20 分钟后略膨胀再切成薄片固定。
4.取材的大小取材的大小一般为 0.50.50.3 厘米, 110.3 厘米,最厚不超过 0.5 厘米。
取材很关键,应新鲜、迅速。
二、固定将取下的材料,立即投入固定剂内,借助药品的作用,使组织细胞的形态结构保存起来。
(一)固定的目的 1.防止组织的溶解和腐败。
2.使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶类等各种物质沉淀下来,保存组织细胞原有的结构。
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 3.固定剂兼有硬化作用,使组织硬化、增加硬度,使组织不易变形,有利于以后的处理。
(二)固定剂的种类种类很多,一般分为单纯固定剂和混合固定剂。
单纯固定剂是用一种药品作为固定剂的如乙醇、甲醛等,混合固定剂是用几种药品配合起来,可以使各自的优点相互补充。
1.单纯固定剂 1)乙醇---无色的液体,可以与水以任何比例混合。
具有以下特点:穿透速度快,与其他固定液混合使用时可以增加他们的穿透力。
酒精固定的组织硬化显著,体积收缩厉害,组织在高浓度酒精中滞留过久,会变脆,体积缩小原体积的 20%左右。
通常用 95%或 100% 的酒精固定,但是不宜放置过久,一般保存在 70%酒精。
酒精是一种还原剂,易被氧化成乙醛,再变为醋酸,所以不能与铬酸、重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合。
酒精可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白,前二者生成的沉淀不溶于水,后者所生的沉淀则溶于水,所以酒精固定的标本对核的染色不良。
2)甲醛---是一种气体,一般市售的为 37-40%的甲醛水溶液5/ 16或者称福尔马林,易挥发,有强烈的刺激性气味。
福尔马林固定组织,渗透力强,组织收缩少,但经酒精脱水时收缩很大,它能使组织硬化并增加组织的弹性。
甲醛为非沉淀性固定剂,但是可与蛋白质化和,对脂肪、神经及髓鞘的固定效果较好,也可固定高尔基复合体和线粒体,为一般病理制片常用。
固定后,核的染色较好,胞浆染色较差。
适合固定的浓度:10%的福尔马林。
固定小块组织数小时即可,时间长也没有关系。
加热可缩短固定时间。
对于较长时间固定的组织须流水冲洗 24 小时甚至 48 小时,否则会影响染色效果。
因为福尔马林防止久,能产生三聚甲醛白色沉淀,在高温下可变回甲醛,甲醛易氧化,变成乙酸,使溶液变为酸性,增加标本的酸性,严重时影响核的染色。
可用如下方法保持中性甲醛:福尔马林 100 毫升,蒸馏水 900 毫升,一水磷酸二氢钠 4 克,磷酸氢二钠 6.5 克 3)醋酸---17℃以下结冰,又称冰醋酸。
此液能凝固细胞核中的蛋白质,适合染色质或染色体的固定,穿透力强,对于一般的组织块,只需固定 1 小时。
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 此液可使细胞膨胀,防止收缩;不能凝固细胞中的蛋白质,所以不会使组织硬化,常和酒精、福尔马林等容易引起组织变硬和收缩的液体混合。
4)苦味酸---是一种黄色结晶,在水中的溶解度为 0. 9-1. 2%,在空气中能自燃,在封闭容器中能剧烈爆炸,故在实验室中常配成饱和水溶液保存。
易溶于酒精、二甲苯、苯、水。
苦味酸可沉淀一切蛋白质,它对类脂物、碳水化合物无作用。
此固定液对细胞收缩明显,收缩程度可达 50%以上,但是不使组织变硬;穿透速度慢。
经苦味酸固定的组织不用水洗,可直接用 70%的酒精洗去黄色,即使留些颜色也无妨碍。
固定时间不宜过久,否则影响苏木精碱性染料的染色。
2.混合固定剂 1) Bouin 氏液:苦味酸饱和水溶液 75 毫升福尔马林 25 毫升冰醋酸 5 毫升。
是一种良好的固定剂,一般组织学和胚胎学的材料均可固定,该液渗透力强,固定均匀,组织收缩少,可把一般的微细结构显示出来。
一般组织固定 12-24 小时,小块组织数小时。
2) Carnoy 氏液:7/ 16纯酒精 60 毫升冰醋酸 10 毫升氯仿 30 毫升。
此液穿透速度快,达快组织不超过 3-4 小时,小块组织20-40 分钟,时间久了,会使组织膨胀并有硬化现象。
多用于细胞学制片,固定染色体、中心体、有丝分裂相等;对外膜致密的组织特别适合,也适于腺体和淋巴组织。
第二节洗涤和脱水一、洗涤材料从固定液中取出后,需要立即冲洗使其中含有的固定液全部除去。
否则留在组织中的固定液,有的可妨碍染色,有的可以发生沉淀物或结晶影响观察,有的可继续发生作用,使材料变坏或使以后的处理发生困难。
冲洗有一定的原则,视固定剂的种类而异:1.含有苦味酸的固定液,如 Bouin 氏液,倒去固定液入 70%的酒精更换数次即可脱水。
如想除去苦味酸的黄色,可在 70%的酒精中加入少量的氨水(数滴),且能中和苦味酸,更换数次新液。
2.福尔马林固定的组织,一般不需要冲洗,固定时间长久的标本一定要充分水洗,否则会影响染色,一般自来水冲洗 12-24 小时。
3.含有铬酸、重铬酸钾的固定剂,必须流水冲洗,冲洗时间与固定时间相同或多于固定时间。
4.如固定液中含有氯化汞,应根据溶液的性质用水或酒精冲洗,冲洗后必须在 70%的酒精中加碘去汞(一般为 0.5%的碘酒精),---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 去汞后再用 5%的硫代硫酸钠去除碘的黄色。
因为汞易在组织内形成结晶不利于切片,不利于观察。
5.锇酸及含有锇算的固定液,必须用流水冲洗。
因为锇算能使组织发黑,影响染色,经过酒精时形成沉淀。