实验三 透析实验(一)——蛋白质的透析

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实验三 透析实验(一) ——蛋白质的透析
实验目的
掌握透析的基本原理和操作; 了解透析袋的使用方法。
实验原理
透析是利用小分子能通过而大分子不能通过 半透膜的原理把它们分开的一种重要手段, 是生物化学分离提纯过程经常使用的基本操 作技术之一。 蛋白质作为生物分子物质,不能透过透析膜 而小分子物质(比如离子等)可以自由通过。


取8ml蛋白质溶液放入透析袋中,并将开口端同样用线绑住并放入盛 有蒸馏水的烧杯中。随时用玻棒搅拌液体。
每30min从烧杯中取水1ml,用10%HNO3酸化溶液,再加入 1%AgNO3 1-2d,检查氯离子的存在。另外取出1-2ml做双缩脲反应, 检查烧杯中是否有蛋白质存在。 每0.5h更换一次烧杯中的三级水以加速透析过程。直到数小时后,烧 杯中的水不能检出氯离子的存在时,停止透析。并观察和检测透析袋 内容物是否有蛋白质或者氯离子存在。
Hale Waihona Puke Baidu
器具与试剂


烧杯;玻棒;试管;试管架;透析袋(宽 26cm,长8-10cm),线。 0.5mol/L EDTA;2%NaHCO3 ;1% AgNO3溶液;10%HNO3,10%NaOH; 1%CuSO4;鸡蛋清-NaCl溶液
实验步骤
透析袋的前处理。 将蛋白质溶液做双缩脲反应。 取出透析袋,用三级水清洗透析袋内外,并检查透析袋是否有损坏。 用线将透析袋靠近末端的地方绑紧。

附:
透析袋的处理方法 用2%NaHCO3和10mM的EDTA煮沸 10min后,用蒸馏水清洗透析袋内外,重新 置于1mM的EDTA溶液中煮沸10min,保 存于4℃冰箱中。
思考:
透析是去除小分子物质,那还有哪些去除小 分子物质的方法? 影响透析的因素有哪些?
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