电镜试样的制备实验报告
电镜实验报告
贴壁培养细胞表面形貌的扫描电镜观察【实验目的】1.了解扫描电镜生物样品制备的基本过程2.了解扫描电镜的基本操作【实验原理】扫描电镜的基本原理：扫描电子显微镜是以能量为1-30KV间的电子束，以光栅状扫描方式照射到被分析试样的表面上，利用入射电子和试样表面物质相互作用所产生的二次电子和背散射电子成象，获得试样表面微观组织结构和形貌信息。
其核心是电子光学系统，又分为两个部分：电子枪和透镜系统。
电子枪：提供电子束。
来自热阴极或场发射阴极的电子被1-30KV的电压加速，由阳极孔射出，形成一交叉电子束。
其交叉斑对于热阴极为10-50μm，对于场发射阴极为10-100nm。
透镜系统：由两个或三个电磁透镜组成，改变透镜的励磁电流可连续调节透镜的焦距，在透镜系统的作用下，能将电子枪形成的电子束交叉斑缩小，在样品的表面形成最小直径为3-10nm的电子束照射斑。
（图1）扫描电镜的基本构造示意图相互作用：当电子束轰击样品表面时，一部分的能量转变成热能，还有部分的能量由于电子与样品原子的相互作用而发射出各种有用的信息，其中包括二次电子、背散射电子、俄歇电子等等。
二次电子：入射电子使样品原子激发所产生的电子，能量较低，一般小于50eV。
具体来讲，它是由入射电子与核外松散的被束缚的外层电子之间发生非弹性散射的结果。
松散的外层电子由于入射电子能量的降低而获得一定能量而脱离原有的轨道，而为人们所探测到；但如果它们产生在样品表面以下100Å的地方，则这些二次电子被样品强烈吸收，难以逃逸。
因此二次电子反映样品表面以下100Å的一个薄区域的情况。
成像原理：来自扫描发生器的扫描信号分别送给电子光学系统的扫描线圈和显象管的扫描线圈，让电子束与显象管的阴极射束做同步扫描，使阴极射束在荧光屏上的照射点与电子束在样品上的照射点一一对应，样品上的物点在电子束作用下所产生的信号被检测器随时检出，经视频放大器放大后控制显象管阴极射束的强度使荧光屏上象点的亮度受试样上物点所产生的信号的大小的调制，从而得到与样品性质有关的图象。
扫描电镜实验报告
扫描电镜实验报告姓名：xxx 专业：xxx 学号：xxxxxxxx一、实验目的1. 了解扫描电镜的构造及工作原理；2. 学习扫描电镜的样品制备；3. 学习扫描电镜的操作；3. 利用扫描电镜对铝粉的形貌进行观察。
二、实验原理扫描电镜原理是由电子枪发射并经过聚焦的电子束在样品表面扫描，激发样品产生各种物理信号，经过检测、视频放大和信号处理，在荧光屏上获得能反映样品表面各种特征的扫描图像。
扫描电镜由下列五部分组成，主要作用简介如下：1．电子光学系统。
其由电子枪、电磁透镜、光阑、样品室等部件组成。
为了获得较高的信号强度和扫描像，由电子枪发射的扫描电子束应具有较高的亮度和尽可能小的束斑直径。
常用的电子枪有三种形式：普通热阴极三极电子枪、六硼化镧阴极电子枪和场发射电子枪。
前两种属于热发射电子枪；后一种则属于冷发射电子枪，也叫场发射电子枪，其亮度最高、电子源直径最小，是高分辨本领扫描电镜的理想电子源。
电磁透镜的功能是把电子枪的束斑逐级聚焦缩小，因照射到样品上的电子束斑越小，其分辨率就越高。
扫描电镜通常有三个磁透镜，前两个是强透镜，缩小束斑，第三个透镜是弱透镜，焦距长，便于在样品室和聚光镜之间装入各种信号探测器。
为了降低电子束的发散程度，每级磁透镜都装有光阑；为了消除像散，装有消像散器。
样品室中有样品台和信号探测器，样品台还能使样品做平移、倾斜、转动等运动。
2. 扫描系统。
扫描系统的作用是提供入射电子束在样品表面上以及阴极射线管电子束在荧光屏上的同步扫描信号。
3. 信号检测、放大系统。
样品在入射电子作用下会产生各种物理信号、有二次电子、背散射电子、特征X射线、阴极荧光和透射电子。
不同的物理信号要用不同类型的检测系统。
它大致可分为三大类，即电子检测器、阴极荧光检测器和X射线检测器。
4. 真空系统。
镜筒和样品室处于高真空下，它由机械泵和分子涡轮泵来实现。
开机后先由机械泵抽低真空，约20分钟后由分子涡轮泵抽真空，约几分钟后就能达到高真空度。
材料分析(SEM)实验报告
材料专业实验报告题目：扫描电镜(SEM)物相分析实验学院：先进材料与纳米科技学院专业：材料物理与化学姓名：学号：**********2016年6月30日扫描电镜(SEM)物相分析实验一．实验目的1.了解扫描电镜的基本结构与原理2.掌握扫描电镜样品的准备与制备方法3.掌握扫描电镜的基本操作并上机操作拍摄二次电子像4.了解扫描电镜图片的分析与描述方法二．实验原理1.扫描电镜的工作原理扫描电镜（SEM）是用聚焦电子束在试样表面逐点扫描成像。
试样为块状或粉末颗粒，成像信号可以是二次电子、背散射电子或吸收电子。
其中二次电子是最主要的成像信号。
由电子枪发射的电子，以其交叉斑作为电子源，经二级聚光镜及物镜的缩小形成具有一定能量、一定束流强度和束斑直径的微细电子束，在扫描线圈驱动下，于试样表面按一定时间、空间顺序作栅网式扫描。
聚焦电子束与试样相互作用，产生二次电子发射以及背散射电子等物理信号，二次电子发射量随试样表面形貌而变化。
二次电子信号被探测器收集转换成电讯号，经视频放大后输入到显像管栅极，调制与入射电子束同步扫描的显像管亮度，得到反映试样表面形貌的二次电子像。
本次实验中主要通过观察背散射电子像及二次电子像对样品进行分析表征。
1）背散射电子背散射电子是指被固体样品原子反射回来的一部分入射电子，其中包括弹性背反射电子和非弹性背反射电子。
弹性背反射电子是指被样品中原子和反弹回来的，散射角大于90度的那些入射电子，其能量基本上没有变化（能量为数千到数万电子伏）。
非弹性背反射电子是入射电子和核外电子撞击后产生非弹性散射，不仅能量变化，而且方向也发生变化。
非弹性背反射电子的能量范围很宽，从数十电子伏到数千电子伏。
背反射电子的产生范围在100nm-1mm深度。
背反射电子产额和二次电子产额与原子序数的关系背反射电子束成像分辨率一般为50-200nm（与电子束斑直径相当）。
背反射电子的产额随原子序数的增加而增加，所以，利用背反射电子作为成像信号不仅能分析形貌特征，也可以用来显示原子序数衬度，定性进行成分分析。
扫描电镜显微分析
扫描电镜显微分析扫描电镜显微分析实验报告一、实验目的1、了解扫描电镜的基本结构和原理。
2、掌握扫描电镜试样的制备方法。
3、了解扫描电镜的基本操作。
4、了解二次电子像、背散射电子像和吸收电子像，观察记录操作的全过程及其在组织形貌观察中的应用。
二、实验内容1、根据扫描电镜的基本原理，对照仪器设备，了解各部分的功能用途。
2、根据操作步骤，对照设备仪器，了解每步操作的目的和控制的部位。
3、在老师的指导下进行电镜的基本操作。
4、对电镜照片进行基本分析。
三、实验设备仪器与材料Quanta 250 FEG 扫描电子显微镜四、实验原理（一）、扫描电子显微镜的基本结构和成像原理扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscope,简称SEM）是继透射电镜之后发展起来的一种电子显微镜简称扫描电镜。
它是将电子束聚焦后以扫描的方式作用样品，产生一系列物理信息，收集其中的二次电子、背散射电子等信息，经处理后获得样品表面形貌的放大图像。
扫描电镜主要由电子光学系统；信号检测处理、图像显示和记录系统及真空系统三大系统组成。
其中电子光学系统是扫描电镜的主要组成部分，主要组成：电子枪、电磁透镜、光栏、扫描线圈、样品室等，其外形和结构原理如图1所示。
由电子枪发射出的电子经过聚光镜系统和末级透镜的会聚作用形成一直径很小的电子束，投射到试样的表面，同时，镜筒内的偏置线圈使这束电子在试样表面作光栅式扫描。
在扫描过程中，入射电子依次在试样的每个作用点激发出各种信息，如二次电子、背散射电子、特征X射线等。
安装在试样附近的探测器分别检测相关反应表面形貌特征的形貌信息，如二次电子、背散射电子等，经过处理后送到阴极射线管（简称CRT）的栅极调制其量度，从而在与入射电子束作同步扫描的CRT上显示出试样表面的形貌图像。
根据成像信号的不同，可以在SEM的CRT上分别产生二次电子像、背散射电子像、吸收电子像、X射线元素分布图等。
本实验主要介绍的二次电子像和背散射电子像。
TEM电镜实验报告
TEM电镜实验报告tem实验报告学院：材料科学与工程学院班级：材型1202学生：刘玉蒙学号： 201214020213 时间： 2015年 7月实验报告一、实验目的与任务1. 初步了解透射电镜操作过程。
2.初步掌握样品的制样方法。
3.学会分析典型组织图像。
二、透射电镜的结构与原理透射电镜以波长极短的电子束作为光源，电子束经由聚光镜系统的电磁透镜将其聚焦成一束近似平行的光线穿透样品，再经成像系统的电磁透镜成像和放大，然后电子束投射到主镜简最下方的荧光屏上而形成所观察的图像。
在材料科学研究领域，透射电镜主要可用于材料微区的组织形貌观察、晶体缺陷分析和晶体结构测定。
透射电子显微镜按加速电压分类，通常可分为常规电镜(100kv)、高压电镜(300kv)和超高压电镜(500kv以上)。
提高加速电压，可缩短入射电子的波长。
一方面有利于提高电镜的分辨率；同时又可以提高对试样的穿透能力，这不仅可以放宽对试样减薄的要求，而且厚试样与近二维状态的薄试样相比，更接近三维的实际情况。
就当前各研究领域使用的透射电镜来看，其主要三个性能指标大致如下：加速电压：80～3000kv 分辨率：点分辨率为0.2～0.35nm、线分辨率为0.1～0.2nm 最高放大倍数：30～100万倍尽管近年来商品电镜的型号繁多，高性能多用途的透射电镜不断出现，但总体说来，透射电镜一般由电子光学系统、真空系统、电源及控制系统三大部分组成。
此外，还包括一些附加的仪器和部件、软件等。
有关的透射电镜的工作原理可参照教材，并结合本实验室的透射电镜，根据具体情况进行介绍和讲解。
以下仅对透射电镜的基本结构作简单介绍。
1．电子光学系统电子光学系统通常又称为镜筒，是电镜的最基本组成部分，是用于提供照明、成像、显像和记录的装置。
整个镜筒自上而下顺序排列着电子枪、双聚光镜、样品室、物镜、中间镜、投影镜、观察室、荧光屏及照相室等。
通常又把电子光学系统分为照明、成像和观察记录部分。
实验十一扫描电镜样品制备
注入液体二氧化碳 依次打 开二氧化碳钢瓶排气阀和 仪器的进气阀在0～10℃ 下，向样品杯注入液体二 氧化碳。
1
2
装样： 将样品从醋酸异戊酯中 挑入(或倒入)样品笼中，用滤纸 吸去样品笼外围的醋酸异戊酯， 然后连笼移入仪器的样品杯(高 压容器)内，盖上盖并拧紧以防 漏气。(注：在装样前，应先打 开仪器电源，将温度调节设定在 0℃处预冷10～15min，以保证 液态二氧化碳有足够量进入样品 杯中)。
3
4
当液体二氧化碳充至样品杯容积的 50％(通过刻度尺观察，以液面超过 样品笼为度)时，关闭仪器进气阀， 静置15～20min，让醋酸异戊酯向 液态二氧化碳中充分扩散，然后， 打开仪器排气流量计阀门和进气阀 门，让其边排气边充液10min左右， (让含有醋酸异戊酯的二氧化碳排出 和充入新鲜的液态二氧化碳)再关闭 排气阀；继续充入液体二氧化碳至 样品杯的80％左右，关闭进液阀， 停止充液。
置换乙醇
吸出乙醇，加入醋酸 异戊酯与乙醇Байду номын сангаас：1的 混合液，浸泡10-20分 钟并适当摇动，再吸 弃混合液，加入纯醋 酸异戊酯浸泡10-20分 钟并适当摇动。
样品的干燥
常规临界点干燥法。
临界点干燥法
临界点干燥法是一种消除 了物相界面(液相／气相)， 也就是消除了表面张力来 源的干燥方法。这种方法 由于没有表面张力的影响， 所以样品不易收缩和损伤。 具体处理步骤如下：
三、扫描电镜样品的制备
1
取样：
2
样品的清洁：
将取下的动植物组织放入预
把载玻片上切好的样品快，
冷的含有2％戊二醛溶液的
用牙签轻轻地逐个拨入盛有
载玻片上，用刀片将组织块
0.1mol/L PH7.2磷酸缓冲
电镜样品制备
2014
（读书报告、研究报告）
考核科目:学生所在院（系）：学生所在学科:
材料电子显
材料科学与
材料工程
微分析实践
工程学院
学
生Байду номын сангаас
姓
名：
季
相
儒
学
号：
1 5
S1
0 9 2 7 2
学
生
类
别：
工
程
硕士
考
核
结
果
阅卷人
电镜样品的制备
切片
总结词
切片是将包埋后的样品切成薄片，以 便于电镜观察。
详细描述
切片时应选择合适的刀具和切片厚度， 以保证切片的完整性和均匀性。切片 后应进行修整和染色处理，以提高观 察效果。
染色
总结词
染色是为了增强样品的对比度，以便于电镜观察和拍照记录。
05 电镜样品制备的常见问题 及解决方案
样品固定不充分
总结词
样品固定是电镜样品制备过程中的关键步骤，如果固定不充分，会导致样品在电镜观察时发生形变或 溶解。
详细描述
在固定过程中，应选择适当的固定剂，如戊二醛或锇酸，并确保样品在固定剂中充分浸泡。对于不易 固定的样品，可以采用预固定或二次固定反复清洗样品，以去 除固定液和其他杂质。
脱水操作示例
脱水剂选择
选择适当的脱水剂，如乙醇、丙 酮等，根据脱水剂的浓度和脱水
时间进行操作。
脱水方法
将清洗后的样品放入脱水剂中，逐 渐增加脱水剂的浓度，并在适宜的 温度下进行脱水。
清洗
脱水完成后，用适量的缓冲液清洗 样品，以去除脱水剂和其他杂质。
取样工具
使用锋利的刀片或剪刀， 确保工具清洁并经过灭菌 处理。
样品处理
将取下的组织或部位放入 预先准备好的容器中，加 入适量的固定液，确保样 品与固定液充分接触。
固定操作示例
固定液选择
根据样品类型和观察目的 选择适当的固定液，如戊 二醛、四氧化锇等。
固定方法
将样品放入固定液中，确 保样品完全浸没，并在适 宜的温度和环境下固定一 定时间。
行复染或补染。
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扫描电子显微镜生物样品制备与观察细胞生物学实验报告剖析
细胞生物学实验报告扫描电子显微镜生物样品制备与观察姓名：学号：班级：专业：同组成员：【实验目的】1、了解扫描电镜的基本结构与工作原理2、了解扫描电镜的基本使用方法3、了解临界点干燥仪的工作原理了解扫描电镜生物样品制备的基本过程【实验原理】扫描电镜主要用于观察样品表面几何形貌。
一般扫描电镜生物样品制备过程包括取材、固定、脱水、干燥以及导电处理等步骤。
取材时应尽量保护待观察的样品表面（如细胞表面、组织或器官的上皮表面等），并且避免样品表面在清洗过程中的人为损伤。
一般生物样品需经干燥后才能在扫描电镜下观察。
由于表面张力的作用，含水量大的生物样品在自然干燥过程中，其表面形貌将发生严重变形。
为了观察生物样品真实的表面形貌，通常采用临界点干燥法对样品进行干燥处理。
当气液两相处于临界点时，气体、液体密度相等，表面张力为零。
因此，对生物样品进行临界点干燥，可以较好地保护其表面形貌。
水的临界温度和压力分别为374.1℃和218.3大气压，显然，此条件下生物样品将受到严重损坏。
由于CO2的临界温度和压力较低，为31.4℃和72.9大气压，故通常选择CO2作为生物样品临界点干燥的工作介质。
固定、脱水后的样品需经过乙酸异戊酯处理，然后利用临界点干燥仪对样品进行干燥。
由于生物样品导电性低，未经过导电处理的样品在扫描电镜下观察时会产生荷电现象，从而影响观察和照相记录。
为了减少荷电效应，对生物样品表面要进行导电处理，通常使用离子溅射仪在样品表面喷镀金属导电薄层。
喷镀的金属包括：金（Au），铂（Pt）及其合金等，喷镀导电薄层厚度在10nm左右为宜。
对于花粉粒等含水量较少的生物样品，可以经过自然干燥后在扫描电镜下观察。
入射电子术与固体样品原子之间的相互作用1、入射电子术与固体样品原子之间的相互作用。
具有一定的能量的电子入射固体厚样品后收到样品原子的散射，产生二次电子、背散射电子以及特征x射线等。
二次电子是从样品表面约10nm深度范围内被入射电子激发的低能电子，其能量约为0~50eV。
实验一 透射电子显微镜样品制备
第二篇材料电子显微分析实验一透射电子显微镜样品制备一、实验目的1．掌握塑料—碳二级复型样品的制备方法。
2．掌握材料薄膜样品的制备方法—双喷电解减薄法和离子薄化法。
二、塑料—碳二级复型的制备原理与方法(一) AC纸的制作所谓AC纸就是醋酸纤维素薄膜。
它的制作方法是：首先按重量比配制6％醋酸纤维素丙酮溶液。
为了使AC纸质地柔软、渗透性强并具有蓝色，在配制溶液中再加入2％磷酸三苯脂和几粒甲基紫。
待上述物质全部溶入丙酮中且形成蓝色半透明的液体，再将它调制均匀并等气泡逸尽后，适量地倒在干净、平滑的玻璃板上，倾斜转动玻璃板，使液体大面积展平。
用一个玻璃钟罩扣上，让钟罩下边与玻璃板间留有一定间隙，以便保护AC纸的清洁和控制干燥速度。
醋酸纤维素丙酮溶液蒸发过慢，AC纸易吸水变白，干燥过快AC纸会产生龟裂。
所以，要根据室温、湿度确定钟罩下边和玻璃间的间隙大小。
经过24小时后，把贴在玻璃板上已干透的AC纸边沿用薄刀片划开，小心地揭下AC纸，将它夹在书本中即可备用。
(二) 塑料—碳二级复型的制备方法(1) 在腐蚀好的金相样品表面上滴上一滴丙酮，贴上一张稍大于金相样品表面的AC纸(厚30~80μm)，如图1-2(a)所示。
注意不要留有气泡和皱折。
若金相样品表面浮雕大，可在丙酮完全蒸发前适当加压。
静置片刻后，最好在灯泡下烘烤一刻钟左右使之干燥。
(2) 小心地揭下已经干透的AC纸复型(即第一级复型)，将复型复制面朝上平整地贴在衬有纸片的胶纸上，如图1-2(b)所示。
(3) 把滴上一滴扩散泵油的白瓷片和贴有复型的载玻片置于镀膜机真空室中。
按镀膜机的操作规程，先以倾斜方向“投影”铬，再以垂直方向喷碳，如图1-2(c)所示。
其膜厚度以无油处白色瓷片变成浅褐色为宜。
(4) 打开真空室，从载玻片上取下复合复型，将要分析的部位小心地剪成2mm×2mm的小方片，置于盛有丙酮的磨口培养皿中，如图1-2(d)所示。
(5) AC纸从碳复型上全部被溶解掉后，第二级复型(即碳复型)将漂浮在丙酮液面上，用铜网布制成的小勺把碳复型捞到清洁的丙酮中洗涤，再移到蒸馏水中，依靠水的表面张力使卷曲的碳复型展平并漂浮在水面上。
电子显微镜生物样品的制备实验
电子显微镜生物样品的制备实验一、目的要求学习并掌握制备微生物及核酸电镜样品的基本方法。
二、电子显微镜与光学显微镜的主要区别显微镜的分辨率取决于所用光的波长，1933年开始出现的电子显微镜正是由于使用了波长比可见光短得多的电子束作为光源，使其所能达到的分辨率较光学显微镜大大提高。
而光源的不同，也决定了电子显微镜与光学显微镜的一系列差异（表Ⅲ-1）。
表Ⅲ-1根据电子束作用于样品的方式的不同及成像原理的差异，现代电子显微镜已发展形成了许多种类型，目前最常用的是透射电子显微镜（transmission electron microscope）和扫描电子显微镜(scanning electron microscope)，前者总放大倍数可在1000~1000000倍范围内变化，后者总放大倍数可在20~300000倍之间变化。
本实验主要介绍这两种显微镜样品的制备。
三、器材1.菌种大肠杆菌（大肠埃希氏菌，Escherichia coli）斜面。
2.溶液或试剂醋酸戊脂，浓硫酸，无水乙醇，无菌水，2%磷钨酸钠（pH6.5~8.0）水溶液，0.3%聚乙烯甲醛（溶于三氯甲烷）溶液，细胞色素c，醋酸铵，质粒pBR322。
3.仪器或其他用具普通光学显微镜，铜网，瓷漏斗，烧杯，平皿，无菌滴管，无菌镊子，大头针，载玻片，细菌计数板，真空镀膜机，临界点干燥仪等。
四、操作步骤（一）透射电镜的样品制备及观察1.金属网的处理光学显微镜的样品是放置在载玻片上进行观察。
而在透射电镜中，由于电子不能穿透玻璃，只能采用网状材料作为载物，通常称为载网。
载网因材料及形状的不同可分为多种不同的规格，其中最常用的是200~400目（孔数）的铜网。
网在使用前要处理，除去其上的污物，否则会影响支持膜的质量及标本照片的清晰度。
本实验选用的是400目的铜网，可用如下方法进行处理：首先用醋酸戊酯浸漂几小时，再用蒸馏水冲洗数次，然后再将铜网浸漂在无水乙醇中进行脱水。
透射电镜样本的制备
负染染色方法
悬滴法：悬滴法 用一根细滴吸管吸一滴样品悬液滴 在有膜的铜网上，滴样时要防止铜网被液体吸到管上 来或翻转而被污染。滴液后静置数分钟，然后用滤纸 从铜网边缘吸去多余的液体，滴上负染色液，染色 1～2分钟用滤纸吸去负染色液，再用蒸馏水滴在铜 网上洗1～2次，用滤纸吸去水，待干后可用于电镜 观察。
负染
简单快速 可显示生物大分子、细菌、分离的细胞器以及蛋白晶 体等样品的形态、结构、大小及表面结构的特征。 病毒
负染染色剂的条件
较强的电子散射能力以产生足够的图像反差。 熔点高，在电子束的轰击下不会升华 溶解度大，不易析出沉淀。 在电镜下不呈现可观察到的结构。 分子小，容易渗入不规则表的凹陷处 与样品不起化学反应。
2-3%戊二醛固定液中 4℃，2小时或更长时间。
磷酸缓冲液漂洗
1%锇酸 磷酸缓冲液漂洗
3次，每次15min。
2h 3次，每次15min。（可4℃过夜） 15min 15min 15min 2次，每次20min
• 脱水：
50%丙酮 70%丙酮 90%丙酮 100%丙酮
• 浸透：
100%丙酮：Epon812=2:1 100%丙酮：Epon812=1:1 100%丙酮：Epon812=1:2 纯Epon812
脱水
去除样品中的水，为包埋剂的均匀浸透做准备
常用脱水剂
乙醇，与环氧树脂的互溶性差，需用环氧丙烷作为 中间溶剂进行转换。 丙酮
市售的无水丙酮含少量水分，可加入 无水硫酸钠或硫酸铜等干燥剂吸去水分。
脱水
H2O
H2O
H2O 70% 丙酮
15min
50% 丙酮
15min
电镜试样的制备实验报告
电镜试样的制备透镜试样制备的主要步骤：机械切割→手工磨光→冲样→预减薄→最终减薄1.机械切割：将样品切成厚度为100～200微米的薄片；确定取样部位和试样的大小。
为了防止组织的改变，切割时必须注意以下两点：注意问题：（1）：防止切割时金属发生变形。
（2）：防止金属材料因受热引起组织的变化。
切割试样的工具有很多，比如手锯、锯床、砂轮切割机、显微切片机等。
切割前应该根据试样的大小和材料的软硬，选择合适的方法切割。
金属切样后的形状一般选择方柱形和圆柱形，其尺寸不宜过大或过小，尺寸太小，拿起来不太方便，且容易造成边缘缺陷和磨面不平坦；试样过大，研磨时耗费时间多，同样试样的磨面也易残留磨痕和其他缺陷。
对于金属样品，一般采用线切割的方法。
2. 手工磨光：金属试样机械切割后，表面都很粗糙且具有严重的变形层，故需要不同粒度的金相砂纸逐步磨光。
砂纸主要有两类：1）干砂纸，是在干的条件下磨光，这类砂纸是刚玉砂纸，多半是混合刚玉磨料制成的砂纸，一般呈灰棕色。
因为这类砂纸含有较软的相（Fe2O3），磨光时易碎化脱落，因此需要清理脱落的磨粒或更换砂纸2）水砂纸，在水冲刷的条件下使用最好。
金属样品好像用的较少。
手工磨光时，将砂纸铺在玻璃或平板上，将试样磨面轻压在砂纸上，并且向前推行，进行磨光，知道试样磨面仅留有一个方向的均匀磨痕为止。
在磨光的回程中最好将试样提起拉回，步与砂纸接触。
磨光选用什么粒度的砂纸主要与磨平的试样表面的粗糙程度以及材料的软硬有关。
磨光操作每更换细一号砂纸时，为了便于观察前一道砂纸留下的较粗磨痕的消除情况，磨面磨削的方向应该与前一号砂纸磨痕方向成90或45度。
3.冲样：金属材料韧性比较好，可在冲样机上冲出直径为3mm的小圆片，也可用机械切片机（mechanical punch）将直径3mm薄圆片从材料上切下来。
一个设计得很好的机械切片机只会在切下的小圆片的圆周上引起很小的损伤，但对某些材料机械切片时产生的冲击可造成剪切变形4.预减薄：如果冲样前的试样磨得不是很好，此时可以在砂纸上再次手工研磨。
电镜样品制备
）、固定 （二）、固定
固定目的：为了在处理和观察样品过程中， 固定目的：为了在处理和观察样品过程中， 样品的原有形态变化最小。 使样品的原有形态变化最小。 常用固定剂： 常用固定剂： 戊二醛 四氧化锇 甲 醛
O H C CH2 CH2 CH2 C O H
OsO4 O H C H
电镜常用双固定的方法。 电镜常用双固定的方法。
电镜生物样品制备
赵翔 细胞生物
一 、透射电镜样品制备
透射电镜照片
透射电镜样品制备
取材 固定 脱水 包埋 切片 染色
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（一）取材
快、小、准
超微结构对缺血缺氧敏感，在缺 超微结构对缺血缺氧敏感， 血缺氧几分钟后就会有明显变化，因 血缺氧几分钟后就会有明显变化， 此要求取材速度很快，一般在1分钟 此要求取材速度很快，一般在1 内进入固定液。 内进入固定液。 固定剂渗透能力有限， 要求样品 固定剂渗透能力有限 ， 一定要小。一般在１mm3 左右。 一定要小。一般在１ 左右。
（四）、干燥水滴 ）、干燥
临界点干燥法
液体和气体是分子的不同聚集 状态， 状态，温度和压力可改变其聚集状 临界点干燥法是利用物质的临 态。临界点干燥法是利用物质的临 界状态这一物理性质来完成干燥的。 界状态这一物理性质来完成干燥的。
气体的压强—密度等温曲线
P P d
a O
理想气体
b
ρ
P= RT
（五）、镀膜
扫描电镜是电子束在样品上扫 样品必须导电。 描 ， 样品必须导电 。 使生物样品导 的办法是在其上覆盖一层金属膜， 的办法是在其上覆盖一层金属膜 ， 这种方法叫镀膜。 这种方法叫镀膜。 同时金属二次电子产率高， 同时金属二次电子产率高 ， 可 以提高样品的反差。 以提高样品的反差 。 常用的金属有 (Au)和铂(Pt)。 和铂(Pt) 金(Au)和铂(Pt)。
SEM实验报告
SEM实验报告实验目的：本次实验旨在通过扫描电子显微镜（SEM）的应用，对材料的微观结构进行表征和观察，并利用SEM技术分析样品的形貌特征、组织结构、成分组成等相关信息。
实验装置和方法：本次实验采用了型号为XYZ SEM-100的扫描电子显微镜。
实验过程如下：1. 样品的制备：选择了一块金属材料作为样品，使用砂纸将其表面打磨至光滑。
随后，将样品浸泡在去离子水中并使用超声波清洗10分钟，以去除表面的杂质。
最后，将样品晾干。
2. 样品的固定：将样品放置在SEM样品架上，并使用导电胶将其固定。
导电胶的使用可以提高样品的导电性，增强SEM观察的效果。
3. SEM参数设置：设置SEM的工作条件，包括加速电压、工作距离、电子束流、信号采集等参数。
本次实验中，采用了加速电压15 kV，工作距离10 mm，电子束流100 pA的参数。
4. SEM样品架的安装：将装有样品的SEM样品架安装到SEM主机中。
5. SEM观察和图像获取：打开SEM主机，进行样品的观察和图像获取。
通过调节焦距和样品位置，选取合适的观察区域，获得清晰的图像。
实验结果与分析：在SEM观察过程中，我们获得了样品不同区域的图像，并对其进行了分析和评估。
1. 形貌特征：通过SEM的观察，我们发现样品表面存在许多微小的颗粒状结构。
这些颗粒具有不同的形状和大小，呈现出均匀分布的特点。
这种形貌特征可能与材料的晶格结构和制备工艺有关。
2. 组织结构：在高放大倍率下观察，我们发现样品内部存在一定的晶格结构。
晶粒之间呈现出不规则的形状，且有的晶粒之间存在空隙。
这表明样品的组织结构较为疏松，晶粒尺寸不均匀。
3. 成分组成：利用能谱分析技术（EDS），我们对样品进行了元素成分的定性分析。
结果显示，样品主要由金属元素组成，其中含有氧、碳等少量杂质元素。
这些元素的分布情况在SEM图像中也得到了初步的展示。
实验结论：通过本次SEM实验，我们成功对金属材料的微观结构进行了观察和表征。
【实验】扫描电镜实验报告
【关键字】实验扫描电镜实验报告篇一：扫描电镜实验报告扫描电镜实验报告班级：材化11学号：姓名：李彦杰日期：XX 05 16一、实验目的1. 了解扫描电镜的构造及工作原理；2. 扫描电镜的样品制备；3. 利用二次电子像对纤维纵向形貌进行观察；4. 了解背散射电子像的应用。
二、实验仪器扫描电子显微镜（热发射扫描型号JSM-5610LV）、真空镀金装置。
扫描电镜原理是由电子枪发射并经过聚焦的电子束在样品表面扫描，激发样品产生各种物理信号，经过检测、视频缩小和信号处理，在荧光屏上获得能反映样品表面各种特征的扫描图像。
扫描电镜由下列五部分组成，主要作用简介如下：1．电子光学系统。
其由电子枪、电磁透镜、光阑、样品室等部件组成。
为了获得较高的信号强度和扫描像，由电子枪发射的扫描电子束应具有较高的亮度和尽可能小的束斑直径。
常用的电子枪有三种形式：普通热阴极三极电子枪、六硼化镧阴极电子枪和场发射电子枪。
前两种属于热发射电子枪；后一种则属于冷发射电子枪，也叫场发射电子枪，其亮度最高、电子源直径最小，是高分辨本领扫描电镜的理想电子源。
电磁透镜的功能是把电子枪的束斑逐级聚焦缩小，因照射到样品上的电子束斑越小，其分辨率就越高。
扫描电镜通常有三个磁透镜，前两个是强透镜，缩小束斑，第三个透镜是弱透镜，焦距长，便于在样品室和聚光镜之间装入各种信号探测器。
为了降低电子束的发散程度，每级磁透镜都装有光阑；为了消除像散，装有消像散器。
样品室中有样品台和信号探测器，样品台还能使样品做平移、倾斜、转动等运动。
2. 扫描系统。
扫描系统的作用是提供入射电子束在样品表面上以及阴极射线管电子束在荧光屏上的同步扫描信号。
3. 信号检测、缩小系统。
样品在入射电子作用下会产生各种物理信号、有二次电子、背散射电子、特征X射线、阴极荧光和透射电子。
不同的物理信号要用不同类型的检测系统。
它大致可分为三大类，即电子检测器、阴极荧光检测器和X射线检测器。
4. 真空系统。
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电镜试样的制备
透镜试样制备的主要步骤：
机械切割→手工磨光→冲样→预减薄→最终减薄
1.机械切割：
将样品切成厚度为100～200微米的薄片；确定取样部位和试样的大小。
为了防止组织的改变，切割时必须注意以下两点：
注意问题：（1）：防止切割时金属发生变形。
（2）：防止金属材料因受热引起组织的变化。
切割试样的工具有很多，比如手锯、锯床、砂轮切割机、显微切片机等。
切割前应该根据试样的大小和材料的软硬，选择合适的方法切割。
金属切样后的形状一般选择方柱形和圆柱形，其尺寸不宜过大或过小，尺寸太小，拿起来不太方便，且容易造成边缘缺陷和磨面不平坦；试样过大，研磨时耗费时间多，同样试样的磨面也易残留磨痕和其他缺陷。
对于金属样品，一般采用线切割的方法。
2. 手工磨光：
金属试样机械切割后，表面都很粗糙且具有严重的变形层，故需要不同粒度的金相砂纸逐步磨光。
砂纸主要有两类：
1）干砂纸，是在干的条件下磨光，这类砂纸是刚玉砂纸，多半是混合刚玉磨料制成的砂纸，一般呈灰棕色。
因为这类砂纸含有较软的相（Fe2O3），磨光时易碎化脱落，因此需要清理脱落的磨粒或更换砂纸2）水砂纸，在水冲刷的条件下使用最好。
金属样品好像用的较少。
手工磨光时，将砂纸铺在玻璃或平板上，将试样磨面轻压在砂纸上，并且向前推行，进行磨光，知道试样磨面仅留有一个方向的均匀磨痕为止。
在磨光的回程中最好将试样提起拉回，步与砂纸接触。
磨光选用什么粒度的砂纸主要与磨平的试样表面的粗糙程度以及材料的软硬有关。
磨光操作每更换细一号砂纸时，为了便于观察前一道砂纸留下的较粗磨痕的消除情况，磨面磨削的方向应该与前一号砂纸磨痕方向成90或45度。
3.冲样：
金属材料韧性比较好，可在冲样机上冲出直径为3mm的小圆片，也可用机械切片机（mechanical punch）将直径3mm薄圆片从材料上切下来。
一个设计得很好的机械切片机只会在切下的小圆片的圆周上引起很小的损伤，但对某些材料机械切片时产生的冲击可造成剪切变形4.预减薄：
如果冲样前的试样磨得不是很好，此时可以在砂纸上再次手工研磨。
然后再用凹坑减薄仪进行减薄。
减薄后薄圆片样品出现一个碗状得凹坑，在碗得底部样品最薄，其它部分较厚，保证样品不易碎。
5.最终减薄
一般采用双喷或者离子减薄。
1）双喷：这种方法主要用于金属和合金样品。
双喷时要选择好电解液，还要控制水流、电压、电流和温度。
举例来说，如果水流太小，腐蚀产物冲不走；若水流太大，又会把薄区冲掉。
这中方法的有点时减薄速度快，没有机械损伤，但是电解双喷可能会引起非晶的晶化、污染、氧化等。
2）离子减薄：这种方法对于陶瓷、金属等试样都可以使用，是一种普适的减薄方法。
应当注意，如果长时间进行离子减薄，由于试样中不同成分和不同取向的溅射速度不同，试样表面成分可能发生变化，而且离子辐照损伤可能使试样表面非晶化，所以选择合适的减薄条件。
二、扫描试样样品制备：
1.块状试样：
（a）对于块状导电试样，除了大小要适合仪器样品台的底座尺寸，基本上不需要制备，用导电胶把试样粘结在样品座上，即可以放在扫描电镜中观察。
（b）对于块状的非导电或导电性较差的材料，要先进行镀膜处理，在材料表面形成一层导电膜，避免在电子束找些下产生的电荷积累，影响图像质量，并可防止试样的热损失。
2.粉末试样
【1】粉末样品先粘结在样品底座上：
方法：（a）在样品座上涂一层导电胶或火棉胶溶液，将试样粉末洒在上边，带导电胶或火棉胶挥发把粉末粘牢后，用吸耳球将表面上未黏住的试样粉末吹去。
（b）在样品座上黏贴一张双面胶带，将试样粉末洒在上边，在用吸耳球把未黏在上边的粉末吹去。
（c）将粉末制成悬浮液液滴滴在样品底座上待溶液挥发，粉末附着在样品座上。
【2】试样粉末粘牢在样品座上后，需要镀层导电膜，然后才放在扫描电镜上观察。