HPLC测定复方四环素片4个组分的含量

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调 pH 至 3.5)(20∶80∶0.3)，流速：1 mL·min1，检测波长 246 nm。结果 为 100.1%，100.3%，99.3%，100.5%。结论 的含量。
B6 的线性范围分别为 20~160 μg·mL ，8~64 μg·mL ，1~8 μg·mL ，1~8 μg·mL1，r 都为 0.999 9，平均加样回收率分别 该方法简便、准确、重复性好，可用于同时测定复方四环素片中 4 个组分
HPLC 测定复方四环素片 4 个组分的含量
陈建琴 1，陈秋虹 2 (1.南宁食品药品检验所，广西
摘要：目的 法。方法
南宁 530001；2. 广西分析测试中心，广西 南宁 530022)
建立 HPLC 同时测定复方四环素片中盐酸四环素、甲氧苄啶、维生素 B1、维生素 B6 4 个组分含量测定的方 采用 Phenomenex C18(150 mm×4.6 mm，5 μm )色谱柱，流动相为甲醇-0.05%庚烷磺酸钠溶液-三乙胺(用冰醋酸 盐酸四环素、甲氧苄啶、维生素 B1、维生素
甲氧苄啶
维生素 B1
维生素 B6
测得量 /mg 80.17 100.47 118.96 32.70 41.30 49.12 3.852 4.863 5.839 4.094 5.092 6.080
回收率 /% 100.60 100.48 99.24 100.68 99.75 100.18 99.27 99.68 99.77 100.79 99.84 100.20
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中国现代应用药学 2010 年 2 月第 27 卷第 2 期
24 h进样，盐酸四环素、甲氧苄啶、维生素B1、维 生素B6峰面积的RSD分别为0.46%， 0.31%， 0.39%， 0.27%。 结果表明供试品溶液在室温下24 h内稳定。 2.8 加样回收率试验 取维生素 B1、维生素 B6 对照品适量，分别制 成 含 维 生 素 B10.501 2 mg·mL 、 维 生 素 B6 为 0.503 5 mg·mL 的对照品溶液。 精密称取已知含量的复方四环素片内容物 3 份，置 50 mL 量瓶中，分别精密加入高、中、低 3
作者简介： 陈建琴，女，副主任药师
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Tel: 13507715101
E-mail: cjq3280@
Chin JMAP, 2010 February, Vol.27 No.2
中国现代应用药学 2010 年 2 月第 27 卷第 2 期
复方四环素片为抗感染类药，是由盐酸四环 素、甲氧苄啶、维生素B1、维生素B6 4个组分组成 的复方制剂，收载于《化学药品地方标准上升国 家标准》 。质量标准中盐酸四环素含量测定采用 微生物检定法，操作繁琐，费时，误差大；甲氧 苄啶含量测定采用紫外分光光度法，未见HPLC测 定复方四环素片中盐酸四环素、甲氧苄啶、维生 素B1、维生素B64个组分的报道。为了更全面地控 制该制剂的质量，本试验建立了高效液相色谱法 同时测定该制剂中4个组分的含量的方法。本方法 操作简便，结果准确可靠，重复性好，可用于该 制剂的质量控制。 1 仪器与试药 美国 Waters Alliamcee 高效液相色谱仪 ( 包括 Waters2695 型泵， 2996 二极管阵列 -紫外检测器， EMPOWER色谱工作站)；盐酸四环素、甲氧苄啶、 维 生 素 B1 、 维 生 素 B6 对 照 品 ( 批 号 分 别 为 ： 130488-200403、100031-200304、100390-200301、 100116-200502，中国药品生物制品检定所，纯度： 100%) ；复方四环素片 (市售品，河北东风药业有 限公司，批号：20060524，20060908，20061215)； 甲醇为色谱纯，水为高纯水，庚烷磺酸钠、三乙 胺、冰醋酸均为分析纯。 2 2.1 方法及结果 色谱条件 色谱柱：Phenomenex Cl8(150 mm×4.6 mm， 5 μ m )； 流动相： 甲醇-0.05%庚烷磺酸钠溶液-三乙 胺 ( 用 冰 醋 酸 调 pH 至 3.5)(20 ∶ 80∶0.3) ； 流 速 ： 1 mL·min ；柱温：室温；进样量：20 μL；检测 波长：246 nm。各组分的分离度应符合要求，色 谱图见图1。
图1
高效液相色谱图
下方法配制，按含量测定方法计算各组分含量， 盐酸四环素、甲氧苄啶、维生素 B1 、维生素 B6 的 RSD分别为0.78%，0.83%，0.65%，0.70%。
B6 ;
A对照品溶液；B供试品溶液；1维生素 B1；2维生素 B6；3甲氧 苄啶； 4盐酸四环素
Fig 1
HPLC chromatogram
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个量的盐酸四环素(30，50，70 mg)、甲氧苄啶(12， 20，28 mg)对照品，以及上述维生素 B1、维生素 B6 对照品溶液各 3，5，7 mL，加流动相溶解并稀 释至刻度，摇匀，滤过。每份续滤液分别精密量 取 3 份各 2 mL，置 50 mL 量瓶中，加流动相稀释 至刻度，摇匀，即得相当于样品溶液浓度 80%， 100%， 120%的供试品溶液。 取供试品溶液和 “2.2” 项下的对照品混合溶液各 20 μL，分别注入液相色 谱仪，计算加样回收率，结果见表 1。
Center of Analysis and Test Research, Nanning 530022, China) ABSTRACT: OBJECTIVE To establish an HPLC method for the content determination of tetracycline hydrochloride, trimethoprim, vitamin B1 and vitamin B6 in compound tetracycline tablets. METHODS The Phenomenex Cl8(150 mm×4.6mm, 5 μm) column was used, the mobile phase was methanol-0.05% sodium heptanesulfonate-triethylamine(pH=3.5 adjusted by acetic acid ) (20∶80∶0.3), the flow rate was 1 mL·min1 and the detection wavelength was set at 246 nm. RESULTS The calibration curve linear of tetracycline hydrochloride, trimethoprim, vitamin B1 and vitamin B6 were 20-160 μg·mL1(r=0.999 9), 8-64 μg·mL1(r=0.999 9), 1-8 μg·mL1(r=0.999 9), 1-8 μg·mL1(r=0.999 9) respectively. The average recover were 100.1%, 100.3%, 99.3%, 100.5%, respectively. CONCLUSION The method is simple, accurate, reproducible, and it can be used for the quality control of compound tetracycline tablets. KEY WORDS: HPLC; compound tetracycoine tablets; tetracycline hydrochloride; trimethoprim; vitamin B1; vitamin B6; content determination
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2.2Biblioteka 对照品溶液的配制 分别精密称取盐酸四环素、甲氧苄啶对照品
适量置同一 25 mL 量瓶中，另取维生素 B1、维生 素 B6 对照品适量置另一 100 mL 量瓶中，加流动 相使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成含盐酸四环 素、甲氧苄啶分别为 2，0.8 mg·mL1 的对照品溶 液(对照品贮备溶液 1)及含维生素 B1，维生素 B6 均为 0.1 mg·mL1 的对照品溶液(对照品贮备溶液 2)。 精密量取对照品贮备溶液 1 和 2 各 2 mL 置 50 mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得对 照品的混合溶液。 2.3 供试品溶液的配制 取本品 20 片，除去糖衣，精密称定，研细， 精密称取细粉适量(约相当于盐酸四环素 200 mg)， 置 100 mL 量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度， 摇匀，滤过。精密量取续滤液 2 mL 置 50 mL 量瓶 中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。 2.4 线性关系考察 精密量取上述对照品贮备溶液1和2各1，2，4， 6，8 mL于100 mL量瓶中，混匀，用流动相稀释至 刻度，摇匀，制成不同浓度的混合对照品溶液。分 别进样， 测定峰面积， 以浓度C(μg·mL1)对峰面积A 进行线性回归，得盐酸四环素的回归方程为 ： A=233 678.3C5 245.7 (r=0.999 9)； 甲氧苄啶的回归 方程为： A=164 568.3C+2 543.2 (r=0.999 9)； 维生素 B1 的 回 归 方 程 为 ： A=2 567 813.1C+3 641.9 (r=0.999 9) ； 维 生 素 B6 的 回 归 方 程 为 ： A= 1 365 328.5C+7 855.3 (r=0.999 9)。结果表明，盐酸 四环素在20~160 μg·mL1内线性关系良好，甲氧苄 啶在8~64 μg·mL1内线性关系良好，维生素B1、维 生素B6在1~8 μg·mL1内线性关系良好。 2.5 仪器精密度试验 取同一供试品溶液按照“2.1”色谱条件连续 进样6次，测定峰面积，盐酸四环素、甲氧苄啶、 维生素B1、维生素B6的RSD分别为0.72%，0.54%， 0.43%，0.58%。 2.6 重复性试验 取批号为20060908的样品6份，按照“2.3”项
关键词： HPLC；复方四环素片；盐酸四环素；甲氧苄啶；维生素 B1；维生素 B6；含量测定 中图分类号：R917.101；R917.795 文献标志码：B 文章编号：1007-7693(2010)02-0154-03
Determination of Four Components of Compound Tetracycline Tablets by HPLC CHEN Jianqin, CHEN Qiuhong(1.Nanning Institute for Food and Drug Control, Nanning 530001, China; 2.Guangxi
Areference substance; Bsample; 1vitamin B1; 2vitamin 3trimethopim; 4tetracycline hydrochloride
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稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于2，6，10，18，
Chin JMAP, 2010 February, Vol.27 No.2
表 1 加样回收率试验结果(n=3) Tab 1 Results of recovery test(n=3)
被测组分 盐酸四环素 取样量 /g 0.106 2 0.106 4 0.105 2 0.106 2 0.106 4 0.105 2 0.106 2 0.106 4 0.105 2 0.106 2 0.106 4 0.105 2 已知量 /mg 49.87 49.98 49.43 20.94 20.99 20.76 2.359 2.365 2.339 2.572 2.578 2.549 加入量 /mg 30.12 50.25 70.06 11.68 20.36 28.31 1.504 2.506 3.508 1.510 2.518 3.524