细胞化学染色法课件

固定 显示 复染
三、基本步骤
固定
目的：保持细胞结构及化学成分不变。 方法： 1. 物理法
干燥、火焰固定 2. 化学法
蒸汽固定、液体固定 （甲醛、乙醇、丙酮等）
显示
偶氮偶联法 联苯胺法 普鲁士蓝反应 雪夫反应 金属沉淀法
复染
目的：使各种细胞显示出来便于观察 染核：中性红、甲基绿、苏木精、核固
苏丹黑染色
原理：能溶解于细胞内含脂结构中，使 脂类物质显示出来，呈棕黑色或深黑色。
正常细胞的染色反应 同（ＰＯＸ染色） 临床评价 ＰＯＸ染色特异性高于ＳＢＢ染色 ＳＢＢ染色敏感性高于ＰＯＸ染色
中性粒细胞碱性磷酸酶染色 （ＮＡＰ）
原理：中性粒细胞胞质中的碱性磷酸酶 在PH9.6的碱性条件下能水解磷酸奈酚 钠底物，生成奈酚，后者与偶氮盐偶联 形成不溶性的有色沉淀定位于胞质中的 酶活性处。
原单可为阴性，少数可弱阳性，（少而细 小，常弥散分布）。
急性早幼粒细胞白血病与急性单核细胞 白血病鉴别
AML-M3 强阳性
组织细胞白血病、恶性组织细胞病与急 单
前两者阴性
2. 成熟中性粒细胞过氧化物酶活性的变化
活性增高：再生障碍性贫血、感染、急 性淋巴细胞白血病和慢性淋巴细胞白血 病
活性减低：急粒、慢粒、急单、MDS、 放射病、退化性中性粒细胞
中性粒细胞碱性磷酸酶染色 （ＮＡＰ）
原理：
磷酸奈酚钠底物 PH9.6
碱性磷酸酶 (中性粒细胞胞质中)
奈酚+偶氮盐 (有色沉淀)
正常血细胞染色反应
NAP主要存在于中性成熟粒细胞(杆 状\分叶)
参考值：成人NAP阳性率10%-40%； NAP积分 40-80分
ＮＡＰ积分增加：
细菌性感染、再生障碍性贫血、骨 髓增殖性疾病、慢性粒细胞白血病（加 速期、急变期）、急性淋巴细胞白血病、 慢性淋巴细胞白血病、恶性淋巴瘤、骨 髓转移癌、肾上腺糖皮质激素及雄激素 治疗后等。
红、沙黄等 染浆：伊红、刚果红、光绿等
四、种类
过氧化物酶染色、苏丹黑染色、 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 过碘酸-雪夫反应 α-醋酸奈酚酯酶染色 酸性磷酸酶染色 铁染色
过氧化物酶染色(POX)
过氧化物酶： 是中性粒细胞含量最多的一种酶 主要存在于线粒体和溶酶体中 主要功能是破坏生物氧化过程中有剧毒 的过氧化物，使其放出氧，参加细胞内 氧化还原过程。
原理 Washburn 法 四甲基联苯胺法 改良pereira 染色法
四甲基联苯胺法
H2O2 溶酶体颗粒中的ＰＯＸ H2O＋O2 四甲基联苯胺 O2 联苯胺蓝 联苯胺蓝＋亚硝基铁氰化钠 O2 蓝色物质
（沉淀）
正常细胞的染色反应
粒细胞系统
原粒（可为阴性） 度逐渐增强）
分叶（阳性程
嗜酸阳性最强
×100%
临床评价： 1、鉴别白血病类型 急单 急粒 急性早幼粒细胞白血病（强阳性，不
被抑制） 急性粒单细胞白血病
其他脂酶染色
氯乙酸AS-D奈酚脂酶染色 几乎仅出现在粒细胞、特异性高。
临床意义： 急性粒细胞白血病有一定数量白血病细
胞阳性，可以肯定白血病细胞中有粒系成分， 阴性不排除急粒。
ＮＡＰ积分下降：
慢性粒细胞白血病（慢性期）、阵发性 睡眠性血红蛋白尿、骨髓增生异常综合 症、恶性组织细胞病等。
疾病的鉴别
1. 类白血病反应 血病
慢性粒细胞性白
2. 细菌性感染 病毒性感染
3. 急粒 急淋
4. 恶性淋巴瘤 恶性组织细胞病
5. 恶性组织细胞病 反应性组织细胞增 多症
6. 真性红细胞增多症 继发性红细胞增 多症
单核细胞系统 原单（可为阴性）,其他为阳性。
淋巴：大多阴性，少数阳性。 巨核及血小板：阳性
临床评价
红血病、红白血病、骨髓增生异常综合 征中幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）
白细胞系统疾病： 急淋：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗 颗粒或块状） 急粒：少数原粒呈阳性 急单：可呈阳性
M5 PAS(+)
铁染色
1、原理： 铁+亚铁氰化钾
酸性环境
亚铁氰化铁（兰色）
2、正常血细胞的染色反应 贮存铁部位：巨噬细胞和幼红细胞 细胞外铁：骨髓小粒的巨噬细胞中 呈弥散蓝色、颗粒状、小珠状或块状 可将细胞外铁分为（-）、（+）、（++）
细胞化学染色法
一、概念
细胞学和化学相结合的一门科学。 以细胞形态学为基础，结合运用化学反 应原理对血细胞内的各种化学物质（酶 类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等） 作定性、定位、半定量分析的方法。
二、临床应用
辅助判断急性白血病的细胞类型 仅从细胞形态学观察白血病的诊断
正确率约50-70%，如结合细胞化学染色 则可提到90%以上。 辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断 观察疾病疗效和预后 发病机制的探讨
7. 原发性血小板增多症 继发性血小板 增多症
8. 再生障碍性贫血 阵发性睡眠性血红蛋 白尿
过碘酸-雪夫反应
原理：
乙二醇基（多糖类物质中） 过碘酸
双醛基＋无色品红
紫红色化合物
正常血细胞染色反应
粒细胞系统
原粒（可为阴性） 强）
分叶（阳性程度逐渐增
嗜酸胞质呈红色,颗粒不着色
嗜碱反之
红细胞系统 阴性
嗜碱阴性
单核细胞系统 阴性或弱阳性，（颗粒 少而细）
其他细胞 阴性
临床评价：
辅助诊断急性白血病细胞类型首 选、最重要的细胞化学染色。
１、帮助鉴别诊断急性白血病的类型 急性粒细胞白血病：
原粒可呈阳性(粗大，局限性分布）， 阴性不可排除。 急性淋巴细胞白血病：
ＦＡＢ规定阳性率〈３％。 急性单核细胞白血病：
醋酸AS-D萘酚酯酶染色 染色结果 、临床意义基本同α-NAE
染色。
α -丁酸萘酚酯酶染色 临床意义同α-NAE染色，特异性低
于α-NAE染色
Leabharlann Baidu
酸性磷酸酶染色
原理： 偶氮偶联法： Gomori硫化铅法 抗酒石酸酸性磷酸酶染色
临床评价： 诊断多毛细胞白血病
毛细胞呈阳性，阳性反应不被L-酒石 酸抑制。
AML-M6
AML-M7
M7 PAS(+)
α-醋酸萘酚酯酶染色
原理 α-醋酸萘酚
PH中性 α-醋酸萘酚酯酶
α-萘酚+重氮盐(坚牢蓝B) (黑色或灰黑色)
正常血细胞的染色反应
单核细胞、粒细胞、淋巴细胞（均可+） 单核细胞的阳性可被氟化钠抑制。
氟化钠抑制率=抑制前的阳性率/积分-抑制后的 抑制前的阳性率/积分