【课外阅读】可溶性还原糖鉴定的几种方法

可溶性还原糖鉴定的几种方法

生物组织中普遍存在着各种糖类，其中葡萄糖、果糖、麦芽糖等分子内含有醛基，醛基具有还原性，可与弱氧化剂反应。因此凡是与醛基有特定颜色反应的化学试剂都可以用来鉴定可溶性还原糖的存在。在化学上常用新制的氢氧化铜和银氨溶液来鉴定可溶性还原糖，在生物学上常用斐林试剂、班氏试剂、本尼迪特试剂来鉴定可溶性还原糖。

1．利用银氨溶液（也叫托伦试剂）：银氨溶液是在2％的AgNO3溶液中逐滴滴入2％的稀氨水，至最初产生的沉淀恰好溶解为止，这时得到的溶液就是银氨溶液。银氨溶液中含有Ag(NH3)2 OH（氢氧化二氨合银），这是一种弱氧化剂，能把可溶性还原糖中的醛基氧化成羧基，同时Ag＋被还原成金属银。还原生成的银附着在试管壁上，形成银镜。可见，银镜反应可用于鉴定可溶性还原糖，鉴定的结果是出现银镜。

2．利用新制的氢氧化铜：在试管里加入10％的NaOH溶液2mL，滴入2％的CuSO4溶液4～6滴，振荡后就会生成新制的Cu(OH)2，加入生物组织样液0.5 mL，加热至沸腾，若生物组织样液中含有可溶性还原糖，就会产生砖红色的Cu2O（沉淀）。

3．利用斐林试剂：斐林试剂由质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液和质量浓度为0.05g/mL C uSO4溶液配制而成。使用时，先将NaOH溶液和CuSO4溶液混合（将4～5滴CuSO4溶液滴入2mL NaOH溶液中），生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀，然后向所要鉴定的生物组织样液加入该混合液进行水浴加热，若溶液的颜色变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀），则说明生物组织样液中含有可溶性还原糖。由于斐林试剂要现配现用，否则实验难以得到满意结果，因为此鉴定方法实际利用的是斐林试剂中的新制Cu(OH)2作为弱氧化剂，与可溶性还原糖的反应，而Cu(OH)2是一种沉淀物质，放置过久沉淀过多则不利于反应，因此人们对斐林试剂进行改良，配制出了班氏试剂和本尼迪特试剂。

4．利用班氏试剂（也叫班氏糖定性试剂）：班氏试剂是斐林溶液的改良试剂，由硫酸铜、柠檬酸钠和无水碳酸钠配制而成。配制方法是：将85g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠溶解在400mL 水中，将8.5g无水硫酸铜溶解在50mL的热水中，然后将CuSO4溶液加入上述的柠檬酸钠和碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如有沉淀产生可过滤除去。柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐，在水中它们均可水解产生OH－，柠檬酸钠和碳酸钠溶液与CuSO4溶液混合时，Cu2+和OH－结合，生成Cu(O H)2与可溶性还原糖中的醛基反应生成砖红色沉淀。由于柠檬酸钠与碳酸钠为一对缓冲物质，产生的OH－数量有限，与CuSO4溶液混合后产生的Cu(OH)2浓度相对较低，不易析出变质，因此该试剂可长期保存。不必象斐林试剂那样配成甲、乙两种溶液，分别保存，所以比斐林试剂使用方便。

5．利用本尼迪特试剂：也是斐林溶液的改良试剂，也是由硫酸铜、柠檬酸钠和无水碳酸钠配置成的蓝色溶液，与班氏试剂相比，只是有关的物质浓度有所差异。配制方法是：20克柠檬酸钠和11.5克无水碳酸钠溶解于100毫升热水中。在不断搅拌下把2克结晶硫酸铜的20毫升水溶液慢慢地加到上述柠檬酸钠和碳酸钠溶液中。此溶液应该十分清彻，否则需要过滤。本尼迪特试剂在放置时不易变质，也不必象斐林试剂那样配成甲、乙两种溶液，分别保存，所以比斐林试剂使用方便。

班氏试剂、本尼迪特试剂与斐林试剂只适用于可溶性还原性糖的鉴定，不适用于非还原性糖（如蔗糖）的鉴定。无论是班氏试剂、本尼迪特试剂，还是斐林试剂，归根结底都是Cu(OH)2与可溶性还原性糖中的醛基在沸水浴加热条件下反应而生成砖红色的Cu2O沉淀，因而三者反应现象是一样的。