类胡萝卜素的测定方法
植物叶绿素类胡萝卜素测定方法
叶绿素、类胡萝卜素含量的测定一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度,即可用公式计算出提取液中各色素的含量;根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C 和液层厚度L成正比,即A＝αCL式中：α比例常数;当溶液浓度以百分浓度为单位,液层厚度为1cm 时,α为该物质的吸光系数;各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得;如果溶液中有数种吸光物质,则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和;这就是吸光度的加和性;今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量,只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A,并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度;在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰,所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰;二、材料、仪器设备及试剂一材料：新鲜或烘干的植物叶片;二仪器设备：1分光光度计；2电子顶载天平感量；3研钵；4棕色容量瓶； 5小漏斗；6定量滤纸；7吸水纸； 8擦境纸；9滴管;三试剂：195%乙醇或80%丙酮v丙酮：v乙醇=2：1的95%水溶液；2石英砂；3碳酸钙粉; 暗中2h,,25ml三、实验步骤1取新鲜植物叶片或其它绿色组织或干材料,擦净组织表面污物,剪碎去掉中脉,混匀;2将取好的样品放入25ml容量瓶中,加混合浸提液无水乙醇:丙酮=5:520ml,放在黑暗条件下,浸泡至叶片发白,用浸提试剂定容至25ml,摇匀备用;3把叶绿体色素提取液倒入1cm光径的比色皿内,以浸提试剂为空白测定吸光度;选择波长663 646 和470nm;四、实验结果计算叶绿素a 的浓度 = OD 633 – OD 646叶绿素b 的浓度 = OD 646– OD 663类胡萝卜素浓度=÷229 单位 mg/L Cmg/L 提取液总量ml叶绿体色素含量mg/g= ____________________________ 烟叶重量g1000注意事项：操作避光研磨时间短些。
食物中胡萝卜素的测定方法
食物中胡萝卜素的测定方法(1)杨月欣教授等一、纸层析法1.原理以丙酮和石油醚提取食物中的胡萝卜素及其他植物色素，以石油醚为展开剂进行纸层析，胡萝卜素极性最小，移动速度最快，从而与其他色素分离，剪下含胡萝卜素的区带，洗脱后于450nm波长下定量测定。
2.适用范围参照GB12389-90。
本方法适用于植物性食物和含有植物性食物的混合食物中胡萝卜素的测定，其最小检出限为μg。
3.仪器和设备（1）实验室常用设备。
（2）玻璃层析缸。
（3）分光光度计。
（4）旋转蒸发器：具150ml球形瓶。
（5）恒温水浴锅。
（6）皂化回馏装置。
（7）点样器或微量注射器。
（8）滤纸。
4.试剂除特殊说明外，实验用试剂为分析纯，水为蒸馏水。
（1）石油醚（沸程30～60℃）：同时是展开剂。
（2）无水硫酸钠：分析纯。
（3）5%硫酸钠溶液。
（4）1+1氢氧化钾溶液：取50g氢氧化钾溶于50ml水。
（5）无水乙醇：需脱醛处理。
①检验乙醇是否含醛：a、银氨液：加浓氨水于5%硝酸银液中，直至氧化银沉淀溶解，加入L氢氧化钠溶液数滴，如发生沉淀，再加浓氨水使之溶解。
b、银镜反应：加2ml银氨液于试管内，加入几滴乙醇摇匀，加入少许mol/L氢氧化钠溶液加热。
如乙醇中无醛，则没有银沉淀，否则有银镜反应。
②脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中，取4g氢氧化钠溶于温乙醇中，将两者倾入1L乙醇中，摇匀，静置一、两天，将上层清液倾入蒸馏瓶中，蒸馏，弃去初蒸的50ml。
（注：蒸馏速度控制在1滴/秒。
）（6）β-胡萝卜素标准贮备液：取5mgβ-胡萝卜素标准品，溶于10ml三氯甲烷中，浓度约为500μg/ml，准确测其浓度。
①标定：取标准溶液μl，加正己烷，混匀。
测其吸光度值，比色杯厚度为1cm，以正己烷为空白，入射光波长450nm，平行测定三份，取均值。
②计算公式：X1=A ~×1× (1)E1000…式中：X1--胡萝卜素标准溶液浓度，mg/ml；A --吸光值；E --β胡萝卜素在正己烷溶液中，入射光波长450nm，比色杯厚度1cm，溶液浓度为1ppm的吸光系数，为；1——将ppm换算成mg/ml；*1000——测定过程中稀释倍数的换算。
高效液相色谱法测定15种蔬菜中的胡萝卜素
2、重复性和精密度
此外，该方法具有较好的重复性和精密度，能够满足实际测定的要求。通过 本研究的开展，为准确评估蔬菜的营养价值提供了科学依据。
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2、样品中胡萝卜素的测定结果
表1 15种蔬菜中胡萝卜素的含量（mg/100g）
3、样品中水分含量的测定结果
3、样品中水分含量的测定结果
采用烘干法测定了15种蔬菜中的水分含量，结果如表2所示。由表可知，不同 蔬菜中的水分含量也存在显著差异。其中，生菜和芹菜中的水分含量较高，分别 为94.7%和92.5%；红薯和土豆中的水分含量较低，分别为79.3%和78.6%。其他 蔬菜中的水分含量介于上述两者之间。
采用高效液相色谱法测定蔬菜中类胡萝卜素，需对方法进行重复性和精密度 评估。实验结果表明，该方法的重复性和精密度均较好，能够满足实际测定的要 求。
2、重复性和精密度
结论 本次演示介绍了高效液相色谱法测定蔬菜中类胡萝卜素的方法及注意事项。 该方法具有分离效果好、分析速度快、灵敏度高等优点，能够准确测定蔬菜中类 胡萝卜素的含量。通过对不同种类蔬菜中类胡萝卜素含量的测定，发现叶菜类蔬 菜中类胡萝卜素含量较高，而根茎类蔬菜中类胡萝卜素含量较低。
2、实验方法
（2）色谱条件：采用高效液相色谱仪进行分离分析，色谱柱为C18柱（5μm， 4.6mm×250mm），流动相为甲醇-丙酮（1:1），流速为1ml/min，检测波长为 450nm，柱温为30℃。
2、实验方法
（3）标准曲线绘制：精确称取适量胡萝卜素标准品，用甲醇-丙酮（1:1）混 合溶剂配制成不同浓度的标准溶液。分别进样分析，以峰面积（A）对胡萝卜素 浓度（C）绘制标准曲线。
3、高效液相色谱法测定类胡萝 卜素
3、高效液相色谱法测定类胡萝卜素
鉴定胡萝卜素的方法
鉴定胡萝卜素的方法
首先，最常见的鉴定胡萝卜素的方法之一就是紫外-可见分光光度法。
这种方
法是利用不同波长下胡萝卜素的吸收特性来进行鉴定。
通过测定样品在特定波长下的吸光度，可以得到胡萝卜素的含量。
这种方法简单、快速，且准确度较高，因此被广泛应用于食品加工和质量监控领域。
其次，色谱法也是一种常用的鉴定胡萝卜素的方法。
色谱法是利用样品在色谱
柱中的分离和吸附特性来进行鉴定。
通过比较待测样品与标准物质在色谱图谱上的保留时间和峰面积，可以准确地确定胡萝卜素的含量和种类。
这种方法需要专业的设备和操作技能，但其分析结果准确可靠，因此在科研领域得到了广泛应用。
另外，光谱法也是一种常见的鉴定胡萝卜素的方法。
光谱法是利用样品在特定
波长下的吸收、发射或散射特性来进行鉴定。
通过测定样品在紫外、可见、红外等光谱范围内的吸收特性，可以得到胡萝卜素的含量和结构信息。
这种方法操作简单，且对样品的要求较低，因此在食品行业得到了广泛应用。
最后，生化分析法也是一种重要的鉴定胡萝卜素的方法。
生化分析法是利用生
物学试剂和生化技术来进行鉴定。
通过测定样品在特定生化反应条件下的变化，可以准确地确定胡萝卜素的含量和种类。
这种方法需要专业的实验室设备和操作技能，但其分析结果准确可靠，因此在科研领域得到了广泛应用。
综上所述，鉴定胡萝卜素的方法有很多种，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，可以根据具体的需求和条件选择合适的方法进行鉴定。
希望本文介绍的内容能够对相关领域的科研工作者和食品从业人员有所帮助。
水果蔬菜汁类胡萝卜素含量的测定
水果、蔬菜汁类胡萝卜素含量的测定1 主题内容与适用范围本标准规定了水果、蔬菜汁中类胡萝卜素的分离提取方法及提取物中类胡萝卜素总量的测定方法。
本标准适用于水果、蔬菜汁中类胡萝卜素总量的测定。
2 原理果蔬滤液通过溶剂萃取,分离提取类胡萝卜素,在特定波长下用分光光度法测其吸光度。
该吸光度与类胡萝卜素含量成线性关系,通过换算即可得知类胡萝卜素之含量。
3 试剂和溶液本标准所用试剂除特殊规定外,均使用符合国家标准的分析纯试剂,均采用蒸馏水。
3.1 石英砂(Q/HG 22--467)；3.2 萃取剂,2/1(v/v)氯仿(GB 682)-甲醇(GB 683)混合。
4 仪器设备4.1 抽滤器；4.2 无灰分滤纸；4.3 分液漏斗：250mL；4.4 容量瓶,100mL；4.5 移液管,20mL；4.6 烧杯,50mL；4.7 分光光度计,使用的测量波长为440±10nm。
5 分析步骤注：由于类胡萝卜素本身性状的不稳定性,即见光易氧化分解,建议所有操作应避光进行。
5.1 试样的制备5.1.1 液体样品：混合均匀后取样。
5.1.2 固体样品：捣碎机捣碎后,纱布挤汁。
5.2 用移液管吸取20mL样液置50mL烧杯中。
5.3 过滤：在烧杯(5.2)中加入3g石英砂,摇动后用布氏漏斗过滤(布氏漏斗预先铺有无灰滤纸,纸上铺有2g石英砂),然后再用5mL水冲洗滤渣3次。
5.4 萃取：在250mL的分液漏斗中倒入滤液(5.3),再加入20mL萃取剂(3.2),振摇后静置,收集下部分有机相,再用20mL萃取剂提取两次,将三次萃取所得有机相合并,用萃取剂定容为100mL。
注：对果胶含量大的果蔬,萃取时,将三次合并的有机相重新倒回原分液漏斗,继续用20mL萃取洗涤一次,然后用萃取剂定容至100mL。
5.5 测定：在440±10nm波长下测定提取液的最大吸光度A。
6 结果的计算和表示类胡萝卜素总量用mg/L表示,按下式计算：类胡萝卜素(mg/L)＝A×20式中：A——测定的最大吸光度；20——换算系数。
高效液相色谱定量分析新鲜加工过的水果中的主要类胡萝卜素
高效液相色谱定量分析新鲜加工过的水果中主要类胡萝卜素的含量概念一、类胡萝卜素（carotenoid）不溶于水而溶于有机溶剂。
叶绿体中的类胡萝卜素含有两种色素，即胡萝卜素（carotene）和叶黄素（lutein），前者呈橙黄色，后者呈黄色。
功能为吸收和传递光能，保护叶绿素。
类胡萝卜素是一类重要的天然色素的总称，属于化合物。
普遍存在于动物、高等植物、真菌、藻类和细菌中的黄色、橙红色或红色的色素。
二、番茄红素(lycopene)番茄中的红色素，是胡萝卜素的母体化合物。
番茄红素是成熟番茄的主要色素,是一种不含氧的类胡萝卜素。
番茄红素是植物中所含的一种天然色素。
主要存在于茄科植物西红柿的成熟果实中。
它是目前自然界中被发现的最强抗氧化剂。
番茄红素清除自由基的功效远胜于其他类胡萝卜素和维生素E，它可以有效的防治因衰老，免疫力下降引起的各种疾病。
三、β-胡萝卜素(β-carotene)β-胡萝卜素是类胡萝卜素之一，也是橘黄色脂溶性化合物，它是自然界中最普遍存在也是最稳定的天然色素。
许多天然食物中如绿色蔬菜、甘薯、胡萝卜、菠菜、木瓜、芒果等，皆存有丰富的β—胡萝卜素。
β-胡萝卜素是一种抗氧化剂，具有解毒作用，是维护人体健康不可缺少的营养素。
β-胡萝卜素在进入人体后可以转变为维生素A，不会有因过量摄食而造成维生素A累积中毒现象。
另外，在促进动物的生育与成长也具有较好的功效。
四、毛细管柱色谱法(capillary column chromatography)开管柱气相色谱(open tubular gas chromatography)，又称高分辨气相色谱(high resolution gas chromatography)，是气相色谱的重要分支。
用内壁上涂附有固定液的空心的毛细管柱进行组分分离的色谱法。
与填充柱色谱法相比，其分离效率高、分析速度快、样品用量少。
HPLC法定量分析芒果和木瓜中类胡萝卜素的含量摘要：采用高效液相色谱法定量分析芒果、木瓜样品及一些加工产品的主要类胡萝卜素,使用外标法和标准加入校准技术。
类胡萝卜素含量方法
（一）检测原理：类胡萝卜素含量测定(酶标仪96T)叶绿体中所含色素主要有两大类，叶绿素(包括叶绿素a和叶绿素b)和类胡萝卜素(包括胡萝卜素和叶黄素)，它们与类囊体膜上的蛋白质结合，成为色素蛋白复合体，其含量多少及其组成决定了植物对不同光的吸收、利用效率，常常作为研究光合生理的重要指标。
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，在649nm和665nm处测定叶绿素提取物的吸光值，在470nm处测定类胡萝卜素；然后利用经验公式计算出样品中叶绿素a含量、叶绿素b含量、叶绿素总含量及类胡萝卜素含量。
（二）试剂组分与配制：试剂名称规格保存要求试剂一粉剂×1瓶4℃保存乙醇（自备）1000mL×1瓶4℃保存抽提Buffer配制：（体积比）乙醇：丙酮=95:5（三）所需的仪器和用品：酶标仪、96孔板、天平、10mL玻璃试管、锡箔纸、无水乙醇，丙酮。
（四）测定步骤：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备（1）取新鲜植物叶片或其它绿色组织，去掉中脉。
（2）称约0.1g剪碎，用蒸馏水洗干净，然后加入1mL抽提Buffer，少量试剂一（约50mg），叶绿素对光敏感，务必在黑暗或弱光条件下充分研磨（难磨叶片可以添加少量石英砂助磨），然后转移至10mL玻璃试管。
（3）用抽提Buffer冲洗研钵，将所有冲洗液及研钵中所有的绿色物质转入10mL玻璃试管，用抽提Buffer补充至10mL，玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提3h，观察试管底部组织残渣完全变白则提取完全，若组织残渣未完全变白，继续浸提至其完全变白。
2、上机检测分别取200μL浸提液和200μL抽提Buffer于96孔板，记为测定管和空白管，分别于665nm 和649nm和470nm处读取吸光值A，△A665=(A测定-A空白)665，△A649=(A测定-A空白) 649，△A470=(A测定-A空白)470。
类胡萝卜素的测定方法
类胡萝卜素的测定方法（高效液相色谱法）本方法适用于各类食品中以羟基类胡萝卜素为主的多种类胡萝卜素的测定。
本方法最低检出量为：α-胡萝卜素为5ng/mL，β-胡萝卜素为 4.3ng/mL，γ-胡萝卜素为3.5ng/mL，番茄红素为2.7ng/mL，斑蝥黄素为1.0ng/mL。
1. 方法提要样品以丙酮-石油醚（1+1体积比）混合溶剂反复萃取使类胡萝卜素与其他成分分离，在450nm 波长条件下进行HPLC分析检测，通过外标法计算各种类胡萝卜素的含量。
2. 仪器（1）高效液相色谱仪。
（2）冷凝回流皂化装置。
（3）旋转蒸发仪。
（4）离心机（5000r/min）。
3. 试剂本方法所使用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为重蒸馏水。
（1）丙酮-石油醚（1+1体积比）混合溶剂：取相同体积的丙酮、石油醚混匀。
（2）50% KOH甲醇-水溶液：称取250g氢氧化钾，用50mL适量水溶解后，用甲醇定容至500mL容量瓶，备用。
（3）无水硫酸钠（Na-2SO4）。
（4）二丁基羟基甲苯（BHT）。
（5）无水乙醇（C2H5OH）。
（6）流动相使用液：按乙腈+二氯甲烷+甲醇（85+10+5）比例准确量取各溶剂，并充分混匀，经.45μm微孔膜过滤后使用。
（7）类胡萝卜素标样：α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素。
（8）标准溶液：准确称取α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素一定量，先分别用少量的乙酸乙酯溶解，再用甲醇配制成60~80ng/L的标准储备液（于-30℃冻箱保存），使用时再配成3.5~16.5mg/L的标准使用液。
4. 测定步骤（1）样品处理：a. 皂化提取法（如牛奶等脂肪含量较高的样品）：取250L鲜牛奶于2℃、5000r/min冷冻离心30min，取上层油脂于250mL皂化瓶中，加入50mL乙醇、40mL 50% KOH甲醇溶液、0.1g BHT，65~75℃回流皂化30min，用石油醚反复提取皂化液，多次水洗至中性后用无水硫酸钠脱水，定容至25mL容量瓶中，备用。
15-05-04 叶黄素微丸中总类胡萝卜素的测定_USP36
叶黄素微丸中总类胡萝卜素的测定
方法来源：USP36
样品储备液的制备
取相当于1.5 mg叶黄素的样品于50 mL离心管中，加15 mL温水，盖上盖子，超声30分钟，期间振摇几次，超声后冷却至室温，加30.0 mL乙酸乙酯和2-3g氯化钠。
振摇一分钟，2000转/分离心5分钟，使用橘红色上层溶液。
样品溶液的制备
取1.0 mL样品储备液至100 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度。
分光光度计条件
分析波长：446 nm
光程：1 cm
空白对照：无水乙醇
分析
样品：样品溶液
计算：以叶黄素计，计算样品中总类胡萝卜素的百分含量
结果=（A×V×D×100）/(F×W)
A = 样品溶液的吸光度
F = 叶黄素在乙醇中的吸收系数，255.0（mL/mg·cm）
V = 有机溶剂的体积(30mL)
D = 稀释因子（从样品储备液稀释到样品溶液）
W = 制备样品储备液时称取样品的质量（mg）。
生理指标的测定2
1 色素含量的测定（叶绿素、类胡萝卜素）采用95%乙醇浸泡法（李合生，2000），称取剪碎的新鲜样品0.1g放入试管中，取95%乙醇15ml，在黑暗条件下浸泡24h，期间摇晃2-3次，至叶片表面变白，取上清液，在波长665nm、649nm、470nm下测定吸光度。
计算公式：叶绿素a（mg/L）=13.95*OD665－6.88*OD649叶绿素b（mg/L）=24.96*OD649－7.32*OD665总叶绿素=（6.63* OD665+18.08* OD649）*15/100类胡萝卜素（mg/L）=（1000OD470－2.05C a－114.8C b）/245色素含量（mg/g）=（色素浓度×提取液体积×稀释倍数）/样品鲜重2 细胞膜透性的测定取新鲜样品1g放入试管中，取25ml蒸馏水，浸泡1h，测得此时电导率值a，再至于沸水浴中处理15min，冷却至室温，测得电导率值b，细胞膜透性=a/b。
注意：煮后一定要冷却到室温才测，可以用冰，煮过后值大致相同。
3 组织含水量的测定4 类黄酮及总酚含量的测定取1g样品（一般用粉末），加入1%的盐酸甲醇溶液（量取27ml分析纯盐酸用分析纯甲醇定容到1000ml）25ml，浸提2h，过滤到50ml容量瓶中，用盐酸甲醇溶液定容到刻度，在325nm和280nm进行比色，分别测定类黄酮和总酚的含量。
4.1.4.8多酚氧化酶(PPO)的测定方法粗酶液的制备:称取西兰花花蕾部分1.0g，加入磷酸缓冲液印pH6.8,0.05m。
比,含l%聚乙烯毗咯烷酮)20mL,冰浴匀浆,离心Zomin(r0000Xg,4oC),上清液即为粗酶液。
酶活性测定:磷酸缓冲液印H6.8,0.05m川几)1.5mL,加入0.1mo比儿茶酚底物2.0mL,35℃保温巧min;再加入0.5mL酶液后迅速混匀,每隔105记录吸光度值灿2。
的变化,共记录3min,试验重复3次。
酶活性以U德.min表示,以翰。
高效液相色谱法测定蔬菜中类胡萝卜素组分
高效液相色谱法测定蔬菜中类胡萝卜素组分赵显峰;潘丽莉;孟晶;王茵;江月仙;荫士安【期刊名称】《卫生研究》【年(卷),期】2008(37)2【摘要】目的测定食物中叶黄素（Lut）、隐黄素（Cryp）、α-胡萝卜素（a-C）、β-胡萝卜素（β-C）和番茄红素（Lyco）的水平。
方法采用高效液相色谱法（HPLC）。
HPLC色谱柱：Develosil C30柱；流动相：A（甲醇：叔丁基甲基醚：水=83：15：2），B（甲醇：叔丁基甲基醚：水：8：90：2），梯度洗脱；检测器：紫外-可见光检测器；检测波长：450nm。
结果Lut在0、013～0．508,ug／ml范围内与峰面积的线性相关，R。
=0、999，加标回收率为105．9％，RSD=4、62％；Cryp在0．015～0、605μg／m1范围内与峰面积的线性相关，R^2=1．000，加标回收率为94．7％，RSD=3．50％；n—C在0．011～0．432μg／ml范围内与峰面积的线性相关，R^2=1．000，加标回收率为95．8％，RSD：3．83％；、β-C在0、013～0、518μg/ml范围内与峰面积的线性相关，R^2=1．000，加标回收率为108．1％，RSD=2、97％；Lyco在0．012～0．498μg／ml范围内与峰面积的线性相关，R^2：1、000，加标回收率为104．5％，RSD：4．24％。
结论该方法同时测定了蔬菜中的Lut、Cryp、α—C、β-C和Lyco5种类胡萝卜素组分，方法简便、快速、准确。
【总页数】3页(P228-230)【关键词】高效液相色谱法;类胡萝卜素;食物【作者】赵显峰;潘丽莉;孟晶;王茵;江月仙;荫士安【作者单位】中国疾病预防控制中心营养与食品安全所,北京100050;浙江省医学科学院保健食品研究所【正文语种】中文【中图分类】R151.3【相关文献】1.高效液相色谱法测定蔬菜中的类胡萝卜素 [J], 宋曙辉;薛颖2.高效液相色谱法分析蔬菜水果及其制品中类胡萝卜素含量的研究 [J], 刘新艳;吕军;刘中笑;李凌云;张延国;郑姝宁;徐东辉3.超声萃取-超高效液相色谱法快速测定烤烟中的类胡萝卜素 [J], 李小玉; 肖丽凤; 杨懋勋4.高效液相色谱法同时测定红心鸭蛋中5种类胡萝卜素含量 [J], 蔡翔宇; 秦富; 司露露; 欧玉玲5.高效液相色谱法测定鸡蛋、鸡肉中五种类胡萝卜素物质 [J], 兰韬;闫娜;裴栋;刘佳雯;于聪聪;初侨;李笃信因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
烟叶中叶绿素和类胡萝卜素的测定
存在特点和测定意义一 、叶绿素种类：比例种类颜色丙酮溶液中长波吸收峰叶绿素a蓝绿色663nm3黄绿色645nm1叶绿素b二、类胡萝卜素种类： 类胡萝卜素包括：胡萝卜素和叶黄素，二者之比是2：1。
（ß-胡萝卜素的乙醚溶液在451处有吸收峰）三、测定意义： 1、高水分，叶绿素含量高，愈近成熟，叶绿素降低。
2、低生物碱品系，叶绿素含量高，不易烤 高生物碱品系，叶绿素含量低，易烤 3、叶绿素含量影响烟叶成熟落黄河烘烤特性叶绿素和类胡萝卜素测定一、叶绿素测定 1、原理：用有机溶剂将叶绿素提取出来，制成待测液，根据提取液对某一波长的光有选择吸收，吸光度符合朗莫-比尔定律，计算出待测液中叶绿素含量： E＝lgI0/I＝KCL 如果比色皿厚度一定，则上式简化为： E＝KC K：吸光系数 C：浓度 如果待测液中含有2种以上有色物质，其吸光度也符合朗莫-比尔定律 溶液中含有2种有色物质时，有下式成立： Eλ1=Ka1 Ca+Kb1 Cb (1) Eλ2=Ka2 Ca+Kb2 Cb (2) 在叶绿素的待测液中含叶绿素a和b ，则有： E663＝82.04Ca＋9.27Cb (1)E645＝16.75Ca＋45.6Cb (2) E663＝82.04Ca＋9.27Cb (1)E645＝16.75Ca＋45.6Cb (2) 解联立方程式（1）和（2）得到： Ca=0.0127 E663-0.00259 E645 Cb=0.0229 E645-0.00467 E663 Ca+b=0.00805E663+0.0203E6452、测定步骤 ①待测液制备：0.5-2g样品于乳钵（研钵）内，加4倍体积的丙酮和约10mL 80%的丙酮，乳棒研磨。
用吸管仔细吸取抽出液转移到50mL容量瓶内，重向乳钵内加入10mL 80%的丙酮，继续研磨，合并抽出液，如此反复，直至研磨看不出有色素浸出为止，最后用80%丙酮定容到50mL，充分混匀，放冷暗处，使瓶内溶液澄清。
丙酮和二甲基亚砜法测定植物叶绿素和类胡萝卜素的方法学比较
Abstract Chlorophyll and carotenoids m easurement by dim ethyl sulfoxide (DM SO ) and acetone extractions are two typ ical and popular methods used in p lant ecophysiological research. However, few studies on the compara2 bility between these two methods have been carried out. To answer this question, the contents of p igments in leaves and young branches of 19 woody species were measured in this study and we found the follow ing conclu2 sions. Firstly, chlorophyll a (Chla) , Chlb and total chlorophyll contents measured by the DM SO method were much higher than those measured by the acetone m ethod, however, the result of Chla / b ratio was slightly affect2 ed. Contrarily, carotenoids contents m easured by the acetone method were m uch higher than those m easured by DM SO m ethod. D irect comparison of these data w ill make serious bias; Secondly, both chlorophyll data and ca2 rotenoids data measured by these two methods were significantly linearly correlated. Thus, it is possible to use these linear relations to make data correction in comparative studies; Thirdly, unit differences also affect the data correlations of these two methods. W hen using the unit of fresh mass, the correlation was much higher than that unit of surface area; Fourthly, the influences of these two methods on the data p recision differed between leaves and branches. In the case of branches ( low chlorophylls) , two m ethods give slightly difference. However, the
烟叶中的色素测定及进展
测定方法：
1.方法：分光光度法
2.原理： 将叶绿素a和b分离出去，剩下的类胡萝卜素溶于乙醚中， 测定这个有色溶液在451nm处的吸光值，计算出类胡萝卜素 的含量。
三、黑色素（多酚类等）的测定
测定意义：
1.酚类物质与酶促棕色化反应关系密切，影响烟叶颜色。
2.多酚类在烟草燃吸时产生酸性反应，可有效中和部分 烟气碱性，醇和烟气。多酚不但本身具有令人愉快的香 气，而且常在燃吸时通过干馏、裂解等作用，产生多种 芳香成分，改善香吃味。 3.多酚类物质含量与烤烟等级存在一致性关系，高等级 烤烟多酚含量较高，低等级烟叶的多酚含量较低。 4.多酚过量氧化常引起烟叶颜色加深，甚至出现挂灰烟 和棕色烟，严重影响烟叶的内在品质。
谢谢！
测定方法：
1.方法一：酒石酸比色法
2.原理： 酚类物质的羟基与酒石酸铁中的 铁离子生成蓝色络合物，根据络合 物溶液颜色深浅，在540nm处比色， 可测出烟叶中酚类物质含量。
1.方法二：福林法
2.原理： 在碱性条件下利用多酚的还原性，多酚可以将磷 钨钼酸还原成蓝色，蓝色深浅与多酚含量城正相关， 可以用分光广度计进行测定。
测定方法：
1.方法：分光光度法
2.原理：用有机溶剂将叶绿素提取出来，制 成待测液，根据提取液对某一波长的光有选 择吸收，吸光度符合朗莫-比尔定律，计算出 待测液中叶绿素含量：
E＝lgI0/I＝KCL
（K：吸光系数 C：浓度 L：比色皿厚度）
Байду номын сангаас
二、类胡萝卜素的测定
测定意义：
类胡萝卜素是影响烟叶品质的主要成分之一，它不仅决 定了调制后烟叶的颜色，而且在烟叶在调制、陈化过程 中，类胡萝卜素部分分解转化，形成一系列降解产物， 这些产物与烟草香味成分有正相关关系。
反相高效液相色谱法同时测定番茄中5种类胡萝卜素
类胡萝卜素的编号同图 ∀
样品的重复性试验
取样品约 按相应的前处理操作步骤重复提
取 次 上机测定并进行统计分析 结果见表 ∀由表
可 看 出 Α Β Χ
的变异系数均在 以
流速为
检测器为
进样量为 Λ 柱温为室温∀
结果与讨论
最佳检测波长的选择
我们首先用紫外分光光度计对 种类胡萝卜素
标样进行了紫外扫描 扫描波长为 ∗
结
果如图 所示∀从图 中可以看出 Α 有两个特征吸
收高峰 波长依次为 峰最大
峰次之
Β 为
Χ 为
为
α 中国农业大学食科系与日本大学农兽医部合作项目
小检出限分别为 和 ∀
精密度与重复性试验
保留时间的重复性试验
在实验的色谱条件下对每一种类胡萝卜素进行
次重复实验 测定保留时间并进行统计分析∀ Α
Β Χ
及
保留时间的标准差依次为
和 ∀变异系数 Χς 依次
为
和 ∀
图 种类胡萝卜素的紫外吸收光谱图
的储备液 使用前配成合适比例的工作液∀
样品处理
取适量新鲜成熟番茄匀浆后 称取 ∗
于
小烧杯中 加入
用丙酮石油醚混合液
反复提取 经无水硫酸钠脱水 用石油醚定容
于
容 量 瓶 中∀取 上 述 提 取 液
减压蒸干
用 甲醇溶解 经 Λ 微孔滤膜过滤后进色 谱柱∀
色谱条件
色 谱 柱 为 Λ
≅
流动相为乙腈二氯甲烷甲醇
类胡萝卜素标准检测法
类胡萝卜素标准检测法类胡萝卜素是一类重要的营养物质，对人体健康具有重要意义。
为了确保产品质量和食品安全，需要对类胡萝卜素进行标准检测。
本文将介绍类胡萝卜素的标准检测方法，以及相关的实验步骤和注意事项。
首先，类胡萝卜素标准检测法的原理是基于其在特定波长下的吸光度进行测定。
常用的检测方法包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外-可见分光光度法（UV-Vis）和荧光光度法等。
其中，HPLC法是目前应用最为广泛的一种方法，其准确性高、灵敏度好，能够有效地分离和测定不同种类的类胡萝卜素。
具体的实验步骤如下：1. 样品制备，将待测样品进行适当的处理，如研磨、溶解等，以获得均匀的样品溶液。
2. 仪器设置，根据HPLC仪器的要求，设置合适的流速、柱温、检测波长等参数。
3. 样品进样，将样品溶液注入HPLC仪器的进样口，进行进样操作。
4. 色谱条件，根据实际需要，设置合适的色谱条件，如流动相的组成、梯度elution 程序等。
5. 数据处理，通过仪器自带的软件或其他数据处理软件，对检测到的色谱图进行处理，获得类胡萝卜素的含量数据。
需要注意的是，在进行类胡萝卜素标准检测时，需要注意以下几点：1. 样品制备的均匀性和稳定性对实验结果有重要影响，因此在样品制备过程中要严格控制各项条件。
2. 仪器的准确性和灵敏度直接影响到实验结果的可靠性，因此在进行实验前要对仪器进行严格的校准和验证。
3. 实验操作过程中要注意避免空气氧化、光照等因素对类胡萝卜素的影响，以确保实验结果的准确性。
总之，类胡萝卜素标准检测法是一项重要的实验技术，对于保障产品质量和食品安全具有重要意义。
通过本文的介绍，相信读者对类胡萝卜素的标准检测方法有了更深入的了解，希望能够对相关领域的研究和实践工作有所帮助。
类胡萝卜素检测
类胡萝卜素检测
类胡萝卜素（Carotenoids）是一类广泛存在于动物、高等植物、真菌中的天然色素的总称，种类繁多，已经发现的天然类胡萝卜素就有700多种，按其化学结构和溶解性的不同可分为胡萝卜素类（Carotenes）和叶黄素类（Xanthophylls）两大类。
其中，胡萝卜素类主要包括α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素和番茄红素等；叶黄素类主要包括叶黄素、α-隐黄质、β-隐黄质、玉米黄素（玉米黄质）、虾青素、辣椒红素和藏红素（栀子黄）等。
迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)方法，使用Agilent或者Waters高效液相色谱仪，配备DAD检测器或ELSD检测器，可检测各类样品中类胡萝卜素含量变化。
此外，我们还提供生化法检测类胡萝卜素含量以及其他色素检测服务，以满足您的不同需求。
检测项目。
检测指标。
检测方法。
类胡萝卜素。
高效液相色谱法/生化法。
胡萝卜素。
高效液相色谱法。
β-胡萝卜素。
高效液相色谱法。
番茄红素。
高效液相色谱法。
叶黄素。
高效液相色谱法。
β-隐黄质。
高效液相色谱法。
玉米黄素/玉米黄质/隐黄素。
高效液相色谱法。
虾青素。
高效液相色谱法。
其他类胡萝卜素。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
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类胡萝卜素的测定方法（高效液相色谱法）
本方法适用于各类食品中以羟基类胡萝卜素为主的多种类胡萝卜素的测定。
本方法最低检出量为：α-胡萝卜素为5ng/mL，β-胡萝卜素为mL，γ-胡萝卜素为mL，番茄红素为mL，斑蝥黄素为mL。
1. 方法提要
样品以丙酮-石油醚（1+1体积比）混合溶剂反复萃取使类胡萝卜素与其他成分分离，在450nm 波长条件下进行HPLC分析检测，通过外标法计算各种类胡萝卜素的含量。
2. 仪器
（1）高效液相色谱仪。
（2）冷凝回流皂化装置。
（3）旋转蒸发仪。
（4）离心机（5000r/min）。
3. 试剂
本方法所使用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为重蒸馏水。
（1）丙酮-石油醚（1+1体积比）混合溶剂：取相同体积的丙酮、石油醚混匀。
（2）50% KOH甲醇-水溶液：称取250g氢氧化钾，用50mL适量水溶解后，用甲醇定容至500mL容量瓶，备用。
（3）无水硫酸钠（Na-2SO4）。
（4）二丁基羟基甲苯（BHT）。
（5）无水乙醇（C2H5OH）。
（6）流动相使用液：按乙腈+二氯甲烷+甲醇（85+10+5）比例准确量取各溶剂，并充分混匀，经.45μm微孔膜过滤后使用。
（7）类胡萝卜素标样：α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素。
（8）标准溶液：准确称取α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素一定量，先分别用少量的乙酸乙酯溶解，再用甲醇配制成60~80ng/L的标准储备液（于-30℃冻箱保存），使用时再配成~L的标准使用液。
4. 测定步骤
（1）样品处理：
a. 皂化提取法（如牛奶等脂肪含量较高的样品）：取250L鲜牛奶于2℃、5000r/min冷冻离心30min，取上层油脂于250mL皂化瓶中，加入50mL乙醇、40mL 50% KOH甲醇溶液、BHT，65~75℃回流皂化30min，用石油醚反复提取皂化液，多次水洗至中性后用无水硫酸钠脱水，定容至25mL容量瓶中，备用。
b. 直接提取法（如番茄等脂肪含量较低的样品）：适量新鲜成熟番茄匀浆后称取5~10mg于小烧杯中，加入BHT，用丙酮-石油醚（1+1体积比）混合溶剂提取3次，合并、收集上层
有机相，反复水洗后，用无水硫酸钠脱水，定容至25mL容量瓶中，备用。
取上述提取液20mL减压蒸干，用1mL甲醇溶解，经μm微孔膜过滤后待测。
（2）色谱分离条件：
色谱柱：μ-Bondapak C18×150mm)。
流动相：乙腈+二氯甲烷+甲醇（85+10+5）。
流速：min。
检测器波长：150nm。
进样量：20μL。
柱温：18℃。
（3）样品测定：准确吸取样品处理液和类胡萝卜标准混合使用液10μL注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准溶液出峰的保留时间定性，以其峰面积或峰高计算样液中各类胡萝卜素的含量。
5种类胡萝卜的标准色谱图见图2-19，番茄样品色谱图见图2-20。
5. 结果计算
根据各标准样品的保留时间和峰面积或峰高，分别对样品中各类胡萝卜素进行定性与定量。
6. 准确度与精密度
在不同食品中进行不同浓度加标回收实验、精密度与重复性实验，α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、斑蝥黄素5种类胡萝卜素的回收率分别为：%~%、%~%、%~%、%~%、%~%。
相对标准差（RSD）分别为：%~%、%~%、%~%、%~%、%~%。
其线性相关系数（r）依次为, , , , (n=7)。
7. 注释
（1）类胡萝卜素见光、遇氧容易被破坏，所以标样最好随配随用，或配制高浓度储备液冲氮低温冻藏，使用时配制一定低浓度的工作使用液。
样品的整个提取、分析过程应在黄色弱光中操作。
（2）在处理大量试样或放置时间较长时，要加抗氧化剂（BHT、BHA）。
（3）在反复提取皂化液时会发生乳化现象，有时难以分离。
可滴加无水乙醇，以达到分离效果。
（4）本方法较适合于羟基类胡萝卜素的分析测定，对氧合羟基类胡萝卜素的分离、分析效果较差。