[课件]二维液相色谱进展与应用PPT
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液相色谱-质谱(LC-MS)联用的原理及应用课件
喷雾的离子化技术, 可产生带很多电荷 的离子,最后经计
+TOF MS: 1.84 min (57 scans) from go 10
1. 26e 1
Int act Ant ibody Spect r um
算机自动换算成单
5
质/荷比离子。
2500
3000
3500
4000
m/z, amu
BioSpec Reconstruct for +TOF MS: 1.84 min (57 scans) from go, smoothed
总离子流图:
• 在选定的质量范围内，所有离子强度的 总和对时间或扫描次数所作的图,也称TIC
图.
学习交流PPT
10
质量色谱图
• 指定某一质量(或质荷比)的离子其强度对时间所 作的图.
• 利用质量色谱图来确定特征离子，在复杂混合物 分析及痕量分析时是LC/MS测定中最有用的方式。 当样品浓度很低时LC/MS的TIC上往往看不到峰， 此时，根据得到的分子量信息，输入M+1或 M+23等数值，观察提取离子的质量色谱图，检 验直接进样得到的信息是否在LC/MS上都能反映 出来，确定LC条件是否合适，以后进行MRM等 其他扫描方式的测定时可作为参考。
学习交流PPT
3
Ionic
IonSpray
APCI
Analyte Polarity
GC/MS
Neutral
101
102
103
104
105
Molecular Weight
学习交流PPT
4
现代有机和生物质谱进展
• 在20世纪80及90年代，质谱法经历了两次飞跃。 在此之前，质谱法通常只能测定分子量500Da以下 的小分子化合物。20世纪70年代，出现了场解吸 （FD）离子化技术，能够测定分子量高达 1500~2000Da的非挥发性化合物，但重复性差。20 世纪80年代初发明了快原子质谱法（FAB-MS）， 能够分析分子量达数千的多肽。
《液相色谱技术》课件
通过液相色谱技术，可以检测环境中的有毒有害物质，如农药、酚类等，为环境治理和保护提供科学依据。
生态毒理学研究
液相色谱技术可以用于研究环境污染物对生物体的毒理学效应，有助于了解环境污染对生态系统的危害。
液相色谱技术的未来发展与挑战
高效液相色谱法（HPLC）
HPLC是液相色谱技术中的一种，具有高分离效能、高灵敏度、高选择性等优点，被广泛应用于生物医药、环境监测、食品安全等领域。随着技术的不断发展，HPLC的分离柱、检测器等关键部件也在不断改进，提高了分离效果和检测灵敏度。
智能化与自动化：随着机器人技术和自动化控制技术的发展，液相色谱技术的操作将更加智能化和自动化。未来的液相色谱仪将更加便捷、高效，能够实现自动化进样、自动优化分离条件等功能，大大提高分析效率。
感谢观看
THANKS
流动相的准备与更换
根据实验要求，准备好适量的流动相，并定期更换以保证实验结果的准确性。
定期清洗进样器、色谱柱和检测器，保持仪器表面清洁。
日常保养
定期校准
常见故障排除
对仪器进行定期校准，确保检测结果的准确性。
遇到问题时，应先检查电源、管线连接等基本情况，再根据仪器手册排查故障。
03
02
01
液相色谱技术的实验设计
色谱柱
检测色谱柱流出的组分，并将其转化为电信号，便于记录和检测。
检测器
用于采集、处理、分析和存储色谱数据。
数据处理系统
数据处理与分析
采集色谱数据，进行峰识别、定量和合适的流速、检测波长等参数，开始色谱分离。
进样
将样品注入进样器，设定进样量，启动进样程序。
准备工作
检查仪器是否正常，准备好流动相、色谱柱和样品。
样品前处理的挑战：液相色谱技术对于样品的要求较高，需要进行适当的前处理以去除杂质、提高分离效果。目前常用的样品前处理方法包括沉淀、萃取、吸附等，但这些方法操作繁琐、耗时长且效果不稳定。为解决这一问题，新型的样品前处理技术如固相萃取、免疫吸附等正在不断发展，以提高样品处理的效率和效果。
生态毒理学研究
液相色谱技术可以用于研究环境污染物对生物体的毒理学效应，有助于了解环境污染对生态系统的危害。
液相色谱技术的未来发展与挑战
高效液相色谱法（HPLC）
HPLC是液相色谱技术中的一种，具有高分离效能、高灵敏度、高选择性等优点，被广泛应用于生物医药、环境监测、食品安全等领域。随着技术的不断发展，HPLC的分离柱、检测器等关键部件也在不断改进，提高了分离效果和检测灵敏度。
智能化与自动化：随着机器人技术和自动化控制技术的发展，液相色谱技术的操作将更加智能化和自动化。未来的液相色谱仪将更加便捷、高效，能够实现自动化进样、自动优化分离条件等功能，大大提高分析效率。
感谢观看
THANKS
流动相的准备与更换
根据实验要求，准备好适量的流动相，并定期更换以保证实验结果的准确性。
定期清洗进样器、色谱柱和检测器，保持仪器表面清洁。
日常保养
定期校准
常见故障排除
对仪器进行定期校准，确保检测结果的准确性。
遇到问题时，应先检查电源、管线连接等基本情况，再根据仪器手册排查故障。
03
02
01
液相色谱技术的实验设计
色谱柱
检测色谱柱流出的组分，并将其转化为电信号，便于记录和检测。
检测器
用于采集、处理、分析和存储色谱数据。
数据处理系统
数据处理与分析
采集色谱数据，进行峰识别、定量和合适的流速、检测波长等参数，开始色谱分离。
进样
将样品注入进样器，设定进样量，启动进样程序。
准备工作
检查仪器是否正常，准备好流动相、色谱柱和样品。
样品前处理的挑战：液相色谱技术对于样品的要求较高，需要进行适当的前处理以去除杂质、提高分离效果。目前常用的样品前处理方法包括沉淀、萃取、吸附等，但这些方法操作繁琐、耗时长且效果不稳定。为解决这一问题，新型的样品前处理技术如固相萃取、免疫吸附等正在不断发展，以提高样品处理的效率和效果。
液相色谱质谱联用的原理及应用课件PPT
质量色谱图
指定某一质量(或质荷比)的离子其强度对时间所 作的图.
利用质量色谱图来确定特征离子，在复杂混合 物分析及痕量分析时是LC/MS测定中最有用的 方式。当样品浓度很低时LC/MS的TIC上往往看 不到峰，此时，根据得到的分子量信息，输入 M+1或M+23等数值，观察提取离子的质量色谱 图，检验直接进样得到的信息是否在LC/MS上 都能反映出来，确定LC条件是否合适，以后进 行MRM等其他扫描方式的测定时可作为参考。
串联四极质谱仪(MS/MS) ： 第二步：以第一步测得值为母离子，做PRODUCT ION SCAN（MS2），调节CE等参数，使母，子离子都具有一定强度，平滑后得到 MS2谱，从各母离子中各选择2个最高的子离子，分别为 呋喃它酮AMOZ： M/Z 291，262； 质谱分析是先将物质离子化，按离子的质荷比分离，然后测量各种离子谱峰的强度而实现分析目的的一种分析方法。
Ionic
IonSpray
APCI
Analyte Polarity
GC/MS
Neutral
101
102
103
104
105
Molecular Weight
现代有机和生物质谱进展
在20世纪80及90年代，质谱法经历了两次飞跃。 在此之前，质谱法通常只能测定分子量500Da以 下的小分子化合物。20世纪70年代，出现了场解 吸（FD）离子化技术，能够测定分子量高达 1500~2000Da的非挥发性化合物，但重复性差。 20世纪80年代初发明了快原子质谱法（FABMS），能够分析分子量达数千的多肽。
由机械真空泵(前极低真空泵)，扩散泵或分子泵 (高真空泵)组成真空机组，抽取离子源和分析器 部分的真空。
液相色谱质谱联用技术进展及其在中药中的应用
中药作用机制和药效研究
总结词
液相色谱质谱联用技术有助于深入探究中药的作用机制和药效，为中药的通过分析中药在体内代谢产物的变化，可以探究中药的作用机制和代谢途径。同时，利用该技术可以 检测中药对生物体内各种代谢产物的调控作用，从而全面了解中药的药效和作用特点。这有助于推动 中药的现代化研究和临床应用，为中药的国际化和普及化奠定基础。
随着技术的不断发展，LC-MS 逐渐应用于环境、食品、药物等 领域，成为一种重要的分离和检
测手段。
近年来，LC-MS在仪器设备、 分离效果、检测灵敏度等方面取 得了显著进展，为复杂样品的分
析提供了有力支持。
技术的主要突破和进步
高通量分析
高分离效果
通过自动化和快速进样技术，LC-MS可以 实现高通量分析，提高了分析效率。
液相色谱质谱联用技术进 展及其在中药中的应用
• 引言 • 液相色谱质谱联用技术的进展 • 液相色谱质谱联用技术在中药研究中
的应用 • 案例分析：液相色谱质谱联用技术在
中药研究中的应用实例 • 结论
01
引言
目的和背景
液相色谱质谱联用技术是一种重要的分离分析技术，广泛应 用于生物医药、环境监测、食品安全等领域。随着科技的发 展，该技术在中药领域的应用也日益广泛，为中药质量控制 、药效物质基础研究等方面提供了有力支持。
采用新型色谱填料和优化色谱条件，LCMS的分离效果得到显著提高，能够更好地 解决复杂样品中的分离难题。
高灵敏度检测
多维度分析
通过采用新型离子源和质谱检测器，LCMS的检测灵敏度得到显著提升，能够检测 低浓度的目标物。
通过串联质谱技术，LC-MS可以实现多维 度分析，提供更多的结构信息和分子量信 息。
二维液相色谱进展与应用(PPT课件)
11
二维液相色谱法在鹿茸蛋白分离中的应用
建立 SAX - RP 模式的在线二维液相色谱系统，并将其应用于鹿茸蛋白的分离、分 析.中。方法样品首先由第一维强阴离子交换色谱（COSMOGEL QA Glass Packed Column，75 mm ×8.0 mm I. D）在 pH 9.16的 Tris -HCl 缓冲体系中以0.8 mL / min 的流 速洗脱分离，采用不连续的逐步增加盐浓度的8步台阶梯度方式洗脱，洗脱产物富集在与 反相柱相同填料的捕集柱顶端，通过阀切换将富集在捕集柱上的组分反向冲入第二维反相 分析柱（ Shodex Rspak RP18~415，150 mm ×4.6 mm I. D）继续分析。结果鹿茸蛋白 在所构建的二维系统上得到了较好的分离，与一维色谱相比，系统的总峰容量、分辨率在 一定程度上得到了提高，系统总出峰数为30，总峰容量为240。结论使用常规尺寸的色谱 柱构成的二维液相色谱系统仪器要求简单，对鹿茸为代表的动物类中药的分离、分析有一 定指导意义
➢ 将分离机理不同又相互独立的两根色谱柱串连起来构成的分离系统。
3
二维液相色谱的发展
➢尽管二维液相色谱技术目前还没有被广泛使用，但这方面的潜力是巨大的。 大型公司，如安捷伦和岛津，都在投入资金开发这种仪器，让科学家能够回 答之前无法回答的问题。目前，一些优秀的产品已上市。这种强大的技术可 用在各种不同的领域，如制药、生物制药、天然产物的研究和食品分析等。 二维液相色谱有望成为分析中等至高度复杂的混合物的强大工具。
13
展望
14
Thank you
15
放映结束 感谢各位的批评指导！
谢 谢！
让我们共同进步
16
12
二维液相色谱技术在中药质量控制中的应用
二维液相色谱法在鹿茸蛋白分离中的应用
建立 SAX - RP 模式的在线二维液相色谱系统，并将其应用于鹿茸蛋白的分离、分 析.中。方法样品首先由第一维强阴离子交换色谱（COSMOGEL QA Glass Packed Column，75 mm ×8.0 mm I. D）在 pH 9.16的 Tris -HCl 缓冲体系中以0.8 mL / min 的流 速洗脱分离，采用不连续的逐步增加盐浓度的8步台阶梯度方式洗脱，洗脱产物富集在与 反相柱相同填料的捕集柱顶端，通过阀切换将富集在捕集柱上的组分反向冲入第二维反相 分析柱（ Shodex Rspak RP18~415，150 mm ×4.6 mm I. D）继续分析。结果鹿茸蛋白 在所构建的二维系统上得到了较好的分离，与一维色谱相比，系统的总峰容量、分辨率在 一定程度上得到了提高，系统总出峰数为30，总峰容量为240。结论使用常规尺寸的色谱 柱构成的二维液相色谱系统仪器要求简单，对鹿茸为代表的动物类中药的分离、分析有一 定指导意义
➢ 将分离机理不同又相互独立的两根色谱柱串连起来构成的分离系统。
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二维液相色谱的发展
➢尽管二维液相色谱技术目前还没有被广泛使用，但这方面的潜力是巨大的。 大型公司，如安捷伦和岛津，都在投入资金开发这种仪器，让科学家能够回 答之前无法回答的问题。目前，一些优秀的产品已上市。这种强大的技术可 用在各种不同的领域，如制药、生物制药、天然产物的研究和食品分析等。 二维液相色谱有望成为分析中等至高度复杂的混合物的强大工具。
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展望
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Thank you
15
放映结束 感谢各位的批评指导！
谢 谢！
让我们共同进步
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二维液相色谱技术在中药质量控制中的应用
《液相色谱法》PPT课件
第七章 液相色谱(liquid chromatography)
§7-1 概述
（1）液相色谱简介
（2）液相色谱的发展
（3）液相色谱的分类
§7-2 液相色谱仪
（1）液相色谱仪
（2）液相色谱仪的流程图
（3）液相色谱仪的工作过程
（4）液相色谱仪的基本组成系统
（5）高压泵
精选课件ppt
1
第七章 液相色谱(liquid chromatography)
吸附色谱 吸附能，氢键 异构体分离、族分离，制备
分配色谱 疏水分配作用 各种有机化合物的分离、分析与制备
凝胶色谱 溶质分子大小 高分子分离，分子量及其分布的测定
离子交换色谱
库仑力
无机离子、有机离子分析
离子排斥色谱 Donnan膜平衡 有机酸、氨基酸、醇、醛分析
离子对色谱 疏水分配作用 离子性物质分析
疏水作用色谱 疏水分配作用 蛋白质分离与纯化
手性色谱
立体效应 手性异构体分离，药物纯化
亲和色谱 生化特异亲和力 蛋白、酶、抗体分离，生物和医药分析
两种最常用的色谱法
（一）吸附色谱法（adsorption chromatography） 以吸附剂为固定相的色谱方法称为吸附色
谱法。使用最多的吸附色谱固定相是硅胶，流 动相一般使用一种或多种有机溶剂的混合溶剂。 在吸附色谱中，不同的组分因和固定相吸附力 的不同而被分离。
（6）梯度洗脱装置 （7）进样器 （8）色谱柱 （9）色谱填料 （10）检测器 （11）数据处理系统与自动控制单元
§7-3 新型液相色谱仪简介
（1） waters的UPLC （2）岛津高效率HPLC-2010A/2010C型 （3）岛津LC-VP系列应用系统离子色谱仪
§7-1 概述
（1）液相色谱简介
（2）液相色谱的发展
（3）液相色谱的分类
§7-2 液相色谱仪
（1）液相色谱仪
（2）液相色谱仪的流程图
（3）液相色谱仪的工作过程
（4）液相色谱仪的基本组成系统
（5）高压泵
精选课件ppt
1
第七章 液相色谱(liquid chromatography)
吸附色谱 吸附能，氢键 异构体分离、族分离，制备
分配色谱 疏水分配作用 各种有机化合物的分离、分析与制备
凝胶色谱 溶质分子大小 高分子分离，分子量及其分布的测定
离子交换色谱
库仑力
无机离子、有机离子分析
离子排斥色谱 Donnan膜平衡 有机酸、氨基酸、醇、醛分析
离子对色谱 疏水分配作用 离子性物质分析
疏水作用色谱 疏水分配作用 蛋白质分离与纯化
手性色谱
立体效应 手性异构体分离，药物纯化
亲和色谱 生化特异亲和力 蛋白、酶、抗体分离，生物和医药分析
两种最常用的色谱法
（一）吸附色谱法（adsorption chromatography） 以吸附剂为固定相的色谱方法称为吸附色
谱法。使用最多的吸附色谱固定相是硅胶，流 动相一般使用一种或多种有机溶剂的混合溶剂。 在吸附色谱中，不同的组分因和固定相吸附力 的不同而被分离。
（6）梯度洗脱装置 （7）进样器 （8）色谱柱 （9）色谱填料 （10）检测器 （11）数据处理系统与自动控制单元
§7-3 新型液相色谱仪简介
（1） waters的UPLC （2）岛津高效率HPLC-2010A/2010C型 （3）岛津LC-VP系列应用系统离子色谱仪
高效液相色谱法原理与应用(详细版)课件PPT
保留时间(tR):
调整保留时间(t’R): tR' tR tM
死体积(VM): VMtMF0
保留体积(VR): VR tRF0
调整保留体积(V’R): V R ' tR ' F 0(tRtM )F 0
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2. 色谱分离基本方程
R tR(2) tR(1)
1 2
(W1
W2
)
R: 分离度 tR: 保留时间 t0：死时间 W：峰底宽度
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不同R值的峰重叠情况示意图
R>1.5可以得到基线分离
分离度R反映的是相邻两个峰的分开程度
R太小，两个峰无法彻底分离
R太大，分离时间过长，工作效率低下
一般要求R>1.5，也可遵循行业特殊规定
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色谱分离基本方程
高效液相色谱法原理与应用
参考书 《高效液相色谱及其应用》 《液相色谱检测方法》 《实用高效液相色谱法的建立》
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1
第1章 色谱基本原理
一、色谱法概述 1. 色谱法的定义与特点 2. 色谱法的分离原理 3. 色谱法的特点 4. 色谱法的分类
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2
1.色谱法的定义
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校正归一化法
➢推导：
Ci%m mi 100m1
mi m2 mn
100
Ai fi
100
A1f1 A2f2 An fn
Ci%fifA iA i i 10% 0
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➢应用范围：当试样中各组分都能流出色谱柱，
液相色谱质谱联用技术进展及其在中药中的应用
新药研发支持
液相色谱质谱联用技术在新药研发中也具有广泛应用，如用于药效物质基础研究、药代动力学研究等，为新 药的开发提供技术支持。
液相色谱质谱联用技术在
05 中药活性成分研究中的应 用
活性成分筛选与鉴定
快速筛选与分离
利用液相色谱质谱联用技术，可以快速筛选和分离中药中的活性 成分，提高研究效率。
结构鉴定
07 总结与展望
当前液相色谱质谱联用技术在中药领域取得成果总结
成分鉴定与质量控制
液相色谱质谱联用技术已广泛应用于中药复杂体系的成分鉴定和质 量控制，为中药现代化和国际化提供了有力支持。
代谢组学研究
利用液相色谱质谱联用技术，对中药在体内外的代谢过程进行深入 研究，揭示了中药药效物质基础和作用机制。
质谱技术简介
质谱（MS）是一种通过测量样 品离子的质荷比来进行分析的 技术。
质谱具有高通量、高灵敏度和 高分辨率等特点，能够提供样 品的分子量和结构信息。
常用的质谱类型包括电子轰击 质谱、化学电离质谱、电喷雾 质谱和基质辅助激光解吸电离 质谱等。
液相色谱质谱联用原理及优势
1
液相色谱质谱联用（LC-MS）技术将液相色谱的 分离能力与质谱的定性分析能力相结合，提高了 分析的准确性和可靠性。
当前中药研究面临问题
成分复杂
中药通常包含多种化学成分，其结构和性质各异， 给研究带来一定难度。
质量标准不统一
由于缺乏统一的质量标准和检测方法，不同批次 或来源的中药质量存在差异。
药效机制不明确
部分中药的药效机制尚未完全阐明，限制了其在 临床上的广泛应用。
液相色谱质谱联用技术在中药研究中的应用前景
药物相互作用评价
该技术可评估中药与其他药物间的相互作用，为临床合理用药提供 科学依据。
液相色谱质谱联用技术在新药研发中也具有广泛应用，如用于药效物质基础研究、药代动力学研究等，为新 药的开发提供技术支持。
液相色谱质谱联用技术在
05 中药活性成分研究中的应 用
活性成分筛选与鉴定
快速筛选与分离
利用液相色谱质谱联用技术，可以快速筛选和分离中药中的活性 成分，提高研究效率。
结构鉴定
07 总结与展望
当前液相色谱质谱联用技术在中药领域取得成果总结
成分鉴定与质量控制
液相色谱质谱联用技术已广泛应用于中药复杂体系的成分鉴定和质 量控制，为中药现代化和国际化提供了有力支持。
代谢组学研究
利用液相色谱质谱联用技术，对中药在体内外的代谢过程进行深入 研究，揭示了中药药效物质基础和作用机制。
质谱技术简介
质谱（MS）是一种通过测量样 品离子的质荷比来进行分析的 技术。
质谱具有高通量、高灵敏度和 高分辨率等特点，能够提供样 品的分子量和结构信息。
常用的质谱类型包括电子轰击 质谱、化学电离质谱、电喷雾 质谱和基质辅助激光解吸电离 质谱等。
液相色谱质谱联用原理及优势
1
液相色谱质谱联用（LC-MS）技术将液相色谱的 分离能力与质谱的定性分析能力相结合，提高了 分析的准确性和可靠性。
当前中药研究面临问题
成分复杂
中药通常包含多种化学成分，其结构和性质各异， 给研究带来一定难度。
质量标准不统一
由于缺乏统一的质量标准和检测方法，不同批次 或来源的中药质量存在差异。
药效机制不明确
部分中药的药效机制尚未完全阐明，限制了其在 临床上的广泛应用。
液相色谱质谱联用技术在中药研究中的应用前景
药物相互作用评价
该技术可评估中药与其他药物间的相互作用，为临床合理用药提供 科学依据。
二维液相色谱在药物和毒物分析中的应用进展
二维液相色谱在药物和毒物分析中的应用进展萧伟斌;蹇阳;李桦【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2014(42)12【摘要】Qualitative and quantitative analyses of biological samples containing drugs, toxicants and endogenous substances play an important role in the researches of life sciences, as well as in new drug discovery and development. Biological samples are characterized by complex matrix, multiple endogenous interferences, significantly lower concentrations of measured analytes compared to endogenous components and small sampling volume. Consequently, it often requires bioanalysis methods with superior specificity, high sensitivity and good reproducibility. The two-dimensional liquid chromatography (2D-LC) technique, which allows for high peak capacity, significant reduced matrix effect and carryover of complex matrix samples and automated sample pre-treatment and analysis, has been the powerful solution to the separation and analysis of biological sample and widely applied to environment, food and pharmaceutical analysis. On the basis of introduction of the principle and equipments of 2D-LC, the application of this technique in the pharmacokinetics, toxicological and biological study was reviewed.%生物样品中药物、毒物及内源性物质的定性与定量分析在生命科学和药物研发中发挥重要作用。
液相色谱基本原理与应用ppt课件
一、液相色谱定义
高效液相色谱是在经典液相色谱基础上， 引入了气相色谱的理论，在技术上采用了 高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器， 因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操 作自动化的特点。
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
三、HPLC在各领域的主要应用
• 环境：常见多环芳烃、多氯联苯、硝基化 合物、酚类化合物、邻苯二甲酸脂、有机 农药等。
• 农业：土壤矿物成分、肥料、饲料添加剂、 茶叶等农产品中无机和有机成分等。
• 食品：有机酸、氨基酸、糖、维生素、脂 肪酸、香料、甜味剂、防腐剂、人工色素、 病原微生物、霉菌毒素、多核芳烃等。
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
多环芳烃标准品色谱图
mV 900
萘 苊
800
700
600
二 苯 并a，h蒽 苯 并g，h，i苝 茚 苯1，2，3-cd苝
苯 并a蒽 屈 苯 并b荧 蒽 苯 并k荧 蒽 苯 并a芘
500
荧蒽
苊烯
400
芴 菲
蒽 芘
300
200
100
0
3 -100
6
9
12
15
18
高效液相色谱是在经典液相色谱基础上， 引入了气相色谱的理论，在技术上采用了 高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器， 因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操 作自动化的特点。
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
三、HPLC在各领域的主要应用
• 环境：常见多环芳烃、多氯联苯、硝基化 合物、酚类化合物、邻苯二甲酸脂、有机 农药等。
• 农业：土壤矿物成分、肥料、饲料添加剂、 茶叶等农产品中无机和有机成分等。
• 食品：有机酸、氨基酸、糖、维生素、脂 肪酸、香料、甜味剂、防腐剂、人工色素、 病原微生物、霉菌毒素、多核芳烃等。
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
多环芳烃标准品色谱图
mV 900
萘 苊
800
700
600
二 苯 并a，h蒽 苯 并g，h，i苝 茚 苯1，2，3-cd苝
苯 并a蒽 屈 苯 并b荧 蒽 苯 并k荧 蒽 苯 并a芘
500
荧蒽
苊烯
400
芴 菲
蒽 芘
300
200
100
0
3 -100
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二维液相色谱概念_概述及解释说明
二维液相色谱概念概述及解释说明1. 引言1.1 概述二维液相色谱是一种高效分离技术，广泛应用于分析化学、生物医药等领域。
随着科学技术的不断发展，单一柱液相色谱已经无法满足对复杂样品中成分的完全分离和定性分析的需求。
因此，为了提高分离能力和分析效率，二维液相色谱这一新兴技术诞生了。
1.2 文章结构本文将围绕二维液相色谱的概念、原理、应用领域以及主要组成部分展开详细讨论。
首先，在介绍二维液相色谱概念方面，我们将对其定义进行阐述，并介绍其与传统单一柱液相色谱的区别。
接着，我们将深入探讨二维液相色谱的原理，包括两个柱之间的连接方式以及采用不同机制实现样品分离的方法。
然后，我们会重点关注二维液相色谱在不同领域中的应用案例，并探讨其中取得成功的原因。
随后，我们将详解二维液相色谱系统的主要组成部分，主要包括第一维柱和第二维柱的介绍及原理说明，以及色谱流体介质选择和优化方法，同时还会介绍考虑因素和操作参数调控方法。
在此基础上，我们会详细探讨二维液相色谱的优势与局限性，分析实际应用案例并探讨局限性所带来的挑战，并提出解决方法。
最后，我们将对二维液相色谱的发展趋势进行展望，并提出未来研究方向的建议。
1.3 目的本文旨在全面、系统地介绍二维液相色谱领域中的相关概念、原理、应用和技术组成部分。
通过深入了解二维液相色谱技术，读者能够更好地把握其理论基础和实际应用，为相关领域的科研工作者提供参考和借鉴。
同时也将帮助读者更好地认识到二维液相色谱技术在样品分离与定性分析中所具有的优势与局限性，并为进一步研究提供思路与建议。
2. 二维液相色谱概念:2.1 定义:二维液相色谱（2D-LC）是一种分离方法，通过在不同的柱上进行两次连续的液相色谱分离来实现高效分离和复杂样品分析。
与传统单一柱的液相色谱相比，2D-LC可以更有效地解决复杂样品中的混杂物问题，并提高目标物质的检测灵敏度和分辨率。
2.2 原理:2D-LC的原理基于两个核心概念：首先是选择性，即使用具有不同保留机制和选择性的两个柱进行分离。
全二维液相色谱(NPLC×RPLC)接口及其应用
１ 实 验部 分
１ １ 仪器 和试 剂 ．
一
维洗脱采用 Ｍｃ ．ｅｈ ｉｏ ｃ 微流量液相色谱仪 （ ｉ ｏ ｅｈＳｉ ｔ ｃ ｎ ， Ａ Ｕ Ａ 进行等度洗脱 ， ｒＴ Ｍｃ — ｃ ｃ ｎ ｆ ｃ Ｃ ， Ｓ ） ｒＴ ｅｉ Ｉ ｉ
该仪器包括一个电动六通进样阀和一个电动十通切换阀． 一维反相色谱检测器为 Ｕ —ｉ２０可变波长 ＶＶｓ ０
出的组分交替存储在十通阀上 的两个 定量环 中 ，同时定 量环 中前一个 组分被 转移 到第二维 进行 反相分 离．
因为第一维的流动相流量仅是第二维 的 １５０ 然解决 了流动相兼容问题． ／０ ，自 采用芳香族化合物 的混合物和
中药丹参正 己烷提取液对该全二维液相系统的分离能力进行了评价．
田宏 哲 ， 徐 静 ，关亚 风
（ 中国科学 院大连化学物理研究所仪器分析研究室 ， 大连 １６ ２ ） １０ ３
摘 要 用 内径为 ０ ５ ｍ的填充毛细管正相液相色谱为第一维 ， ４ ６ｍ ｉｄ ）× ０ｍ Ｐ１ ｅ ． ３ｍ 用 ． ｍ（． ． ５ ｍ Ｒ 一８ 整体柱反 相色谱为第二维 ， 建立 了定量环一 阀切换接 口的全 二维液相色谱 系统 （ Ｐ Ｃ×Ｒ Ｌ ．第一维 色谱分离 洗脱 ＮＬ Ｐ Ｃ）
关键词
全二维液相色谱； 正相色谱／ 反相色谱联用 ； 定量环一 阀切换接 口； 中药 ； 丹参
０ ５ ６８ 文献标识码 Ａ 文章编号 ０ ５ －７０ ２ ０ ）４ ６０ ５ ２ １ ９ （ ０７ ０ － ３ － ０ 成极其复杂 ， 常常含有几百甚至上千种组分 ， 因此采用液相色谱
维普资讯
Ｖｏ ‘ ８ ｌ２
２０ ０ ７ 年 ４月
高 等 学 校 化 学 学 报
《液相色谱》幻灯片PPT
思考题：
1.正相色谱 2.反相色谱 3.化学键和固定相 4.洗脱剂及其作用
离子对色谱
强极性有机酸、有机碱的别离分析
将一种〔或多种〕与溶质离子电荷相反的离子〔对离子或反离子〕加到流动 相中使其与溶质离子结合形成疏水性离子对化合物，使其能够在两相之间进 展分配；
阴离子别离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十六烷基三甲铵 作为对离子；
〔2〕亲水性固定液常采用疏水性流动 相，即流动相的极性小于固定相的极性，称 为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。
〔3〕假设流动相的极性大于固定液的
2. 流动相类别
按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇 、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动 相的极性或增加选择性，以改进别离或调整出峰时间。
一、液相色谱固定相
stationary phase of HPLC
二、液相色谱流动相
mobile phase of HPLC
一、液相色谱固定相 stationary phases of LC
1. 液-液色谱及键合相色谱固定相
〔1〕全多孔型担体
由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球
体；早期采用100μm的大颗粒，外表涂渍固定液，
薄壳键合型；微粒硅胶 键合型〔键合离子交换基团〕
树脂类别： 〔1〕 阳离子交换树脂〔强酸 性、弱酸性〕 〔2〕 阴离子交换树脂〔强碱 性、弱碱性〕
4. 空间排阻别离固定相
〔1〕软质凝胶 葡聚糖凝胶、琼脂凝胶等。多孔网状构造； 水为流动相。适用于常压排阻别离。
〔2〕半硬质凝胶 苯乙烯-二乙烯基苯交联共聚物，有机凝胶； 非极性有机溶剂为流动相，不能用丙酮、乙醇等极性溶剂
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二维液相色谱的构成：
二维液相色谱的分类：
根据切换系统不同进行分类： 1）传统的中心切割技术色谱 2）全二维液相色谱
二维液相色谱的应用
二维液相色谱法的应用
二维液相色谱法在天然药物成分分析中的应用 二维液相色谱法在鹿茸蛋白分离中的应用
二维液相色谱技术在中药质量控制中的应用
二维液相色谱法在差异蛋白质组学中的应用 二维液相色谱法在羊草地上部总蛋白分离中的应用 二维液相色谱法在体内药物分析中的应用
二维液相色谱进展与应用
多维液相色谱理论：
多维色谱理论最早由Giddings 提出。 他提出多维色谱的两条标准： 1）样品组分必须经过两种或两种以上的不同分离模式。 2）经一种模式分离的样品组分不应该在其后续的分离中被混合。
二维液相色谱：
将分离机理不同又相互独立的两根色谱柱串连起来构成的分离系统。
反相柱相同填料的捕集柱顶端，通过阀切换将富集在捕集柱上的组分反向冲入第二维反相
分析柱（ Shodex Rspak RP18~415，150 mm ×4.6 mm I. D）继续分析。结果鹿茸蛋白 在所构建的二维系统上得到了较好的分离，与一维色谱相比，系统的总峰容量、分辨率在 一定程度上得到了提高，系统总出峰数为30，总峰容量为240。结论使用常规尺寸的色谱 柱构成的二维液相色谱系统仪器要求简单，对鹿茸为代表的动物类中药的分离、分析有一 定指导意义
二维液相色谱法在鹿茸蛋白分离中的应用
建立 SAX - RP 模式的在线二维液相色谱系统，并将其应用于鹿茸蛋白的分离、分 . 析中。方法样品首先由第一维强阴离子交换色谱（ COSMOGEL QA Glass Packed Column，75 mm ×8.0 mm I. D）在 pH 9.16的 Tris -HCl 缓冲体系中以0.8 mL / min 的流 速洗脱分离，采用不连续的逐步增加盐浓度的8步台阶梯度方式洗脱，洗脱产物富集在与
二维液相色谱技术在中药质量控制中的应用
由于复杂体系样品分离需要更强的分离能力，二维色谱能使样 品组分在两个不同的分离条件下进行分离，显著提高分离能力，降低色 谱峰重叠，同时改善色谱峰鉴定的可靠性，在中药质量控制中发挥重要 作用。不同的二维色谱技术中，在线全二维液相色谱技术由于其在较短
时间内可以获得高峰容量、样品损失低、重现性好及自动化程度高，成
为对于复杂体系分离时最受关注，发展最迅速的技术。
展望
Thank you
......
二维液相色谱法在天然药物成分分析中的应用
天然药物成分复杂，包括从无机物到有机物，从极性到非极性，从小分子到生 物大分子的各种成分，预处理费时费力，操作困难。2D-LC串联质谱技术简化了预 处理过程，提高了峰容量与选择性。用2D-LC系统来分析天然药物中的非挥发性成 分，并针对不同成分摸索了LC的选择和合适的条件，其中分别采用了强酸性阳离子 交换柱或氨基柱与反向C18柱组成二维系统，接口三通阀内接15mmX4mm的C18 富集柱来浓缩欲分离组分。进样12分钟后，富集柱上的组分被有机溶剂反洗到第二 维分析柱中，并采用质谱检测。两种系统分别对生物碱组分和单唾液酸神经节苷酯 等组分表现出良好的富集效果和分离能力。
二维液相色谱的发展
尽管二维液相色谱技术目前还没有被广泛使用，但这方面的潜力是巨大的。 大型公司，如安捷伦和岛津，都在投入资金开发这种仪器，让科学家能够 回答之前无法回答的问题。目前，一些优秀的产品已上市。这种强大的技 术可用在各种不同的领域，如制药、生物制药、天然产物的研究和食品分 析等。二维液相色谱有望成为分析中等至高度复杂的混合物的强大工具。