结核分枝杆菌阅读笔记

结核杆菌/致病性/致病机理：
有毒株在机体内顽强增殖引起炎症
菌体成分、代谢产物的毒性
机体对菌体成分产生的免疫损伤
主要病变：以迟发型超敏反应为基础的肉芽
肿性炎症，形成结核结节
结核杆菌免疫性以细胞免疫为主
治疗原则：
早期：早发现、早治疗
联用：联用二种或二种以上抗结核药物，
保证疗效和防止耐药性产生
适量：剂量过大产生副作用，
剂量不足产生耐药性，确保疗效
规律：在规定的疗程内有规律的按时用药
全程：中断治疗导致治疗失败和增加复发率
DOTS—直接督导短程化疗
DOTS combines five elements: political commitment, microscopy services, drug supplies, surveillance and monitoring systems, and use of highly efficacious regimes with direct observation of treatment
直接督导下的短程化疗结合了五个要素:政治承诺、显微镜服务、药物供应、监测和监测系统，以及使用高效的方案和直接观察治疗
一线药物是指药效较好且使用频率较高的药物，抗结核的一线药物包括异烟肼、利福平、乙胺丁醇等。抗结核的二线药物有卡那霉素、左氧氟沙星等，二线药物药效较弱，同时副作用也比较大。
三、结核分枝杆菌微生物学检查
细菌学免疫学 分子生物学 其他
二级或以上生物安全柜
诊断TB步骤：
包括病史和风险评估的医学评估
结核菌素皮肤试验
胸部x光片
细菌学检查
结核杆菌微生物学检查：
标本采集
1.根据不同的检验要求采集标本:
镜检标本、分离培养标本
2.根据不同的感染部分采集标本：
痰、尿、粪、脑脊液、胸、腹水、
儿童易将痰吞下，可取洗胃液检查
检验程序;
标本
涂片染色镜检：抗酸染色
培养法：罗氏固体培养基
动物试验
细菌学基因诊断：PCR
形态学检查法
（1）涂片：
①厚膜涂片法(直接涂片)：含菌量达>10万/ml才能检查，污染严重，影响结果
②离心沉淀涂片法：
③漂浮集菌涂片法：结核杆菌胞壁富含类脂质，加有机溶剂，细菌溶于有机相，悬浮于水层表面而集菌
2）抗酸染色法：
原理:抗酸菌含有分枝菌酸，能与石炭酸复红牢固结合，盐酸酒精不易脱色，而非抗酸菌易被酒精脱色，被美兰染成兰色
步骤：涂片→干燥→固定→石炭酸复红加热染5min→冷后水洗→脱色1-3min（3%HCl酒精脱至无红色)→水洗→美兰复染1min →水洗→干燥→镜检
染色性：抗酸菌红色，非抗酸菌兰色
形态：细长略弯曲的杆菌，人型比牛型细长，常聚集成团，衰老菌，抗结核药物作用可出现多形性，呈球状，串珠状，丝状
荧光染色法：
金胺O染色法——加热固定的涂片，石炭酸金胺

液O染色15min，水洗、干燥、酸乙醇脱色2min，水洗、干燥，高锰酸钾2min，水洗，干燥，荧光显微镜观察。此法阳性率可提高10~30倍。
暗背景，抗酸杆菌呈黄绿色或银白色荧光
培养检查法
结核杆菌培养检查的意义？
确诊
观察化疗效果
确定流行病学指标
研究抗结核药物的作用等
标本处理方法:
酸(3%HCl或6%H2SO4)，30min
或碱(4%NaOH)，30min
可杀灭绝大多数杂菌
消化标本中的粘稠物质，有利于结核菌的生长
去除杂菌或/和集菌，提高检出率，
102~103个/ml结核杆菌即可培养阳性
经酸碱处理的标本，中和后接种
无杂菌污染的标本，如脑脊髓，腹水，可直接接种，或集菌后分离培养
罗氏培养基主要成分的作用:
蛋黄含脂质生长因子，能刺激结核杆菌生长
甘油对人型菌生长有促进作用。一定浓度对牛型及鼠型菌有抑制作用
孔雀绿抑制杂菌生长，便于分离和长期培养
青霉素(50u/ml)或抗霉素，抑制细菌及真菌生长，为选择性培养基
菌落特征
呈颗粒、结节或“花菜状”，乳白色或米黄色，不透明
细菌含脂质多，疏水性，需氧性，易形成皱褶的菌膜浮于液面，如加Tween 80，则细菌呈均匀生长，有利于作药敏和动物试验
CO2： 5~10% ，振荡培养有利菌生长
湿度：培养基用胶塞，保证湿度，提供一定浓度的CO2
结核菌素试验
原理：Ⅳ超敏反应
结核菌素：
①旧结核菌素（OT）结核杆菌的甘油肉汤培养物加热过滤液，主要成分是蛋白，也含有结核杆菌生长过程中的其他代谢产物和培养基成分
②纯蛋白衍生物（PPD，精制结核菌素）OT经三氯醋酸沉淀后的纯化物，纯细菌蛋白成分
结果观察
阴性：硬结<5mm ①从无结核菌感染，又无卡介菌接种史②原发性感染的早期，尚未产生超敏反应③正患严重结核病（如全身粟粒性结核或结核性脑膜炎）机体已丧失反应能力④病毒感染：如麻疹病毒⑤医源性：放疗、大剂量化疗、激素药物
阳性：硬结>5mm，< 15mm 阳性，表明机体对TB有超敏反应，曾感染过结核，但不表明现在有结核病
强阳性：硬结>15mm 强阳性，表明可能有活动性感染，应进一步检查是否有结核病
结核菌素试验的应用：
①选择卡介苗接种对象、测定卡介菌接种后免疫效果
②作为婴幼儿结核病的辅助诊断
③了解人群自然感染率，在未接种卡介苗人群中作结核菌感染的流行病学调查
④测定肿瘤病人等的细胞免疫功能
γ-干扰素释放试验
结核特异抗原 ESAT-6 CFP-10