核酸提取方法

核酸提取方案

一、DNA提取

1．向离心管中加入200μl样品, 200μl消化液，涡旋震荡15秒

2．加入蛋白酶K 10μl混匀（RnaseA根据需要决定是否添加）

3．56℃孵育15分钟，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底

4.加入250 μl无水乙醇，涡旋震荡15秒，室温放置5分钟，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底

5.将步骤4中所得溶液加入到已装入收集管（RNaseFree Tube 2 ml）的吸附柱（RNaseFree Column RS）中，若一次不能加完溶液，可分多次转入，8,000 rpm离心1分钟6．向吸附柱中加入500 μl洗液（使用前检查是否已加入无水乙醇），8,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中

7．向吸附柱中加入500 μl无水乙醇，8,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中

8．12,000 rpm（13,400×g）离心3分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干

9．将吸附柱置于一个新的收集管（RNaseFree Tube 1.5 ml）中，向吸附柱膜的中间部位悬空加入20-150 μl Buffer RE或灭菌水，室温放置2-5分钟，10,000 rpm离心1分钟，收集核酸溶液

二、RNA提取

1．向离心管中加入200μl样品，加入500μl裂解液，充分混匀，静置3～5min（有杂质离心）

2．将吸附柱套入收集管，样品处理液转入吸附柱中(尽量不要吸到颗粒杂质，以免堵塞柱子)，4℃条件下12000rpm，离心1min

3．弃去收集管中液体，加入500μL洗液，4℃条件下12000rpm，离心1min

4．重复步骤3；

5．弃去收集管中液体，瞬离除去残液；

6．将吸附柱转入新的无RNA酶的1.5ml EP管中，向柱中央加入20-30µL洗脱液，室温静置2min溶解RNA, 4℃条件下12000rpm，离心1min,管中液体即为模板RNA