种子纯度鉴定汇总

2、生化鉴定法
1）同工酶电泳 2）蛋白质电泳法 3）高效液相色谱法
生化标记概念
• 生化标记：建立在生化遗传学基础上的特异性同 功酶或蛋白质。其编码基因的位置及其与其它基 因位点的连锁关系也是明确的。
• 蛋白质是由基因编码的，特定的基因型决定了蛋 白质的特定组成，因此蛋白质组成能够反映出其 特征或特性
④许多类型的分子标记表现位共显性，能够鉴别出 纯合基因型和杂合基因型，提供完整的遗传信息
⑤表现为中性，即不影响目标性状的表达，与不良 性状无必然的连锁关系
⑥可对控制任何目标性状的基因进行标记
（2）常用分子标记技术简介
1）限制性片段长度多态性（Restriction
Fragment Length Polymorphism，RFLP）
• 原理：生物体在长期的自然选择和进化过程 中，由于个别碱基的突变以及序列的缺失、 插入或重排，会造成DNA在核苷酸序列上 出现差异，从而导致限制性内切酶识别位点 的不同，当用限制性内切酶来消化不同材料 的DNA时，会产生数目和大小不同的DNA 片段，电泳后经转膜和与探针杂交，就可以 得到DNA限制性片段长度多态性。
基因组DNA的不同位点，再经凝胶电泳分开， 得到一系列多态性DNA片段。
RAPD中多态性产生的基础 片段数量、大小和有无 ①核苷酸置换造成引物与结合位点无
法匹配 ②某个引物结合位点缺失 ③两引物结合位点间的间距过大，因
片段太长致使扩增中断（<3kb) ④插入或缺失改变了扩增产物的大小
RAPD
中 多 态 性 产 生 的 基 础
① 具有共显性特点，可以区别基因型纯合与杂合， 能提供单个位点上较完整的资料；
② 标记无表型效应，不受环境和发育条件影响；
③在非等位RFLP标记之间不存在上位效应，因而互 不干扰；
④ 标记源于基因组DNA的自然变异，数量上几乎不 受限制
•缺陷：RFLP标记对DNA需要量较大，操作繁琐，
花费昂贵
•其应用受到一定程度的限制；主要用于遗传连锁 图的绘制和目标基因的标记
2） 随机扩增多态性DNA（Random Amplified Polymorphism DNA，RAPD；RP-PCR ；AP-PCR ）
• 1990 年Williams 和Welsh • 原理：以一个人工合成的随随机的寡核苷
酸序Fra Baidu bibliotek(通常为10 个碱基) 作引物，以基因 组总DNA 为模板，利用PCR技术随机扩增
L-f1，l-f2 ln（4）；Lo，lo；l-w1，l-w2；l-b1,l-b2； A V1；y3；y4；… y20 Pa1，pa1；Pa2，pa2；P1，p1（2）；P2，p2（4）； Pb，pb（14）；Pc，pc；Pd1，pd2；Ps，ps
f(11) S，s Lps，lps df2（6）；df3；df4；df5（1）
第三章 作物品种纯度鉴定
主要内容
一、研究意义 二、鉴定依据 三、鉴定方法
一、研究意义
1、品种纯度是种子的主要质量指标，影 响作物的产量和产品品质。
2、由于纯度低而导致的减产就完全有可 能抵消一个新品种的增产潜力，因而纯度 低而造成很大的损失。
二、鉴定依据
遗传特性的差异，即调控性状发生发育的 基因的差异。
三、主要鉴定方法
1、常规鉴定法 2、生化鉴定法 3、分子标记技术
1、常规鉴定法
1）田间种植鉴定 2）籽粒和幼苗形态鉴定 3）物理化学鉴定法
1、常规鉴定法
1）田间种植鉴定 依据：形态特征和生物学特性 优点：鉴定结果是比较准确、可靠的 缺点：时间长、费用高，用地较多。
大豆部分形态标记性状及标记基因
标记性状 色素 花色 茸毛色 荚色 种皮 种脐 双色 子叶色 叶 小叶数目 叶形 落叶性 叶绿素缺失 茸毛类型
茎 扁化茎 节间长度 短叶柄 矮杆
标记基因（括号内数字表示所在连锁群）
W1，w1（8） T，t（1） L1，l1（5）；L2，l2 G，g（3） R，r-m（2）；I，i-i，I-k，i（7） K1；K2；K3 D1（3）；D2；Cyt-G，Y3
• 主要利用种子蛋白：数量丰富、稳定、易于提取
3、分子标记技术
(1)分子标记的特点 (2)常用的分子标记
• （1）分子标记的特点 ①直接对DNA进行标记，在植物体的各种组织、器
官，不同发育时期均可检测到，不受环境、季节 的限制，不存在表达与否的问题
②类型丰富，数量多，遍及整个基因组
③多态性高，自然存在着许多等位变异，不需要创 造特殊的材料
1、常规鉴定法
2）籽粒和幼苗形态鉴定 种子粒形、类型、颜色，大小、果柄颜色 等 幼苗叶鞘颜色、叶片颜色、叶片形状等特 征
•对形态鉴定的评价
优点： •简单 •直观
缺点： •数量少、多态性差 •易受环境条件因素影响 •显隐关系要通过自交或杂交来检出
1、常规鉴定法
3）物理化学鉴定法 特殊物质或对化学试剂有特殊的生化反应。
RAPD标记的优、缺点
• 无需知道有关模板DNA的结构信息； • 引物没有种属特异性 • 模板DNA用量少，纯度要求不高 • 操作简便快速，可实现自动化操作 • RAPD标记是显性标记，不能区分纯合型
和杂合型 • 扩增产物易受反应条件影响，实验结果
重复性较差。
3）扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length
• 1980年Botstein等首次提出
对DNA进行酶切
单拷贝或低拷贝DNA
电泳分离
标记探针
将DNA片段转到膜上 杂交
观察多态性
RFLP技术流程
RFLP产生的原因——多态性基础 A）点突变
RFLP产生的原因——多态性基础 B）缺失
RFLP产生的原因——多态性基础 C）插入
RFLP图例
•RFLP标记的优点
AFLP Polymorphism，
) http://www.pcrlinks.com/variants/aflp.htm
• Zabean等于1992年发明的一项专利技术
原理：基因组DNA经2个限制性内切酶酶切后，与
特定接头相连接，根据接头的核苷酸序列和酶 切位点设计引物，进行特异性PCR扩增，经聚丙 烯酰胺凝胶电泳分离检测扩增片段的多态性。 由于不同材料的DNA片段存在差异，因而便产生 了扩增产物的多态性。实际上它是RFLP与PCR结 合的一种中间产物。