樱花组织培养研究进展

2、生长素对组培中不定芽的分化 及增殖的影响。IBA 对外植体生长的影 响主要表现在不影响愈伤组织的发生 和叶形态是否正常，在不添加 IBA 的 情况下，外植体的叶随 BA 浓度的增大 而变大、变薄，叶色变浅。当外植体 还很幼嫩时，添加 IBA 有利于避免玻 璃状叶的发生，尤其在 0.2mg/LIBA 与 较低浓度的 BA(1 或 0.5mg/L)情况下， 愈伤组织会大量发生，严重影响外植 体茎叶的生长。
3、 GA3 对 芽 伸 长 生 长 的 影 响 。 王光萍认为适宜的 GA3 浓度不仅有利 于丛生芽的增殖，而且对芽的生长具 有明显促进作用，同时基部又可萌发 新的丛生芽。而 GA3 浓度过高则使丛 生芽发生黄化，反而造成生长不良。 但王永清却发现 GA3 对樱花芽外植体 茎伸长的影响取决于离体培养的时间 (转管次数)。经过一定时间的培养后， 即使不加 GA3，茎也能明显伸长，说 明樱花芽外植体建立阶段的茎不伸长 可能也与外植体的阶段发育状态有关， 在未经一定时间培养前 GA3 未能使茎 伸长，说明 GA3 可能只在外植体经过 “幼化”后才能起作用，或添加的 GA3 量不足以克服外植体阶段发育的影响， 或在添加 GA3 的同时还需降低 BA 浓 度。
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用量到 1.0，丛生芽诱导率有所提高， 芽生长增殖最快。福建山樱花在 BA1. 0mg/1(或 KT1.0mg/l)和 IBA0.0lmg/l 培养 基上不定芽分化较好，当细胞分裂素 浓度提高到 BA2.0～5.0mg/1 （KT2.0～ 5.0mg/1） 时，易产生愈伤组织，芽分 化较少。
(责任编辑 黄海帆)
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（四） 生长调节物质对愈伤组织诱 导的影响
在对雾灵樱花叶片及叶柄的培养 中，黄守印 （2002） 等认为较高浓度 的细胞分裂素的作用比生长素还重要， 细胞分裂素 2.0mg/L 时，100%的外植 体产生愈伤组织，当细胞分裂素减少 到 1.0mg/L 时，只有 50%的外植体产生 愈伤组织。用只含生长素 IBA 和 NAA 的培养基，结果诱愈率仅 10.5%。
花试管苗生根有促进作用。郭万里认 为，3 种生长素对樱花试管苗根发生的 影 响 效 果 为 IBA>IAA>NAA。 IAA 和 IBA 能共同刺激樱花试管苗根的发生， 同时，IAA 和 IBA 在较低浓度下的组 合时，愈伤较小。及华认为附加 IBA 的培养基上 芽 生 根 较 附 加 NAA 的 缓 慢，且根细长。并且樱花试管芽的生 根率与芽的继代次数无关。
（三） 生 长 调 节 物 质 对 根 诱 导 的 影响
生长素对组培中外植体不定根的 诱导有着比较显著的作用。研究表明 NAA 的最佳使用范围应小于 0.1mg/L。 而 IAA 在一定浓度范围内(0～0.3mg/L) 可能具有促进生根的能力。愈伤块的 大小随 IBA 浓度的升高而略有升高， 在 0.03～0.5 mg/L，单独使用 IBA 对樱
不能及时改善环境，就会枯死。光照 强 度 为 1000 ～2000LX， 光 照 时 间 为 12～14h/d。蔗糖含量生根培养基中为 20g/L，其他为 30g/L，pH5.5～5.8。
能正常生长成叶大、茎伸长、浓 绿的试管苗，还和封口材料有关系。 封口物以棉塞、硫酸纸两种比较看， 棉塞封口，易返潮、滋生霉菌，特别 是高温高湿季节最明显。改用两层无 菌硫酸纸封口，减缓了基质水分的蒸 发，杜绝了霉菌污染，取得较好培养 效果。
在附加 2,4- D 培养基上继续培养， 培养基上的愈伤组织在增殖的同时， 形成光滑、质地致密的愈伤组织并长 出瘤状突起，说明 2,4- D 在其中起到 极为重要 的 作 用 ， 有 利 于 胚 性 细 胞 的形成。
四、环境因素 适合樱花的离体培养条件为：温 度 25±2℃，温度过高对樱花有不利影 响。雾灵樱花离体茎段继代增殖培养 的幼芽在 26±1℃，1000～1500LX 日 光灯下 14h/d 和散射光条件下，均能正 常生长增殖，叶片浓绿、平展，基质 收缩得慢，无胀水苗现象，利于形成 切割继代的优质苗。而培养在两种同 等光照条件，32±1℃高温下的幼芽， 叶片卷曲、生长缓慢或停止生长，如
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樱花组织培养研究进展
河南农业职业学院
贺爱利 刘艳杰 黄海帆
濮阳县林业局林技站 马文亮
樱 花 （P.serrulata） 别 名 ： 山 樱 花、福岛樱、青山樱，泛指蔷薇科 （Rosaceae），李亚科 （Prunoidea），樱 属 （Cerasus） 观赏植物，共 120 余种， 有 0.2cm 左右大小、带叶原基的芽 心即可。及华则是切取敬翁樱生长健 壮的嫩梢，剪掉叶片和托叶，用流水 冲洗干净，浸泡在 800 倍多菌灵溶液 中 30min。然后用自来水冲洗干净，在 超净工作台上先用含 2 滴吐温 - 20 的 1%安替福民溶液消毒 1min，再用 0.1% 升汞溶液消毒 1 min，无菌水冲洗 4～5 次。
樱花对气候、土壤适应范围较宽。 喜光，喜湿度大的环境和深厚肥沃、 排水良好的土壤，不耐盐碱，忌积水， 抗旱，有一定耐寒力。樱花传统的繁 殖方法有播种、分株、嫁接和高空压 条等，绝大多数樱花种类扦插则不易 生根。
一、樱花组培研究简史 樱花传统的繁殖方法成苗慢，难 以大量生产。随着组培技术的发展， 组培为樱花的快速繁殖和工厂化生产 提供了一条有效途径。根据资料记载， 最早开展樱花组培的是国外学者 Boxus，他于 1974 年用樱花分生组织进 行组织培养研究，1977 年对日本樱花 进行了离体培养研究，均获得丛芽。 王永清在 1997 年成功地获得了芽外植 体。及华在 1998 年对樱花进行离体快
常 见 栽 培 种 类 有 ： 樱 花 （P. serreulata），日本晚樱 （nnesiana）， 日本早樱 （P.subhirtella），大山樱 （P. sargenti）i ， 云 南 樱 花 （P.cerosoides）， 科樱花 （P.majestica） 等。
樱花树形美，花期早。春暖花开 时，繁花满树，竞相争妍，花色素艳 清香，淡雅端庄。是重要的观花树种， 还可用于行道树、绿篱、制作盆景、 切花。同时樱花对氢氧化合物、二氧 化碳的吸附能力较强，具有净化空气 的功能。樱花也能应用于樱叶茶、沐 浴包及食品、酒类、日用化工、制药、 保健品等领域的生产，具有较高的经 济效益、生态效益和社会效益。
三、培养基 （一） 培养基 樱花基本培养种类有：MS、改良 MS*、AS、W、WPM 等等。许多研究 者在进行丛生芽诱导时，用 1/8MS～ MS 基本培养基，继代培养采用全价 MS 基 本 培 养 基 ， 生 根 培 养 则 采 用 1/2MS 基本培养基。认为启动培养基的 MS 和琼脂浓度对樱花芽外植体褐化死 亡及水浸状苗的发生有很大影响。最 佳组合为 1/4MS 和 0.5%琼脂制成的低 营养浓度软质培养基。 适宜福建山樱花嫩枝的基本培养 基，诱导丛生芽的为 1/4MS，继代培养 基的为 MS，生根培养基的 为 1/2MS。 对敬翁樱及华采用的基本培养基是： 用 1/3MS 诱导丛生芽，用 MS 进行继代 增殖，用 1/2MS 进行生根培养。而徐 兆波的垂枝樱花组培研究全部采用 3/4MS。 （二） 植物生长调节物质对丛生芽 诱导的影响 樱花组织培养中外植体芽的诱导 及增殖不仅与植物生长调节剂的种类 有关，而且还与它的组合及浓度有关。 1、细胞分裂素对组培中不定芽的 分化及增殖的影响。黄守印（2001，2003） 等在雾灵山地区野生樱花组织培养时， 在 IAA 含量相同情况下，减少 6- BA的
五、其他影响因素 NaH2PO4 对樱花试管苗壮苗生长 有明显的促进作用。姚连芳在培养基 中 添 加 NaH2PO4 继 代 培 养 东 京 樱 花 (Prunus yedoensis Matsum)试管苗，结果 两 个 浓 度 (150mg/L 和 250mg/L) 的 NaH2PO4 处理可以促进叶片的分化，增 加叶片数。 六、问题与进展 樱花和其他木本植物一样，在组 织培养中，初次培养的褐变死亡和培 养中玻璃化苗大量产生是普遍存在的 问题，目前尚无彻底的解决办法。陈 正华(1986)、赵蓬晖 （2001） 等认为， 取材部位、材料大小、培养条件以及 外植体受伤害程度等均能对褐变产生 影响。一般采取以下措施也可减轻褐 变：如取材时尽可能减小伤口面积， 缩短切口暴露在空气中的时间，选择 合适的消毒剂和消毒时间。此外，在 培养基中加入抗氧化剂如盐酸半胱氨 酸(100mg/L)，抗坏血酸(50～100mg/L)， 柠 檬 酸 (150mg/L)、 间 苯 三 酚 等 ， 能 大 大减缓木本植物组织培养中褐化的程 度。在培养基中加入 0.1%～0.5%活性 炭对减缓木本植物组织培养中褐化的 程度也有较大帮助。培养条件不适宜， 如温度过高或光照过强，致使多酚氧 化酶的活性提高，也会加速组织褐变。
速繁殖，培养出完整植株，栽入大田， 成活率达 90%以上。
二、外植体 （一） 外植体的种类及取材时间 国内学者对樱花的研究主要集中 在山樱花、东京樱花(Prunus yedoensis Matsum)、福建山樱花、雾灵山地区野 生 樱 花 、 C.maackii、 敬 翁 樱 等 种 类 和 品种上。用生长健壮的嫩梢和带腋芽 的茎段、叶、叶柄、0.2cm 大小带叶原 基的樱花(嫁接于樱桃砧上)芽心等外植 体进行培养，获得供继代培养的外植 体，继代培养中以丛芽形式增殖为主。 国外也有以山樱花成熟贮藏种子(stored seed)的子叶为材料进行培养诱导成苗 的报道，Karen E.H （2000） 等对 8 种 樱属观赏樱花分别取子叶与胚轴为培 养材料诱导丛芽，其他 7 种则不能形 成丛芽或丛芽生长不正常。 樱花外植体的采集时间以春天 3～4 月最佳，新发枝条处于半木质化 状态，最易诱导腋芽的发生。但不同 种或品种有其最佳培养时期。黄守印 （2001） 在 5 月初花期取材培养，生长 增殖均正常。而 10 月初落叶前取材接 种离体培养，不能形成丛生苗。 （二） 外植体的处理 不同的学者对不同材料做进一步 表面消毒时，选择的消毒剂种类不同， 消毒的时间长短不同，方法也不相同， 但都取得了很好的效果。 王光萍 （2002） 等进行茎段培养 时，用流水冲洗 2h，放入 70%酒精内 消 毒 1min， 再 用 0.1% HgCl2 消 毒 7min，无菌水清洗 4 次。王永清在采 取芽心时，先将尚未萌发抽生二次新 梢 的 芽 ， 用 0.1% HgCl2 表 面 灭 菌 15min， 无 菌 水 冲 洗 三 次 ， 剥 尽 鳞 片 ，