病毒的分离与鉴定ppt课件
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病毒的纯化和检测.ppt
• 病毒感染细胞的结果可使培养液的pH值 改变，说明细胞的代谢在病毒感染后发生 了变化。这种培养环境的生化改变也可作 为判断病毒增殖的指标。
(二) 病毒的数量与感染性测定
• 1.蚀斑测定
• 是一种检查和准确滴定病毒感染性的方法。 将稀释的病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。 病毒吸附后，再覆盖一层融化的半固体营养 琼脂，使病毒在单层细胞培养中有限扩散。 结果是每一个有感染性的病毒在单层细胞中 可产生一个局限性的感染灶。用活性染料 (如 中性红) 染色，则活细胞着色，受病毒感染而 破坏的细胞不着色，形成肉眼可见的蚀斑 (plaque)。每个蚀斑是由一个感染性病毒颗 粒形成的，称作蚀斑形成单位 (plaque forming unit,PFU)。病毒悬液中的感染性 病毒量的滴度可用PFU／ml表示。
• 病毒的纯化可以应用提纯蛋白质的技术方 法；
• 对大小、形状和密度高度一致的病毒粒子， 可以采用分级分离的技术。
四、病毒萃取液的分级纯化
• 沉淀法 ➢中性盐沉淀法
➢聚乙二醇沉淀法
➢有机溶剂沉淀法 ➢等电点沉淀法
• 离心法
➢差速离心法 ➢密度梯度离心法
速率区带离心法 等密度区带法
➢凝胶色谱法 ➢电泳法
生产较复杂、成本高
生产简单、成本低
二、人工被动免疫
• 人工被动免疫的制剂有免疫血清和丙种球蛋白， 或与细胞免疫有关的因子等。大多数人均受过不 同种类的病毒感染，从正常血清中提取免疫球蛋 白可用于紧急预防。常注射人免疫球蛋白预防甲 型肝炎、麻疹、脊髓灰质炎等。可使接触病原者 不出现症状或仅出现轻微症状。近年来有人应用 含有高滴度抗HBs的乙肝免疫球蛋白Ig) 预防乙型 肝炎有一定效果。在使用免疫球蛋白时因其半衰 期短，故应注意有效期。
(二) 病毒的数量与感染性测定
• 1.蚀斑测定
• 是一种检查和准确滴定病毒感染性的方法。 将稀释的病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。 病毒吸附后，再覆盖一层融化的半固体营养 琼脂，使病毒在单层细胞培养中有限扩散。 结果是每一个有感染性的病毒在单层细胞中 可产生一个局限性的感染灶。用活性染料 (如 中性红) 染色，则活细胞着色，受病毒感染而 破坏的细胞不着色，形成肉眼可见的蚀斑 (plaque)。每个蚀斑是由一个感染性病毒颗 粒形成的，称作蚀斑形成单位 (plaque forming unit,PFU)。病毒悬液中的感染性 病毒量的滴度可用PFU／ml表示。
• 病毒的纯化可以应用提纯蛋白质的技术方 法；
• 对大小、形状和密度高度一致的病毒粒子， 可以采用分级分离的技术。
四、病毒萃取液的分级纯化
• 沉淀法 ➢中性盐沉淀法
➢聚乙二醇沉淀法
➢有机溶剂沉淀法 ➢等电点沉淀法
• 离心法
➢差速离心法 ➢密度梯度离心法
速率区带离心法 等密度区带法
➢凝胶色谱法 ➢电泳法
生产较复杂、成本高
生产简单、成本低
二、人工被动免疫
• 人工被动免疫的制剂有免疫血清和丙种球蛋白， 或与细胞免疫有关的因子等。大多数人均受过不 同种类的病毒感染，从正常血清中提取免疫球蛋 白可用于紧急预防。常注射人免疫球蛋白预防甲 型肝炎、麻疹、脊髓灰质炎等。可使接触病原者 不出现症状或仅出现轻微症状。近年来有人应用 含有高滴度抗HBs的乙肝免疫球蛋白Ig) 预防乙型 肝炎有一定效果。在使用免疫球蛋白时因其半衰 期短，故应注意有效期。
微生物实验十 流感病毒的分离培养 PPT课件
• （二）、接种样本 • 将标记好的鸡胚的气室朝上放置在照蛋器上。 • （2）用75％酒精消毒鸡胚，用无菌镊子在气室 端钻孔，再无菌眼科剪剪开10x6mm窗口。 • (3)用注射器吸800µl标本。 • (4)从窗口中滴入无菌的液体石蜡，轻轻晃动鸡胚， 让液体石蜡在鸡胚壳膜内层铺开，此时在照蛋灯 下即可清楚的看到鸡胚胎的位置。将注射针头刺 入胚胎的鄂下胸前，用针头轻轻拨动下颚及腿， 当进入羊膜腔时，能看到鸡胚随着针头的拨动而 动，即可注射200µl标本。将针头退出至½ 寸，将 另外200µl标本注入鸡胚尿囊腔。每个样本接种2全装置中 • (6)用消毒过的医用胶布封口 • (7)33～35oC 温箱培养鸡胚2～3 天。临床 采样标本通常培养3天，病毒传代通常培养 2天。 • 注意：鸡胚进行病毒分离培养时，每天检 查鸡胚生长情况，24小时内死亡的鸡胚， 认为是非特异死亡应弃去
+++”：大部分红细胞凝集，在管底铺成薄膜状，但尚有少数红细胞不
二、流感病毒分离之鸡胚培养法
• （一）、检视标记鸡胚 • （1）用照蛋灯检视鸡胚，判断鸡胚状态 • 血管：活胚血管清晰；死胚模糊，成淤血带 或淤血块 • 胎动：活胚有明显的自然运动，死胚无胎动 • 绒毛尿囊膜发育界限：密布血管的绒毛尿囊 膜与鸡胚 • 胎的另一面形成明显的界限 • （2）标记出鸡胚的气室与尿囊的界限 • （3）如果鸡胚是死胚、没有受精、有裂痕、发 育不全、或表面有好多渗水孔，应弃掉
• • • • •
6、牛血清白蛋白组分Ⅴ，7.5%溶液 7、临床样品0.5mL 8、1mL无菌移液管 9、10mL无菌移液管 10、15mL无菌离心管
• • • • •
（三）实验步骤 1、准备病毒生长液 （1）细胞维持液准备 500mL D-MEM液中加入 ①青、链霉素母液 5mL（终浓度达： 100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素） • ②牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL（终浓度： 0.2%） • ③HEPES缓冲液 12.5mL（终浓度： 25mM）
病毒的分离与鉴定
病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离病毒分离的一般程序是：检验标本→杀灭杂菌(青、链霉素)→接种易感的动物→出现病状鸡胚→病变或死亡细胞培养→细胞病变→鉴定病毒种型(血清学方法)无菌标本(脑脊液、血液、血浆、血清)可直接接种细胞、动物、鸡胚；无菌组织块经培养液洗液洗涤后制成10～20%悬液离…（一）病毒的分离病毒分离的一般程序是：检验标本→杀灭杂菌(青、链霉素)→接种易感的动物→出现病状鸡胚→病变或死亡细胞培养→细胞病变→鉴定病毒种型(血清学方法)无菌标本(脑脊液、血液、血浆、血清)可直接接种细胞、动物、鸡胚；无菌组织块经培养液洗液洗涤后制成10～20%悬液离心后，取上清接种；咽洗液、粪便、尿、感染组织或昆虫等污染标本在接种前先用抗生素处理，杀死杂菌。
1．细胞培养用分散的活细胞培养称细胞培养（Cell culture）。
所用培养液是含血清（通常为胎牛血清）、葡萄糖、氨基酸、维生素的平衡溶液，pH7.2～7.4。
细胞培养适于绝大多数病毒生长，是病毒实验室的常规技术。
原代细胞培养(Primary cell culture) 用胰蛋白酶将人胚（或动物）组织分散成单细胞，加一定培养液，37℃孵育1-2天后逐渐在培养瓶底部长成单层细胞，如人胚肾细胞、兔肾细胞。
原代细胞均为二倍体细胞，可用于产生病毒疫苗，如兔肾细胞生产风疹疫苗，鸡成纤维细胞产生麻疹疫苗，猴肾细胞生产脊液灰质炎疫苗。
因原代细胞不能持续传代培养，故不便用于诊断工作。
二倍体细胞培养(Diploid cell cultune) 原代细胞只能传2-3代细胞就退化，在多数细胞退化时，少数细胞能继续传下来，且保持染色体数为二倍体，称为二倍体细胞。
二倍体细胞生长迅速，并可传50代保持二倍体特征，通常是胚胎组织的成纤维细胞（如WI-38细胞系）。
二倍体细胞一经建立，应尽早将细胞悬浮于10%二甲基亚砜中，大量分装安瓿贮存于液氮（-196℃ ）内，做为“种子”，供以后传代用。
第七章2病毒分离鉴定PPT课件
优点：技术简单、来源充沛、价格低廉、数量可 大、不需特殊设备 。
缺点：很多病毒不能适应，主要是哺乳动物的 病毒。
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14
(三）细胞培养
细胞培养(cell culture)是指利用机械、酶或化 学方法使动物组织或传代细胞分散成单个乃至 2～4个细胞团悬液进行培养。
根据细胞的类型和培养 细胞代数的不同，可将 其分为两种。
有血凝素（HA）的病毒能凝集人或动物红细胞，称为血凝现 象，血凝现象能被相应抗体抑制称为血凝抑制试验，原理是 相应抗体与病毒结合后，阻止病毒表面HA与红细胞结合.
血凝试验
血凝抑制试验
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32
四、 电子显微镜检查
病毒的很多特征如大小、形态、结构等 必须借助电子显微镜进行检查。对于目前尚 难培养而形态又非常典型的病毒，可直接从 感染组织或分泌液，或者接种病料的鸡胚和 细胞培养收获的材料作电子显微镜检查，直 接观察病毒粒子。
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33
透射电子显微镜
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34
1. 正染法：超薄切片法
取材
戊二醛 固定
四氧化锇
清洗与 脱水
切片
染色
铀染 铅染
浸透 包埋 聚合
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35
鸡痘病毒（超薄切片）
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36
超薄切片法的优缺点：
优点：可观察病毒形态和形态发生过程 缺点：操作复杂，费时，但标本可长时间保存
测定抗体
潜伏期及前驱期 刚发病或急性期
较难查见 最多查见
未增多
未增多或增多 不明显
恢复期及康复期
很难查见
明显增多 （常超过4倍）
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2
一、标本的处理
缺点：很多病毒不能适应，主要是哺乳动物的 病毒。
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(三）细胞培养
细胞培养(cell culture)是指利用机械、酶或化 学方法使动物组织或传代细胞分散成单个乃至 2～4个细胞团悬液进行培养。
根据细胞的类型和培养 细胞代数的不同，可将 其分为两种。
有血凝素（HA）的病毒能凝集人或动物红细胞，称为血凝现 象，血凝现象能被相应抗体抑制称为血凝抑制试验，原理是 相应抗体与病毒结合后，阻止病毒表面HA与红细胞结合.
血凝试验
血凝抑制试验
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四、 电子显微镜检查
病毒的很多特征如大小、形态、结构等 必须借助电子显微镜进行检查。对于目前尚 难培养而形态又非常典型的病毒，可直接从 感染组织或分泌液，或者接种病料的鸡胚和 细胞培养收获的材料作电子显微镜检查，直 接观察病毒粒子。
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透射电子显微镜
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1. 正染法：超薄切片法
取材
戊二醛 固定
四氧化锇
清洗与 脱水
切片
染色
铀染 铅染
浸透 包埋 聚合
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35
鸡痘病毒（超薄切片）
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超薄切片法的优缺点：
优点：可观察病毒形态和形态发生过程 缺点：操作复杂，费时，但标本可长时间保存
测定抗体
潜伏期及前驱期 刚发病或急性期
较难查见 最多查见
未增多
未增多或增多 不明显
恢复期及康复期
很难查见
明显增多 （常超过4倍）
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2
一、标本的处理
常见病毒鉴定ppt课件
腮腺炎病 毒
球形，核心为单股负 链RNA，衣壳呈螺旋 对称，有包膜
一侧或双侧腮腺肿大，伴有疼痛、 发热
第一节 呼吸道病毒
三、其他呼吸道病毒
病毒名称 形态结构
所致疾病
腺病毒
球形、双链DNA、核 咽炎、扁桃体炎、肺炎、流行性眼
衣壳20面体对称、无 结膜炎、急性出血性膀胱炎、胃肠
包膜
炎等
副流感病 毒
球形、单负链RNA、 核衣壳螺旋对称、有 包膜
月
第二节 肝炎病毒
3.培养特性 易感动物：黑猩猩，狨猴，鹰面猴，短尾猴 允许性细胞：Vero、恒河猴胚肾细胞
（FRHK-4）、人肝癌细胞株（PLC/PRF/S） 等 在培养细胞中生长缓慢，无CPE
第二节 肝炎病毒
（二）微生物学检验
HAV-IgM检测：早期、快速诊断最可靠的血清学指标 HAV-IgG检测：主要用于了解既往感染史、疫苗免疫、效 果评价或流行病学调查 分离培养：原代肝细胞或恒河猴胚肾传代株细胞对HAV敏 感，生长缓慢，不引起细胞裂解
第十八章 常见病毒鉴定
本章内容
1 第一节 呼吸道病毒 2 第二节 肝炎病毒 3 第三节 反转录病毒 4 第四节 疱疹病毒 5 第五节 肠道病毒 6 第六节 朊粒及其他病毒
学习目标及重点
学习目标： 掌握流感病毒、肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、肠道病毒的主要生物学特点, 各病毒的传播途径、临床检验和防治原则 区别乙型肝炎病毒常见抗原抗体的组成及其临床意义 五种肝炎病毒常用鉴定方法 解释流感病毒变异和流行的关系 了解朊粒的生物学特征 本章重点： ★流感病毒、肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、肠道病毒的生物学特性和致病性 ★常见病毒的检验方法
第一节 呼吸道病毒
3.培养特性： 在鸡胚羊膜腔和尿囊腔中增殖 红细胞吸附试验（hemoadsorption test） 易感动物为雪貂 4.抵抗力： 抵抗力较弱 不耐热，56℃ 30分钟可灭活病毒 室温下很快丧失传染性
病毒分离鉴定54页PPT
61、奢侈是舒适的，否则就不是奢侈 。——CocoCha nel 62、少而好学，如日出之阳；壮而好学 ，如日 中之光 ；志而 好学， 如炳烛 之光。 ——刘 向 63、三军可夺帅也，匹夫不可夺志也。 ——孔 丘 64、人生就是学校。在那里，与其说好 的教师 是幸福 ，不如 说好的 教师是 不幸。 ——海 贝尔 65、接受挑战，就可以享受胜利的喜悦 。——杰纳勒 尔·乔治·S·巴顿
Hale Waihona Puke 谢谢！病毒分离鉴定
21、没有人陪你走一辈子，所以你要 适应孤 独，没 有人会 帮你一 辈子， 所以你 要奋斗 一生。 22、当眼泪流尽的时候，留下的应该 是坚强 。 23、要改变命运，首先改变自己。
24、勇气很有理由被当作人类德性之 首，因 为这种 德性保 证了所 有其余 的德性 。--温 斯顿． 丘吉尔 。 25、梯子的梯阶从来不是用来搁脚的 ，它只 是让人 们的脚 放上一 段时间 ，以便 让别一 只脚能 够再往 上登。
病毒的分离鉴定
病毒的分离与鉴定要证明某种疾病是由某一感染性病毒所引起，则必须满足以下原则：①从患病者体内分离出病毒；②在实验动物或寄主细胞中可以培养；③证明这种培养物具有滤过性；④在原始宿主或相关种属内能产生同样的病症；⑤能重新分离出病毒。
1. 病毒的分离1.1 标本的处理1.1.1 标本的收集a）粪便标本：将5g粪便标本和50ml PBS放入盛有20-25颗玻璃小珠的100ml无菌瓶中，搅拌成悬液，倒出上清，3000X g, 4C离心6min 。
b）拭子和生物体液：拭子浸在2-3ml 运载培养基中，将棉拭子中的液体尽量挤出以获得标本，如果液体被污染，应3000X g 4C离心30min。
c）组织标本：用无菌乳钵或匀浆器研磨组织标本，同时加入足量的PBS制备成20%的悬液，3000X g 4C离心30min。
1.1.2 除菌处理a）粪便可加青链霉素使最终浓度为10000单位/毫升，置4C过夜。
b）鼻咽拭子一般加抗生素最终浓度为2000单位/毫升，置4C作用4小时c）对乙醚有抵抗的病毒如鼻病毒、肠道病毒、呼肠孤病毒、腺病毒、痘病毒等，则可加入等量的乙醚4 C过夜除菌。
1.2病毒的分离培养病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养病毒必须使用细胞。
根据病毒的不同选用敏感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或离体细胞进行分离培养（细胞培养）。
1.2.1鸡胚接种a）鸡卵的选择：一般都选新鲜、10天以内的受精卵以保证规格质量上的一致b）孵育：孵育时可将鸡卵放入卵箱内进行，气室向上，孵育的最适温度为38--39C，相对湿度为40—70%，孵育8日后，鸡卵应每天翻动1—2次，以帮助鸡胚发育匀称和防止鸡胚膜粘连。
c）检卵：鸡卵孵育4〜5天后，即可用检卵器检查鸡胚发育情况（二天一次）。
①未受精鸡卵：在检卵器上仅见到模糊的阴影。
②活鸡卵：鸡胚发育4天后，在检卵器上就可见到清晰的血管，鸡卵内有一小黑点（鸡胚），有明显的自然转动。
③死胎：如果发现鸡卵血管模糊、扩张、胚胎活动呆滞或不能自主地转动，则可判断胚胎频死或已经死亡，应将其挑捡出来。
病毒的分离与鉴定(一)ppt课件
9
7
病毒的动物接种法－小白鼠脑内接种
实验材料 (1)脑炎病毒悬液. (2)小白鼠(3W龄). (3)1ml的注射器、针头. (4)碘酒、酒精棉球. 实验方法: (1)以左手将小白鼠头部和体部固定于台面. (2)用碘酒、酒精棉球消毒头部右侧眼、耳间部位
8
病毒的动物接种法－小白鼠脑内接种
(3)以1ml的注射器抽提病毒悬液,以右手持注射器, 将针头向眼外与耳根连线中点略偏向耳的方向刺 入颅腔,约进针2~3mm,注入量0.02~0.03ml. (4)注射完毕,将用过之物煮沸消毒. 实验结果: 接种后每日观察动物2次.动物一般在接种后3-4d后 开始发病,食欲减退,活动迟缓,耸毛、震颤、卷曲、 尾强直,逐渐导致麻痹、瘫痪而死亡.
实验九
1
病毒的分离与鉴定（一）
1、病毒的培养与鉴定 2、病毒的CPE过程 3、病毒的电镜照片观察 4、流感病毒的分离鉴定（一）
（1）鸡胚尿囊腔接种法 （2）病毒的动物接种法－小白鼠脑内
接种
2
流感病毒的分离鉴定
（1）鸡胚尿囊腔接种法 （2）病毒的动物接种法－小白鼠脑内接种 目的：熟悉人工培养病毒的常用方法及其操 作技术。
(+)
(—)
作血凝抑制试验 盲传鸡胚两代，仍为
阴性时报告阴性
5
实验方法：
(1)取孵育10~12d鸡胚, 在检卵灯下画出气室 界线,于胚胎附近无大 血管处画出标记作为 注射入口. (2)将卵置于卵架上,消 毒标记处,用无菌剪刀法：
(3)用灭菌注射器吸取流感病毒液 0.2ml,由小孔刺入0.5cm后,进行注射. (4)注射后,用无菌胶布 封孔,置35度温箱孵育. (5)每日在灯下检视鸡 胚情况(若鸡胚在接种 后24h内死亡为非特异 性死亡,应弃之).
7
病毒的动物接种法－小白鼠脑内接种
实验材料 (1)脑炎病毒悬液. (2)小白鼠(3W龄). (3)1ml的注射器、针头. (4)碘酒、酒精棉球. 实验方法: (1)以左手将小白鼠头部和体部固定于台面. (2)用碘酒、酒精棉球消毒头部右侧眼、耳间部位
8
病毒的动物接种法－小白鼠脑内接种
(3)以1ml的注射器抽提病毒悬液,以右手持注射器, 将针头向眼外与耳根连线中点略偏向耳的方向刺 入颅腔,约进针2~3mm,注入量0.02~0.03ml. (4)注射完毕,将用过之物煮沸消毒. 实验结果: 接种后每日观察动物2次.动物一般在接种后3-4d后 开始发病,食欲减退,活动迟缓,耸毛、震颤、卷曲、 尾强直,逐渐导致麻痹、瘫痪而死亡.
实验九
1
病毒的分离与鉴定（一）
1、病毒的培养与鉴定 2、病毒的CPE过程 3、病毒的电镜照片观察 4、流感病毒的分离鉴定（一）
（1）鸡胚尿囊腔接种法 （2）病毒的动物接种法－小白鼠脑内
接种
2
流感病毒的分离鉴定
（1）鸡胚尿囊腔接种法 （2）病毒的动物接种法－小白鼠脑内接种 目的：熟悉人工培养病毒的常用方法及其操 作技术。
(+)
(—)
作血凝抑制试验 盲传鸡胚两代，仍为
阴性时报告阴性
5
实验方法：
(1)取孵育10~12d鸡胚, 在检卵灯下画出气室 界线,于胚胎附近无大 血管处画出标记作为 注射入口. (2)将卵置于卵架上,消 毒标记处,用无菌剪刀法：
(3)用灭菌注射器吸取流感病毒液 0.2ml,由小孔刺入0.5cm后,进行注射. (4)注射后,用无菌胶布 封孔,置35度温箱孵育. (5)每日在灯下检视鸡 胚情况(若鸡胚在接种 后24h内死亡为非特异 性死亡,应弃之).
医学病毒学PPT课件
02 保持社交距离 避免近距离接触有症状的人，尽量保持至少1米的安全 距离。
03
佩戴口罩
在公共场所、尤其是室内环境佩戴医用口罩或N95口 罩，以阻挡含有病毒的飞沫进入呼吸道。
04
增强免疫力
保持充足的睡眠、均衡的饮食、适当的锻炼，以提高 身体免疫力，抵抗病毒侵袭。
05
接种疫苗
根据当地卫生部门的建议，及时接种相关疫苗，以降 低感染风险。
播的风险。
疫苗研发与使用
疫苗研发
通过科研机构和制药公司的合 作，加速针对新型病毒的疫苗
研发进程。
临床试验
确保疫苗在投入使用前经过严 格的临床试验，确保安全性和 有效性。
分阶段使用
疫苗上市后，根据疫情情况和 接种计划，分阶段、分人群进 行接种。
监测与评估
在疫苗使用过程中，持续监测 其安全性和有效性，并根据实
药物设计与筛选
03
基于病毒结构信息，设计和筛选能够抑制病毒复制或破坏病毒
颗粒的药物分子。
THANK YOU
感谢聆听
病毒基因组每天约产生 10^-5~10^-8个突变， 其中大部分为负突变（降 低生存能力的突变）。
病毒进化的规律与趋势
适应性进化
病毒在传播过程中逐渐适应宿主环境 的过程，表现为毒力增强或减弱。
协同进化
病毒与宿主之间相互影响、共同进化 的过程，如病毒抗原变异与宿主免疫 应答之间的协同进化。
定向进化
在选择压力下，病毒基因组朝着特定 方向进化的过程，如抗药性病毒的出 现。
血液传播
病毒通过血液、体液等途径传播，如丙肝病毒、 乙肝病毒等。
接触传播
病毒通过接触口、鼻、眼等黏膜或破损皮肤进入 人体，如HIV病毒、HBV病毒等。
微生物病毒ppt课件
微生物病毒ppt课件
contents
目录
• 微生物病毒概述 • 微生物病毒的结构与功能 • 微生物病毒的感染与传播 • 微生物病毒的检测与鉴定 • 微生物病毒的预防与控制 • 微生物病毒与人类健康
01 微生物病毒概述
定义与特点
定义
微生物病毒是一种寄生在活细胞内 的非细胞型微生物，由核酸和蛋白 质外壳组成，必须在活细胞内寄生 并以复制方式增殖。
成熟的、结构完整的、具有感染性的单个病 毒，也称为病毒颗粒。
病毒粒子的中心结构，由核酸和蛋白质组成， 核酸构成病毒的基因组。
衣壳（Capsid）
包膜（Envelope）
包围在核酸外面的蛋白质外壳，由一定数量 的壳粒组成，具有保护核酸和识别宿主细胞 的作用。
某些病毒在衣壳外还有一层包膜，由脂质和 蛋白质组成，具有保护病毒和帮助病毒进入 宿主细胞的作用。
通过空气、飞沫、气溶 胶等方式进入呼吸道， 引起呼吸道病毒感染。
消化道感染
通过污染的食物、水或 接触病毒污染的物体表 面，经口摄入消化道而
感染。
血液感染
病毒通过输血、注射、 蚊虫叮咬等方式进入血 液系统，引起病毒感染。
性接触感染
通过性接触传播，如艾 滋病病毒、人类乳头瘤
病毒等。
微生物病毒的传播方式
环境保护
在环境保护领域，病毒检测与鉴定可用于监测环境中病毒的分布和变 化情况，为环境保护提供科学依据。
05 微生物病毒的预 防与控制
微生物病毒的预防措施
个人卫生
保持良好的个人卫生习惯， 如勤洗手、戴口罩等，是 预防微生物病毒感染的基 本措施。
环境卫生
保持室内外环境清洁，定 期消毒，减少病毒在环境 中的传播。
特点
contents
目录
• 微生物病毒概述 • 微生物病毒的结构与功能 • 微生物病毒的感染与传播 • 微生物病毒的检测与鉴定 • 微生物病毒的预防与控制 • 微生物病毒与人类健康
01 微生物病毒概述
定义与特点
定义
微生物病毒是一种寄生在活细胞内 的非细胞型微生物，由核酸和蛋白 质外壳组成，必须在活细胞内寄生 并以复制方式增殖。
成熟的、结构完整的、具有感染性的单个病 毒，也称为病毒颗粒。
病毒粒子的中心结构，由核酸和蛋白质组成， 核酸构成病毒的基因组。
衣壳（Capsid）
包膜（Envelope）
包围在核酸外面的蛋白质外壳，由一定数量 的壳粒组成，具有保护核酸和识别宿主细胞 的作用。
某些病毒在衣壳外还有一层包膜，由脂质和 蛋白质组成，具有保护病毒和帮助病毒进入 宿主细胞的作用。
通过空气、飞沫、气溶 胶等方式进入呼吸道， 引起呼吸道病毒感染。
消化道感染
通过污染的食物、水或 接触病毒污染的物体表 面，经口摄入消化道而
感染。
血液感染
病毒通过输血、注射、 蚊虫叮咬等方式进入血 液系统，引起病毒感染。
性接触感染
通过性接触传播，如艾 滋病病毒、人类乳头瘤
病毒等。
微生物病毒的传播方式
环境保护
在环境保护领域，病毒检测与鉴定可用于监测环境中病毒的分布和变 化情况，为环境保护提供科学依据。
05 微生物病毒的预 防与控制
微生物病毒的预防措施
个人卫生
保持良好的个人卫生习惯， 如勤洗手、戴口罩等，是 预防微生物病毒感染的基 本措施。
环境卫生
保持室内外环境清洁，定 期消毒，减少病毒在环境 中的传播。
特点
流感的病毒分离和鉴定知识培训课件
分离后病毒的保存与运
低温保存
将分离到的病毒保存在低温环境 下，如-70℃或液氮中，以保持病 毒的活性。
包装与运输
根据国家相关规定，对病毒样本 进行包装和运输，确保安全可靠 。
分离技术的优缺点
细胞培养法的优点是操作简便、敏感性高，缺点是细胞株的来源和质量可能影响实 验结果。
鸡胚接种法的优点是操作简便、成本低，缺点是鸡胚的来源和质量可能影响实验结 果。
碎片。
病毒分离
将处理后的样本接种到敏感细胞 或鸡胚中，进行病毒的分离培养
。
病毒鉴定
通过病毒形态观察、免疫学检测 、核酸检测等方法对分离的病毒
进行鉴定。
实验操作中的常见问题与处理
样本污染
在实验操作过程中，要严格控制样本 的采集、运输和预处理，避免交叉污 染。如发生样本污染，应立即停止实 验，重新采集样本。
病毒鉴定的应用场景与选择
总结词
根据不同的应用场景选择合适的鉴定方法。
详细描述
在流感病毒的分离与鉴定过程中，应根据实际需求和应用场景选择合适的鉴定方法。形态学鉴定方法简单、快速 ，适用于初步筛选；免疫学鉴定方法特异性强、灵敏度高，适用于病毒抗原和抗体的检测；分子生物学鉴定方法 准确度高、分型能力强，适用于病毒核酸序列的分析。
免疫学方法的优点是灵敏度高、特异性强，缺点是抗体试剂的质量和实验操作可能 影响实验结果。
03
流感病毒鉴定技术
形态学鉴定
总结词
通过观察病毒形态、大小、染色特性 等指标，对病毒进行初步鉴定。
详细描述
形态学鉴定通常采用显微镜观察病毒 粒子，了解其形状、大小、染色特性 等特征，从而对病毒进行初步分类和 鉴定。
的竞争力。
法律法规要求
病毒感染实验诊断ppt课件
②不出现细胞病变现象。 ③细胞培养液pH的变化。
2.中和试验
病毒与特异性抗体进行免疫反应， 使病毒失去感染性，在细胞培养 和活的机体内不出现病变的试验。 常用细胞培养进行中和试验。如 果特异性抗体能中和病毒，使之 失去感染性，不出现细胞病变效 应，则该病毒为特异性抗体的同 型病毒，
用于病毒的分型诊断最具敏感和 准确性。也可用于检查患者病后 或人工免疫后，机体血清中抗体 增加情况。
2．电子显微镜检查 (1)电镜直接检查：早期病毒感染标 本的病毒颗粒。如“秋季泻”患儿 粪便中的轮状病毒、甲肝患者粪 便中的HAV，疱疹病毒的疱疹液， HBV患者血清，均可观察到特征性 病毒颗粒。
(2)免疫电镜检查：在标本中加入 抗体。使病毒聚集成块负染观 察，更易发现病毒体，灵敏度 可提高100倍。
9．免疫荧光抗体染色
将感染细胞固定，用特异抗血 清荧光标记染色，在荧光显微镜 下，可见细胞内荧光，即可确定 型别。
第三节病毒感染快速诊断
通过测定病毒的特异标志成分，如 特殊形态、特异的抗原成分及病毒 的核酸，早期确认病毒的感染，是 病毒学诊断的重大发展。
一、形态学检查
1．光学显微镜 观察病毒感染细胞出现的包涵体。 根据特点可作出辅助诊断。狂犬病 病毒在脑细胞出现嗜酸性的圆形或 椭圆形包涵体，称为内基小体。巨 细胞病毒在上皮细胞的细胞核内出 现周围绕有一轮晕似“猫头鹰眼”样 大型嗜酸性包涵体。
5．聚合酶链反应(PCR)
选择病毒的特异保守片段作为靶基 因，进行引物设计和扩增可诊断病 毒性感染。选择病毒的易变区，结 合RFLP，测序等技术可以对病毒进 行分型和突变的研究。
(1可通过RT-PCR技术， 将RNA逆转录为cDNA，再进行 PCR扩增。
传代细胞系
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病毒的动物接种法－小白鼠脑内接种
(3)以1ml的注射器抽提病毒悬液,以右手持注射器, 将针头向眼外与耳根连线中点略偏向耳的方向刺 入颅腔,约进针2~3mm,注入量0.02~0.03ml.
(4)注射完毕,将用过之物煮沸消毒.
• 实验结果:
接种后每日观察动物2次.动物一般在接种后3-4d后 开始发病,食欲减退,活动迟缓,耸毛、震颤、卷曲、 尾强直,逐渐导致麻痹、瘫痪而死亡.
(5)每日在灯下检视鸡
胚情况(若鸡胚在接种 后24h内死亡为非特异 性死亡,应弃之).
病毒的动物接种法－小白鼠脑内接种
• 实验材料
(1)脑炎病毒悬液. (2)小白鼠(3W龄). (3)1ml的注射器、针头. (4)碘酒、酒精棉球. • 实验方法: (1)以左手将小白鼠头部和体部固定于台面. (2)用碘酒、酒精棉球消毒头部右侧眼、耳间部位
实验方法：
(1)取孵育10~12d鸡胚, 在检卵灯下画出气室
界线,于胚胎附近无大
血管处画出标记作为
注射入口.
(2)将卵置于卵架上,消 毒标记处,用无菌剪刀 尖在标记处打一小孔.
实验方法：
(3)用灭菌注射器吸取流感病毒液 0.2ml,由小孔刺入0.5cm后,进行注射. (4)注射后,用无菌胶布 封孔,置35度温箱孵育.
病毒的分离与 鉴定
病毒的分离与鉴定（一）
• 1、病毒的培养与鉴定
• 2、病毒的CPE过程
• 3、病毒的电镜照片观察
• 4、流感病毒的分离鉴定（一） • •
（1）鸡胚尿囊腔接种法 （2）病毒的动物接种法－小白鼠脑内 接种
流感病毒的分离鉴定
• （1）鸡胚病毒的常用方法及其操 作技术。
鸡胚尿囊腔接种法
• 实验材料： • (1)来亨鸡受精卵、卵架、检卵灯。
• (2)碘酒、酒精消毒棉球。
• (3)灭菌的手术刀、镊子、剪刀。 • (4)1ml注射器及针头。 • (5)病毒液:流感病毒、新城鸡瘟病毒。 • (6)无菌胶布。
•
分离鉴定程序 病人急性期咽喉含漱液 (经双抗处理) 鸡胚培养(羊水囊或尿囊腔) 35℃ ，72h 收获：取羊水或尿囊液作血凝试验 (+) (—) 作血凝抑制试验 盲传鸡胚两代，仍为 阴性时报告阴性