分子遗传学实验复习题

名词解释：

1.Flow cytometry：流式细胞术：是一种定量分析技术，是指利用流式细胞仪检测细

胞内特异性标记的荧光信号从而测定细胞的多种生化物质（如膜表面受体、抗原、离子或DNA\RNA表达等）特性的方法，同时也是一项可以把具有相同荧光信号特性的某些细胞亚群从多细胞群体中分离和富集出来的细胞分析技术。

2.PBMC：外周血单个核细胞：主要指淋巴细胞和单核细胞，是免疫学实验中最常用

的细胞群，也是进行T细胞和B细胞分离纯化的重要环节。

3.Real time PCR：传统PCR基础上加入荧光基团，利用荧光信号积累对PCR反应的过

程进行实时监控

4.foword scatter(FSC)：前向散射光：FSC 信号的强弱与细胞的大小相关

5.side scatter(SSC)：侧向散射光：SSC 信号的强弱与细胞内的颗粒多少相关,对胞膜、

胞质、核膜变化更敏感。

6.Reference genes：内参基因：是指在多种样本间恒定表达的已知参照基因，且其表

达水平不受研究条件下处理方式的影响。其表达水平能准确量化初始材料的载量。

在相对定量分析中一般选用看家基因。

7.融解曲线:在使用SYBR Green染料进行实验，需要分析融解曲线，以识别不同的产

物。

简答题：

1、简述荧光定量PCR原理及其与普通PCR的区别

原理：染料法：SYBR Green 1 结合到双链DNA的小沟部位。SYBR Green 1 染料只有和双链DNA结合后才发荧光。单链DNA+自由染料（荧光弱）双链DNA=绑定小沟（强荧光）.非特异性结合，包括引物二聚体、非异性扩增片断。进行融解曲线分析。探针法：Probe 与目标序列互补；5‘端标记有报告基因（reporter。R），如FAM、VIC等；3’端标记有荧光淬灭基因（quencher，Q）；探针完整，R所发射的荧光能量被Q集团吸收，无荧光，Q与R分开，发荧光；taq酶有5‘—3‘外切核酸酶活性，可水解探针。

区别：普：在PCR结束后对终点产物进行定量分析。荧：实时检测PCR扩增，在扩增的指数期对起始模板进行定量。

2、简述以流式细胞术检测B细胞表面标志物CD19的相关操作流程

①B细胞分离以及计数②离心收集细胞，调整细胞至2*106③加100ul PBS-BSA 制备细胞悬液④加入10ul CD19 antibody⑤4°，避光孵育30分钟⑥离心去上清，PBS-BSA 洗细胞2-3次⑦进行流式细胞分析、分选

3、简述流式细胞术中数据显示的几种方式

①单参数直方图②双参数数据显示：二位点图、等高线图、二位密度图、假三维图③三维图