现代仪器分析-高效毛细管电泳法在药物分析中的应用 ppt课件

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几种常用的毛细管电泳分离模式
（1）毛细管区带电泳 （Capillary Zone Electrophoresis, CZE=FSCE） 是指溶质在毛细管内均一的背景电解质缓冲溶
液中以不同速率迁移而形成彼此分离的溶质带的电 泳模式，分离的基础是淌度的差别。
CZE只能分析带有电荷的离子而不能分离中性
小，柱长增加， l 高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理
论塔板数高达几十万块/米，特殊柱子可以达到数 百万甚至数千万。
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毛细管电泳原理示意图
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二、毛细管电泳的主要模式
毛细管区带电泳（CZE） 毛细管凝胶电泳（CGE） 毛细管等电聚焦（CIEF） 毛细管电动色谱（ MECC; MEEKC etc.） 毛细管电色谱（CEC） 毛细管等速电泳（CITP） 亲和毛细管电泳（ACE） 非水相毛细管电泳（NACE）
质谱分析法
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精品资料
• 你怎么称呼老师？
• 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你 是否会认为老师的教学方法需要改进？
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭
• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
➢ 带电微粒在毛细管内实际移动的速度为电泳流和电渗流的 矢量和。
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高效毛细管电泳技术上的重要突破
高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进： Ø 一是采用了25~75µm内径的毛细管； Ø 二是采用了高达数千伏的电压。 l 毛细管的采用使产生的热量能够较快散发，大大
减小了温度效应，使电场电压可以很高。 l 电压升高，电场推动力大，又可进一步使柱径变
CAPS* (3-(环己胺)-1-丙磺酸钠)
9.7-11.7
* zห้องสมุดไป่ตู้itterionic buffer (两性离子缓冲液 )
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*From Landers, Handbook of Capillary Electrophoresis, 2nd Ed., CRC Press(1997)
Buffer Modifiers (改性剂 )for CZE
5.4-7.4
PIPES (哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸) )
5.8-7.8
Phosphate
6.2-8.2
HEPES* (羟乙基哌嗪乙硫磺酸)
6.6-8.6
Tricine*(三(羟甲基)甲基甘氨酸)
7.2-9.2
Tris (三羟甲基氨基甲烷 ）
7.3-9.3
Borate (硼酸盐)
8.1-10.1
现代仪器分析
第一讲: 高效毛细管电泳法 在药物分析中的应用
College of Pharmacy, Shanxi Medical University
Prof. Anjia CHEN
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第一节 仪器分析法概述 (generalization)
色谱分析法 √
光谱分析法 √
仪器分析法
电化学分析法
HPCE: 以内径10~200µm的毛细管柱为分离通道， 对大分子和小分子等进行高效分离和检测的有关技 术的统称。
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一、HPCE原理
分离的原因：电泳迁移，电渗迁移
➢ 电泳迁移：在高压电场下，样本中各带电离子依据其所带 电荷的性质、多少及大小、形状的不同向相反方向移动。
➢ 电渗迁移：电渗迁移指在电场作用下溶液相对于带电管壁 移动的现象。当毛细管内充满缓冲溶液时，毛细管壁上的 硅羟基发生解离，生成的氢离子溶解在溶液中，这样就使 毛细管壁带上负电荷与溶液形成双电层，在毛细管的两端 加上直流电场后，带正电的溶液就会整体的向负极端移动， 这就形成了电渗流。
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带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流速度的矢量和。
正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出；
阴离子：两种效应的运动方向相反； u电渗流 ＞u电泳时,阴离子在负极最后 流出,在这种情况下,不但可以按类 分离,同种类离子由于差速迁移被 相互分离。
其他仪器分析法有：
Ø 流动注射分析 (Flow Injection Analysis, FIA) Ø 热分析 (Thermal Analysis, TA) Ø X射线分析 (X-ray Analysis)
…
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第二节 HPCE基本知识回顾
毛细管电泳(CE: Capillary Electrophoresis)又称高 效毛细管电泳(HPCE),是指离子或带电粒子以弹性石 英毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,依 据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实 现分离的液相分离分析技术。
物质，是最基本、最普遍的一种分离模式。
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❖ CZE中背景电解质的浓度一般高于试样，起运 载电流的作用，其离子有一定的迁移率。当电流 通过时，缓冲溶液中的阴、阳离子以一特定的速 度分别向正极和负极移动。同时试样中的不同离 子将按各自的恒定速度移动，形成背景电解质离 子流动中伴随有试样离子的流动。如果试样中不 同离子的迁移率差别很大，就能将不同离子分离。
Organic Solvent – Solubilizer (增溶剂), EOF modifier (ex. methanol, acetonitrile, ethylene glycol (乙二醇) )
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Typical Buffer Systems/FSCE(CZE)
BUFFER
Useful pH Range
Phosphate
1.1-3.1
Formate
2.8-4.8
Acetate
3.8-5.8
MES* (2-(N-吗啉)乙磺酸介绍)
5.2-7.2
Citrate (柠檬酸盐 )
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Buffer Considerations
1. Typical [buffer]: 25-200mM 2. Good buffering capacity within the desired range 3. Minimal UV absorbance（低紫外吸收） 4. Low conductivity if possible (低电导) 5. Inexpensive/available (廉价/有效)