溶液各种配制

附录：常用试剂配制及应用

一、常用缓冲液、试剂的配制

碳酸盐缓冲液(Carbonate-Bicarbonate Buffer)

由于碳酸盐pH 值偏碱，因此，常用于pH>9的缓冲液配制（附表1）。

附表1. 0.2 mol/L 碳酸盐缓冲液（～）

磷酸缓冲液(Phosphate Buffers ，PB)

磷酸盐是使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa 值，所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽。NaH 2PO4：pKa1＝，pKa2＝； Na 2HPO4：pKa1＝，pKa2＝。

另外，磷酸盐还有钾盐分子形式，一般来说，低温时钠盐难溶，钾盐易溶，因此，配制细胞培养用试剂时常常添加钾盐试剂，但若配制十二烷基硫酸钠（SDS ）-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用钠盐而不能用钾盐，因为SDS 会与磷酸钾生成难溶的十二烷基硫酸钾。

磷酸缓冲液的优点为：①可配制成不同离子强度的缓冲液；②适用pH 缓冲范围较宽；③受温度影响缓冲液pH 值变化较小；④离子强度对缓冲液pH 影响较

小，如L缓冲液稀释10倍其pH变化小于。

磷酸缓冲液的缺点是：①磷酸盐易与钙离子（Ca2+）、镁离子（Mg2+）及重金属离子结合生成不溶的沉淀物；②可能干扰某些生物化学反应过程，如对某些酶的催化活性具有一定程度的抑制作用。

NaH

2PO

4

的pH值偏酸性，可用作pH<4的缓冲液。

Na

2HPO

4

的pH值偏碱性，可用作pH>10的缓冲液。

而pH＝6～8的中性缓冲液是更常用的缓冲液，需要NaH

2PO

4

与Na

2

HPO

4

两种磷

酸盐混合配制（附表2）。

附表2. 0.2 mol/L磷酸盐缓冲液（～）

磷酸盐缓冲溶液（Phosphate-buffered saline, PBS)

磷酸盐缓冲液是在磷酸缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液的渗透压，因此，

PBS适用于做细胞缓冲液，常用PBS配制如下。

NaCl 8g

KCl 0.2g

Na

2HPO

4

1.44g

KH

2PO

4

0.24g

在800ml蒸馏水中溶解，用HCl调节溶液的pH值至～加水定容至1L，15psi （1.05kg/cm2）高压灭菌20min，室温保存备用。

Tris缓冲液（Tris-HCl Buffer, TB）

Tris的pH值偏于碱性，因此，通过添加HCl调节pH至所需值，Tris-HCl 缓冲液的离子强度（mol/L）是专指Tris的浓度，如某一特定pH的 mol/L Tris 缓冲液的配制是将50ml mol/L Tris碱溶液与附表3所示相应体积（ml）的mol/L HCl混合，加水至将体积100ml，即为 mol/L Tris缓冲液。

另外，按附表3制备的缓冲液，由于试剂来源的不同，缓冲液pH可能与所需略有差异，此时可通过稍许减少或增加HCl用量，精细调节pH至所需值。

附表4. 0.05 mol/L Tris缓冲液

Tris盐缓冲液（TBS）：

Tris盐缓冲液是在Tris缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液的渗透压，因此，TBS也适用于做细胞缓冲液，常用TBS配制如下。

8g NaCl、0.2g KCl以及3g Tris溶解于800ml蒸馏水中，加入0.015g酚红并用HCl调pH至用蒸馏水定容至1L，分装后在15psi（1.05kg/cm2）高压灭菌20min，室温保存。

现在常用Tris盐缓冲液通常不加pH指示剂，而且该溶液如果不用于细胞培养，通常不加KCl及酚红。

Hank’s液 (Hank’s Balanced Salt Solution)

Hank’s液是一种平衡盐溶液，主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗等。

贮存液A液：

(I)NaCl 80g

KCl 4g

MgSO

4·7H

2

O 1g

MgCl

2·6H

2

O 1g

用双蒸馏水定容至450ml。

(II)CaCl

2 1.4g (或CaCl

2

·2H

2

O 1.85g)

用双蒸馏水定容至50ml。

将I和II液混合，即成A液。贮存液B液：

Na

2HPO

4

·12H

2

O 1.52g，

KH

2PO

4

0.6g,

酚红 0.2g,

葡萄糖 ,

酚红应先置研钵内磨细，然后按配方顺序一一溶解，用双蒸馏水定容至

500ml。

(3)应用液：A、B储存液分别经112.6℃湿热灭菌20min，取A和B液各25ml，

加无菌双蒸馏水至450ml，使用前用无菌的%或% NaHCO

3

调至所需pH。

注意：药品必须全部用试剂，并按配方顺序加入，用适量双蒸水溶解，待前一种药品完全溶解后再加入后一种药品，最后补足水到总量。

无Ca2+、Mg2+ Hank’s液（Hank’s Solution without calcium, magnesium sulfate）

NaCl 80g,

KCl 4g,

Na

2HPO

4

·12H

2

O 1.52g，

KH

2PO

4

0.6g,

葡萄糖 10g,

用双蒸馏水溶解后，加入％酚红溶液50ml，再加入双蒸水至1000ml，112.6℃湿热灭菌20min，4℃ 冰箱保存。临用前将原液用无菌双蒸水作1：10倍稀释，

用无菌的%或% NaHCO

3

调至所需pH。