毛细管电泳法测定毛发中氨基酸
毛细管电泳-激光诱导荧光检测法分离检测谷胱甘肽及其构成氨基酸
毛 细 管 电泳 。 激 光 诱 导 荧 光 检 测 法分 离检 测 谷 胱 甘 肽 及 其 构 成 氨 基 酸
王 宇飞 ， 蔡元丽 ， 林 夏 ， 晏 瑾 ， 李 晖 。
（ 四川大学化学工程学院， 四川 成都 ６ １ ０ ０ ６ ５ ）
摘要 ： 以４ － 氯－ ７ 一 硝基苯并＿ ２ － 氧杂． １ ， ３ － 二唑 （ Ｎ Ｂ Ｄ ・ Ｃ １ ） 为柱前衍 生试剂 ， 建立 了一种毛细 管 电泳． 激光 诱导荧光 直接检测氧化型 和还 原型谷胱 甘肽及其构 成氨基酸 （ 谷 氨酸 、 半胱 氨酸和甘 氨酸 ） 的新方 法。经过 实验条件 的优化 ， 采用 ２ ５ ｍ ｍｏ ｌ ／ Ｌ硼砂－ ２ ０ ｍ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ聚氧 乙烯 月桂醚 （ Ｂ 川－ ３ ５ ） － ５ ％乙腈 （ ｐ Ｈ ９ ． ５ ） 的缓 冲体系 ， 在柱温 为 ２ ５。 ｃ 、 分 离 电压为 ２ ０ ｋ Ｖ的条件下 ， 压力进样 ３ ４ ４ ７ ． ５ Ｐ ａ （ ０ ． ５ ｐ ｓ ｉ ） ×３ Ｓ ， 五种 物质在 １ １ ｍ ｉ ｎ内实 现高效基线分 离 。在该方法下 ， 还原型谷胱甘肽 、 氧化 型谷 胱甘肽 、 谷氨 酸、 半胱 氨 酸和甘 氨酸 的线 性范 围分 别 为 ： １—５ Ｏ
ｏ ｆ ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｇ ｌ ｕ ｔ ａ ｔ ｈ ｉ ｏ ｎ ｅ， ｇ ｌ ｕ ｔ ａ ｍｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ， ｃ ｙ ｓ ｔ ｅ ｉ ｎ ｅ ｎｄ ａ ｇ ｌ ｙ ｃ ｉ ｎ ｅ ａ ｆ ｔ ｅ ｒ ｄ ｅ ｒ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗｉ ｔ ｈ ４ － ｃ ｈ ｌ ｏ ｅ－ ｒ ７ － ｎ ｉ ｔ ｅｂ ｒ ｅ ｎ ｚ ｏ ｆ ｕ ｒ ａ ｚ ａ ｎ
毛细管电化学检测法测定光损伤头发中的氨基酸
第２ ５卷 第 ２期
２０ ０ ８年 ６月
苏 州 科 技 学 院 学 报 （ 然 科 学 版） 自
Ｊ ｕｎ ｌ ｆ ｎ ｖｒｉ ｆ ｃ ｎ ｅａ ｄＴ ｃ ｎ ｌ ｙｏ ｕ ｈ ｕ （ ａｕａ Ｓ ｉｎ ｅ ｏ ｒａ ｏ ｉｅｓ ｙｏ ｉ ｃ ｎ ｅ ｈ ｏｏ ｆ ｚ ｏ Ｎ ｔ ｒｌ ｃｅ ｃ ） Ｕ ｔ Ｓｅ ｇ Ｓ
法准确 、 重现 性好 ， 步骤 繁琐 ， 但 比较 耗 时 。 此外 ， 解 中和后 ， 经脱 盐直接 上柱 ， 水 不 易对树 脂造 成污 染［ ４ １ 。毛细 管 电泳 技术 具 有分 离效 率 高 ， 耗 样 品少 ， 消 无需 昂贵 的色 谱 柱与 复 杂 的 前处 理 等诸 多优 点 ， 电化 学 检 测 且 （ Ｄ） 于 电活性物质 不仅 具有较 高 的灵 敏度 ， 具有选 择性 。笔者 建立 了用毛 细管 电化学 检测 法测 定 Ｕ Ｂ Ｅ 对 且 Ｖ
显 退化 ， 】因此 ， 头发 的光 防护 不容 忽视 。 发发质 的好坏取 决 于头发 结构 和组分 的完整 程度 。 发受 到各 种 头 头
环 境 和物理化 学因素 的影 响而 导致 的损 伤主要 是头发结 构和组 分受 到破 坏 。色 氨酸Ｉ 酪 氨酸 与含巯 基化合 ２ １ 、 物【 为光敏 性物质 ， 紫外线 照射 下 ， ３ １ 均 在 其含 量都会 减少 。因此 ， 对头 发损 伤和 头发结构 及组 分相 互关 系 的研 究 已引起大 家 的重视 。色 氨酸 紫外 光 下不 稳定 ， 易产 生光 分解［， 氨酸可 以推 荐作 为头 发光 损 伤 的灵 敏 容 ２色 １ 标 志 物ｆ ２ 】 者已经 采用荧 光法 测定 了光 损伤 头发 中色氨酸含量 的变化 ， 。笔 但采用 碱水解 法研 究色 氨酸 时无 法
毛细管电泳法
在毛细管中施加电场，带电粒子在电场的作用下产生迁移，由于迁移速度与粒 子所带电荷、半径、质量等因素有关，因此不同粒子在电场中产生不同的迁移 速度，从而实现分离。
发展历程
01
02
03
1980年代初期
毛细管电泳法由 Jorgenson和Lukacs首次 提出并实验验证。
1980年代中期
该技术逐渐成熟，被广泛 应用于生物、医药、环境 等领域。
饮用水安全
毛细管电泳法能够检测饮用水中 的消毒副产物、有机污染物等， 保障饮用水安全。
在食品检测领域的应用
食品添加剂分析
毛细管电泳法能够分离和检测食品中 的添加剂，如色素、防腐剂等，有助 于食品安全监管。
营养成分分析
毛细管电泳法能够快速分析食品中的 营养成分，如氨基酸、维生素等，有 助于食品质量控制和营养评价。
核酸分析
毛细管电泳法能够分离和检测核酸片段，用于基 因诊断、基因表达研究和法医学鉴定。
3
临床检验
毛细管电泳法可用于检测体液中的小分子代谢物， 如氨基酸、糖类等，辅助临床诊断。
在环境监测领域的应用
污染物分析
毛细管电泳法能够分离和检测水 体、土壤中的有害物质，如重金 属、农药残留等，有助于环境监 测和污染治理。
在化学分析领域的应用
有机物分析
毛细管电泳法能够分离和检测有机化合物，如药物、染料等 ，在药物研发、化工生产等领域有广泛应用。
金属离子分析
毛细管电泳法能够高灵敏度地检测金属离子，如铅、汞、镉 等，可用于地质、冶金和环境等领域的研究。
谢谢
THANKS
加样
将处理好的样品加入毛 细管中，注意控制加样
量。
施加电压
启动电源，施加适当的 电压，使带电粒子在电
毛细管电泳-紫外检测法测定
用于清洗毛细管，防止 样品残留。
标记物
用于增强样品在紫外检 测器中的信号，提高检
测灵敏度。
实验设备
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
01
02
03
04
毛细管电泳仪
用于分离样品中的各组分，具 有高分辨率和高灵敏度。
紫外检测器
用于检测样品中特定组分的紫 外吸收光谱，从而确定组分的
性质和浓度。
洗脱泵
用于提供洗脱液，清洗毛细管 内的残留物。
毛细管电泳-紫外检测法的优缺点
高分离效率
毛细管电泳具有高柱效和低扩散 系数，能够实现高效分离。
微量样品需求
只需少量样品即可完成分析，适 用于珍贵样品的分析。
毛细管电泳-紫外检测法的优缺点
快速分析
分析时间短，适合高通量分析。
多种检测模式
可结合多种检测器，如紫外、荧光、质谱等，实现多组分同时检测。
毛细管电泳-紫外检测法的优缺点
图表展示
通过柱状图、折线图等形式展示实验结果，便于直观地比较不同样品之间的差异 。
结果分析
吸光度分析
根据实验数据，分析各样品在检测波长下的吸光度，探讨吸 光度与样品浓度之间的关系。
分离效果评估
对毛细管电泳分离后的各组分进行紫外检测，分析分离效果 ，包括峰形、分离度等。
结果比较与讨论
1 2 3
不同样品比较
05
结论
研究成果总结
毛细管电泳-紫外检测法是一种 高效、灵敏的分离分析方法， 适用于多种化合物的分离和检
测。
在本实验中，成功分离和检测 了多种目标化合物，包括有机 酸、氨基酸、肽类和蛋白质等
。
该方法具有较高的分离效率和 灵敏度，能够满足实际应用的 需求。
高效毛细管电泳法快速测定血清中游离氨基酸_陈惜贞
高效毛细管电泳法快速测定血清中游离氨基酸陈惜贞(广东省汕尾市人民医院检验科516600)=摘要>目的建立快速测定人血清中游离氨基酸的方法。
方法用高效毛细管电泳法对40例健康体检者及32例肾病患者血清氨基酸进行检测。
结果8min内分离16种氨基酸,线性范围在10~700L mo l/L,最低检出限为2.5~7.9L mol/L,回收率86.3%~107.4%,批内精密度2.8%~10.3%,批间精密度3.5%~11.6%。
对32例肾脏病患者血清中氨基酸测定结果与40例健康对照组氨基酸测定结果进行统计学分析。
结论高效毛细管电泳法具有快速、准确、灵敏等特点,为临床及科研工作中测定氨基酸提供了一种有效的方法。
=关键词>氨基酸;D-正白氨酸;2,4-二硝基氟苯;电泳中图分类号:R446.1文献标志码:A文章编号:1672-9455(2007)06-516-02氨基酸测定不仅对遗传代谢性疾病、肾病、肝病的诊断和治疗具有重要价值,而且在评价患者营养状况方面亦受到广泛重视。
为研究不同疾病状态下氨基酸的代谢情况,需要一种快速测定氨基酸的方法来满足大批量样品检测的需要,离子交换色谱法和反相高效液相色谱法因其成本高且费时而难以普及[1]。
相比之下,最新发展起来的高效毛细管电泳法以其快速、简便、准确、成本低等诸多优点备受青睐,为快速测定氨基酸提供了有效手段。
作者采用高效毛细管电泳法,建立快速检测人血清中游离氨基酸的方法,取得满意效果,现报道如下。
1资料与方法1.1一般资料缓冲液由0.03mo l/L pH9.8四硼酸钠缓冲液、异丙醇30%Brij35=825B150B25组成;开口石英毛细管总长度370mm,有效长度300mm,内径75L m;电压28kV;温度为15e;压力进样5s。
1.2仪器与试剂高效毛细管电泳仪为美国BECKM AN公司P/A CE5500;pH计为OR ION520A;石英毛细管为内径75 L m,河北永年光导纤维厂生产。
高效毛细管电泳_紫外检测法分离测定氨基酸的含量_孔红星
’2， ) =%> ： 迁 移 时 间 的 相 对 标 准 偏 差 ?@A 小 于
峰 面 积 的 ?@A 在 4"4BC$3.B 之 间 ； -"%!B ， D3 线 性 范 围： 甘氨酸、 谷氨酸、 苏氨酸、 丙氨酸、 缬氨酸、 亮氨酸为 甲硫氨酸、 赖氨酸为 #C%&!; 1 ’2， 线性相 .C#.&!; 1 ’2， 关 系 数 大 于 &388.， 甲 硫 氨 酸 和 赖 氨 酸 的 检 测 限 为 表4 测定平均值 缬氨酸 亮氨酸 进展 5E73 现代医学仪器与应用 6!&&!6#,:#>F8C44"
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EF 的选择
在酸性介质中， 氨基酸带正电荷，
易被毛细管壁吸附， 因而通常在碱性介质中实现氨基
收稿日期： #$$+*$,*#( 作者简介：孔红星（ ， 男， 工程师， 研究方向： 分析化学。 5<$+, ） 基金项目：广西教育厅科研基金资助课题， 桂教科研 =&###>)<& 。
分离 酸的毛细管电泳分离。在碱性介质中， EF 升高， 效果提高， 但过高的 EF 对毛细管的使用不利， 且会使 取得了较好的分离效果。 基线不稳， 本文选取 EF%$，
!$%
定量方法研究
在选定的毛细管电泳分离条件下，对 % 种 氨 基
酸的定量方法进行了研究： 9" 重现性 : 浓度为 $-!; <
参考文献：
5#7
周琼 6 陈缵光 6 莫 金 垣 3 毛 细 管 电 泳 在 氨 基 酸 分 析 中 应 用 的 傅 若 农 6 顾 峻 岭 " 近 代 色 谱 分 析 5G7" 北 京 F 国 防 工 业 出 版 社 6
氨基酸分析的检测方法评述
文章编号:1004-7964(2004)03-0039-05收稿日期:2003-11-05基金项目:国家高技术研究发展计划(863计划)经费资助,课题编号:2001AA647020四川大学青年基金,课题编号:H2002[9-057]第一作者简介:戴红,女,1966年出生,副教授。
主要研究方向:分析检验。
氨基酸分析的检测方法评述戴红,张宗才,张新申(皮革化学与工程教育部重点实验室(四川大学),四川成都610065)摘 要:对氨基酸分析常用的化学方法、电化学方法、分光光度法(包括可见光分光光度法,紫外光分光光度法和荧光分光光度法)等检测方法进行综述,以期为提高氨基酸分析的灵敏度、准确性,为快速、高效的氨基酸分析方法的建立提供参考。
关键词:氨基酸;检测;分析中图分类号:Q517;Q503 文献标识码:ADetermination M ethods of Amino A cids A nalysisDA I Hong ,ZHA N G Zong 2cai ,ZHA N G Xi n 2shen (Key L aboratory of L eather Chemist ry and Engi neeri ng(S ichuan U niversity ),M i nist ry of Education ,Chengdu 610065,Chi na )Abstract :Determination methods for amino acids ,including chemistry determination ,elec 2tric 2chemistry determination ,spectrophotometer determination and conductivity detection method were reviewed for the sake of improving the analysis sensitivity and accuracy.The paper aimed at providing useful reference to building a fast and effective amino acids aualytic methods.K ey w ords :amino acid ;analysis ;determination 氨基酸是蛋白质的基本结构单位和生物代谢过程中的重要物质,氨基酸分析技术对蛋白质化学、生物化学和整个生命科学研究以及产品开发、质量控制和生产管理等具有重要意义,广泛地应用于化工、轻工、食品加工、医药卫生行业的医药、食品、保健品等的分析,并且用于皮革化学鞣革机理的研究中[1,2,3]。
毛细管电泳分析检测氨基酸
灵敏度高
毛细管电泳结合紫外或荧光检 测器，可实现高灵敏度的氨基 酸检测。
操作简便
毛细管电泳设备简单，操作方 便，适合于实验室和现场分析
。
未来研究方向与展望
新型分离模式开发
研究开发新型的毛细管电泳分离模式， 以提高氨基酸的分离效果和检测灵敏 度。
联用技术
将毛细管电泳与其他检测技术联用， 如质谱、核磁共振等，实现氨基酸的 高精度和高灵敏度分析。
毛细管电泳能够区分氨基酸的异构体，如D型和L型氨基酸。
未知物筛查
通过与标准品比对和数据库比对，可筛查未知氨基酸及其相关化 合物。
04 毛细管电泳技术的前景与挑战
CHAPTER
技术发展与改进
高效分离
微型化与便携化
通过优化毛细管电泳的条件，如电解 质浓度、pH值和分离电压等，提高氨 基酸的分离效率，缩短分析时间。
电化学检测器
开发新型电化学检测器，如安培检测器和电导检测器等，利 用电化学反应将氨基酸转化为可测信号，实现直接、快速的 氨基酸检测。
提高检测灵敏度的方法
优化进样技术
通过改进进样方式和优化进样参数，减少进样误差和背景干扰， 提高检测灵敏度。
信号放大技术
利用化学或生物放大技术，如酶放大、抗体放大等，将氨基酸信号 放大，提高检测灵敏度。
预富集技术
利用毛细管电泳的预富集技术，对氨基酸进行富集和浓缩，提高其 浓度水平，进而提高检测灵敏度。
05 结论
CHAPTER
毛细管电泳在氨基酸分析中的优势
高分离效率
毛细管电泳采用微米级别的分 离通道，能够实现高效率的分
离，缩短分析时间。
样品需求量少
毛细管电泳技术需要的样品量 较少，适用于珍贵样品的分析 。
配位作用毛细管电泳分离天冬中氨基酸
数据采集和处理 ： Ｗ 一 ００色谱 工作站 ， Ｈ ２０ 南京 千谱软件 有
限公司 。
电子天平 （ Ｙ ２ ） 日本 岛津公 司 ； Ｓ １０型超声 仪 ， Ａ １０ ， Ａ ３２ 天津 奥特塞恩斯仪器有 限公 司 ； 转蒸发 器 （ Ｅ一 ２ Ａ） 上 海亚荣 旋 Ｒ ５Ａ ， 生化仪器 厂 ； 显式 电热 恒 温水 浴 锅 ， 海 跃 进 医疗 器 械 厂 ； 数 上
ｉ ｔ ．Ａｎ ｅｅ ｔｏ ｈ ｒ ｓｓｂ ｆ ｒｏ ０ ｍｍｏ／ ｕ Ｏｄｗａ ０ ｎ ｏ ｐ ｏ ｉ ｅ ｔ ｅ ｅｆ ｃｉｅ ｓ ｐ ｒ ｔ ｎ Ｕｎ ｅ ｈ ｐ ｉ ｚ ｄ ｌｙ ｉ ｌ ｃｒ ｐ ｏ ｅ ｉ ｕ ｆ ｆ５ ｅ ｌ Ｌ Ｃ Ｓ ｓ ｆｕ ｄ ｔ ｒ ｖｄ ｈ ｆ ｔ ｅ ａ ａｉ ． ｅ ｖ ｏ ｄ ｒｔｅ ｏ ｔ ｍｉｅ ｃ ｎ ｉｏ ｏ ｄ ｔ ｎ，ｇ ｕａ ｃ ａ ｉ ，ｈ ｓｉ ｉ ｅ ｒ ｉ ｉ ｅ ｌｃ ｎ ，ｔ ｐ ｏ ｈ ｎ，ｌｕ ｉ ｅ ａ ｉ ｅ ｎ ｌ ｔ ｍｉ ｃ ｄ ｃ ｕ ｄ ｂ ｌ ｓ ｐ ｉ ｌ ｔｍｉ ｃ ｄ ｉｔ ｎ ，ａ ｇｎ ｎ ，ｇ ｙ ｉ ｅ ｒ ｔｐ ａ ｄ ｙ ｅ ｃ ｎ ，ｖ ｌ ，ａ ｄ ｇｕ ａ ｃ ａ ｉ ｏ ｌ ｅｗｅｌ ｅ － ｎ ａ ａ ｅ ．Ｔ ｅ ｐ ｏ ｏ ｅ ｔ ｏ ｆ ｒ ｄ ａ ｎ ｍｂ ｒｏ ｅ ｅ ｔ ｉ ｃｕ ｉ ｇ ｒ ｐ ｄ，ｓｍｐ ｅ ｉｈ ｓ ｎ ｉ ｖｔ ｎ ｏ ｓ ｍｐ ｅ ｄ ｒｖ － ｒ ｔｄ ｈ ｒ ｐ ｓ ｄ ｍｅｈ ｄ ｏ ｆ ｅ ｕ ｅ ｆｂ ｎ ｆ ｓ ｎ ｌ ｄ ｎ ａ ｉ ｅ ｉ ｉ ｌ ，ｈ ｇ ｅ ｓ ｉ ｉ ａ ｄ ｎ ａ ｌ ｅ ｉａ ｔ ｙ
为二 次重 蒸水 。
度 过大 ， 电渗流过小 ， 焦尔热过多析时间 ， 并且 带来过多 的问题 。通过 考察 ， 最 终 选 定 Ｃ “ 的浓 度 为 ５ ｍ ｌＬ ｕ ０ｍ ｏ 。 ／
毛细管电泳在氨基酸分析中的应用
毛细管电泳在氨基酸分析中的应用大连大学环境与化学工程学院化学112 刘纪程1.概述毛细管电泳（Capillary electrophoresis，CE）又称高效毛细管电泳（HPCE）或毛细管电分离法（CESM），是经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物。
毛细管电泳(CE)的应用包括很多内容。
已在生命科学、生物工程、医药、环境保护、食品检验等领域获得了广泛应用。
被分析的物质有离子、小分子、生物大分子乃至高分子和粒子的分析；分析对象从无机物、有机物、生物体系乃至活体单个细胞的分析；含量测定范围可从常量到微量乃至几个分子的测定电泳技术是蛋白质分离的重要手段，而毛细管电泳技术一经发明，就在多肽、蛋白质等生物活性物质的分离分析方面显示出了巨大的优越性。
1.2 CE 的分离模式CE 基于分离介质和分离原理的不同，常见的有以下几种分离模式[1， 2]：此外，还有毛细管矩阵电泳（CAE）、芯片式毛细管电泳（CCE）及非水毛细管电泳（CNACE）等，对于蛋白质和多肽的检测而言，应用最多的还是CZE和CIEF 这两种。
近年来，一些新型的电泳溶剂也得到了应用，如非水相的或者水相+ 有机相的电解液、等电点缓冲溶液，离子性液体也被用于电泳分离，这大大拓展了其应用范围[3]1.3 CE 的检测技术由于CE 进样量小的特性，对检测器的灵敏度要求很高，通常采用柱上检测。
在蛋白质和多肽的检测中，因为芳香类氨基酸有紫外吸收，故常用紫外检测器；在样品含量较低时，可采用荧光或者激光诱导荧光检测器；由于蛋白质溶液具有导电性，因此对毛细管进行改进以后，采用电导或安培电流也能检测出峰；另外，伴随蛋白质酶谱技术的发展，将CE 与质谱串联定性检测蛋白质水解后的多肽链的技术也得到了较快发展[4]。
2.氨基酸分析由于只有少数几种氨基酸在紫外范围内有吸收，所以对氨基酸分析的主要问题在于检测方式。
虽然也有报道用间接紫外、间接荧光、间接电化学、检测器测定未衍生化的氨基酸，但最灵敏的方法是采用荧光试剂将氨基酸衍生后再进行分离测定。
氨基酸检测方法
氨基酸检测方法1. 氨基酸色谱法氨基酸色谱法是一种常用的氨基酸检测方法。
该方法是利用氨基酸的特性，在具有特定氨基酸浓度梯度的柱子中流动时，各种氨基酸会按照一定的顺序在柱子中被分离出来。
利用这种分离技术加上不同的检测方法，可以精确地测量样品中各种氨基酸的含量。
该方法准确度高，响应灵敏，但需要高昂的仪器和耗材。
2. 离子交换色谱法离子交换色谱法也是一种常用的氨基酸检测方法。
该方法是在离子交换柱中，将混合的氨基酸样品与柱内的离子交换树脂进行交换，实现各种氨基酸的分离和测量。
该方法测量精度高，但某些疏水性氨基酸分离效果不佳。
3. 毛细管电泳法毛细管电泳法是一种高效而准确的氨基酸检测方法。
其基本原理是将氨基酸样品在带电的毛细管中进行分离，利用质量分析仪器对氨基酸进行检测。
毛细管电泳法能够在非常短的时间内对混合氨基酸进行快速、准确的测量。
4. 气相色谱法气相色谱法是一种相对快速而精确的氨基酸检测方法。
在气相色谱法中，氨基酸样品首先通过氨基酸衍生化反应使其变得易于气相分析，然后在气相色谱仪中将氨基酸进行分离和测量。
该方法准确度较高，同时也提供了氨基酸的结构信息。
5. 氢化技术法氢化技术法是一种经典的氨基酸检测方法。
该方法是将氨基酸样品加入到盛有氢气的高压釜中，加热反应，利用氢化反应将氨基酸转化为氨基酸替代物，然后对替代物进行定量测量。
该方法简单易行，但需要高压釜及氢气供应等耗材。
6. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种可靠的氨基酸检测方法。
其基本原理是使混合样品在高效液相色谱柱中分离，使各种氨基酸有序地流过柱中吸附剂，并使用各种检测方法获得氨基酸含量的定量信息。
该方法测量范围广，准确度高，但仍需要较昂贵的仪器和耗材。
7. 红外光谱法红外光谱法是一种非常方便和易行的氨基酸检测方法。
该方法利用分子中各个化学键的振动所导致特定波长的吸收光谱来区分各种氨基酸。
虽然红外光谱法不能直接定量测量氨基酸，但是可以通过特定的计算和数据分析方法来获得氨基酸的含量和结构信息。
氨基酸检测方法
1. 分光光度法氨基酸检测： 主要是利用氨基酸与衍生剂发生化学反应，产生蓝紫色化合物，该化合物在某一波长处有最大吸收峰，根据吸收值大小得到氨基酸含量。
常用的衍生剂为茚三酮。
分光光度法具有操作方便、仪器要求简单、成本低、应用范围广以及适用于芳香族氨基酸检测等特点。
2. 毛细管电泳法氨基酸检测： 根据分离原理的不同，可分为毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等电电泳、毛细管等速电泳以及胶束电动力学毛细管电泳。
其中，毛细管区带电泳和胶束电动力学毛细管电泳可用于氨基酸检测。
毛细管电泳法具有分离效率高、分析时间短、溶剂用量少、无须梯度洗脱以及适用于氨基酸的手性分离等特点，但该方法分析结果重现性较差。
3. 近红外光谱法氨基酸检测： 利用有机化合物的含氢基团在特定波长区域跃迁，产生光谱的变化，结合统计学方法间接地实现氨基酸的定量检测。
近红外光谱法具有高效、无污染、无破坏性以及可同时检测多组分等特点。
4. 气相色谱法氨基酸检测：将氨基酸衍生化处理变为容易气化的物质，根据气态样品中各组分在流动相和固定相中的分配系数的不同，实现对氨基酸的定量分析。
GC法不仅能检测氨基酸含量，还可以发现新氨基酸，但缺点在于操作复杂、干扰因素多，专一性差。
5. 高效液相色谱法氨基酸检测： 是最常用的一种氨基酸检测方法。
由于大多数氨基酸本身没有紫外吸收和荧光反应，因此需要对样品进行衍生化处理将其转化为有紫外吸收和发射荧光的物质，衍生可分为柱前衍生和柱后衍生。
1)柱前衍生：是样品在进入色谱柱之前，氨基酸经衍生化转变为适合反相高效液相色谱检测的物质，常用的衍生剂有丹酰氯、邻苯二甲醛、萘二甲醛等。
实验常用的色谱柱有C8柱、C18柱和CN柱，检测方法有HPLC-UV、HPLC-ELSD、HPLC-FLD、HPLC-MS等。
2)柱后衍生：是样品经离子交换柱分离，分离后的氨基酸再进行衍生化处理。
常用的柱后衍生化试剂有茚三酮和荧光胺，其中荧光胺的灵敏度比茚三酮高大约 3个数量级。
毛发水解氨基酸的分离与综合应用
毛发水解氨基酸的分离与综合应用Separation and Comprehensive Applications of Hair Hydrolysis Amino Acids毛发中含有一些重要的氨基酸，如谷氨酸、苏氨酸、甘氨酸、琥珀酸、天冬氨酸等，它们可以把毛发水解变成氨基酸。
氨基酸的水解分离的原理，是利用前面提到的氨基酸的不同物理性质，其电荷性质，溶解性，亲水性，有机溶液以及溶剂的选择性等特点，利用不同的分离的条件来实现氨基酸的分离。
There are some important amino acids in hair, such as glycine, cysteine, proline, serine and threonine, which can hydrolyze hair into amino acids.The principle of hydrolysis and separation of amino acids is to use the different physical properties of the above mentioned amino acids, such as charge, solubility, hydrophilicity, organic solvent and selective solvents to realize the separation of amino acids.氨基酸的分离过程可以分为不同的步骤：1.预处理：这一步骤涉及氨基酸在粗提取后的准确测定，以及清洗毛细血管物质的溶解液；2.水解：首先将毛发放入含有氢氟酸的热温水溶液中，在加热蒸汽条件下进行水解，将有机化合物水解变为有机氨基酸；3.电泳分离：将水解产物通过电泳分离，分离出不同亲电性或疏电性的氨基酸；4.离子交换柱分离：用离子交换柱进一步将所有氨基酸进行分离，确保氨基酸的纯度；5.HPLC分离：最后，用HPLC对分离的氨基酸进行检查，以保证产品的质量。
高效毛细管电泳分离氨基酸
食品
环境
生物医药
石油化工
手性分离
高新技术 研究
应用
2.1 电渗现象electroosmosis
当固体与液体接触时，固体表面由于某种原因带一种定域电荷，因静电引力使其周围液体带有相反电荷，在液-固界面形成高出溶液本体的“自由”离子，即形成双电层，二者之间存在电位差。 在液体两端施加电压时，由于定域电荷无法移动，而双电层中的“自由”离子在电泳过程中通过碰撞等作用给溶剂分子施加单向推力，使之同向运动，并通过粘滞阻力带动周围溶剂运动，从而发生液体相对于固体表面的移动，这种液体相对于固体表面的移动的现象叫电渗现象。 电渗现象中整体移动着的液体叫电渗流（electroosmotic flow ，简称EOF）。
毛细管电色谱兼具HPCE的高效性和HPLC固定相具有高选择性的特点； 分类：开管柱、填充柱、整体柱；
姚老师的课题——毛细管电色谱分离手性化合物
5 习题
请用电渗的原理确定推测本实验中两个样品的出峰顺序。（四） 请以本实验为例列举两种色谱定性方法。(十) 请举出两种常用的色谱定量的方法。(十二） 查阅文献，请举一毛细管电泳具体应用的实例。(九) 若在本实验的缓冲液中分别加入十二烷基三甲基溴化铵（阳离子表面活性剂），或十二烷基磺酸钠（阴离子表面活性剂），请推测电渗流的大小和方向以及样品的出峰顺序会产生何种变化，为什么。(七) 若在本实验的缓冲液中加入有机溶剂甲醇，请推测电渗流会产生何种变化，为什么。 若提高本实验的缓冲液中的磷酸二氢钠的浓度，请推测电渗流会产生何种变化，并且此变化会对样品的检测产生何种影响？(五)
利用电泳现象对某些化学或生物物质进行分离分析的方法和技术叫电泳法或电泳技术。
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按形状分类：U型管电泳、柱状电泳、板电泳；
毛细管电泳-直接紫外测定复方氨基酸注射液中氨基酸的含量
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毛细管电泳电化学检测分离测定毛发中的色氨酸酪氨酸和半胱氨酸
1.试验部分
1.1仪器与试剂
毛细管电泳-电化学检测系统(CE - ED) 为自组装, 包括±30 kV 高压电源(上海原子核研究所) ；三电极工作系统（直径为300μm的碳圆盘电极为检测电极、铂丝为辅助电极、饱和甘汞电极为参比电极）；三维定位调节器（上海联谊光纤激光
器械厂）；BAS LC- 3D 安培检测器(Bioanalytical Systems , USA) ；HW色谱工作
站（上海千谱软件有限公司）；熔融石英毛细管(长70cm，内径25μm，河北永年光导纤维厂)；超声波清洗器；毛细管清洗器（上海医科大学仪器厂）；分析天平色氨酸，酪氨酸，半胱氨酸；头发样品：志愿者提供；其它试剂为分析纯。
1.2标准溶液及样品溶液的制备
标准溶液：色氨酸，半胱氨酸储备液：1.0×10- 3 g/m L，酪氨酸储备液：0.5×10- 3 g/m L，用50mmol/L硼砂－20mmol/L氢氧化钠溶液配置，再用运行缓冲液稀
释至所需浓度。
样品溶液：将头发用石油醚脱脂，干燥后称取50mg置于水解管中，加入3mL6mol/L氢氧化钠（含0.5％可溶性淀粉）；水解管用真空泵抽真空3min，在酒精
喷灯上封管；然后，将封好的水解管置于110o C烘箱中水解20小时。
将水解液置于已
加有2.9mL6mol/L盐酸溶液的25mL容量瓶中，用蒸馏水洗涤水解管3～4次，最后用
蒸馏水定容。
1.3 试验方法
毛细管使用前依次用0.1mol/L的NaOH、二次水、缓冲液各冲洗5min、2min、10min。
自制碳圆盘电极使用前要用细砂纸打磨，并用超声波清洗2min，使用自组装的CE-ED检测系统，通过三维定位调节器使工作电极与毛细管的出口在同一直线上，并尽可能靠近毛细管的末端，以50mmol/L的硼砂（pH ＝8.98）缓冲液为运行液，采用电动进样，检测池内为0.1mol/L的NaO H溶液，阴极电泳槽为检测端。
所有溶液使用前均用0.25μm聚丙烯滤膜过滤。
2 结果与讨论
2.1 3种氨基酸的分子量及等电点的比较
3种氨基酸的分子量：色氨酸（M r=204.11）>酪氨酸（M r=181.09）》半胱氨酸（M r=121.12）；等电点：色氨酸（pI=5.89）> 酪氨酸（pI=5.66）> 半胱氨酸（pI=5.07）；毛细管电泳的分
离机理主要取决于待分离物质的分子大小及其在分离体系中自身所带电荷的多少。
3种氨基酸在pH为8.98的缓冲液中均带负电荷，而且所带负电荷量与其等电点成反比，在毛细管中的迁移速率与物质的带负电荷量成正比，与物质的分子量大小成正比。
色氨酸与酪氨酸的分子质量和等电点都比较接近，由此可知，色氨酸与酪氨酸的分离将成为难点。
2.2 电泳条件的优化
2.2.1 流体动力学伏安图
图1为色氨酸、酪氨酸和半胱氨酸的流体动力学伏安图，由图可知，色氨酸、酪氨酸，从0.75 v到0.95v，随氧化电压的变大，峰电流缓慢变大，在氧化电压为1.0时，峰电流迅速变大；而从0.75 v到1.0 v，半胱氨酸的峰电流变化幅度较大。
综合灵敏度和稳定性的因素，选择检测电位为1.0v。