如何养好细胞——细胞污染的防治.ppt
关于细胞污染的一些总结和心得
关于细胞污染的一些总结和心得概述凡混入细胞培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染，细胞污染不能完全被消除，但能减少其发生的频率和后果的严重性。
细胞污染根据污染源主要可以分为物理性，化学性和生物性污染。
物理性污染的来源、危害及预防：物理性污染常常被人们所忽视或被笼统地归为化学性污染。
物理性污染通过影响细胞培养体系中的生化成分，从而影响细胞的代谢。
培养环境中的物理因素，如温度、放射线、振动、辐射(紫外线或荧光)会对细胞产生影响。
细胞、培养液或其它培养试剂暴露于放射线、辐射或过冷过热的温度中，可以引起细胞代谢发生改变，如细胞同步化、细胞生长受抑制甚至细胞死亡。
通过实验室的合理设计及建立规范的操作规程，可以减少环境中物理因素对细胞的影响。
孵箱应放在温度较恒定的环境中，周围不能放置能引起机械振动的设备，如离心机。
培养液及培养试剂应放在固定的位置，为避免光照试剂不能放在玻璃门的冰箱中，试剂周围不能放同位素。
培养液从冰箱中取出后应在室温中放置一段时间后再进行实验，以避免过冷的温度对细胞的影响。
化学性污染的来源、危害及预防培养环境中许多化学物质都可以引起细胞的污染。
化学物质并不总是抑制细胞的生长，某些化学物质如激素就可促进细胞的生长。
不同细胞对化学物质污染的反应是不一样的。
未纯化的物质、试剂、水、血清、生长辅助因子及储存试剂的容器都可能成为化学性污染的来源。
细胞培养的必需养分，如氨基酸，若浓度超过了合适的范围，也会对细胞产生毒性。
同样，不同细胞系其最佳培养条件下对血清和缓冲液的要求是不一样的，在培养中应严格控制。
玻璃制品清洗过程中残留的变性剂或肥皂(通常残留在瓶盖的内表面)是最常见的化学性污染。
水是唯一一种在凝固时膨胀的化合物。
因此在选择冻存细胞的容器时应考虑到这个因素。
容器因水的膨胀而发生破裂是引起试剂污染的重要原因。
为了避免金属离子、有机分子、细胞内毒素等物质对水的污染，在配制液体，清洗容器时必须使用不含杂质的超纯水。
细胞培养中常见的污染及处理@麦粒
常见细胞污染及其处理方法麦~粒（2012级生物化学与分子生物学专业）摘要：细胞培养是生命科学实验及生物医药产业化中的一项关键技术，细胞污染问题一直是细胞培养中的大敌。
本文综述了细胞培养中污染的类型、处理方法和预防措施等，以期为实验室细胞培养中遇到的细胞污染的解决提供参考。
关键词：细胞培养，细胞污染，支原体污染细胞培养技术是现代生命科学研究中不可缺少的一项基本实验技术，同时也是细胞工程中的核心技术之一。
细胞培养的质量好坏直接关系到实验结果的可靠性与否以及产品质量的合格与否。
在细胞培养中，最基本的原则就是无菌操作，污染是细胞培养最致命的大敌，预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。
特别是对于一些珍贵的细胞株，一旦污染对实验可能就是毁灭性的。
1 污染的类型细胞污染的类型可分为物理、化学、生物三类。
其中化学、生物因素最为常见，物理因素最易被忽视。
1.1物理污染物理性污染通过影响细胞培养体系中的组分，从而影响了细胞的代谢。
最为常见的是温度和辐射（紫外线照射）。
过冷或过热的温度对细胞可引起细胞生理状态的改变，如从冰箱中取出的培养液直接加至37℃培养的细胞中可能会造成细胞应激，影响某些实验现象的观察。
在生物安全柜紫外灭菌时，应当遮蔽对紫外线敏感的试剂，同时普通操作中也要注意对见光易分解的物质进行避光处理。
对于需要使用同位素标记的某些实验，应当注意细胞、试剂周围不能放同位素。
除此之外，有时操作过程中偶尔有异物落入，极易造成污染。
一些小的颗粒状异物作为是微生物污染的载体进入培养液中造成细胞污染。
另外，实验过程中酒精棉球的棉絮、移液器枪头上的某些塑料碎屑等都有可能增加染菌的概率。
1.2化学污染细胞培养中的化学污染大多是由于实验准备或实验过程中造作不当造成的。
在实验准备阶段，细胞培养室中的器皿应做到专用，避免与常用器皿混用。
此外，细胞用器皿洗刷过程中要注意洗刷彻底，不可有洗涤剂等残留。
高压灭菌时应灭菌彻底，并在灭菌后的生物安全柜中打开使用。
细胞污染
二、细胞污染的预防
消毒（耗 材、制备 间）
无菌操作
消毒
• 制备间 0.1% 新洁尔灭、75%酒精、紫外
照 射、臭氧熏
• 物料耗材 高压灭菌、75%酒精、紫外照
病毒污染
由于病毒有种属特异性， 所以病毒污染的概率比 较小。病毒污染难于发 现，一般的实验室都没 能力检查细胞培养中污 染的病毒。由于病毒一 般潜伏在细胞内，对整 个细胞培养不是致死的， 但它可能会影响实验的 结果。
人角膜上皮细胞被HSV-1感染后的形态学变化
细胞交叉污染
• 细胞污染是由于在培养过程中各种细胞同时进行， 而所用器具或液体混杂使用所致。这种污染使培 养细胞不同种类之间发生混乱，细胞生长特性， 形态发生变化。
支原体污染
支原体无细胞壁形态呈高度 多形性，可为圆形、丝状或 梨形。直径0.2~0.3μm，一 般过滤除菌无法去除它，光 镜下难以看清它的形态结构。 培养细胞受支原体污染后， 多数细胞病理变化轻微，部 分敏感细胞可见细胞生长增 殖变慢，部分细胞变圆，从 瓶壁脱落。
支原体内的DNA被荧光染料着色
原虫污染
培养液可轻微浑浊，显 微镜下那些细小的点状 物数量非常多，轻微活 动，细胞虽然可以 生长 但繁殖速度却明显减慢， 而且细胞状态不好，边 缘不清楚，细胞不透亮。
螨虫污染
黑胶虫污染
• 存在争论
生物：直径小于0.1μm，大多国外血清中多见，可能是国 外牛血清中含有的某种原虫。 非生物：血清中的某些蛋白成分的物质，经过灭活之后丧 失活性，在培养基中，镜检见到的运动其实是这些物质在 溶液中做“布朗运动”。
细胞培养注意事项5
细胞培养也叫细胞克隆技术。细胞培养技术可以由一 个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的 多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培 养本身就是细胞的克隆。
意义：通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。 因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养 技术是生物技术中最核心、最基础的技术。
注意事项
2、无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品， 例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置， 其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实 验用品以70%ethanol擦拭后才带入无菌操作台内。实 验操作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌 区域操作。
注意事项
3、小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触 吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开的容器正上 方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身， 倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
遇到的问题
细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？
除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细 胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入 含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换 新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解 冻后细胞无法生长或贴附之问题。
遇到的问题
注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将 DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。
遇到的问题
冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一：冷冻管置于4 C 30~60分钟 → (-20 C 30分钟) → -80 C 16~18小时(或隔夜)→液氮槽vapor phase长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温 机中每分钟降1-3 C 至–80 C 以下，再放入液氮槽 vaporphase长期储存。*-20 C 不可超过1小时，以防止 冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接 放入-80C冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞培养中的常见问题解决方法
细胞培养中的常见问题解决方法细胞培养是生物医学研究和药物开发中不可或缺的重要工具。
然而，细胞培养过程中常常会遇到一些问题，例如污染、细胞凋亡、不适当的生长条件等。
本文将介绍细胞培养中的一些常见问题以及相应的解决方法。
1. 细胞污染细胞污染是细胞培养中最常见的问题之一。
它可能是由细菌、真菌、酵母、病毒等微生物引起的。
污染会导致细胞生长受阻、实验结果的不可靠以及其他严重后果。
为了解决这个问题，可以采取以下几种方法：- 严格按照无菌操作操作培养细胞。
使用无菌操作条件，包括在无菌环境下穿戴手套、使用消毒液清洗操作台面和器具、对培养皿和培养物进行灭菌处理等。
- 经常检查细胞培养物的外观。
细胞培养物应呈现透明、均匀的状态。
如果有任何可疑的异常，请及时进行检查和处理。
- 使用含有抗生素的培养基。
对于某些细胞株来说，添加适量的抗生素可以阻止细菌等污染物的生长。
2. 细胞凋亡细胞凋亡是正常细胞生命周期的一个重要阶段，但在细胞培养过程中，过量的细胞凋亡会导致细胞数量的减少，对实验结果造成不利影响。
以下是一些常见的细胞凋亡问题及其解决方法：- 减少细胞培养的过度处理。
频繁的细胞移植和传代会导致细胞凋亡增加。
适当延长传代周期，避免过多的细胞移植。
- 提供适当的细胞营养来源。
细胞需要足够的营养物质来维持正常的生长。
不合适的培养基组分或者浓度可能会导致细胞凋亡。
确保培养基中的营养物质符合细胞的需求，并根据细胞株的特点进行相应的调整。
- 坚持细胞培养的无菌操作。
如前所述，细菌或其他微生物的污染会导致细胞凋亡的增加。
通过无菌操作避免细胞污染，继而减少细胞凋亡。
3. pH值失调培养基的pH值是细胞培养中一个重要的生长条件。
pH值的不稳定性会影响细胞的代谢和生长。
以下是一些解决pH值失调的建议：- 定期检测和调整培养基的pH值。
使用pH计或试纸进行测定，及时调整pH值，保持在适宜的范围内。
- 确保培养基的配制正确。
细胞培养基的配制过程中，需要严格按照配方中所指定的浓度和比例添加各种成分。
细胞培养及避免细胞污染的方法
１３ 冷 冻 细胞 的 复 苏 ．
冷冻细胞复苏的原则为快速解冻 ，从液氮 中取 出细胞 冻存 管 之前 应 准备好 ３ ％的温 水 ，冻存 管取 ８ 出后 用 镊子 夹 住 顶端 迅 速 放 入 温 水 中不 停 搅 动 ， 使
菌 的培 养 瓶 中放入 培 养箱 中培养 ，如果 有 污染 则 肉
其迅速融化 ， 目的是使细胞快速通过受损温度 ， 其 尽 量减少对细胞活力的损害。由于冻存液中的二 甲基 亚 砜对 细胞 有 一 定毒 性 ， 因此解 冻 的细 胞应 先 离 心 ，
去 除上 清 （ 即冻 存 液 ）再 向细胞 中加入 新 鲜 的培 养 ， 液 ，吹 吸数 次混 匀细 胞 ，转入 经 ３ ℃预 温 的培养 瓶 ７ 中 。 般细胞 在 复苏后 ４ ８ 时就 可贴壁 。 胞复 苏 一 ～小 细
滤使用的滤器滤膜最好使用一次性 的，如果是反复 使 用的滤器则应在 过滤前 先将滤器和 滤膜高压灭
菌 ， 后在 无 菌操 作 台内进 行过 滤分 装 ， 收 滤液 的 而 接 容 器也 需事 先 高压 灭 菌 。培 养细 胞 过程 中使用 的所 有 实 验 用具 ， 移液 管 、 次 性 枪 头 、 次 性 塑 料离 如 一 一
冻保 存 液 ， 温 待 用 。将 待保 存 的 细胞 离 心 （ ０ 室 ３ ０ ０ 转 以下 ３ ５分 钟 ）去 除 上清 ， — ， 加入 适 量冷冻 保存 液 ，
２２ 细胞 培 养 的 试 剂 和 用品 ．
培养 液 和胰 酶 的配 制 用水 是 三蒸 水 或符 合 培养 细胞标 准 的水 。试 剂 的除菌 方法采 用过 滤除菌 法 ， 过
一
一
以减少 沉淀 。
口 卫 生 防 疫
细 胞 培 养 及 避 免 细 胞 污 染 的 方 法
听说你的细胞被污染了？
听说你的细胞被污染了？导语学会正确地进⾏细胞培养是细胞实验的基础，然⽽⼩⼼翼翼的你，怎奈何体外细胞的脆弱，百密终有⼀疏。
你偶然的⼀个喷嚏，不经意得捋捋你的头发丝，对于这些丢失体外抵抗能⼒的细胞都可能是毁灭性的灾害。
但是，并⾮所有的细胞污染都是致命的，若是及时发现，还是可以得到挽救的。
今天咱们的主题就是：教⼤家辨别各种细胞污染及如何应对。
如下图：实验室常见的细胞污染，你都知道属于哪种污染吗？细胞培养中的常见污染主要包括：细菌、霉菌、⽀原体、⿊胶⾍、病毒和交叉污染等，每⼀种污染都有各⾃的特点。
如细菌和霉菌增殖迅速，短时间就对细胞造成明显伤害；⽽⽀原体和病毒对细胞的影响则是⼀种缓慢长期的过程。
下⾯就具体看看每⼀种污染。
1. 细菌污染（较容易被发现）引起原因：操作不规范或⽆菌措施不到位等；细菌污染种类：⽩⾊葡萄球菌，⼤肠杆菌，假单孢菌、枯草杆菌等；细胞污染后的变化：①污染后由于有⼤量酸性物质产⽣，因此培养基会短时间内由红⾊变为黄⾊；②由于细菌⼤量增殖，培养基变浑浊，稍微振荡后可见培养基表⾯有漂浮物；③普通倒置显微镜⾼倍镜观察，胞浆内可见⼤量颗粒（如下图红⾊箭头）；④细胞⽣长缓慢，逐渐变圆脱落。
如下图所⽰：左：悬浮细胞污染后，可见悬浮细胞个体远⼤于杆状细菌，⽽细菌呈⿊⾊颗粒状并会有较快的运动速度；右：贴壁细胞，可看到球状细菌分布于细胞周围并做剧烈运动。
细菌污染的细胞（左悬浮细胞，右贴壁细胞）图⽚来源：UNC School of Medicine处理措施：在培养液中添加双抗（P/S）处理；可⽤抗⽣素的常⽤量的5~10倍作冲击疗法，⽤药24~48h后再换常规培养液；另外添加西司他丁钠和亚胺培南（泰能）处理细胞，适⽤于培养⽤具被打翻、使⽤了污染的培养液或要培养污染的组织或者冻存细胞的污染情况[1]。
裸⿏体内接种法是⽐较有效和彻底的除菌⽅法。
主要包括腹⽔接种和⽪下荷瘤分离细胞。
既能彻底清除污染细菌，⼜能保持肿瘤细胞的来源特征和恶性特性。
细胞培养中的常见问题及解决方法
细胞培养中的常见问题及解决方法细胞培养是现代生命科学研究中常用的实验技术之一，可以用于细胞增殖、分化、转染等研究。
然而，细胞培养过程中常常会出现一些问题，如细胞污染、细胞凋亡和细胞失活等。
本文将讨论细胞培养中的这些常见问题，并提出相应的解决方法。
1. 细胞污染细胞污染是细胞培养中的一大难题。
它可以由细菌、真菌或其他细胞类型的污染引起。
细胞污染会影响实验结果的准确性，并可能导致细胞系的丢失。
为了解决这个问题，我们可以采取以下措施：（1）经常检查细胞培养器具和培养基，确保其无菌；（2）使用抗生素或抗黴剂对培养基进行预处理，以减少污染的风险；（3）定期进行污染检测，例如细胞培养液和工作区的表面。
2. 细胞凋亡细胞凋亡是正常细胞生命周期的一部分，但在细胞培养中，过多的细胞凋亡会导致实验结果的误差。
为了减少细胞凋亡的发生，我们可以考虑以下措施：（1）优化培养条件，包括温度、CO2浓度和培养基配方等；（2）定期检查细胞形态和健康状况，及时处理出现凋亡现象的细胞；（3）使用细胞凋亡检测工具，如Annexin V-FITC/PI染色法，来评估细胞凋亡水平。
3. 细胞失活细胞失活现象在细胞培养中常常发生，可能是由于细胞老化、无营养补充或培养条件不佳等原因引起。
为了避免细胞失活的发生，我们可以尝试以下方法：（1）及时更换培养基，确保细胞获得充足的营养物质；（2）避免过度培养，及时传代细胞；（3）定期鉴定细胞的纯度和活力，并确保培养条件适当；（4）尝试使用细胞增殖激素或生长因子来促进细胞的增殖和存活。
细胞培养中的常见问题并不局限于上述三个，还有其他一些问题，例如细胞出现突变、细胞凝固等。
针对这些问题，我们可以进一步深入研究并寻找解决方法。
同时，注意维持实验室的清洁和规范操作也是解决这些问题的关键。
细胞培养在生命科学研究中发挥着重要作用。
了解并解决细胞培养中的常见问题，有助于提高实验结果的准确性和可重复性。
通过合理的实验设计、严谨的操作和科学的方法选择，我们可以克服这些问题，为细胞培养研究的进展做出贡献。
培育技术中常见的细胞污染处理方法
培育技术中常见的细胞污染处理方法细胞污染是培育技术过程中一个常见而严重的问题。
细胞污染指的是外源性的微生物、真菌、细菌或其他细胞种类在细胞培养中的存在。
细胞污染会对实验结果产生不可预测的影响，甚至使实验失效。
因此，对于细胞污染的处理方法和预防措施的研究非常重要。
本文将介绍一些在细胞培养中常见的细胞污染处理方法。
一、消毒剂处理消毒剂处理是最常见的细胞污染处理方法之一。
消毒剂可以有效杀灭微生物和其他细胞种类，以减少污染。
常见的消毒剂有乙醇、过氧化氢和氯化物等。
在使用消毒剂处理细胞污染时，应选择适当的浓度和处理时间，并确保消毒剂不会对目标细胞产生不良影响。
二、培养基更换培养基更换是另一种常见的细胞污染处理方法。
培养基中添加抗生素可以有效抑制污染微生物的生长。
常用的抗生素包括青霉素、链霉素和庆大霉素等。
更换含有抗生素的培养基可以杀灭或抑制细菌和真菌等微生物的生长，从而有效处理细胞污染。
三、细胞分离细胞分离是一种通过分离感染的细胞来处理细胞污染的方法。
这可以通过细胞离心、细胞分选或免疫磁珠分离等技术来实现。
通过分离感染的细胞，可以有效减少细胞污染，同时保留无污染的细胞进行后续实验。
四、细胞冻存细胞冻存是另一种有效处理细胞污染的方法。
将无污染的细胞分装入液氮等低温环境中冻存，可以有效抑制细菌、真菌和其他细胞种类的生长。
在需要时，可以从冻存样品中恢复细胞，以继续实验。
然而，细胞冻存也存在一定的风险，如细胞冻存过程中可能引起的细胞损伤等问题需要注意。
五、污染原因的分析和改进污染原因的分析和改进是细胞污染处理的重要环节。
通过分析细胞污染的原因，可以采取相应的改进措施来预防细胞污染的再次发生。
污染原因的分析可以包括对实验设备、试剂和操作流程等的检查和评估。
通过对可能存在的问题进行改进，可以有效提高细胞培养的纯度和可靠性。
细胞污染是培育技术中一个常见且严重的问题。
为了有效处理细胞污染，研究并应用适当的处理方法和预防措施是非常重要的。
细胞培养操作规范课件
02
细胞培养操作流程
准备工作
细胞培养用品
准备适合细胞生长的培 养基、细胞培养瓶、细 胞培养板、离心管等。
无菌操作
在超净工作台中进行操 作，确保无菌环境。
细胞来源
确保细胞来源可靠，避 免使用污染或异常细胞
。
培养环境
调节室内温度和湿度， 保持适宜的二氧化碳浓
度。
细胞复苏
01
02
03
04
细胞凋亡的检测与分析
细胞凋亡的检测
利用荧光染色、电镜观察等技术手段 检测细胞凋亡的特征性形态学变化和 生化改变。
凋亡分析
分析凋亡细胞的形态学特征、数量分 布以及与细胞生长、分化等生物学过 程的关系，了解凋亡在细胞生命活动 中的作用。
THANKS
感谢观看
02
细胞培养技术广泛应用于生命科 学、医学、农业和工业等领域， 是研究细胞生物学和疾病机制的 重要手段。
细胞培养的类型
01
02
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原代细胞培养
直接从生物体获取的细胞 进行培养。
传代细胞培养
将原代细胞进行传代培养 ，使其在体外持续生长和 分裂。
干细胞培养
对干细胞进行体外培养， 以维持其未分化状态或诱 导其分化为特定类型的细 胞。
注意药物处理对细胞的影响，控 制药物浓度和作用时间。
总结词：细胞死亡可能是由于培 养条件不适、药物处理或细胞交 叉污染等原因引起的。
检查培养基是否新鲜，确保没有 过期或污染。
对细胞进行鉴定和纯化，避免交 叉污染。
细胞形态异常
总结词：细胞形态异常 可能是由于细胞发生突 变、癌变或病毒感染等
原因引起的。
准备复苏液
将适量的培养基和胎牛血清混 合，加入细胞培养瓶中。
解决细胞培养的污染问题之抗生素篇
解决细胞培养的污染问题之抗⽣素篇近⽇，细胞培养俱乐部⾥⼤家⼜在对细胞污染和⽤什么抗⽣素产⽣疑问，对于新⼿来说，这⼀道关卡确实是严峻的考验。
做细胞研究的如果细胞养不好，后⾯的都免谈。
⼑王因此采访了⼏位圈内的好友，看看这些实验狗都是如何建议的吧。
不过在采访前先来看看各⾃奇葩的污染。
或者这会⼉已经有⼈在对号⼊座了吧（哈哈）丁⾹园的看客：由于细菌和酵母等的污染很容易观察到，及时清理污染细胞可⼤⼤减少⽀原体、病毒的污染机会。
潜在的⽀原体、病毒的感染会带来很⼤的危害。
这些微⽣物的存在会影响细胞的理化性质，从⽽使研究者得到错误的实验结果。
由于过滤技术的提⾼和超净台质量的改进，在规范细胞培养操作过程中引进污染的机会已经被⼤⼤减低。
所以，建议常规的的细胞培养中不要使⽤抗⽣素。
只有在培养污染源较多(如组织培养)或者⾮常珍贵的细胞株时才使⽤抗⽣素。
伏尔加河上的实验狗：细菌的话最好排查污染源，抗⽣素不是好东西。
如果⼀定要加的话，平时使⽤浓度是青霉素100U/mL，链霉素100µg/mL。
如果是冲击治疗，可⽤10X（刚才配⽐为1X）。
另外，实验室条件如果不好，可能引发真菌污染，可以尝试⽤两性霉素，具体浓度不记得了，因为这个毕竟⽤的少。
⽉亮不等于⾼冷：对付细菌和真菌的污染不应求助于抗⽣素，因为⽤久了我们知道它有⼀个选择效应，会产⽣抗药性的菌株。
所以最好还是注意⽆菌操作，从源头上排除污染⽐较好。
对付⽀原体污染，还是要⽤抗⽣素的，可以⽤环丙沙星，终浓度50µg/mL就可以，处理⼤约⼀周到两周再去掉环丙，我买回来的的两株细胞这样处理好了。
我不是歌⼿：污染细胞最好还是丢弃，除⾮珍贵的细胞系可以⽤药救⼀救。
我同时养七株不同的细胞都没发⽣污染……个⼈感觉还是操作问题。
莱卡：找到污染源并彻底清理是更好的处理⽅法，不要觉得可惜就⽼是想着要加抗⽣素挽救。
肯定挽救不过来的，这次⽤庆⼤抑制住了，慢慢还是会筛选出抗性细菌的。
细胞培养技术与防止细胞污染的方法
实， 做好精神准备 。面对生 离死别 ， 他们都非常渴望 与亲人的团聚 ， 尽量为患 者提 供单人病 房 ， 并保持光 线充足 、 空气新 鲜 ， 氛和谐 、 气 安静 、 舒适的环境 ， 使患者及家属有家的感觉。指导家属学会简单 的
护理操作 ， 家属通过 自己亲 自为患者解 除痛苦 ， 他ｔ ，， 上有 让 使 ｌ ５理 ｑ
４３ 当的肠 外营养 ，可以改善患者 的恶 液质 ，提高患者 的生活质 ．适
量， 延长生存时间 ， 降低死亡率。
５ 家 属 的抚 慰
６ 应具有正确的生死 观 生命是有限 的， ． ２ 生命 的终结 是 自然规律 ，
护士巨大的思想变化及 身心折磨 ， 同时也 给家属带来极 大的痛 苦和沉重的经济负担 ， 心理 上都有不 同程度 的
细 胞培 养 技术 与 防止 细胞 污染 的方 法
周 丽 薇
摘要 ： 近年来， 细胞培养技术在分子生物学及 分子遗传 学中获得 巨大的进展 。 是 ， 但 在细胞培养 中常可发 生细茵和霉菌等 的污染， 如何才能有效
的 避 免 细胞 培 养 过 程 中污 染 的 发 生 。 为 此 ， 文作 者 主要 就 细胞 培 养 技 术 及 对 策 进 行 了 阐述 。 本 关键 词 ： 细胞 培 养 技 术 ： 染 ； 法 污 方
医学信息 ２ １ 年 １ 月第 ２ 卷第 １ 期 Ｍ ｄ ａ Ｉ ｏ ａ ｏ． ｏ １ ． ｏ ２ ． ｏ １ ００ １ ３ １ ｅ ｉ ｌ ｎ ｒ ｔ ｎ Ｎ ｖ２ ０ Ｖ １ ３ Ｎ ． ｃ ｆｍ ｉ ０ ． １
取舒适 的位置进餐 ， 如有恶心时 ， 进餐前先用止吐药。 障碍 。如恐惧 、 愤怒 、 悲观孤独 ， 再加之 贫困 ， 文化程度 、 家庭环境等 影响 ， 对人对事反应 比较淡漠 ， 在配合治疗 上较一般患者难度 大 ， 只 有通过耐心和细心的观察 ， 才能尽 最大的可能满足 患者 的要求 。
细胞培养技术中的常见问题与解决方法参考
细胞培养技术中的常见问题与解决方法参考细胞培养是生物学和医学研究中非常重要的一项技术。
然而，在进行细胞培养过程中，我们常常会遇到一些问题。
本文将介绍几个细胞培养中常见的问题，并提供相应的解决方法参考。
1. 细胞污染问题细胞污染是细胞培养中最常见的问题之一。
它可能来源于细胞培养器皿、培养基、试剂、液体气氛等多个方面。
常见的细胞污染类型包括细菌、真菌、酵母菌、支原体、霉菌等。
遇到细胞污染问题时，可以采取以下解决方法参考：- 严格的无菌操作：所有实验应该在无菌条件下进行，使用经过验收的培养器皿和无菌试剂。
- 经常检查和更换培养器皿、培养基：经常检查培养器皿和培养基是否有异常情况，如有污染应及时更换。
- 预防细胞污染：定期进行表面消毒、培养器具灭菌和试剂消毒以预防其他污染来源。
2. 细胞生长问题细胞生长问题是细胞培养过程中常见的一个问题。
主要表现为细胞无法黏附、生长缓慢或停止生长。
解决细胞生长问题的方法参考如下：- 增加培养物中的营养物：根据细胞类型和需求，调整培养基中的蛋白质、维生素和氨基酸等营养物的浓度。
- 提供适宜的培养条件：调整温度、湿度、CO2浓度等环境参数，以提供适宜的生长条件。
- 检查细胞的健康状态：定期检查细胞的形态和健康状况，如发现异常应及时采取措施。
3. 细胞凋亡问题细胞凋亡在细胞培养中可能出现，特别是在长期培养过程中。
细胞凋亡表现为细胞收缩、核染色质浓缩、DNA断裂等特点。
以下是解决细胞凋亡问题的方法参考：- 优化培养条件：提供适宜的培养基、温度、CO2浓度、液面高度等环境因素。
- 增加细胞存活因子：添加适量的生长因子、细胞因子或激素等，以提高细胞存活率。
- 检查细胞状态和健康：及时观察细胞的形态和生长状态，发现异常情况及时处理。
4. 细胞分化问题在一些特定细胞系中，细胞分化可能成为一个问题。
细胞分化表现为细胞形态、生长速率、分泌物或细胞功能的改变。
以下是解决细胞分化问题的方法参考：- 控制培养时间：在合适的时间段内收获细胞，以避免细胞进一步分化。
细胞培养技术中常见的细胞污染问题及处理方法
细胞培养技术中常见的细胞污染问题及处理方法细胞培养是生物学研究中经常使用的一种重要技术手段。
然而，随着研究的深入，细胞培养中常常会遇到细胞污染的问题，这给实验结果的可靠性和准确性带来了很大的影响。
细胞污染主要包括细菌、真菌、酵母、病毒以及其他的微生物污染。
在细胞培养中，如何及时发现和处理细胞污染问题，是每个实验室都需要面对的重要课题。
细菌污染是细胞培养中最常见的问题之一。
造成细菌污染的原因有很多，比如培养器具不洁净、操作不规范等。
当出现细菌污染时，可以通过观察培养物的外观变化来初步判断是否受到污染，比如培养物颜色的改变、气泡的形成等。
如果存在细菌污染的症状，可以通过将培养物进行细菌培养或细菌PCR检测以确认。
一旦确认细菌污染，需要立即更换培养器具，重做培养基，并对培养箱等设备进行彻底清洁和消毒。
真菌和酵母的污染在细胞培养中也是相对较常见的问题。
真菌和酵母污染一般表现为培养物的颜色变化、膜片上出现菌丝等。
当怀疑存在真菌和酵母的污染时，可以将培养物进行不同培养基上的转接和形态学观察，也可以通过真菌和酵母的特异性培养基进行检测确认。
处理真菌和酵母污染的方法包括体外灭菌、常规抗生素处理、加入抗真菌和酵母的药物等。
另外，病毒是一种较为严重的细胞污染问题。
病毒感染可以导致细胞凋亡、细胞功能紊乱甚至细胞死亡。
常见的病毒污染有常见冷感冒病毒、乙肝病毒等。
病毒污染的判断往往需要通过病毒培养、PCR或ELISA等技术进行鉴定。
处理病毒污染可以采用病毒灭活剂或直接更换细胞系等方法。
除了微生物污染外，还存在一些其他的细胞污染问题。
比如，细胞交叉污染是指来自其他细胞系的细胞误将自己的培养物中。
为了避免细胞交叉污染，可以采用细胞系的DNA指纹鉴定技术，或者使用经过认证的培养物，同时加强无菌操作的培养。
总结起来，细胞培养中的细胞污染问题多种多样，但我们可以通过细心观察培养物的变化、培养基的转接和不同培养基的形态学观察、特异性培养基的检测以及分子生物学方法的应用等，及时发现和处理细胞污染问题，确保实验的可靠性和准确性。
养细胞中有小黑点,是碎片or污染,如何防范处理
养细胞中有小黑点，是碎片or污染，如何防范处理养细胞中有小黑点，是碎片or污染？如何防范处理相信很多养细胞的新手都遇到过，在养细胞中，细胞在显微镜下观察小黑点，背景比较脏。
遇到这样的问题又不知道怎么去辨别细胞情况！！！如果在显微镜下观察到了小黑点，基本上可以将范围缩小到是细菌污染还是细胞碎片。
到底是污染还是碎片，可从以下几个方面进行判断：1、运动性：很多会动的小黑点，只是发生布朗运动的细胞碎片。
从运动性上比较，浮躁的细菌活跃的多。
2、培养基的浑浊度：如果在显微镜下无法辨认，那就交给时间吧。
细胞培养基对于细菌来说是非常营养的大餐。
一旦发生污染，细菌就会大量繁殖。
培养基PH值迅速下降，培养基变黄且会变浑浊。
通常在12小时内就可以发现，而在48小时内就非常明显。
被污染的细胞培养基变黄且浑浊、未被污染的细胞培养基偏红且澄清。
3、接种平板：将怀疑污染物接种在微生物培养平板中，观察菌落形成情况。
碎片？细菌？一目了然。
对于养细胞的小伙伴，污染是避之唯恐不及，防范于未然更重要。
哪些步骤最容易发生污染？最容易导致细菌污染的一个步骤就是细胞在水浴锅解冻后没有彻底消毒。
如果这个步骤发生污染的话，细胞接种24小时之内就会明显观察到细胞污染。
另外几个可能导致污染的操作是：放培养基的瓶子或者管子在用水浴锅预热后，没有彻底消毒。
实验员在操作过程中枪头有可能接触到被污染的部分而导致细胞污染。
为了防止这种情况，容器外表面包括帽子应喷洒75%乙醇彻底消毒，然后用无菌棉垫擦干。
实验员在操作过程中，移液器的枪尖可能会碰到超菌台内壁或者超菌台内放置的其他瓶子或设备，有时可能会碰到包含细胞的细胞培养瓶外表面，甚至会碰到手套，或者实验操作服的袖口。
以上所提到的任何一项操作失误，都会导致细菌污染。
保持无菌工作区是防止细胞污染的最佳方式：1、使用前和使用后，用75%乙醇对所有工作表面进行消毒。
如果操作过程发生液体溢出的情况，这一项特别重要；2、保持一个整洁的工作空间；工作区应该只包含必须的实验设备；3、在实验之前确保已经准备好所有需要的试剂和耗材，避免反复进出操作区；4、保证整个实验操作在经过彻底消毒的超菌工作台或者生物安全柜中进行。
细胞培养PPT
长需要。
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人工合成培养基只能维持细胞生存，
要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量
的天然培养基（如血清）。
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血清中含有：
①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） ②多种金属离子 ； ③激素；
④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。 ⑤各种生长因子 ⑥转移蛋白 ⑦不明成分
1悬浮生长细胞传代
离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养
液后再混匀传代。
直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除l／
2一2／3，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。
2 半悬浮生长细胞传代（Hela细胞）
此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹
打法使纫胞从瓶壁脱落下来，进行传代。
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滤器
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CO2培养箱
CO2培养箱设定的条件为37 ℃ ，5％CO2 。 使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题：
①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖 微松，以保证通气。
②保持培养箱内空气干净。定期消毒
（90 ℃ ，14 h)。
③箱内火菌蒸馏水3000毫升蒸馏水槽中 以保持箱内湿度，避兔培养液蒸发。
在生长因子、蛋白质工程、基因表达调控等研究领域，迫切需要 用无血清培养基培养细胞．
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无血清培养基的主要研制策略：在基础培养基中补充各种必需因 子，如激素、生长因子 、结合蛋白 、贴壁和扩展因子 等。
无血清培养基由基础培养基和替代血清的补充成分组成。
1975年，Sato首次成功地用无血清培养基培养了垂体细胞株，近 20多年来已报道了几十种细胞系在无血清培养基中成功地生长和 增殖。