3显微镜直接计数法

合集下载

显微镜直接计数法实验报告

显微镜直接计数法实验报告实验报告：显微镜直接计数法一、实验目的本实验旨在通过显微镜直接计数法，测定微生物样品中细胞的数量，以了解其生长和繁殖情况，为生物工程、生物医学、环境科学等领域的研究提供依据。

二、实验原理显微镜直接计数法是一种通过显微镜直接观察并计数样品中微生物数量的方法。

该方法具有操作简便、快速等优点，适用于测定样品中微生物的数量和生长情况。

通过显微镜直接计数法，可以观察到微生物的形态、大小、分布等情况，从而对其生长环境、生长状况等进行评估。

三、实验步骤1.样品制备：将待测样品进行适当稀释，使微生物细胞分散均匀。

2.显微镜观察：将样品滴加到显微镜载玻片上，用盖玻片固定，调整显微镜焦距，观察并计数微生物的数量。

3.计数方法：采用直接计数法，即直接观察并计数样品中的微生物数量。

对于压在盖玻片下的细胞，可以通过轻轻移动盖玻片进行观察和计数。

4.数据记录：记录每个样品中微生物的数量，并计算平均值。

同时记录观察到的细胞形态、大小、分布等情况。

5.结果分析：根据实验数据，分析微生物的生长情况、繁殖速度等。

四、实验结果及数据分析1.实验数据（见附表1）附表1：显微镜直接计数法实验数据2.数据分析通过附表1的数据，我们可以得出以下结论：（1）样品A中微生物的数量较少，而样品B、C、D中微生物的数量较多。

这表明不同样品中微生物的数量存在差异。

（2）在相同稀释倍数下，观察到的细胞数越多，计数结果越准确。

因此，选择合适的稀释倍数对于准确测定微生物数量至关重要。

在本实验中，选择100倍和1000倍作为稀释倍数，可以较为准确地测定微生物数量。

（3）通过对比不同样品在同一稀释倍数下的计数结果，可以得出不同样品中微生物的生长情况。

例如，样品B和D在1000倍稀释下的计数结果较高，说明这两个样品中微生物的生长情况较好。

而样品A和C在100倍稀释下的计数结果较低，说明这两个样品中微生物的生长情况较差。

（4）根据实验数据，可以进一步分析微生物的生长规律和繁殖速度。

微生物活菌计数方法

杂菌数亿/g
细菌杂菌 (亿 / g ) 10 8 19 .3 10 4
100 0.19 10 .10 0.1
重复 1 2 3 菌落平均数
稀释倍数（霉菌在马丁培养基上） 103 104 105 6 / / 7 / / 8 / / 7.0 /
3
/
霉菌数个/g 0.69×106
两个稀释倍数度菌落数之比 / / / 1.1 2.5 / /
菌数亿 /g,mL 25.3 3.2 0.38 0.30 / 0.032 0.015
无法数无法数无法数 313 289 无法数 32 15 315 38 32 136 5 3
3.2 标准差
标准差(Standard Deviation) ：各数据偏离平均数的距离（离均差）的平均数，它是离差平方和平均后的方根。用δ表示。标准差体现随机变量取值与其期望值的偏差。标准 NY411-2000 固氮菌肥料的7.2.6.2。
浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。根据浊度计算出细菌的数量。该方法一般可以估计出细菌的数量级。
经常用于一些特殊的微生物的快速计数，如光合细菌和
藻类的测数。但是由于该方法仅能估测菌数，不能准确定量，而且由于一些颗粒和添加剂的作用，不能正确反映该样品的质量，所以在质检过程中不予采用。
微生物活菌平板计数方法和技术
微生物肥料和食用菌菌种质检中心曹凤明
微生物计数方法种类

1. 2. 3.
直接计数法核酸计数法活菌计数法（培养法）
MPN（Most-Probable-Number ）最大可能数法混菌法平板技术法

显微镜直接计数法原理

显微镜直接计数法原理
显微镜直接计数法是一种用于测定溶液中微粒数量的方法，其原理是通过显微镜观察溶液中的微粒并进行直接计数。

这种方法适用于微粒浓度较低的溶液。

在进行显微镜直接计数之前，需要将待测溶液适当稀释，以保证在显微镜下观察到的微粒较为分散，不会产生严重的重叠。

然后，取少量稀释好的溶液放置在显微镜下的玻片上，利用显微镜进行观察和计数。

在显微镜观察过程中，可以使用目视计数法或者计数仪来进行微粒数量的计数。

目视计数法是通过直接观察显微镜视野中的微粒数量来进行计数，但这种方法需要操作人员具备一定的经验和技巧，否则容易产生误差。

计数仪则是通过将显微镜和计数器结合在一起，使用计数仪的软件进行自动计数，可以提高计数的准确性和效率。

在进行显微镜直接计数时，需要注意减小观察误差。

例如，应该避免在显微镜下对颗粒悬浮物的快速移动进行计数，应尽量保持视野稳定。

此外，还要随机选择计数视野，以确保样本的代表性。

显微镜直接计数法不仅可以用于测定溶液中的微粒数量，还可以用于观察微粒的形状、大小和分布情况。

但是，由于此方法需要借助显微镜进行观察，操作相对繁琐，且对于微粒浓度较高的溶液不适用。

因此，在实际应用中，常常需要结合其他测量方法来进行微粒数量的确定，以提高准确性和可靠性。

3-酵母菌形态的观察和显微镜直接计数法

微生物学实验
实验三酵母菌形态的观察和显微镜直接计数法
执教单位
刘森林
生命科学学院
实验目的
观察酵母菌的形态，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。
掌握酵母菌的一般形态特征。明确血球计数板计数的原理。
掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法。
实验原理
美兰染色检时为无色。活的酵母细胞具有还原能力，能使美兰保持为还原态，因此染色后死的为蓝色、活的为无色。

三.实验步骤: 作业画图说明你所观察到的酵母菌的形态特征，并说明死细胞和活细胞分别为什么颜色。
三.实验步骤:
二．显微镜直接计数法

1. 菌悬液的制备：以无菌水将酿酒酵母制成浓度适中的菌悬液 2. 镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检，若有污物，则需清洗，吹干后才能计数。 3. 加样品：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意：取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有气泡产生。
酵母菌细胞计数的原理:
将菌液放在已知体积计数室(1mm2×0.1mm)，计数室薄，因此每个细胞都可以被看到。体积确定，因此数完所有细胞后就知道单位体积的细胞个数。
三.实验步骤: 一、酵母菌形态的观察（美蓝浸片的观察）
1. 在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌苔放染色液中，混合均匀。 2. 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。注意：盖玻片不宜平放，以免产生气泡影响观察 3. 将玻片放置约3分钟后镜检，先用低倍镜观察后用高倍镜观察酵母菌的形态，并根据颜色区别死活细胞。

显微镜的直接计数和细菌大小测定-精选文档

四、操作方法
(一)酵母菌大小测定的操作方法 1.测微尺的构造和使用方法 (1)目镜测微尺的构造目镜测微尺是一块圆形玻片，其中央刻有精确的刻度，通常是将5mm划分为50 格，实际每格等于100μm。刻度的大小是随使用的接目镜和接物镜的放大倍数而改变，用前必须用物镜测微尺来标定，如图。 (2)物镜测微尺的构造物镜测微尺为一块特制的载玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度，将长1mm的直线等分为100小格，每小格等于10μm，如图。
五、实验报告及思考题
1、微生物大小测定实验结果
（1）将目镜测微尺校正结果填入下表：
接物镜接物镜倍数目镜测微尺格镜台测微尺格
数
数
低倍镜
高倍镜
油镜
目镜测微尺每格代表的长度(μm)
接目镜的放大倍数________
（2）酵母细胞大小的测量结果：
微生物名称
目镜测微尺每格代表的长度
/μm
宽
目镜测微尺格数
2.目镜测微尺的标定
(1)取下接目镜，旋下目镜上的目透镜，将目镜测微尺放人接目镜的中隔板上，使有刻度的一面朝下，再旋上目透镜，并装入镜筒内。 (2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上，使有刻度的一面朝上，同观察标本一样，使具有刻度的小圆圈位于视野中央。 (3)先用低倍镜观察，对准焦距，待看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜测微尺的刻度相平行，并使两尺的左边第一条线相重合，再向右寻找两尺的另外一条重合线。如图 (4)记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数。
4.酵母菌大小的测定
(1)取下镜台测微尺，换上酵母菌水浸制片。
(2)测量菌体的长度和宽度各占目镜测微尺几格，然后换算出菌体的实际长度。

人教(2019)生物选择性必修三(学案+练习)：微生物的选择培养和计数

人教(2019)生物选择性必修三(学案+练习)微生物的选择培养和计数1．微生物的选择培养(1)选择培养基：将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。

(2)稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释后，将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面，进行培养。

①系列稀释操作系列稀释：移液管需要经过灭菌。

操作时，试管口和移液管应离火焰1～2 cm 。

操作过程如下：②涂布平板操作序号图示操作 1取0.1 mL 菌液，滴加到培养基表面2将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 3将沾有少量酒精的涂布器在火焰上灼烧，待酒精燃尽后，冷却8～10 s 4用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。

涂布时可转动培养皿，使菌液涂布均匀 ③培养：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入℃的恒温培养箱中培养1～2 d 。

2．微生物的数量测定(1)稀释涂布平板法①计数原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

②计数标准：为了保证结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板进行计数。

③计数方法：通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为30～300、适于计数的平板。

在同一稀释度下，至少应对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。

④统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计结果一般用菌落数表示。

(2)显微镜直接计数法①计数原理：利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。

②优点：是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。

③缺点：统计的结果一般是死菌数和活菌数的总和。

3．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1．利用稀释涂布平板法和平板划线法均可实现细菌的分离和计数。

(×) 2．培养分解尿素的细菌，培养基的pH会增大。

显微镜直接计数法实验报告

显微镜直接计数法实验报告一、实验目的1、了解显微镜直接计数法的原理和应用。

2、掌握血细胞计数板的使用方法。

3、学会对细胞进行计数，并计算细胞浓度。

二、实验原理显微镜直接计数法是利用血细胞计数板在显微镜下直接计数细胞的一种方法。

血细胞计数板是一块特制的厚玻璃片，板上有四个槽构成三个平台。

中间的平台又被一短横槽隔成两半，每半边上面刻有一个方格网。

方格网上刻有 9 个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。

计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成 16 个中方格，而每个中方格又分成 25 个小方格；另一种是一个大方格分成 25 个中方格，而每个中方格又分成 16 个小方格。

但无论哪种规格，每个大方格的边长均为 1 毫米，盖上盖玻片后，计数室的容积是固定的。

因此，在计数时，只要测定一定体积的样品在计数室中所占的方格数，就能计算出样品中的细胞数量。

三、实验材料与设备1、材料酵母菌悬液2、设备显微镜血细胞计数板盖玻片吸管擦镜纸四、实验步骤1、准备血细胞计数板用酒精棉球擦拭计数板和盖玻片，然后用擦镜纸擦干。

将盖玻片盖在计数板上。

2、制备酵母菌悬液用无菌吸管吸取适量的酵母菌培养液，加入一定量的无菌生理盐水，充分混匀，制成适宜浓度的酵母菌悬液。

3、加样用吸管吸取酵母菌悬液，从盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），使菌液自行渗入计数室，注意不可有气泡产生。

4、计数静置片刻，待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，将血细胞计数板置于显微镜载物台上。

先用低倍镜找到计数室，再换高倍镜进行计数。

计数时，对于压在方格线上的细胞，只计上线和左线的细胞。

5、计算统计五个中方格中的细胞总数，然后按下式计算：每毫升菌液中的细胞数＝五个中方格中的细胞总数 × 5 × 10000 ×稀释倍数五、实验结果与分析1、实验结果经过计数，五个中方格中的细胞总数为_____个。

本次实验所使用的酵母菌悬液稀释倍数为_____倍。

实验技术十显微镜直接计数法

实验技术十显微镜直接计数法
一、目的要求：
1. 理解血球计数板的计数原理 2. 学会并掌握使用血球计数板进行准确计数 3. 了解其在生产实践中的应用
生产实践中测定微生物生长繁殖的方法
测生长
间接法：平板菌落计数法直接法：显微镜直接计数
二、基本原理
利用血球计数器在显微镜下直接计数，这是生产实践中常用的一种微生物计数方法。
1000mm3（1mL）相当于多少个计数室的体积？
设菌悬液稀释倍数为B
则：原菌液含菌数个/毫升=每小格平均菌数 ×4×106×B
若数中方格则：
原菌液含菌数个/毫升=每中方格平均菌数 ×25（16）× 104×B
优点：方便、迅速、直接缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细胞浓度；个体较小的细菌在显微镜下难以观察；
计繁殖数
利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中Βιβλιοθήκη 生物的数量。血球计数板的构造
25中格× 16小格计数室 16中格×25小格计数室
计数室边长为1mm，则计数室的面积为l mm2高度为0.1mm，所以每个计数室的体积为0.1mm3，
1mL=1cm3=1000mm3
1mL原菌液含菌数？

显微镜直接计数法

验——微生物细胞大小的测定和显微镜直接计数录入时间:2011-4-13 9:35:15 来源：天津农学院精品课程目的1.1 学习接目测微计的校正方法，了解血球计数板的构造和计数原理1.2 学习使用显微镜测微尺测定微生物细胞大小，掌握用血球计数板测定微生物细胞总数的方法。

2 原理微生物细胞的大小是微生物分类鉴定的重要依据之一。

微生物个体微小，必须借助于显微镜才能观察，要测量微生物细胞大小，也必须借助于特殊的测微计在显微镜下进行测量。

显微测微计由镜台测微计和目镜测微计两部分组成。

后者可直接用于测量细胞大小。

它是一块圆形玻片(图7—1)，其中央有精确等分到度，测量时将其放在接目镜中的隔板上。

由于目镜测微计所测量的是微生物细胞经过显微镜放大之后所成像的大小，刻度实际代表的长度随使用的目镜和物镜放大倍数及镜筒的长度而改变，所以，使用前须先用镜台测微计进行标定，求出某一放大率下，目镜测微计每一小格所代表的长度，然后用目镜测微计直接测被测对象的大小。

镜台测微计是一块中央有精确刻玻片(图7—1)，刻度的总长为lmm，等分为100小格，每小格长10um，专用于对目镜测微计进行标定的。

3 材料3.1 器械显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺，载玻片、盖玻片、血球计算板、擦镜纸、吸水纸、玻片架、肾形盘、洗瓶、接种环、酒精灯、火柴、滴管。

3.2 菌种培养48h的啤酒酵母斜面菌体和菌悬液。

3.3 革兰氏染液4流程4.1 置目测微计→置台测微计→标定目测微计→测菌体大小→记录结果→用毕擦拭干净4.2 检查计数板→稀释样品→加样→计数→计算→清洗5 步骤5.1 微生物菌体大小的测定5.1.1 目镜测微尺的校正5.1.1.1 更换目镜镜头更换目镜测微尺镜头（标记为PF）；或者取下目镜上部或下部的透镜，在光圈的位置上安上目镜测微尺，刻度朝下，再装上透镜，制成一个目镜测微尺的镜头。

5.1.1.2 某一倍率下标定目镜刻度将镜台测微尺置于载物台上，使刻度面朝上，先用低倍镜对准焦距、看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器使两尺重叠，并使二尺的左边的某一刻度相重合，向右寻找另外二尺相重合的刻度。

显微镜直接计数法名词解释

显微镜直接计数法名词解释
显微镜直接计数法是一种常用的微生物计数方法，它通过显微镜直接观察和计数样品中的细胞或微生物数量。

这种方法的具体步骤是，首先将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（血球计数板），然后在显微镜下直接计数每个格子内的细胞或微生物数量，最后根据格子面积和体积推算出单位体积内的细胞或微生物数量。

显微镜直接计数法的优点包括操作简单、结果直观、可以测定所有形态的细胞或微生物、结果准确、误差小等。

然而，这种方法也存在一些缺点，例如不能区分细胞或粒子的死亡或活性、容易产生误差、需要经验丰富的操作者进行操作、需要时间和劳动力成本高等。

在应用显微镜直接计数法时，需要注意以下几点：首先，样品的稀释比例要适当，以避免细胞或微生物聚集在一起而影响计数结果；其次，要选择合适的血球计数板，根据需要选择不同的规格；最后，在计数过程中要遵守规定的计数规则，以确保结果的准确性和可靠性。

总之，显微镜直接计数法是一种简单、快速、直观的微生物计数方法，适用于各种实验室和科研机构的使用。

在使用该方法时，需要注意操作步骤和注意事项，以保证结果的准确性和可靠性。

3显微镜直接计数法

四、操作步骤
样品稀释度要求每小格内约5-10
个菌体为宜
菌悬液制备取清洁无油的血球计数板在计数室上面加盖玻片
取酵母菌液，摇匀
计数室内不得有气泡
压在方格线上的菌体，以压在上线和左侧线上的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵时，若芽体大小达到母细胞的一半时，即作为
两个菌体计数。
用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入
五、注意事项
1.清洗计数板时要小心，不能使用刷子等硬物，以免破坏精细度；洗完后自行晾干或用吹风机吹干，不能火上烘烤。
2.取样时要摇匀菌液，且加样切勿贪多，一般滴一滴即可（最多两滴），且计数室内不可有气泡产生。
3.调节显微镜光线的强弱适当。
六、实验结果
将显微计数结果记录于下表中（A表示五个中方格中的总菌数；B表示菌液稀释倍数）。
无论是哪一种规格的计数板，每个大方格中都是400个小方格。
（2）计数与计算方法
计数：
通常数 5 个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘以25或16，就得出1个大方格的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数。
计算：
设五个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，如果是25 个中方格的计数板，则：
静止5min 用低倍镜观察并将计数室移至视野中央
在高倍镜下计数计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净
随机计数五个中格的总菌数，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌
液中的含菌数。
计数区
出芽菌计数
如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体计数
各中格中菌数
AB
12345

显微镜直接计数法实验报告

显微镜直接计数法实验报告篇一：显微镜直接计数法实验报告显微镜直接计数法一、实验目的1、明确血细胞计数板计数原理；2、掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。

二、实验原理利用血细胞计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。

此法的优点是直观、快速。

该计数板（构造如图1所示），是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。

中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。

计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。

所以无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的即共有400个小格。

2每一个大方格边长为1㎜，则每一大方格的面积为1㎜，盖上盖玻片后，载玻片与盖3玻片之间的高度为㎜，所以计数室的容积为㎜。

其计算方法如下：设5个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数为B 1．16×25的计数板计算公式细胞数/ml=×16×10000×B=32000AB 个2．25×16的计数板计算公式细胞数/ml=×25×10000×B=50000AB 个三、实验器材（1）菌悬液：酵母菌悬液（2）其他物品：血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细管等。

四、实验步骤1．稀释：将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。

（一般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜）2．镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。

若有污物，则需清洗后才能进行计数。

3．加样品：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，静置5—10分钟即可计数。

《显微镜直接计数法》PPT课件

版权所有未经作者同意请勿使用
实验十显微镜直接计数技术

三、实验材料：
1.实验菌种及培养基：酿酒酵母菌细胞稀释液； 2. 实验设备及器材：恒温培养箱；恒温干燥箱；高压蒸汽灭菌锅；显微镜；酒精灯；接种环；滴瓶；试剂瓶；双层瓶；镊子；载玻片；φ90mm培养皿；500ml标本缸；15×150 试管；火柴（或打火机）；吸水纸；镜头纸；棉花；
版权所有未经作者同意请勿使用

实验十显微镜直接计数技术

计数室是一个边长为1mm的正方形，其面积为1mm2。每个计数室被辅助线划分为25 （中格）×16（小格）个小格，以方便计数。图10-2为计数室（红色双线围成的即为由25 个中格组成的计数室。）
＋
加样处
＋
图10-1 计数板俯视图
二、基本原理：
显微镜直接计数技术可以对含菌样品所含的总菌数做出统计，是常用的、较快捷的一种统计微生物数量的方法和技术。显微镜直接计数技术使用一特制的、专用的计数工具——血球计数板进行计数操作。血球计数板上有四条槽，把计数板分为三个平台，两侧的平台用于搭放盖玻片，中间的平台又被分为两个较小的、每个平台上各有一个计数室的平台。如图10-1
1.将统计、计数结果填入下表：
版权所有未经作者同意请勿使用
实验十显微镜直接计数技术

2.影响显微镜直接计数结果的因素有哪些，如何避免？ 3. 整理实验设备，清理实验台。
版权所有未经作者同意请勿使用
1、快乐总和宽厚的人相伴，财富总与诚信的人相伴，聪明总与高尚的人相伴，魅力总与幽默的人相伴，健康总与阔达的人相伴。 2、人生就有许多这样的奇迹，看似比登天还难的事，有时轻而易举就可以做到，其中的差别就在于非凡的信念。 3、影响我们人生的绝不仅仅是环境，其实是心态在控制个人的行动和思想。同时，心态也决定了一个人的视野和成就，甚至一生。 4、无论你觉得自己多么了不起，也永远有人比更强;无论你觉得自己多么不幸，永远有人比你更不幸。 5、也许有些路好走是条捷径，也许有些路可以让你风光无限，也许有些路安稳又有后路，可是那些路的主角，都不是我。至少我会觉得，那些路不是自己想要的。 6、在别人肆意说你的时候，问问自己，到底怕不怕，输不输的起。不必害怕，不要后退，不须犹豫，难过的时候就一个人去看看这世界。多问问自己，你是不是已经为了梦想而竭尽全力了? 7、人往往有时候为了争夺名利，有时驱车去争，有时驱马去夺，想方设法，不遗余力。压力挑战，这一切消极的东西都是我进取成功的催化剂。 8、真想干总会有办法，不想干总会有理由;面对困难，智者想尽千方百计，愚者说尽千言万语;老实人不一定可靠，但可靠的必定是老实人;时间，抓起来是黄金，抓不起来是流水。 9、成功的道路上，肯定会有失败;对于失败，我们要正确地看待和对待，不怕失败者，则必成功;怕失败者，则一无是处，会更失败。1、快乐总和宽厚的人相伴，财富总与诚信的人相伴，聪明总与高尚的人相伴，魅力总与幽默的人相伴，健康总与阔达的人相伴。 2、人生就有许多这样的奇迹，看似比登天还难的事，有时轻而易举就可以做到，其中的差别就在于非凡的信念。 3、影响我们人生的绝不仅仅是环境，其实是心态在控制个人的行动和思想。同时，心态也决定了一个人的视野和成就，甚至一生。 4、无论你觉得自己多么了不起，也永远有人比更强;无论你觉得自己多么不幸，永远有人比你更不幸。 5、也许有些路好走是条捷径，也许有些路可以让你风光无限，也许有些路安稳又有后路，可是那些路的主角，都不是我。至少我会觉得，那些路不是自己想要的。 6、在别人肆意说你的时候，问问自己，到底怕不怕，输不输的起。不必害怕，不要后退，不须犹豫，难过的时候就一个人去看看这世界。多问问自己，你是不是已经为了梦想而竭尽全力了? 7、人往往有时候为了争夺名利，有时驱车去争，有时驱马去夺，想方设法，不遗余力。压力挑战，这一切消极的东西都是我进取成功的催化剂。 8、真想干总会有办法，不想干总会有理由;面对困难，智者想尽千方百计，愚者说尽千言万语;老实人不一定可靠，但可靠的必定是老实人;时间，抓起来是黄金，抓不起来是流水。14、成长是一场和自己的比赛，不要担心别人会做得比你好，你只需要每天都做得比前一天好就可以了。 15、最终你相信什么就能成为什么。因为世界上最可怕的二个词，一个叫执着，一个叫认真，认真的人改变自己，执着的人改变命运。只要在路上，就没有到不了的地方。 16、你若坚持，定会发光，时间是所向披靡的武器，它能集腋成裘，也能聚沙成塔，将人生的不可能都变成可能。 17、人生，就要活得漂亮，走得铿锵。自己不奋斗，终归是摆设。无论你是谁，宁可做拼搏的失败者 9、成功的道路上，肯定会有失败;对于失败，我们要正确地看待和对待，不怕失败者，则必成功;怕失败者，则一无是处，会更5、别着急要结果，先问自己够不够格，付出要配得上结果，工夫到位了，结果自然就出来了。 6、你没那么多观众，别那么累。做一个简单的人，踏实而务实。不沉溺幻想，更不庸人自扰。 7、别人对你好，你要争气，图日后有能力有所报答，别人对你不好，你更要争气望有朝一日，能够扬眉吐气。 8、奋斗的路上，时间总是过得很快，目前的困难和麻烦是很多，但是只要不忘初心，脚踏实地一步一步的朝着目标前进，最后的结局交给时间来定夺。 9、运气是努力的附属品。没有经过实力的原始积累，给你运气你也抓不住。上天给予每个人的都一样，但每个人的准备却不一样。不要羡慕那些总能撞大运的人，你必须很努力，才能遇上好运气。 10、你的假装努力，欺骗的只有你自己，永远不要用战术上的勤奋，来掩饰战略上的懒惰。 11、时间只是过客，自己才是主人，人生的路无需苛求，只要你迈步，路就在你的脚下延伸，只要你扬帆，便会有八面来风，启程了，人的生命才真正开始。 12、不管做什么都不要急于回报，因为播种和收获不在同一个季节，中间隔着的一段时间，我们叫它为坚持。失败。11、学会学习的人，是非常幸福的人。——米南德 12、你们要学习思考，然后再来写作。——布瓦罗 13、在寻求真理的长河中，唯有学习，不断地学习，勤奋地学习，有创造性地学习，才能越重山跨峻岭。——华罗庚 14、许多年轻人在学习音乐时学会了爱。——莱杰 15、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基 16、我们一定要给自己提出这样的任务：第一，学习，第二是学习，第三还是学习。——列宁 17、学习的敌人是自己的满足，要认真学习一点东西，必须从不自满开始。对自己，“学而不厌”，对人家，“诲人不倦”，我们应取这种态度。——毛泽东 18、只要愿意学习，就一定能够学会。——列宁 19、如果学生在学校里学习的结果是使自己什么也不会创造，那他的一生永远是模仿和抄袭。——列夫· 托尔斯泰 20、对所学知识内容的兴趣可能成为学习动机。——赞科夫 21、游手好闲地学习，并不比学习游手好闲好。——约翰· 贝勒斯 22、读史使人明智，读诗使人灵秀，数学使人周密，自然哲学使人精邃，伦理学使人庄重，逻辑学使人善辩。——培根 23、我们在我们的劳动过程中学习思考，劳动的结果，我们认识了世界的奥妙，于是我们就真正来改变生活了。——高尔基 24、我们要振作精神，下苦功学习。下苦功，三个字，一个叫下，一个叫苦，一个叫功，一定要振作精神，下苦功。——毛泽东 25、我学习了一生，现在我还在学习，而将来，只要我还有精力，我还要学习下去。——别林斯基、学习外语并不难，学习外语就像交朋友一样，朋友是越交越熟的，天天见面，朋友之间就亲密无间了。——高士其 2、对世界上的一切学问与知识的掌握也并非难事，只要持之以恒地学习，努力掌握规律，达到熟悉的境地，就能融会贯通，运用自如了。——高士其 3、学和行本来是有联系着的，学了必须要想，想通了就要行，要在行的当中才能看出自己是否真正学到了手。否则读书虽多，只是成为一座死书库。——谢觉哉、你的假装努力，欺骗的只有你自己，永远不要用战术上的勤奋，来掩饰战略上的懒惰。 11、时间只是过客，自己才是主人，人生的路无需苛求，只要你迈步，路就在你的脚下延伸，只要你扬帆，便会有八面来风，启程了，人的生命才真正开始。 12、不管做什么都不要急于回报，因为播种和收获不在同一个季节，中间隔着的一段时间，我们叫它为坚持。 13、你想过普通的生活，就会遇到普通的挫折。你想过最好的生活，就一定会遇上最强的伤害。这个世界很公平，想要最好，就一定会给你最，取平均值； 6.计算样品所含总菌数：根据统计、计数结果，计算样品所含的总菌数； 7.清洗处理计数板：实验完成后，及时按规定清洁处理技术板。本实验所用计数板，可用清水清洁处理后，吸干水分，妥善保存。

酵母菌数量的测定—显微镜直接计数法

14
五、数据处理
各中格中的菌数（个）
二室平均
菌数
A
B
值（个/
1
2
3
4
5
（个 mL）
）第一
室第二
室
15
六、思考题能否利用显微镜直接计数的方法测定
酵⺟菌菌液中的死细菌与活细菌？如果可以，如何进行？如果不可以，请说明原因。
16
式1：总菌数（个/mL）=A/5×16×10000×B 式2：总菌数（个/mL）=A/5×25×10000×B
三、实验器材血球计数板、显微镜、盖玻片、滴管、酿酒酵⺟菌液
8
四、实验步骤
1、加样品
•取净洁干燥的血球计数板盖上盖玻片。 •将菌悬液适当稀释（稀释1倍），摇匀。
•用滴管吸取菌悬液，加1～2滴于盖玻片边缘，让菌液靠毛细渗透作用进入计数室。 •放置5 min左右让计数室充满菌液。
• 如遇酵⺟出芽，芽体大小达到⺟细胞一般时，即作为两个菌体计算。
• 计算一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。
• 菌体在血球计数板处于不同空间，要在不同焦距下才能看全，所以，观察时必须不断调节细螺用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷； •镜检观察是否清洗干净； •洗后干燥（晾干、吹干，或乙醇、丙酮等有机溶剂脱水干燥）。
4
5
血球计数板规格
计数室高度：0.1mm 大方格边⻓：1mm。每个大方格分成400个小方格。
规格一：每个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格。规格二：每个大方格分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格。
设五个中方格的总菌数为A，菌液的稀释倍数为B，规格一、规格二计数板，分别采用式 1、式2计算。

微生物显微镜直接计数法和死活细胞的鉴定

实验四微生物显微镜直接计数法和死活细胞的鉴定以及四大类微生物菌落形态的比较和识别微生物显微镜直接计数法一、实验目的1、学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。

2、学习并掌握形态观察及死活细胞的鉴别方法。

二、实验原理酵母菌显微直接计数—血球计数板三、实验材料显微镜、血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、无菌滴管、吸水纸、擦镜纸.四、实验步骤1、取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖片。

2、取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。

3、用10×(40x)镜观察并将计数室移至视野中央。

4、在10×(40x)镜下计数：计数5个中格的平均值，最后再换算到每mL 菌液中的含菌数。

注意事项：计上不计下，计左不计右。

出芽计一半。

五、实验结果将显微计数结果记录于下表中。

T 表示五个中方格中的总菌数。

各中格中菌数T二室平均值个/ml12345第一室第二室六、问题与讨论在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？有何改进方法？②酵母菌死活细胞的鉴定一、实验原理美蓝是一种无毒的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。

因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色，借此即可对酵母菌的死活细胞进行鉴别。

二、实验材料酵母菌悬液、0.1 ％吕氏碱性美蓝染色液显微镜、载玻片、盖玻片。

三、实验步骤美蓝镜片的观察1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色掖，然后按无菌操作用吸取计数时酵母菌样品液放在染液中，混合均匀。

2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。

3）将制片放置约1min后镜检，低倍镜到高倍镜观察，根据颜色来区别死活细胞。

注意事项1、加染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。

微生物实验显微镜直接计数法

二、实验原理
1.血球计数板法
利用计数板上有固定体积和精确刻度的两个计数室进行
计数，是常用的在显微镜下对细胞数目进行计数的方法。
（1）计数室体积：正方形，边长为1mm，深0.1mm→盖上盖玻片后，容积为0.1mm3。（2）计数室刻度的规格
具有直观、快速等优点，但误差较大，不适合细菌计数。
16×25型：16个中方格，每个中方格分25个小格；
25×16型：25个中方格，每个中方格分16个小格。
计数室
（3）计数和计算方法
我们采用的是25×16的，计数时查5个中方格的总
菌数。如图：
5个方格的总菌数
计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B
稀释倍数
1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B
=50,000A×B个
三、实验材料
1.菌种：酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）悬液(已
稀释100倍)
2.器具：显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。
四、实验步骤
1.检查计数板
检查计数板是否有破损。
2.镜检计数室
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。
3.加样品
在清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细口滴管让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般
六、作业
显微直接计数结果
÷Ð · Ö · ½ · ñ Ö Ð ¾ ú Ê ý 1 Ú Ò µ » Ê Ò Байду номын сангаас ¶ µ þ Ê Ò 2 3 4 5
5个中格总数
þ Ê ¶ Ò
A
B
100
ú Ê ¾ ý /ml Æ ½ ¾ ù Ö µ

微生物显微镜直接计数法

执行【display flash:/sup.bin flash:/sup.bin
Next startup system software:
flash:/sup.bin
Startup saved-configuration file:
flash:/vrpcfg.zip
//本次启动配置文件
Next startup saved-configuration file: flash:/vrpcfg.zip
天凌晨3点结束。
设备环境基本配置
用户级别切换
用户从高级别切换到低级别时，不需要使用密码。如果用户从低级别切换到高级别时，必须输入正确的级别切换密码。
切换用户级别的环境配置包含两个步骤：
使用高级别用户配置切换用户级别的密码低级别用户登录系统后，切换用户级别。
设备环境基本配置
用户级别切换示例
1. 酵母菌液 2. 显微镜、血球计数器、目镜测微尺、镜台测微尺 3. 载玻片、盖玻片、接种环、胶头吸管等
图5-1 Thoma血球计数板
A.正面图 B.纵切面图 1.血球计数板 2.盖玻片 3.计数室
16小格 × 25大格计数室
25小格 × 16大格计数室
图5-2 计数室的两种刻度形式
四、实验内容
（一）酵母菌数量的检测
1. 显微镜直接计数法（每人1片）注意事项: A. 取样时先要摇匀菌液;加样时计数室不可有气
泡产生。 B. 调节显微镜光线的强弱适当。 2. 平板菌落计数法 (实验八)
（二）酵母菌大小的检测
注意事项：观察时光线不宜过强,否则难以找到镜台测微尺的刻度;换高倍镜和油镜校正时,务必十分小心,防止接物镜压坏镜台测微尺和损坏镜头。
Password: Now user privilege is level 3, and only those commands whose level is equal to or less than this level can be used. Privilege note: 0-VISIT, 1-MONITOR, 2-SYSTEM, 3-MANAGE <Huawei>system-view Enter system view, return user view with Ctrl+Z. [Huawei]