磁珠分选ppt课件
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• 直标微珠 • 间标微珠: 抗免疫球蛋白微珠、抗生物素微珠或链霉亲和
素微珠、抗荧光素微珠 • 多选微珠:专门为分选细胞亚群而研制的一种微珠。 这种微珠通过特殊的方式与抗体偶联， 在第一次阳性分选完成后， 与细胞结合的多选微珠 可以被解离试剂剪切下来， 阳性分选的细胞可以进行 再次阳性分选或者去除分选。
• 去除不需要的细胞； • 缺乏针对目的细胞的特异性抗体（如肿瘤
细胞）； • 不需要抗体和目的细胞结合，即细胞不被
激惹（如T细胞、B细胞、NK细胞功能分 析）； • 复合分选的一部分。
.
联合使用两种以上分选策略，主要用于细胞亚群的分选或者得 到高纯度非常稀有的细胞。
.
适用范围：
（1）非目的细胞也表达用来阳性选择的抗 原 （2）分选非常稀有细胞，先去除非目的细 胞再行阳性分选，可获得高纯度的稀有目 的细胞。
.
MACS微珠
• 与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微 粒
• 直径约有50nm • 无毒性，对细胞无损伤，可以生物降解 • 不影响细胞的光散射特性 • 磁性标记只占用20－30％的结合位点，不影响
细胞的荧光抗体标记。 • 最大限度地避免细胞活化； • 无需解离磁珠
.
• MACS微珠主要有三种：
.
谢谢
.
•
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其他磁分选产品ຫໍສະໝຸດ Baidu
Dynal 大磁珠 后续应用研究，如流式细胞术，则需要将
Dynabeads 与靶细胞分离。 适用于高频细胞
stemcell
.
MACS 与FACS
• MACS相比FACS的优点： 1， 适合大批量的细胞分选，FACS分选速度相对而言要慢很多； 2，稳定性高，重复性强，而FACS由于机器运行时间长会导致参数漂 移故而实际获取得靶细胞阳性率会大大下降； 3，无须大型设备，普遍适合大多数实验室的细胞分选工作； 4，操作简单，无须专门的设备操作人员（FACS操作需要一定的经 验）。 FACS相比MACS的优点： 1，少量细胞分选时比MACS精确得多，速度也快； 2，可以多个marker分选、正选负选同时进行（比如 CD117+/CD90lo/Sca-1+/CD45-），而MACS一般只能进行阳选或阴选， marker往往同时只能做一个（或一类）； 3，抗体可以用荧光直接标的，也可用间标的（最好是厂家标明可以 用于FACS），选择余地大，但是MACS的抗体往往需要和磁珠配套，选 择余地小。
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步骤
• 查找合适的磁珠：首选直标磁珠，试剂盒 • 仔细阅读说明书，根据分选总细胞数，目
的细胞数选择合适的柱子。合适的柱子对 应合适的分选器 • 按照说明书进行操作
样本制备：制备单细胞悬液 磁珠标记：将磁珠与细胞共孵育 过柱：洗柱---上柱------洗脱
.
关键环节
1.抗体包被磁珠对死细胞常有非特异性结合.因而分选前去除死细胞; 2.上分离柱前,充分振荡,混悬细胞,打散细胞团块; 3.用分离柱分选, 减少水中气泡,使分离柱不被气泡阻滞; 分选过程中不能干柱 4.细胞悬液加入分离柱中时,应将滴管伸至底壁后加入,避免将细悬液沿管壁流入,使管壁残流末 分选细胞,以致后继洗柱过程中,因疏忽末被洗下,最后导致纯度不高.洗柱时,应在前次液体充分 流尽后,再加洗液. 5.分选细胞量应根据说明书控制,不超量;细胞计数准确 6.孵育时间和温度应按说明书进行,延长孵育时间、提高温度会增加非特异结合; 7.先用抗体阻断Fc受体,可降低非特异性结合 8.分选温度：低温。预冷分离液
免疫磁珠分选技术
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技术原理
MACS（磁性细胞分选技术）是一种广泛用 来磁性分选多种细胞或者生物分子的技术。 • 基于抗体对抗原的特异性识别
• 磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上， 从而与细胞相连
• 在高强度、梯度磁场中达到细胞磁性 分离的目的
.
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组成成分
• MACS微珠 • MACS分选柱 • MACS分选器
.
MACS分选策略
• 阳性分选 • 去除分选 • 复合分选
。
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• 阳性分选中，目的细胞被磁性标记后，作 为阳性标记组分直接分选出来。阳性分选 策略优点：纯度高，回收率高，操作迅速、 简便
.
• 去除分选是把非目的细胞磁性标记后从细 胞混合物中去除的方法，即未磁性标记的 细胞为目的细胞。
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去除分选策略适用范围
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• MACS分选柱是一类填充有不同规格铁珠的 塑料容器，铁珠表面有亲水包被
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• MACS分选器由永久性磁铁和支架构成。与 分选柱一起组成高强度的梯度磁场。根据 应用范围分为研究用和临床应用的MACS分 选器，根据操作方式分为手动和自动分选 器。
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MACS技术优点
1、MACS微珠由氧化铁和多聚糖组成，直径 只有50nm，体积大约为真核细胞的百万分 之一。 2、微珠易于降解，对细胞无毒性，分选后 细胞仍旧保持生理功能。 3、与流式细胞仪兼容，分选后细胞可以立 即用于分析和后续实验。 4、高纯度、高回收率、高活性。
素微珠、抗荧光素微珠 • 多选微珠:专门为分选细胞亚群而研制的一种微珠。 这种微珠通过特殊的方式与抗体偶联， 在第一次阳性分选完成后， 与细胞结合的多选微珠 可以被解离试剂剪切下来， 阳性分选的细胞可以进行 再次阳性分选或者去除分选。
• 去除不需要的细胞； • 缺乏针对目的细胞的特异性抗体（如肿瘤
细胞）； • 不需要抗体和目的细胞结合，即细胞不被
激惹（如T细胞、B细胞、NK细胞功能分 析）； • 复合分选的一部分。
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联合使用两种以上分选策略，主要用于细胞亚群的分选或者得 到高纯度非常稀有的细胞。
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适用范围：
（1）非目的细胞也表达用来阳性选择的抗 原 （2）分选非常稀有细胞，先去除非目的细 胞再行阳性分选，可获得高纯度的稀有目 的细胞。
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MACS微珠
• 与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微 粒
• 直径约有50nm • 无毒性，对细胞无损伤，可以生物降解 • 不影响细胞的光散射特性 • 磁性标记只占用20－30％的结合位点，不影响
细胞的荧光抗体标记。 • 最大限度地避免细胞活化； • 无需解离磁珠
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• MACS微珠主要有三种：
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谢谢
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其他磁分选产品ຫໍສະໝຸດ Baidu
Dynal 大磁珠 后续应用研究，如流式细胞术，则需要将
Dynabeads 与靶细胞分离。 适用于高频细胞
stemcell
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MACS 与FACS
• MACS相比FACS的优点： 1， 适合大批量的细胞分选，FACS分选速度相对而言要慢很多； 2，稳定性高，重复性强，而FACS由于机器运行时间长会导致参数漂 移故而实际获取得靶细胞阳性率会大大下降； 3，无须大型设备，普遍适合大多数实验室的细胞分选工作； 4，操作简单，无须专门的设备操作人员（FACS操作需要一定的经 验）。 FACS相比MACS的优点： 1，少量细胞分选时比MACS精确得多，速度也快； 2，可以多个marker分选、正选负选同时进行（比如 CD117+/CD90lo/Sca-1+/CD45-），而MACS一般只能进行阳选或阴选， marker往往同时只能做一个（或一类）； 3，抗体可以用荧光直接标的，也可用间标的（最好是厂家标明可以 用于FACS），选择余地大，但是MACS的抗体往往需要和磁珠配套，选 择余地小。
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步骤
• 查找合适的磁珠：首选直标磁珠，试剂盒 • 仔细阅读说明书，根据分选总细胞数，目
的细胞数选择合适的柱子。合适的柱子对 应合适的分选器 • 按照说明书进行操作
样本制备：制备单细胞悬液 磁珠标记：将磁珠与细胞共孵育 过柱：洗柱---上柱------洗脱
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关键环节
1.抗体包被磁珠对死细胞常有非特异性结合.因而分选前去除死细胞; 2.上分离柱前,充分振荡,混悬细胞,打散细胞团块; 3.用分离柱分选, 减少水中气泡,使分离柱不被气泡阻滞; 分选过程中不能干柱 4.细胞悬液加入分离柱中时,应将滴管伸至底壁后加入,避免将细悬液沿管壁流入,使管壁残流末 分选细胞,以致后继洗柱过程中,因疏忽末被洗下,最后导致纯度不高.洗柱时,应在前次液体充分 流尽后,再加洗液. 5.分选细胞量应根据说明书控制,不超量;细胞计数准确 6.孵育时间和温度应按说明书进行,延长孵育时间、提高温度会增加非特异结合; 7.先用抗体阻断Fc受体,可降低非特异性结合 8.分选温度：低温。预冷分离液
免疫磁珠分选技术
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技术原理
MACS（磁性细胞分选技术）是一种广泛用 来磁性分选多种细胞或者生物分子的技术。 • 基于抗体对抗原的特异性识别
• 磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上， 从而与细胞相连
• 在高强度、梯度磁场中达到细胞磁性 分离的目的
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组成成分
• MACS微珠 • MACS分选柱 • MACS分选器
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MACS分选策略
• 阳性分选 • 去除分选 • 复合分选
。
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• 阳性分选中，目的细胞被磁性标记后，作 为阳性标记组分直接分选出来。阳性分选 策略优点：纯度高，回收率高，操作迅速、 简便
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• 去除分选是把非目的细胞磁性标记后从细 胞混合物中去除的方法，即未磁性标记的 细胞为目的细胞。
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去除分选策略适用范围
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• MACS分选柱是一类填充有不同规格铁珠的 塑料容器，铁珠表面有亲水包被
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• MACS分选器由永久性磁铁和支架构成。与 分选柱一起组成高强度的梯度磁场。根据 应用范围分为研究用和临床应用的MACS分 选器，根据操作方式分为手动和自动分选 器。
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MACS技术优点
1、MACS微珠由氧化铁和多聚糖组成，直径 只有50nm，体积大约为真核细胞的百万分 之一。 2、微珠易于降解，对细胞无毒性，分选后 细胞仍旧保持生理功能。 3、与流式细胞仪兼容，分选后细胞可以立 即用于分析和后续实验。 4、高纯度、高回收率、高活性。