流式细胞术检测体液T淋巴细胞亚群的临床应用

合集下载

流式细胞术的基础和临床应用

流式细胞术的基础和临床应用

流式细胞术的基础和临床应用流式细胞术是一种在单个细胞水平上进行多参数快速测定的技术,它利用流体力学原理和荧光化学技术,对细胞进行快速、准确地分析和分类。

流式细胞术具有高速度、高精度和高分辨率的特点,因此在生物学、医学和生物技术等领域得到了广泛应用。

流式细胞术的基础包括细胞物理特性、荧光化学特性以及现代光学、计算机和电子技术的应用。

细胞物理特性是指细胞的大小、形状、粒度等物理性质,这些性质可以通过流式细胞术进行测量。

荧光化学特性是指利用荧光物质标记抗体或核酸等分子,对细胞进行标记和染色,然后通过流式细胞术进行检测。

现代光学技术、计算机技术和电子技术的应用则使得流式细胞术能够实现多参数、高精度和高分辨率的检测。

在临床应用方面,流式细胞术被广泛应用于淋巴细胞亚群分析、功能性T淋巴细胞亚群分析、肿瘤免疫分析等方面。

淋巴细胞亚群分析是流式细胞术最常用的检测项目之一,通过对淋巴细胞亚群的检测和分析,可以了解机体的免疫状态和疾病发病机制,对于免疫相关性疾病的诊断和治疗具有重要意义。

功能性T淋巴细胞亚群分析则可以进一步了解T淋巴细胞的免疫功能和分化特点,对于肿瘤、感染性疾病和自身免疫性疾病等的治疗和预后评估具有指导作用。

肿瘤免疫分析则通过流式细胞术检测肿瘤细胞表面的抗原和抗体,了解肿瘤细胞的免疫逃逸机制和免疫应答情况,为肿瘤的免疫治疗提供依据。

此外,流式细胞术还被应用于干细胞研究、基因表达分析、药物筛选和毒理学研究等领域。

例如,通过对干细胞的表面标志物进行检测和分析,可以了解干细胞的特性和分化能力;通过对基因表达谱的检测和分析,可以了解基因的表达水平和调控机制,为疾病治疗和药物研发提供依据。

总之,流式细胞术作为一种强大的细胞分析工具,其基础包括细胞物理特性、荧光化学特性以及现代光学、计算机和电子技术的应用。

在临床应用方面,流式细胞术已经成为医学研究和诊断中不可或缺的工具之一,其应用范围涵盖了淋巴细胞亚群分析、功能性T淋巴细胞亚群分析、肿瘤免疫分析等多个方面。

流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床

流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床

流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床背景流式细胞术检测T、B、NK淋巴细胞亚群已较为广泛的应用于儿科临床许多疾病涉及儿童相应免疫功能异常临床工作中更有效的理解和应用流式细胞术以评估儿童的免疫状况,指导疾病的诊断、治疗还缺乏系统的学习材料尤其是临床一线的儿科医务工作者对流式细胞术的临床应用更有待进一步加强认识和学习。

检测对象原则:免疫功能受损者均应常规评估淋巴细胞亚群免疫功能包括:免疫防御功能免疫自稳和耐受功能免疫监视功能免疫防御功能受损易发生感染反复感染严重感染多种病原与特殊病原感染常规治疗效果不佳的感染除了宿主免疫防御受损容易造成上述少见感染状况之外,感染本身也可造成继发性免疫防御受损,因此免疫评估应注意原发和继发两方面的问题。

免疫自稳和耐受功能受损过敏性疾病:并非所有这类患者都需要进行淋巴细胞亚群的检测。

对于一些严重的过敏患者应考虑淋巴细胞亚群的检测。

①婴幼儿时期全身严重湿疹样表现。

②嗜酸性粒细胞显著增多③血清IgE水平明显增高(IgE>1000IU/L)④伴有反复、严重感染的患者自身免疫和自身炎症性疾病①存在难以控制的自身免疫反应情况及出现明显的自身免疫性淋巴增殖情况②合并反复感染的患者③存在自身炎症反应④长期免疫抑制药物、生物制剂使用前后免疫监视功能受损主要引起肿瘤血液系统肿瘤:儿童时期最为多见的是血液系统肿瘤其他肿瘤及实体瘤:其他系统肿瘤患者也应酌情进行淋巴细胞亚群的检测,既可能存在原发性淋巴细胞亚群的异常,也可能出现继发性改变,尤其是进行各种化疗时,淋巴细胞亚群大多会受到影响其他特殊情况血常规中淋巴细胞明显异常家族成员中有免疫缺陷病史长期使用免疫抑制剂者基本数据判断应进行绝对计数和相对数的判别相对数的三个基本公式[公式a] CD3+%+CD19+%+CD16/56+%=100%±5%[公式b] CD4+%+CD8+%=CD3%[公式c] CD4+/CD8+比值>1绝对计数的判断绝对数标准不同仪器和年龄段及人群存在差别。

流式细胞术在临床检验中的应用

流式细胞术在临床检验中的应用

流式细胞术在临床检验中的应用流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)是一种可对单细胞悬液进行快速定性、定量分析和分选的技术。

它不仅可以对细胞表面抗原进行检测,也能对细胞内部的生物大分子进行检测,能够在细胞水平上对相关疾病进行诊断和病程监测。

因此在临床医学及科学研究中发挥着非常重要的作用。

随着技术水平的不断提高及完善,FCM得到了更为广泛的应用。

目前,FCM在临床检验方面主要应用于血液学、免疫学、肿瘤、等临床医学和基础医学研究领域,具有检测样品快速、准确以及灵敏度性高等特点,为临床检验提供了一种强有力的手段和全新的医学视角,是临床检验工作中重要的一种研究工具。

FCM主要由液流系统、光学系统、电子系统组成。

其主要基本原理是将待测样本染色后制成单细胞悬液放入样品管中,通过气体的压力使样品进入鞘液,鞘液与样品之间会形成一定的压力,当压力达到一定程度后,在鞘液的带动下,单细胞悬浮样品会形成单细胞柱状经过激光聚焦区,样品柱与激光束垂直,由于样品经特异性染料处理,因此在激光激发下会产生特定波长的荧光。

流式细胞仪中的光学系统收集到荧光信号后进行信号处理,再经过计算机系统对这些数字信号收集、储存,以一维直方图或二维点阵图及数据表或三维图形显示出来,然后做出统计分析从而获得所需要的检测结果。

1.FCM在血液学中的应用FCM主要通过对外周血细胞和骨髓细胞表面抗原和DNA的检测分析对各种血液病如白血病、淋巴瘤等血液系统疾病的分型、诊断、治疗及预后判断均有重要作用。

血细胞在白细胞系、红细胞系、巨核细胞系、血小板及非造血细胞均有不同的分化抗原表达,分布在细胞质、细胞膜中。

血液肿瘤细胞的特征是丧失了正常细胞的系类专一性和分化阶段的规律性,运用FCM将具有系列特异性并涵盖不同分化阶段的单克隆体作为分子探针来检测血液肿瘤细胞的内外抗原,可以反映其本质上与正常造血细胞的差异。

由于不同的血细胞系统都有其特有的表面抗原,FCM通过采用各种血细胞表面分化抗原特异的单克隆抗体,借助于各种不同的荧光染料(FITC、PE)可同时检测一个单细胞的不同参数,根据所测的参数结果来判断出该血细胞的属性。

流式检测淋巴细胞亚群在临床中的应用

流式检测淋巴细胞亚群在临床中的应用

平均值
CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/8+ CD56+ CD127+ CD19+
化疗(n=48) 67.60 27.40 28.20 0.82 13.20 7.40 5.80
放疗(n=81) 65.30 22.30 34.10 0.73 5.90 8.10 6.90
手术(n=82) 65.20 34.00 29.00 1.20 9.10 6.30 7.70
p值
0.311 0.007 0.035 0.032 0.045 0.031 0.165
* t检验:P<0.05 显著性差异
手术、化疗和放疗对肺癌患者淋巴细胞亚群的影响
平均值
CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/8+ CD56+ CD127+ CD19+
手术 (n=152) 67.57 34.39 31.09 1.25 16.08 6.42 8.64
化疗(n=244) 67.67 33.78 32.07 1.30 16.27 7.48 7.93
放疗(n=164) 65.64 28.59 32.99 1.13 17.98 5.85 6.58
p值
0.093 0.001 0.021 0.011 0.045 0.029 0.430
* t检验:P<0.05 显著性差异
2、流式专业讲座:流式相关免疫学、流式相关血 液学、流式相关其他实验。
3、临床流式疑难病例解答:临床在职流式专家为 您解决临床检测中遇到的疑难病例问题,帮您更好 的做出诊断。
4、交流平台:丰富的交流平台可以让更多的流式 从业者在此交流心得,互相帮助,获得更多有用的 信息。

淋巴细胞亚群检测及临床应用

淋巴细胞亚群检测及临床应用
• T淋巴细胞又被分为两个亚群:T辅助/诱导淋巴细胞(CD3+CD4+)、T抑制/ 杀伤淋巴细胞(CD3+CD8+)。
一、概述
二、淋巴细胞亚群检测
1、检测原理
• 把全血加入到试剂中时,荧光标记的抗体会和白细胞表面抗原特异性结合,在采集 时,细胞通过激光束使激光散射。被染色的细胞就会发出荧光。这些被仪器检测到 的散射光和荧光信号提供了关于细胞大小、内部复杂度和相关荧光强度等信息。 BD Multitest检测试剂采用了荧光触发技术,能够直接对淋巴细胞群进行荧光设门, 以减少门中的未裂解细胞或有核红细胞带来的污染。
射光照射。于室温下(20-25℃)进行此程序操作 • 盖上管盖并轻轻混匀振荡进行混匀。室温(20-25℃)环境下避光孵育15min上
机检测。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌B(六色淋巴细胞亚群试剂)
• 取一支 Trucounttube。用反向加样法加入50μl充分混匀的抗凝全血。注意血 不要碰到试管底部的微球( Beads)。
液时,将按钮按至第二个刻度点。释放按钮时,过量样本将被吸入吸头中。 将按钮按至第一个刻度点排出精确体积的样本,将过量样本留在吸头中。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌B(四色淋巴细胞亚群试剂)
• 盖上管盖并轻轻混匀振荡进行混匀。在室温(20~25℃)环境下避光孵育 • 向各管中添加450μl 1× Multitest溶血素,注意:小心保护样本管,免受直
不能使用。室温保存的抗凝全血,可稳定48h;染色固定后的样本在2~8℃条 件下可稳定24h。 • 患者准备:无须特殊准备,检查对象生活饮食处于日常状态,空腹为宜, 静脉采血。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌A

流式细胞术淋巴细胞亚群检测在糖尿病免疫功能紊乱监测中的应用

流式细胞术淋巴细胞亚群检测在糖尿病免疫功能紊乱监测中的应用

P E ) 2 O L, 再 各 自加 入 1 0 0  ̄ L全血 , 轻摇 混 匀 , 室 温 避 光 放 置
丧失 , 由于受遗传 、 肥胖 、 年 龄及饮 食等 影响 , 胰 岛 素 的作 用 效
果受到影 响, 使 患 者 体 内 的 胰 岛 素 相 对 缺 乏 。本 文 对 D M 患
4 5 9例 健 康 体 检 者 , 其 中, 男 3 4 1例 , 女 1 1 8例 。 年 龄 3 6 ~6 O
岁, 平均 4 4 . 5 9岁 。
健康 对照组 c D 3 T 细 胞 和 C D 3 C D 8 T 细 胞 的 百 分 率
分别为 ( 6 9 . 6 5 ±1 1 . 2 8 ) 和( 2 5 . 7 2 ±7 . 9 8 ) , DM 患 者 组 C D 3 T
摘 要 : 目的 探 测糖 尿 病 ( D M) 患者 外周 血 淋 巴细 胞 亚 群 分 布 情 况 , 了 解 糖 尿 病 患 者 细 胞 免 疫 功 能 改 变 。 方 法 以 流 式 细 胞 术 三 色 荧 光标 记 的 单 克 隆 抗 体 检 测 4 5 9例 健 康 体 检 者 和 1 0 0例 DM 患者 体 内 T 细胞 ( C D3 、 C D 3 C D 4 、 C D 3 C D 8 ) 、 B细 胞
意义 。
2 结 果
1 . 1 研 究对象
选择 2 0 0 7年 1 1月 至 2 0 0 8年 1月 来 自重 庆
市某三 甲医院已诊断 为 D M 的患 者 1 0 0例 , 其 中, 男 5 o例 , 女
5 O例 。年 龄 2 4 ~8 7岁 , 平均 5 8 . 2 8岁 。对 照 组 为 同 期 本 院
T4 / T8 r a t i o a n d t h e p e r c e n t a g e o f NK c e l l s b e t we e n DM p a t i e n t s a n d h e a l t h p e r s o n s . C o n c l u s i o n Th e r e i s a c e l l u l a r i mmu n e d y s —

流式细胞仪淋巴亚群在肿瘤化疗后患者中的应用

流式细胞仪淋巴亚群在肿瘤化疗后患者中的应用

流式细胞仪淋巴亚群在肿瘤化疗后患者中的应用摘要目的对流式细胞仪淋巴亚群在肿瘤化疗后患者中的应用价值进行分析研究。

方法60例肿瘤化疗患者作為观察组(化疗后无缓解29例、化疗后完全缓解31例),60例健康体检者作为对照组。

采用流式细胞技术分析观察组患者化疗前后的淋巴细胞亚群的变化特征,并与对照组进行对比。

结果观察组化疗前及化疗后无缓解CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD3-CD16+CD56+均明显低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);观察组化疗后无缓解CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD3-CD16+CD56+与本组化疗前比较差异均无统计学意义(P>0.05),但从数据可看出免疫功能有进一步恶化的趋势;观察组化疗后完全缓解CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD3-CD16+CD56+与本组化疗前及化疗后无缓解比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。

结论肿瘤患者细胞免疫功能衰退,化疗完全缓解后可改善肿瘤患者机体的免疫功能。

关键词流式细胞技术;淋巴亚群;肿瘤化疗后流式细胞仪是一种新型高科技仪器,其中包含了激光、计算机、单克隆抗体、光电测量、细胞荧光化学以及电子物理技术。

流式细胞技术在临床医学当中应用非常广泛,被应用于肿瘤学、免疫学、血液学、微生物检测、器官移植等等[1,2]。

本组研究以本院肿瘤化疗患者为研究对象,对流式细胞仪淋巴亚群在肿瘤化疗后患者中的应用价值进行分析研究,现做如下汇报。

1 资料与方法1. 1 一般资料本研究事先获得患者知情同意,研究开展时间为2015年4月~2016年12月,抽取本院60肿瘤患者作为观察组,所有患者均经手术、内窥镜、病理学检查证实,其中胃癌15例,原发性肝癌12例,结肠癌9例,乳腺癌11例,肺癌6例,食管癌5例,淋巴瘤2例;排除并发免疫性疾病患者,所有患者接受4个周期以上化疗(化疗后无缓解29例、化疗后完全缓解31例);其中男23例,女37例;年龄35~72岁,平均年龄(58.2±6.5)岁。

流式细胞术检测T细胞亚群在2型糖尿病及糖尿病肾病患者中的应用

流式细胞术检测T细胞亚群在2型糖尿病及糖尿病肾病患者中的应用
国际检验医学杂志 21 年 2月第 3 02 3卷第4期 lt a n JLbMe ,eray21' . , . dFbur 0 、 !

49 ・ 1

经 验 交流 ・
流 式 细胞 术 检 测 T 细胞 亚 群在 2型 糖 尿病 及 糖 尿病 肾病 患者 中的应 用
D 组 , 差异 无 统计 学 意义 ( M 但 P> 0 0 ) D 组 外 周 血 C 4 .5;N D
+/ D8 比值 高 于 DM 组 ( 0 0 ) 结 果 见 表 l C + P< . 5 , 。 表 l 各 组 T 细 胞 亚 群 结 果 比较 (: 8 j ) ±
的 慢 性 并 发 症 , 可 致 肾小 球 基 底 膜 增 厚 , 膜 细 胞 增 生 , 膜 其 系 系
特 征 的代 谢 性 疾 病 , 血 糖 是 其 基 本 的 表 现 , 时 也 引 发 和 参 高 同 与 了一 系 列 的代 谢 紊 乱 , 致 各 种 糖 尿 病 并 发 症 的 发 生 ] 导 。糖
尿 病 肾病 ( ib t e h o ah , da ei n p r p t y DN) 糖 尿 病 最 常 见 、 严 重 c 是 最
陈 烨
( 南通 大学 附属 海 安人 民 医院检 验科 , 江苏海安 2 6 0 ) 2 6 0
摘 要: 目的 观 察 2型 糖 尿 病 及 糖 尿 病 肾病 患 者 外 周 血 中 T 细 胞 亚 群 变化 , 讨 其 在 2型 糖 尿 病 、 尿 病 肾病 发 病 中的 致 探 糖 D 组 和 D 组 外周 血 C 3 T 细胞 数 量 ( 8 5 7 5 、 5 . ± M N D + 5 . ± . ) (4 8
常 可能 参 与 2型糖 尿 病 、 尿 病 肾病 的发 生 与 发展 。 糖 D I1 . 9 9ji n 1 7 —10 2 1. 4 0 5 O :0 3 6 /. s . 6 3 4 3 . O 2 O . 5 s 文献标识码 : B 文 章 编 号 : 6 34 3 ( 0 2 0 — 4 10 1 7 —10 2 l) 40 9-2

淋巴细胞亚群流式

淋巴细胞亚群流式

淋巴细胞亚群流式
淋巴细胞亚群流式是一种通过流式细胞术检测淋巴细胞亚群的方法。

流式细胞术是一种用于分析细胞特性和功能的生物技术,通过将单个细胞与特异性抗体结合,对细胞表面和内部标记物进行定量和定性分析。

在淋巴细胞亚群流式中,通过使用特异性抗体标记不同的淋巴细胞亚群,如T细胞、B细胞、NK细胞等,然后利用流式细胞仪对标记后的细胞进行快速分析和计数。

这种方法可以获得淋巴细胞亚群的相对百分比和绝对值,从而评估机体的免疫状态。

淋巴细胞亚群流式在临床诊治中发挥了重要作用。

例如,在白血病诊断和治疗中,通过监测异常淋巴细胞亚群及绝对计数结果,可以为临床初步判断信息提供依据。

同时,在诊疗阶段,更为明确的白血病分型及MRD监测有助于为治疗方案选择、临床疗效分析、预后判断、复发监测等方面提供更加精准的医学决策支持。

此外,在免疫重建过程中,多参数流式细胞术结果对于及时评价患者的细胞免疫功能,指导免疫抑制剂等药品的使用种类和剂量等方面均具有重要价值。

需要注意的是,临床检测都有标准化的检测方案,可以直接上机调用建立好的内置模板,使用比较方便。

流式细胞术检测淋巴细胞亚群的原理及注意事项

流式细胞术检测淋巴细胞亚群的原理及注意事项

流式细胞术(flow cytometry)是一种广泛应用于生物医学领域的技术,它通过检测细胞表面和内部分子的存在和数量,从而可以对细胞进行高度特异性的分析和分类。

在临床诊断、生物医学研究以及药物开发等方面都有着重要的应用。

其中,流式细胞术检测淋巴细胞亚群,可以帮助我们更好地了解免疫系统的功能状态,对于免疫相关疾病的诊断和治疗具有重要意义。

本文将从原理和注意事项两个方面,深入探讨流式细胞术检测淋巴细胞亚群的相关知识。

**一、流式细胞术检测淋巴细胞亚群的原理**1. 标本处理流式细胞术检测淋巴细胞亚群的首要步骤是标本处理。

通常情况下,我们会收集外周血进行检测。

在实际操作中,需要抗凝剂进行处理,避免血液凝固,从而保证细胞的完整性。

2. 抗体染色标本处理完成后,接下来是抗体染色。

我们会选择特定的单克隆或多克隆抗体,将其与待检测的淋巴细胞结合。

这些抗体会携带着荧光标记,通过激光的激发,可以将淋巴细胞亚群进行精准识别。

3. 流式细胞分析染色完成后,样本会被注入到流式细胞仪中,通过激光的激发和散射光的检测,可以将不同淋巴细胞亚群进行高效、高速的分析。

在这一步骤中,流式细胞仪会根据荧光信号的强度和特异性来对淋巴细胞进行分类和计数。

4. 数据分析通过计算机对流式细胞仪获取的数据进行分析和解读,我们可以得到淋巴细胞亚群的比例、数量和表达特征等信息,从而更好地了解免疫系统的状态和功能。

**二、流式细胞术检测淋巴细胞亚群的注意事项**1. 样本保存在进行流式细胞术之前,我们需要认真保存样本,避免细胞的损伤和变性。

通常情况下,标本需要在4摄氏度下保存,并尽快进行检测,避免细胞的失活和降解。

2. 抗体选择在进行抗体染色时,需要根据实际情况选择合适的抗体,保证其对于待检测的淋巴细胞具有高度的特异性和亲和性。

还需要注意避免抗体的交叉反应,以免对结果的准确性造成影响。

3. 仪器校准流式细胞仪作为检测设备,需要定期进行校准和质控。

淋巴细胞亚群检测的临床应用-山西省人民医院

淋巴细胞亚群检测的临床应用-山西省人民医院
淋巴细胞亚群检测的临床 应用-山西省人民医院
淋巴细胞亚群检测是一种重要的临床检验方法,可以帮助医生了解病人的免 疫状况和疾病风险。
淋巴细胞亚群检测的意义和背 景
淋巴细胞亚群检测可揭示患者的免疫功能和疾病易感性,为疾病预防和个体 化治疗提供有力依据。
淋巴细胞亚群的分类和功能
淋巴细胞亚群包括T细胞、B细胞和自然杀伤细胞,它们在免疫系统中发挥着 不同的功能和调控作用。
淋巴细胞亚群检测的方法和工 具
淋巴细胞亚群检测常用的方法包括流式细胞术和免疫组化技术,使用相关标 记和抗体进行细胞表面标记和检测。
淋巴细胞亚群检测在疾病诊断 中的应用
淋巴细胞亚群检测可帮助诊断免疫系统相关疾病,如自身免疫病、感染性疾 病和恶性肿瘤。

淋巴细胞亚群检测在疾病治疗 中的指导价值
淋巴细胞亚群检测可以评估治疗效果、指导用药方案和个体化治疗,提高疗 效和减少不良反应。
山西省人民医院的淋巴细胞亚 群检测服务
山西省人民医院拥有先进的实验室设备和专业团队,提供准确、快捷的淋巴 细胞亚群检测服务,服务范围广泛。
淋巴细胞亚群检测的未来发展 和前景
随着科技的进步和对个体化医疗需求的增加,淋巴细胞亚群检测将在未来得 到更广泛的应用和发展。

流式细胞术分析神经系统疾病患者脑脊液T淋巴细胞亚群

流式细胞术分析神经系统疾病患者脑脊液T淋巴细胞亚群

34 6
检验 医学 2 1 年 5 02 月第 2 卷第 5 7 期
Lb r o M d i , a 2 1 , o 2 . o ao t y ei n M y 02 V l 7 N ar ce 5
文章编号 :6 384 (0 2 0 -3 40 17 -6 0 2 1 ) 50 6 -7
ds a e ,a d f d te sg i c n n i ao si ig o i n r ame tmo i r g ie s s n n h in f a t d c tr d a n ssa d te t n n ti .M eh d T e T l mp o yes b es i i i n on to s h y h c t u st i e i h r l lo n S e ed tr n d i ain swi e r l y t mi i a e .Re u t Ma i g po sb s d o n p r e a o d a d C F w r e mi e p t t t n u a se c d s s s p b n e h s e sl s k n lt a e n
中图分类号 :3 2 1 R 9 .2
文献标志码 : A
流 式 细胞 术 分析 神 经 系统 疾 病 患 者 脑 脊 液 T淋 巴细 胞 亚 群
蔡 蓓 , 冯伟 华 , 李立新 , 王 兰兰 ( 四川 大学华 西 医院实 验 医学科 , 四川 成都 604 ) 10 1
摘要: 目的 用流式细胞术分析脑脊液 中 T淋 巴细胞及其亚群 , 探讨不 同类型神经 系统 疾病患者脑脊液 中 T 采用 流式 细胞术测定
采用流式细胞术分析脑脊液 中 T淋 巴细胞亚群 时, 运

流式细胞术在临床检测上的应用

流式细胞术在临床检测上的应用

流式细胞术在临床检测上的应用(一)淋巴细胞亚群分析目前主要开展的项目:1.T/B/NK/CD4/CD8/CD4:CD82.绝对计数3.活化淋巴细胞的检测(CD69/HLA-DR/CD71)4.CD4+Th/i 和CD8+ Ts/c进一步区分5.Naïve/Memory T细胞亚群检测6.Th1/Th2亚群的检测临床意义:•了解在不同情况下体内免疫功能状态•辅助临床疾病的诊断•探索疾病的发病机理、病程、预后•监测、指导临床治疗方案•免疫系统疾病,如SLE等•免疫缺陷病,AIDS•移植病人排斥反应或移植物抗宿主反应的检测•肿瘤病人化疗后免疫力检测推荐试剂:T/B/NK/CD4/CD8/CD4:CD8:绝对计数活化淋巴细胞检测Th1/Th2检测(二) HLA-B27的检测HLA-B27与强直性脊椎炎(ankylosin spondylitis,AS)具有高度的疾病相关性,B27的个体的该病的相对危险率达300以上,AS病人中约95%以上的个体是B27。

同时,与B27高度相关的疾病还有:莱特儿病(包括腹泻、多发性关节炎、尿道炎、结膜炎等的综合症,Reiter’disease)和急性前葡萄膜炎(acute anterior uveitis)等,最新近研究认为还和心肌炎等心脏病有关联。

BD HLA-B27 Kit检测HLA-B27,报告检测的平均荧光强度,根据界值判定,得到阴性/阳性结果。

实验的灵敏度为100%,特异性为97.5%推荐试剂:(三)血液学上的应用1.白血病和淋巴瘤免疫分型用流式来检测对下列情况有重要意义:•用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。

•形态学为急性淋巴细胞白血病(ALL)或急性未分化白血病(AUL)但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。

•混合性白血病。

•部分髓系白血病。

目前,免疫分型对粒细胞和单核细胞白血病的鉴别尚有一定困难。

•慢性淋巴细胞白血病。

•微小残留白血病。

2.造血干细胞计数主要应用于•PBSC采集前CD34阳性细胞动员有效性的检测•各种造血干细胞移植物的CD34+细胞计量控制•化疗强弱的掌握•贫血的鉴别(如再障,缺铁性贫血等)•基因治疗推荐试剂:3.PNH诊断阵发性血红蛋白尿是由于红细胞膜的获得性缺陷,对激活补体异常敏感的一种慢性血管内溶血。

流式细胞术检测体液T淋巴细胞亚群的临床应用

流式细胞术检测体液T淋巴细胞亚群的临床应用
lm ph c t ub e si l d o h a int y fo c o er nv si a in o y o y es s t n fui ft e p te sb l w ytm ty M O gan g , U i — n X X ao do g
【 摘要 】 目 的 探 讨胸 水 、 水 、 泡灌 洗 液 T 淋 巴 细胞 亚 群 的检 测 方 法及 临床 价 值 。方 法 采 用 流式 细 胞 术 检 测 良 、 性 腹 肺 恶 疾病患者的 5 O例胸 水 、 6例腹 水 、 7例肺 泡 灌 洗 液 ( A ) T淋 巴 细 胞 亚 群 的水 平 并 分 组 进 行 比较 。结 果 1 胸 水 : 核 性 4 4 B I 中 F ) 结
病 组 肺 泡灌 洗 液 Ts 胞 占 T 淋 巴细 胞 的( 45 ±9 5 ) 、 h细 胞 占 T 淋 巴 细 胞 的 (9 2 ± 1. 8 % 、 h T 细 4 . 4 . 6 T 4 .8 2 8 ) T / s比值 为 1 1 ± .3
02, . 9 肺部 恶性 肿 瘤 组 肺 泡灌 洗 液 Ts 细胞 【 淋 巴 细胞 的( 5 1 ±7 7 ) 、 T 6 . 1 . 7 Th细 胞 占 T 淋 巴 细 胞 的( 4 5 ±6 6 ) 、 / s 3 . 7 . 5 Th T

5 ・ O
国际检验 医学杂志 21 1 第 3 卷第 l 00年 月 1 期 lt a n JLb
, 旦苎 Q ! : ! 』 璺

临 床 研 究

流 式 细 胞 术 检 测 体 液 T 淋 巴细 胞 亚 群 的 临床 应 用
莫 扬 许 小 东 ,
( 中科技 大学 同济 医学院 附属 襄樊 医院检验科 , 北襄樊 4 1 2 ;. 生部北京 医院流式细胞仪 室 1 0 3 ) 华 湖 4 0 12卫 0 7 0

流式临床检测项目之T细胞亚群及其意义

流式临床检测项目之T细胞亚群及其意义

流式临床检测项目之T细胞亚群及其意义T细胞是免疫系统中的重要组成部分,起着关键的作用。

T细胞可以分为多个亚群,包括CD4+T细胞、CD8+T细胞、调节性T细胞等。

这些不同的亚群在免疫应答中起着不同的作用,如参与细胞免疫、体液免疫、调节免疫等过程。

因此,通过流式细胞术对T细胞亚群进行检测,可以帮助医生了解免疫系统的功能状态,提供重要的临床参考价值。

CD4+T细胞是一种辅助性T细胞,主要通过与抗原递呈细胞结合,释放细胞因子来协助B细胞产生抗体或直接激活细胞免疫。

在临床检测中,CD4+T细胞数量的变化常常与免疫功能的改变相关。

例如,在感染艾滋病毒(HIV)的患者中,CD4+T细胞数量的下降是艾滋病的重要标志之一,也是监测疾病进展的常用指标。

此外,CD4+T细胞数量的变化还与其他免疫疾病如自身免疫性疾病、感染性疾病等相关联。

CD8+T细胞是一种细胞毒性T细胞,主要通过直接杀伤感染细胞来参与细胞免疫。

CD8+T细胞数量和功能的改变与许多病理过程有关。

临床研究表明,肿瘤患者往往存在CD8+T细胞功能下降的现象,这可能导致肿瘤的免疫逃逸和肿瘤发展。

因此,通过检测CD8+T细胞的数量和活性,可以为肿瘤免疫治疗的疗效评估提供重要依据。

调节性T细胞(Treg细胞)是一种具有免疫抑制功能的亚群,其主要通过抑制其他免疫细胞的活性来维持免疫耐受和免疫平衡。

Treg细胞的数量和功能异常与多种疾病的发生和发展密切相关。

例如,在自身免疫性疾病中,Treg细胞的缺失或功能异常会导致免疫系统对自身组织的攻击。

因此,通过检测 Treg细胞的数量和功能状态,可以辅助诊断和治疗一系列疾病,如自身免疫性疾病、移植排斥反应等。

流式细胞术是一种常用的检测技术,可以对T细胞亚群进行高效、准确的分析。

通过将T细胞标记上特定的抗体,然后通过流式细胞仪进行细胞的检测和分析,可以得到T细胞亚群的数量和功能状态等信息,为临床诊断和治疗提供重要依据。

总之,T细胞亚群的检测在临床中具有重要的意义。

如何运用流式细胞仪进行T淋巴细胞亚群分析

如何运用流式细胞仪进行T淋巴细胞亚群分析

如何运用流式细胞仪进行T淋巴细胞亚群分析流式细胞技术(FCM)是70年代发展起来得一种快速对单细胞定量分析的新技术,它借鉴了荧光显微镜技术,同时利用与荧光染料,激光技术,单抗技术以及计算机技术的发展,将荧光显微镜的激发光源改为激光,使之具有更好的单色性与激发效率,因而大大提高了检测灵敏度,同时将固定的标本台改为流动的单细胞悬液,用计算机进行数据处理,因而大大提高了检测速度与统计精确性,而且从同一个细胞中可以同时测得多种参数,为生物医学与临床检验学发展提供了一个全新的视角和强有力的手段.目前,该技术已经广泛用于基础研究与临床应用,在免疫学,遗传学,血液学,肿瘤学等领域内发挥前重要的作用.本文着重介绍流式细胞仪基本原理及其在临床上的应用.基本原理:流式细胞仪(flow cytometer)是一种能够探测和计数以单细胞液体流形式穿过激光束的细胞检测装置,由于在检测中使用的细胞标志示踪物质为荧光标记物,因此,用来分离、鉴定细胞的流式细胞仪有被称为荧光激活细胞分类仪(fluorescence activated cell sorter,FACS),是分离和鉴定细胞群及亚群的一种强而有力的应用工具。

其原理是在一组混合的细胞群中,加入特异的针对特定靶细胞表面分子的荧光标记单克隆抗体,这种特异单克隆抗体与其对应的抗原靶分子结合,结合后的荧光标记抗体停留在特定细胞的表面,称为荧光抗体标记的靶细胞;将含有被标记细胞的混合细胞群混悬在一定容积的上样缓冲液中,再通过FACS的进样吸管孔,仪器就会将细胞悬液制成以单细胞排列的微细流束。

当每一个细胞通过仪器的激光束照射时,带在细胞上的荧光就会被相应的激光束激活并发出对应的荧光,通过敏感的光电倍增管即可检测到从细胞表面发出的荧光。

根据测得的散射光(scattered light )可得到细胞大小及颗粒状态的信息;而从荧光的发射强度(fluorescence emissions)则提供了结合在细胞上的抗体信息,进而也被反映了该细胞表面相应分子的表达情况。

流式细胞术在临床中的应用

流式细胞术在临床中的应用

HLA-B27检测
• HLA-B27是与强直性脊柱炎(AS)密切相关的基因。 利用流式细胞术检测HLA-B27抗原具有灵敏度高, 特异性强, 结果准确、客观等优势。
HLA-B27在强制Байду номын сангаас脊柱炎中的诊断价值
如果根据症状和体征, AS的可能超过50%, 那么实验阳性 显著增加正确诊断机会。
背痛及强直的患者, 在不伴有银屑病及炎症性小肠病变时, HLA-B27阴性可排除AS诊断。
但低于基因。 比染色体及基因分析快速。
标本要求: 单细胞悬液
标本类型 PB BM 各种体液(如尿液、脑脊液、胸腔积液、腹水) 各种灌洗液 其他组织穿刺标本 液体标本采集及保存: 采集后EDTA或 肝素抗凝,室温保存,6h内送检。
流式细胞术在科研中的应用
• 细胞增殖周期测定和DNA倍体分析 • 凋亡检测 • 细胞因子的测量等

肿瘤
• 呼吸系统疾病: 病毒感染时,CD8+T
GPI锚定蛋白测定
• 阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)的过去常用 诊断灵敏较低, 有30%以上的患者呈阴性反应。 我们采用流式细胞术分析红细胞和白细胞膜 CD55,CD59分子的表达量和计数可以将灵敏度提 高到99%。
参考值 红细胞CD55,CD59 阳性率>95% 粒细胞CD55,CD59 阳性率>95% 临床意义 PNH诊断的金标准 可用于贫血患者的诊断和鉴别诊断 检测病情进展状况, 判断疗效
谢谢!
检测淋巴细亚群的胞临床意义

一般认为循环中淋巴细胞数目及比
例变化是免疫功能紊乱甚至缺陷的重要特征,
会造成很多疾病的发生发展。
• 自身免疫性疾病: 系统性红斑狼疮;1型糖尿病
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

・50・垦竖垫墼堕堂垄查!!!!生!旦箜!!鲞箜!塑丛』!坐!!型!』竺!!!型垫!!!y堕:!!:垒坠!・临床研究・流式细胞术检测体液T淋巴细胞亚群的临床应用莫扬1,许小东2(华中科技大学同济医学院附属裹樊医院检验科,湖北襄樊441021;2.卫生部北京医院流式细胞仪室100730)【摘要】目的探讨胸水、腹水、肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群的榆测方法及临床价值。

方法采用流式细胞术检测良、恶性疾病患者的50例胸水、46例腹水、47例肺泡灌洗液(BALF)中T淋巴细胞亚群的水平并分组进行比较。

结果1)胸水:结核性胸膜炎组胸水Ts细胞占T淋巴细胞的(27.36±6.41)%、Th细胞占T淋巴细胞的(67.98±7.41)%、Th/Ts比值为2.60±0.64,肺部恶性肿瘤组胸水Ts细胞占T淋巴细胞的(67.97士4.20)%、Th细胞占T淋巴细胞的(37.61±4.80)%、Th/Ts比值为0.47-4-0.10,与结核性胸膜炎组比较,恶性组Th、Th/Ts比值显著F降(P<0.01)而Ts显著升高(P<0.01);2)肺泡灌洗液:肺良性疾病组肺泡灌洗液Ts细胞占T淋巴细胞的(44.54-4-9.56)%、Th细胞占T淋巴细胞的(49.28-+4-12.88)%、Th/Ts比值为1.13±0.29,肺部恶性肿瘤组肺泡灌洗液Ts细胞占T淋巴细胞的(65.11±7.77)%、Th细胞占T淋巴细胞的(34.57±6.65)%、Th/Ts比值为0.54-4-0.19,与良性病变组比较,恶性组Th卜.降(P<o.05),Th/Ts比值显著卜.降(P<0.01),而Ts显著升高(P<0.01)。

3)腹水:结核性腹膜炎组腹水Ts细胞占T淋巴细胞的(33.11±3.34)%、Th细胞占T淋巴细胞的(66.69±3.78)%、Th/Ts比值为2.03士0.28,恶性组腹水Ts细胞占T淋巴细胞的(56.64±9.34)%、Th细胞占T淋巴细胞的(35.86士3.30)%、Th/Ts比值为0.65±0.10,与结核性腹膜炎组比较,恶性组Th、Th/Ts比值显著F降(P<0.01),而Ts显著升高(P<o.01)。

结论胸腹水、肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群检测可用于分析性质并有助于评估患者局部免疫功能状态。

【关键词】支气管肺泡灌洗液;流式细胞术;T淋巴细胞哑群中图分类号:R446.61文献标识码:A文章编号:1673—4130(2010)01—0050—02InvestigationofTlymphocytesubsetsinfluidofthepatientsbyflowcytometryMOYankl,XUXiao-dong2(1.DepartmentofClinicalLaboratory,AfJ’iliatedxiangJanHospital,TD竹gJiMedicineCollege,HuazhongScienceandTechnologyUniversity,Xiangfan,Hubei441021,China)[Abstract]0bjectiveToevaluatethemethodoffloweytometricanalysisofTlymphocytesubsetsinbodyfluidofthepa—tients.MethodsInovdertogetTlymphocytesby3-colourstainingmethodutilizingSSC/CD3Percpantibody,47bronchoalveolarlavagefluidand50weretestedbyflowcytometery.Results1)ThepercentageofThis(67.98±7.41)%,Ts(27.36士6.41)%andTh/Ts(2.60±0.64)inBAI。

Fwithlungcancer。

andthepercentageofThis(37.61士4.8)%,Ts(67.97±4.20)%,andTh/Ts(0.47士0.10)inBALFwithlungcancerrespectively。

andtheThcellsinBALFwithlungcancerwerelowerthanthoseinthebenignpulmonarydisorder(P<0.05)。

andtheTh/TsratiowassignificantlylowerwhiletheTscellsweresignificantlyhigherinBALFoflungcancer(P<0.01),eompariedwiththebenignpulmonarydisorder;2)ThepercentageofThis(35.76+-7.71)%andTs(64.31士7.37)%andTh/Ts(0.57土0.18)inBALFwithlungcancer,andthepercentageofThis(49.27土12.88)%,Ts(44.54士9.56)oA,andTh/Tsis(1.13±0.29)inBALFwithbenignpulmonarydisorder.TheThcellsinBALFwithlungcancerwaslowerthanthoseinthebenignpulmonarydisorder(P<0.05),theTh/TsratioweresignificantlylowerandtheTscellsweresignificantlyhigherinBALFoflungcancer(P<0.01)compariedwiththebenignpulmonarydisorder;3)ThepercentageofThis(35.76士7.71)%,Tsis(64.31±7.37)%andTh/Tsare(0.57士0.18)inBALFwithlungcancer,andthepercentageofThis(49.27土12.88)%,Tsis(44.54±9.56)%,andTh/Tsis(1.13±0.29)inBALFwithbenignpulmonarydisorder.Respectively,theThcellsinBALFwithlungcancerwerelowerthanthoseinthebenignpulmonarydisorder(P<0.05),theTh/Tsratioweresignificantlylow—erandtheTscellsweresignificantlyhigherinBALFoflungcancer(P<0.01)compariedwiththebenignpulmonarydisorder.Con‘clusionTheimmunityfunctioninthepatientswithlungcancerwassignificantlydecreased.FlowcytometrieapproachisvaluableinanalyzingTlymphocytesubsetsinBAI。

F.[Keywords]Bronchoalveolarlavagefluid;Flowcytometry;T-lymphocytesubsets恶性浆膜腔积液确诊的金标准是在积液巾找到肿瘤细胞。

然而在临床上,常有高度怀疑为恶性积液但未能找到肿瘤细胞的情况,从而影响到诊断的最终判断。

笔者通过对患者胸水、腹水、肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群的分析判断其性质,为临床恶性积液的诊断提供了一种检测指标,现报道如下。

资料与方法1.标本来源病例为2006年6月至2007年12月在襄樊市巾心医院及卫生部北京医院呼吸科、消化科、肿瘤科住院治疗的相应疾病患者。

1)胸水来源:肺癌20例(均经病理最终证实),年龄31~69岁,男17例,女3例。

组织学分型:鳞癌14例。

腺癌4例,小细胞癌2例;结核性胸膜炎30例,年龄26~68岁,男18例,女12例。

刷检见结核杆菌(抗酸染色阳性)确诊。

2)肺泡灌洗液来源:肺癌组25例(男15例、女10例),均经病理证实,年龄39~71岁;肺部良性疾病组22例(男15例、女7例),年龄28~70岁,其中肺结核8例、肺炎ll例、肺结节病3旦堕焦墅垦堂壅查垫!!芏!旦箜!!查箜!塑迪』逊丛笪:』竺坚型垫!!:∑堕!!!№!例。

3)腹水来源:28例,平均年龄48岁,其中肝癌10例、胃癌11例,结肠癌5例,卵巢癌2例,均经病理最终证实。

2.仪器试剂采用美国BDFACSCalibur流式细胞仪,CD4FITC/CD8PE/CD3PerCP■色荧光抗体及同型对照、红细胞裂解液、荧光校准微球均购自BD公司。

3.方法1)样晶的制备:肺泡灌洗液经尼龙布过滤去掉杂质和痰液,胸水腹水以肝素抗凝采集,标本以1500r/rain离心5min,弃上清液,PBS洗涤。

计数并调节细胞数为2×106/mL/管,加入cD4FITC/CD8PE/CD3PerCP荧光抗体20弘L,窀温避光孵育20min,加1:9配制的红细胞裂解液2mI。

,避光10min,1500r/min离心5min,弃上清液,PBS缓冲液2mI.离心洗涤,0.5mLPBS缓冲液重悬细胞。

同时另一管做同型对照。

2)流式细胞仪测定:以荧光微球calibrite3-colour校准仪器光路使其分辨率达到最佳工作状态,采用cellquestPro软件获取与分析数据。

调节电压、阈值、补偿使细胞在图中分布在合适的位置,在FSC/SSC图中圈出淋巴细胞群为(R1),SSC/CD3图中以CD3+细胞群圈『J(R2)以排除巨噬细胞、碎片及其他成分的干扰,建立CD4/CD3、CD8/CD3散点图并设置为显示G3=RI×R2门内的细胞,获取细胞总数10000个,根据I司型对照设十字门分析Th(CD3+CD4+)和Ts(CD3+CD8+)的表达情况。

同时计算出Th/Ts比值。

3)统计分析:两组数据统计以孑-4-_s表示,应用Excel统计软件进行统计学分析,两组间比较采用£检验,P<o.05为差异有统计学意义。

结果1.结核性胸膜炎与肺癌患者胸水T淋巴细胞亚群比较,见表1。

肺癌组与结核性胸膜炎组相比Th显著减少(P<0.01),Ts显著增高(P<0.01),Th/Ts比值显著减低(P<0.01)。

表1胸水T淋巴细胞亚群在结核胸膜炎及肺炎患者的表达注:与结核性胸膜炎组比较。

相关文档
最新文档