实验三 GOD-POD法测定葡萄糖的回收和干扰试验1

样本测定
37 ℃水浴，10分钟，500nm比色。
结果计算-回收率
加入浓度= 标准液浓度* 标准液量ml 血清量(ml) 标准液量(ml) 生理盐水量(ml)
回收浓度 = 分析样品测得浓度 – 基础样品测得浓度
回收率（%）=
回收浓度 加入浓度
Baidu Nhomakorabea
100％
一般要求回收率95-105%
干扰值计算
4、消除干扰的方法有
1）空白对照 包括试剂空白和标本空白。 2）物理、化学方法去除干扰（可能会引入新的干扰） 3）只使用对干扰物的敏感度不高的方法。如：己糖激酶法 测定GLU，酶法测定肌酐等 4）以两点法或双波长法消除部分干扰，可以设计双试剂法 消除内源性干扰
55.56mmol/L（1000mg/dl）的葡萄糖标准液（ 回收试验用） 27.78mmol/L（500mg/dl）的葡萄糖标准液（回 收试验用） 葡萄糖校准液 维生素C注射量0.25g/1ml
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（一）回收试验
1.回收样本制备 U0 基础样品：血清0.9ml + 0.1ml蒸馏水 U1 回收样品Ⅰ：血清0.9ml＋0.1ml 55.56mmol/L的葡萄糖标准液 U2 回收样品Ⅱ：血清0.9ml＋0.1ml 27.78mmol/L的葡萄糖标准液 U3 回收样品Ⅱ：血清0.9ml＋0.07ml 27.78mmol/L的葡萄糖标准液 ＋ 0.03ml蒸馏水
（2）体积要小，一般不超过原体积的10％。
（3）浓度要比欲加的浓度至少高10倍。也可直接加入 固体标准品
（4）回收样品一般制备高、中、低三个浓度水平。高 浓度应在该方法线性范围的上限以内，加入的被分析 物浓度最好使实验样品中被测物浓度达到医学决定水 平。
2.准确吸量。减少随机误差 3.一般重复测定2-3次取均值。
U0 基础样品： 血清0.9ml + 0.1ml蒸馏水
U1 干扰样品Ⅰ：血清0.9ml＋0.1ml 10mg/ml维生素C溶液
U2干扰样品Ⅱ： 血清0.9ml＋0.05ml 10mg/ml维生素C溶液＋ 0.05ml蒸馏水 U3 干扰样品Ⅲ：血清0.9ml＋0.02ml 10mg/ml维生素C溶液＋ 0.08ml蒸馏水
GOD-POD法测定葡萄糖的回收和干 扰试验
温州医科大学附属二院医学检验中心 徐晓杰
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实验目的
1.掌握GOD-POD法测定葡萄糖的原理 2.掌握回收及干扰试验的原理及目的 3.熟悉回收及干扰试验的设计原则及注意事项 4.了解回收及干扰试验的操作方法
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实验原理
（
一
血
糖
（一测 定 ）GOD-POD法测葡萄糖原理
试剂与器材
1、试剂组成：R1：苯酚10mmol/L，POD>1000U/L，抗VIC氧化 酶； R2： GOD>1600U/L, 4-AAP2mmol/L
2、试剂包装：R1及R2，标准液浓度5.55 mmol/L 3、工作试剂配制：本试剂盒为液态双试剂，加双试剂的仪器
可直接应用，试剂更稳定，加单一试剂的仪器临用时缓冲 液和酶溶液以R1：R2=3:1的比例混合。
干扰试验设计原则
加入干扰物溶液的体积要小。但不如回收严格。
加入可疑干扰物的浓度须达到有价值的范围。有可 能应达到病理标本的最高浓度值。在确证有影响后 应测定在何浓度时，产生的误差在临床上无意义， 即确定使分析结果影响临床应用价值的最低可疑物 浓度值。
在临床化学中，对某一被测物的反应完全特异而不 受标本中其他成分干扰的方法是不多的，所以应根 据被测物和化学反应原理，提出可能的干扰物，如 胆红素、血红蛋白、脂浊、防腐剂、抗凝剂、药物 等。
原
理
GOD
葡萄糖+O2+H2O POD
葡萄糖酸+H2O2
H2O2+酚+4-AAP
H2O+醌亚胺（红色）
在500nm波长下测吸光度，吸光度大小与葡
萄糖浓度成正比。
（二）回收试验
将不同浓度的被分析物的标准溶液加入到病人样品 中，成为回收样品，而原样品加入相同量的无分析 物的溶剂作为基础样品，用试验方法同时测定分析， 两者之差即为回收浓度，回收浓度与加入浓度的百 分率为回收率。测定比例系统误差，评价准确度。
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（三）干扰试验
✓在加入一定浓度的干扰物的，形成恒定系 统误差，并将其测定出来。目的也是用来衡 量候选方法的准确度。
✓既用于检测某方法的特异性，也用于检测 干扰物质对方法的干扰作用。其方法与回收 相似，不同的是所加入的是疑有干扰或非特 异性反应物质，而不是标准液。
回收实验设计原则
1.标准液
（1）要求高纯度标准品。
2.样本测定 37 ℃水浴，10分钟，500nm比色。
（二）干扰试验
1.干扰物维生素C浓度确定 通常维生素C最大注射用量为1g/天，假设其分布在5L血浆中，则血浓度为 200mg/L，即0.2mg/ml，我们将最大干扰浓度大概定为0.5mg/ml。 2.干扰样品制备
维生素C注射液浓度0.25g/ml，将其稀释25倍成为10mg/ml
2．纯标准品溶液的加入体积不得超过血清样 品的10%，避免将血清稀释过度，引起误差 的改变。
3．准确加量是最主要的技术关键。
注意事项(干扰试验)
1、加入可疑干扰物的浓度应明显高于通常所 见浓度的上限，有可能时应达到病理标本 的最高值。
2、凡可疑干扰物都应做，这里仅是举例示范。 3、适当增加测定次数以减少实验的随机误差。
干扰物加入浓度= 干扰物浓度*
干扰物溶液量 ml
血清量 (ml ) 干扰物溶液量 (ml ) 生理盐水量(ml )
干扰值＝加入干扰物后的测定值－基础测定值
是否干扰的判断：干扰值超过1.96s或者<1/4Tea
注意事项(回收试验)
1．分析物浓度最好选择医学决定水平，血糖 测定的医学决定水为平2.8、7、 11.1mmol/L。