可见分光光度法和紫外分光光度法
可见分光光度法和紫外分光光度法
二、物质的吸收光谱 吸收光谱：溶液对不同 波长的光的吸收程度不 同，以吸收程度（吸光 度）为纵坐标，以波长 为横坐标作图，所得曲 线，即为吸收光谱或称 吸收曲线。
最大吸收波长 ：吸收光 谱中，吸光度最大处的 波长为最大吸收波长， 用max表示。
三、透光率和吸光度
I0
Ia
It
I0 = I a + I t
解 设酶和AMP的浓度分别为y和z
为260nm
0.58 ═ 1.521041.00y+1.51041.00z
为280nm
0.46═2.961041.00y+2.41031.00z 解方程得：y ═1.410-5molL–1 z ═2.510-5 molL1
答： 酶的浓度为1.410-5molL–1
lg0.398 A (480nm ) 1.33103 L mol1 cm 1 cb 1.5010 4 mol L1 2.00cm
1 1.33103 L mol1 cm 1 a(480nm) ε (480nm) 5.30L g 1 cm 1 M 251g mol1
例 已知某化合物的相对分子质量为251，将此化合 物用乙醇作溶剂配成浓度为0.150mmolL-1的溶液， 在 4 8 0 nm 波 长 处 用 2 . 0 0 cm 吸 收 池 测 得 透 光 率 为 39.8%，求该化合物在上述条件下的摩尔吸光系数。
解 由Lambert-Beer定律可得：
A lg T ε cb cb
（二）标准对照法
用标准品配制一个已知浓度的标准溶液，在选 定的波长处用同样厚度的吸收池分别测定标准溶 液和未知溶液的吸光度，用计算公式求出未知溶 液的浓度。
As Ax cs c x cs c x Ax As
可见和紫外分光光度法
Ir
I0
It
c b
Ia
I0= Ia+ It
T It I0
T：透光率
Ambert-Beer’s law
A= kbc
b：液层厚度，即吸收池厚度，单位 cm
c：溶液浓度
当单位为mol/L时，k为摩尔吸光系数，单位为：
L·mol-1·cm-1
E 当单位为g/ml时，k为比吸光系数，用 1% 表示，单
朗伯-比尔定律是紫外-可见分光光度法定量测定 的理论基础
吸光度具有加和性：
总吸光度等于吸收介质内各吸光物质吸光度的总 和 A=A1+A2+A3+···=κ1bc1+κ2bc2+κ3bc3+ ···
第二节 可见－紫外分光光度法
一、可见及紫外分光光度计
光源
吸 收 单色器 池 检测器 信号显示系统
样品
性分析的依据。
③λmax几乎不随物质的浓度而变
④λmax附近，A最大，并与浓度c呈正
比关系 ——定量分析依据。
⑤ 远离λmax的光,物质几乎不吸收光 （A→0）,这些光的A与物质的c无
直接关系——不作定量分析依据。
三、吸光度和透光率（ absorbance and transmittance ）
可见和紫外分光光度法
第一节 分光光度法基本原理－吸收光谱和 朗伯－比尔定律
第二节 可见－紫外分光光度法
第一节 分光光度法基本原理－吸收 光谱和朗伯－比尔定律
分光光度法：利用物质的吸收光谱和光的吸收定律
对物质进行定性或定量的方法。
一、紫外光谱的产生
分子中外层电子跃迁产生紫外光谱
光与电磁波
可见-紫外分光光度法：研究物质在可见、紫
02-紫外可见分光光度法全
例：Cd2+浓度为140 umol ·L-1 ，双 硫腙法显色测定波长为520nm，液
层厚度2cm，吸光度为0.22，求 和
透光率T。
解： (1) A = b c
0.22 = 2 140 10-6
= 785.7 L ·mol-1 ·cm-1
(2) A =－lgT = 0.22 lgT = －0.22 T = 10－0.22 = 0.60 = 60%
（ε=200-2000L /（mol*cm ），如苯环。
（4） 210-250 nm有强吸收峰，表明可能含有2个共轭双键 ；在260nm,300 nm,330 nm有强吸收峰，说明是3个或3个以 上双键的共轭体系。
（5)若吸收峰延伸至可见光区，则可能是长链共轭或稠环 化合物
习题P46第21,22题
第三节 紫外可见分光光度法的定量分析 P9
照射分子，由于分子、原子或离子的能级是量子化的，不
连续的，只有光子的能量(h)与被照射物质粒子的基态和
激发态能量之差(E)相等时，才能被吸收。
△ E = h （ h为普朗克常数）
不同物质的基态和激发态的能量差不同，选择吸收光
子的能量也不同，即吸收的波长不同。
2、光的种类 P7
➢具有单一波长的光叫单色光，比如红，蓝光等。 ➢由不同波长的光组成的光叫复色光。比如日光等 ➢如两种适当颜色的单色光按适当的强度比例混合 能得到白光，则这两种颜色的光叫做互补色光。
A = K·b ·c
c：物质的量浓度(mol ·L-1) K:吸光系数。
b：为液层厚度(cm)
应用的条件：
入射光必须是单色光； 吸收发生在稀的均匀的介质中； 吸收过程中，吸收物质互相不发生作用。
3、吸光系数（K）
紫外分光光度法和可见光分光光度法的异同
紫外分光光度法和可见光分光光度法的异同紫外分光光度法和可见光分光光度法，听起来是不是有点拗口？别担心，咱们慢慢聊。
紫外分光光度法，顾名思义，它主要工作在紫外线区域。
这种方法能让我们“偷窥”到一些肉眼看不见的东西。
比如，想知道水里有没有杂质？紫外分光光度法可以精准地告诉你，不信你试试！而可见光分光光度法呢，主要是用来分析那些能被我们眼睛看到的颜色，像红色、蓝色、绿色这些。
你知道的，水里的红色染料和蓝色染料，都是这玩意儿的“主场”。
紫外光和可见光，都是光谱的一部分，但它们的工作原理和应用却大相径庭。
再说说它们的检测对象，紫外分光光度法常常用来检测一些化合物的浓度，特别是那些在紫外区域有吸收特性的物质。
你可以想象一下，就像侦探在找线索，它能帮助科学家找到隐藏的化学成分。
而可见光分光光度法则更像是舞台上的演员，光彩夺目，专门用来分析那些在可见光区域的物质。
有些化合物在紫外光下可能“失踪”，但在可见光下却能光芒四射。
想想看，这就像是有些人在人群中显得特别突出，格外吸引眼球。
说到应用，紫外分光光度法在医学、环境监测和制药等领域都大显身手。
想要检测血液中的某种药物浓度，紫外分光光度法绝对是个好帮手。
可见光分光光度法则常见于食品和饮料行业，检测饮料的色素含量，保证我们的饮品既好看又安全。
谁会喜欢喝那种颜色怪异的饮料呢？食品中的色素含量与我们的生活息息相关，健康可不能掉以轻心。
这两种方法在仪器上也有点差异。
紫外分光光度计一般比较复杂，光源主要是氘灯，波长范围广，适合各种检测需求。
而可见光分光光度计呢，通常简单很多，光源用的是氙灯或者白炽灯，操作起来轻松愉快，适合日常使用。
就好比，一个是驾校里的赛车，一个是街边的小电动车，各有各的优缺点。
不过，别以为这两者就没有交集。
实际上，很多时候，紫外分光光度法和可见光分光光度法可以相辅相成。
比如，在某些复杂样品的分析中，先用紫外法进行初步筛选，再用可见法进一步确认。
就像侦探小说中，先通过蛛丝马迹找到嫌疑人，再通过细节锁定真相，逻辑清晰，层层推进。
紫外-可见分光光度法(6)
A
0.6
0.5
max=510 nm
0.4
0.3
0.2
0.1
0
400
450
500
550
600
波长（nm）
邻二氮菲亚铁溶液 吸收曲线
吸光度最大时， 对应的波长为 最大吸收波长 （λmax）
3.双波长分光光度计
用两不同波长的单色光交替通过 吸收池，得到不同波长处吸光度 的差值进行测定,无需参比池。
§4.3 分析条件的选择
仪器条件 的选择
测狭吸 量缝光 波宽度 长度的
范 围
分析条件的选择
显色条件选择
溶
显 的色 要剂 求反
应
的 选 择
显 色 条 件
剂 参 比 溶 液
参比溶液 试样平 剂品行 参参操 比比作 溶溶参 液液比
氙灯
氢灯
钨灯
2．单色器：
其作用是将光源发射的复合光分解 成单色光，并可从中选出任一波长单 色光的光学系统。包括狭缝、色散元 件和透镜系统。
色散元件：是将复合光分解成单
色光，有棱镜或光栅两种。
光栅示意图
一、基本构造
3.吸收池
玻璃比色皿——仅适用于可见光区 石英比色皿——用于紫外和可见光区
要求
仪器分析模式设定显示窗拉杆样品室0t100t波长设定仪器分析紫外分光光度计与可见分光光度计的差异名称名称可见分光光度计可见分光光度计紫外分光光度计紫外分光光度计波长范围波长范围光源光源吸收池吸收池材料材料仪器分析名称名称可见分光光度法可见分光光度法紫外分光光度法紫外分光光度法波长范围波长范围可见光可见光400400760nm760nm紫外光紫外光200200400nm400nm光源光源卤钨灯卤钨灯氙灯氙灯吸收池吸收池材料材料玻璃玻璃石英石英石英石英紫外分光光度法与可见分光光度法的差异仪器分析双波长分光光度双波长分光光度单波长单光束分光光度单波长单光束分光光度单波长双光束分光光度单波长双光束分光光度一束光分为一束光分为强度相等的强度相等的两束分别两束分别通过通过样品池样品池用两不同波长的单色光交替通过用两不同波长的单色光交替通过吸收池得到不同波长处吸光度吸收池得到不同波长处吸光度的差值进行测定的差值进行测定无需参比池
分光光度法.
3、溶液酸度
a 酸度过大---酸效应 Mn+ + n HL MLn ＋ nH+ 酸度过小—水解效应 Mn+ + nOHM(OH)n b
C显色剂
提高测量灵敏度和准确度方法
（二）、选择合适测定条件 3、溶液酸度
磺基水杨酸离子Sal2-与Fe3+形成配合物 pH 配合物 颜色
cb
=1.33×103L.mol.cm-1 = 0.150×10-3×2.00 1.33×103 =5.30L.g-1.cm-1 a= /M= 251
-lg0.398
练习：P286/5
例：某有色溶液在1.00cm吸收池中，测得其 透光率T=60%，若改用2cm的吸收池时，其 T为？
解： A = k b = - lgT b=1.00 时 A1= -lg0.6 b=2.00 时 A2 ＝2A1 ＝ -2lg0.6 = -lg0.36 T=0. 36
= aM
(a) ,溶液对入射光吸收 。 >103,可进行分光光度分析
分光光度法基本原理
一、Lambert-Beer 定律
例：浓度为0.150mmol.L-1某化合物 (Mr=251) 溶液，在480nm波长处用2.00cm吸收池测得 透光率为39.8%, 求、a.
解： =
A
cb
=
-lgT
例：P284/13-3
解：已知 a(361)=20.7L.g-1.cm-1 b=1.00cm A=0.618 样=0.030g.L-1
测 A/ab 0.618/20.71.00 = = 质量分数= 样 样 0.030
= 0.997
本章要求
近紫外区的波长范围
近紫外区的波长范围泊岸记与你一起，见证青春！今天，从这章开始来给大家讲解《仪器分析》的知识点然后后期如果有时间我会尽力安排一个语音课的录入方便大家学习纯用爱发电，希望得到大家的支持！！多多宣传，多多转发在这个时间段，能带给大家一些帮助我就很开心了！紫外-可见分光光度法分光光度法一、定义二、分类1、可见分光光度法（400—800nm，可见光区）用此吸收光谱进行定性、定量及结构解析的方法称为可见分光光度法。
2、紫外分光光度法（200—400nm，近紫外区）3、红外分光光度法（0.76—500μm，中红外区）三、紫外—可见分光光度法的特点四物质对光的选择性吸收一、UV-Vis光谱的产生分子受电磁波辐射、吸收能量后其能量变化：DE=DE振+DE转+DE电子则分子内运动涉及三种跃迁能级，所需能量大小顺序：DE电子>DE振>DE转UV-Vis光谱是讨论分子中价电子在不同的分子轨道之间跃迁的能级关系UV-Vis光谱是电子光谱、分子光谱、吸收光谱、带状光谱二、UV-Vis光谱的电子跃迁类型1、分子中价电子的类型参与成键的s、s*；p、p*电子未参与成键而仍处于原子轨道中的n电子2、UV-Vis光谱的电子跃迁类型电子能级间隔越小，跃迁时吸收光子的能量越小，波长越长，波数越小，频率越低1）σ→σ*的跃迁发生在含有单键的饱和有机化合物，处于σ成键轨道上的电子吸收适当的能量后，可以将σ电子激发到σ*反键轨道上，从而产生σ→σ*的跃迁。
分子中σ键比较牢固，跃迁需要能量较高，吸收峰的波长一般都小于200nm，处于远紫外区。
在200～400nm范围内没有吸收。
饱和烃化合物的σ→σ*跃迁出现在远紫外区2）π→π*跃迁对应化合物：含有不饱和基团有机化合物C=C、C=N、C=O、CºC等特征：p→p*跃迁吸光系数值大（e>104，强吸收）所需激发能量比σ→σ*要低孤立的π→π*吸收峰的波长在200nm附近，分子中若含有共轭双键，使π→π*跃迁所需能量降低，共轭系统越长，越向长波方向移动，且吸收增强。
第四章紫外-可见分光光度法
（三）有机化合物的紫外、可见光谱
1. 饱和烃及其取代衍生物 σ→σ*、n→σ* 2. 不饱和烃及共轭烯烃 σ→σ*、π→π* 3. 羰基化合物 n→σ*、π→π*和n→π* 4. 苯及其衍生物 E1带、 E2带、 B带 5. 稠环和杂环
当l以cm，c以mol/L为单位时，k称为摩尔吸 光系数，用ε表示，它比a更为常用，ε的单位 为L mol-1 cm-1，即： A = ε c l
当l以cm，c以百分浓度g/100mL为单位时，k 称为比吸光系数，用A1cm1%表示 ε = 0.1 M A1cm1%
用比吸光系数的表示方法特别适用于摩尔质 量未知的化合物。
（二）配位场跃迁
1. f-f跃迁
镧系和铜系元素的离子对紫外和可见光的吸收是 基于内层f电子跃迁而产生的，其吸收光谱是由一些狭 窄的特征吸收峰组成，且这些吸收峰不易受金属离子 所处的配位环境的影响。
2. d-d跃迁
过渡金属离子的d轨道在受到配位体场的作用时 产生分裂。d电子在能级不同的d轨道间跃迁，吸收紫 外或可见光产生吸收光谱。这种光谱的吸收带比较 宽，吸收峰强烈地受配位环境的影响。
光。
3. 吸收池
功能：盛放分析试样（一般是液体）
4. 检测器 功能：检测光信号，测量单色光透过溶
液后光强度变化的一种装置。 5. 信号显示系统
6. 紫外一可见分光光度计的类型
(1) 单波长单光束分光光度计
缺点：测量结果受电源波动的影响较大， 误差较大。
(2) 单波长双光束分光光度计
一个环外双键
5nm
同环二烯 39nm 一个β烷基 12nm 三个γ+烷基 54nm
第四章 紫外-可见分光光度法
仪器分析
式中：A，吸光度，无量刚；
l，液层厚度(光程长度)，cm；
c，溶液的浓度；
k, 称为吸光系数，仅与入射光波长和强度、 溶液的性质及温度有关，与浓度无关。
仪器分析
影响吸光系数的因素及意义
影响吸光系数的因素
物质的性质 溶剂 入射光波长、强度 温度
意义
吸光系数越大，灵敏度越高
二、朗伯-比尔定律
色皿拉入光路中，按100%T 键 5.测定：将第2个比色皿中的参比溶液弃去，倒入待测溶液并拉入光路中
，稳定后读数。 注意：改变波长，必须重新调零
倒溶液时远离仪器，避免溅湿仪器
仪器分析
紫外分光光度计与可见分光光度计的差异
名称
可见分光光度计
紫外分光光度计
波长范围 光源
吸收池 材料
仪器分析
紫外分光光度法与可见分光光度法的差异
二、朗伯-比尔定律
仪器分析
（一）光的吸收定律——定量分析的依据
当一束平行的单色光通过某一均匀、无散射的含 有吸光物质的溶液时，在入射光的波长、强度以及溶
液的温度等因素保持不变的情况下，该溶液的吸光
度A与溶液的浓度c及溶液层的厚度l 的乘积成
正比关系。称为朗伯-比尔定律：
A klc
朗伯—比耳定律数学表达式：
名称
可见分光光度法
紫外分光光度法
波长范围
光源
吸收池 材料
可见光 (400～760nm)
钨灯 卤钨灯 氙灯 玻璃 石英
紫外光 (200～400nm)
氢灯 氘灯
石英
仪器分析
二、常见紫外-可见分光光度计类型
光
①单波长单光束分光光度计
度
计
仪器分析：紫外-可见分光光度法-定量分析
录
Conten点 方法原理
紫外分光光度法的分析应用
三、紫外分光光度法的分析应用 对照品 比较法
定量分析
比色法
定量 分析
吸收系 数法
计算分 光光度
法
三、紫外分光光度法的分析应用
定量分析 对照品比较法
按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液 中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的100%±10%， 所用溶剂也应完全一致，在规定的波长测定供试品溶液和对照品溶液的 吸光度后，按公式计算供试品中被测溶液的浓度
求得ｃｂ。
对于（３），需要解方程组
感谢观看
三、紫外分光光度法的分析应用
定量分析 对照品比较法
计算供试品中被测溶液的浓度∶ cx=（Ax/Ar）cr
式中 cx为供试品溶液的浓度； Ax为供试品溶液的吸光度； cr为对照品溶 液的浓度； Ar为对照品溶液的吸光度。
三、紫外分光光度法的分析应用
定量分析 吸收系数法
按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其 吸光度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本 法测定时，吸收系数通常应大于100，并注意仪器的校正和检 定。
三、紫外分光光度法的分析应用 定量分析-单组分定量分析方法
标准曲线法：配制一系列（５－９）个不同ｃ的标准溶液，在 适当λ－通常为λｍａｘ下，以适当的空白溶液作参比，分别测定 Ａ，做出Ａ－ｃ曲线，在相同测定条件下测得试液吸光度Ａｘ， 计算出对应的Ａｘ。
三、紫外分光光度法的分析应用 定量分析-单组分定量分析方法
三、紫外分光光度法的分析应用
定量分析 计算分光光度法
计算分光光度法有多种，使用时应按各品种项下规定的方法进 行。当吸光度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时， 波长的微小变化可能对测定结果造成显著影响，故对照品和供 试品的测试条件应尽可能一致。
第十三章 可见和紫外分光光度法
第十三章 可见和紫外分光光度法分光光度法(spectrophotometry)是一种现代仪器分析方法，它是利用物质的吸收光谱和光的吸收定律对物质进行定性或定量分析的。
根据所用光源波长的不同，分光光度法又可分为：光源波长在380 nm ~ 780 nm 为可见分光光度法；10 nm ~ 380 nm 为紫外分光光度法(常用波长为200 nm ~ 380 nm)；780 nm ~ 3⨯105 nm 为红外分光光度法。
可见-紫外分光光度法通过测定物质对特定波长光的吸收，求出物质的含量或对物质进行定性。
它的优点是选择性好，灵敏度高，一般物质可测到10-3 mol •L -1～10-6 mol •L -1；相对误差虽比滴定分析大，但对微量分析而言，绝对误差极小，符合分析准确度好的要求；仪器设备简单，操作便捷，应用广泛，在化工、环保、医药、卫生、生物等领域中常用来分析物质的组成和结构、测定化合物的含量及研究生化过程等。
本章主要学习可见-紫外分光光度法基本原理和方法。
第一节 分光光度法基本原理——吸收光谱和朗伯－比耳定律一、吸收光谱的产生与吸收曲线（一）原子光谱和分子光谱当原子中的电子吸收或释放一定能量后将从一个能级(E 1)轨道跃迁到另一个能级(E 2)轨道上，吸收或释放的能量可以是具有一定波长的光。
产生的光波波长λ 与跃迁前后两个能级的能量差有关21chc hc hc h E E E λνν====∆- 式中h 为普朗克常量；c 为光速；ν 为频率。
不同能级间电子的跃迁产生的能量差不同，因此吸收或发射的光的波长也就不同，这便形成了相应的原子的吸收或发射光谱。
它们都是不连续的线状光谱。
不同元素的原子其电子结构不同，能级结构不同，因而有其特征的光谱线。
利用此类性质的分析法称为原子光谱法。
分子是由多个原子结合而成，分子及其内部粒子存在着三种与光的吸收或发射有关的运动形式：价电子在分子轨道上的运动；原子或原子团相对于连接它们的化学键的振动和分子绕着其重心转动。
可见分光光度法和紫外分光光度法
光栅是利用光的衍射与干涉作用制成的，它可用于紫 是利用光的衍射 干涉作用制成的 它可用于紫 衍射与 作用制成的，
外、可见及红外光域，而且在整个波长区具有良好的、几 可见及红外光域 而且在整个波长区具有良好的、 乎均匀一致的分辨能力。它具有色散波长范围宽、 乎均匀一致的分辨能力。它具有色散波长范围宽、分辨本 领高、成本低、便于保存和易于制备等优点。缺点是各级 领高、成本低、便于保存和易于制备等优点。缺点是各级 光谱会重叠而产生干扰。 光谱会重叠而产生干扰。 Back
εmax表明了该吸收物质最大限度的吸光能力，也反映了 表明了该吸收物质最大限度的吸光能力 最大限度的吸光能力， 光度法测定该物质可能达到的最大灵敏度， 越大， 光度法测定该物质可能达到的最大灵敏度，εmax越大，
表明该物质的吸光能力越强， 表明该物质的吸光能力越强，用光度法测定该物质的灵 敏度越高，ε>1000即可进行分光光度法测定。 敏度越高， 即可进行分光光度法测定。 即可进行分光光度法测定
（四）检测器 检测器的功能是检测信号、测量单色光透过溶液后光 检测器的功能是检测信号、 强度变化的一种装置。 强度变化的一种装置。 常用的检测器有光电池、光电管和光电倍增管等。 常用的检测器有光电池、光电管和光电倍增管等 光电池 硒光电池对光的敏感范围为300~800nm，其中又以500 ，其中又以 硒光电池对光的敏感范围为 ~ 600nm最为灵敏。这种光电池的特点是能产生可直接推 最为灵敏。 最为灵敏 动微安表或检流计的光电流， 动微安表或检流计的光电流，但由于容易出现疲劳效应而 只能用于低档的分光光度计中。 只能用于低档的分光光度计中。 光电管在紫外 可见分光光度计上应用较为广泛。 光电管在紫外-可见分光光度计上应用较为广泛。 在紫外 可见分光光度计上应用较为广泛 光电倍增管是检测微弱光最常用的光电元件，它的灵 光电倍增管是检测微弱光最常用的光电元件， 敏度比一般的光电管要高200倍，因此可使用较窄的单色器 敏度比一般的光电管要高 倍 狭缝，从而对光谱的精细结构有较好的分辨能力。 狭缝，从而对光谱的精细结构有较好的分辨能力。back
第二章 紫外-可见分光光度法
1、光源
作用：供给符合要求的入射光。 （1）可见光光源 常见的可见光光源有：钨丝灯和卤钨灯。 （2）紫外光光源 常见的紫外光光源有：氢灯和氘灯。 •另外，为了使光源发出的光在测量时稳定，光 源的供电一般都要用稳压电源，即加有一个稳 压器。
2、单色器
作用：把光源发出的连续光谱分解成单色光，并 能准确方便地“取出”所需要的某一波长的光， 它是分光光度计的心脏部分。 组成：单色器一般由狭缝、色散元件（棱镜和光 栅）、透镜系统组成。 （1）棱镜单色器 •玻璃棱镜：可吸收紫外光，只能用于可见光区域。 •石英棱镜：用于紫外、可见和近红外三个光区域。 （2）光栅单色器 •可用于紫外、可见及红外光区域，目前生产的紫外可见分光光度计大多采用光栅作为色散元件。
•可见分光光度计：使用波长范围是400～780nm， 只能用于测量有色溶液的吸光度 •紫外-可见分光光度计：使用波长范围是200～ 1000nm，可测量在紫外、可见、近红外有吸收 的物质的吸光度。
四、分光光度计的维护 1、仪器对工作环境的要求
•稳固、温度15～28℃、干燥、无腐蚀性气体、 光线不宜过强
•可见分光光度计：使用波长范围是400～780nm， 只能用于测量有色溶液的吸光度 •紫外-可见分光光度计：使用波长范围是200～ 1000nm，可测量在紫外、可见、近红外有吸收 的物质的吸光度。
2、紫外-可见分光光度计——双光束
•/vlabcq/flash/分光光度计/分光光度 计.html
二、紫外-可见分光光度计的类型及特点 1、按使用的波长范围分
•可见分光光度计：使用波长范围是400～780nm， 只能用于测量有色溶液的吸光度 •紫外-可见分光光度计：使用波长范围是200～ 1000nm，可测量在紫外、可见、近红外有吸收 的物质的吸光度。
紫外光和可见光分光光度法对比
紫外光和可见光分光光度法对比分光光度法是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的分析方法，可以通过测量样品在不同波长下吸收或透过光的能力来获得样品的信息。
紫外光和可见光分光光度法是其中两种常用的方法。
本文将对紫外光和可见光分光光度法进行对比分析，从仪器原理、应用范围、检测灵敏度等方面进行综合评估。
一、仪器原理1.1紫外光分光光度法紫外光分光光度法主要利用紫外光区域（200-400nm）内物质与电磁辐射相互作用的特性进行分析。
它的原理是通过测量样品在紫外光照射下所吸收的光的强度变化，进而推测样品中所含有的物质的浓度或质量。
1.2可见光分光光度法可见光分光光度法主要利用可见光区域（400-800nm）内物质对电磁辐射的吸收特性进行分析。
与紫外光分光光度法类似，可见光分光光度法也通过测量样品在可见光照射下所吸收的光的强度变化，来推测样品中所含物质的浓度或质量。
二、应用范围2.1紫外光分光光度法紫外光分光光度法广泛应用于分析生物大分子（如蛋白质、核酸等）结构的研究、药物分析、环境监测、食品安全等领域。
它可以用于测定DNA、RNA、蛋白质等生物大分子的浓度和纯度，以及监测水体、空气中的污染物质。
2.2可见光分光光度法可见光分光光度法主要应用于化学分析、环境监测、食品检测等领域。
它常用于测定金属离子、有机物等的浓度和质量。
例如，可用于测定水中重金属离子的浓度、食品中添加剂的含量等。
三、检测灵敏度3.1紫外光分光光度法紫外光分光光度法具有较高的灵敏度，可以检测到纳克级甚至更低浓度的物质。
这使得它在药物研发、环境监测等领域中有着广泛的应用。
3.2可见光分光光度法可见光分光光度法相对于紫外光分光光度法来说，灵敏度较低，通常用于对浓度较高的物质进行定量分析。
四、仪器设备4.1紫外光分光光度法紫外光分光光度法所需的仪器设备主要包括紫外可见分光光度计和光学比色皿等实验器材。
4.2可见光分光光度法可见光分光光度法所需的仪器设备与紫外光分光光度法类似，也包括可见光分光光度计和光学比色皿等实验器材。
4紫外-可见分光光度法
• 2.参比溶液的选择原则：
• (1)溶剂参比：试样组成简单、共存组份少（基体干扰少）、显色剂 不吸收时，直接采用溶剂（多为蒸馏水）为参比；
• (2) 试样参比：如试样基体在测定波长处有吸收，但不与显色剂反 应时，可以试样作参比（不能加显色剂）。
紫外-可见分光光度法
紫外-可见分光光度法
一、紫外-可见分光光度法原理 二、紫外-可见分光光度计 三、紫外-可见分光光度法应用
紫外-可见分光光度法
分子的能量变化E为各种形式能量变化的总和：
ΔΕ ΔΕe ΔΕv ΔΕr
电子能级间隔比振动能级和转 动能级间隔大1~2个数量级， 在发生电子能级跃迁时，伴有 振-转能级的跃迁，形成所谓的 带状光谱。
第一节 基本原理
二 Lambert- Beer 定律
Lambert-Beer 定律适用范围： ①入射光为单色光，适用于可见、红外、紫外光。 ②均匀、无散射溶液、固体、气体。
吸光度具有加和性：
不仅适用于紫外光、可见光，也适用红外光；在同一波长下， 各组分吸光度具有加和性
A=A1+A2++An
（1）入射光必须为单色光 （2）被测样品必须是均匀介质 （3）在吸收过程中吸收物质之间不能发生相
偏离Lambert-Beer 定律的因素 1. 样品性质影响
1）待测物高浓度--吸收质点间隔变小—质点间相互作用—对特定辐射的吸收 能力发生变化--- 变化；
2）溶剂的影响：对待测物生色团吸收峰强度及位置产生影响； 3）被测溶液不均匀导致的偏离
第一节 基本原理
二 Lambert- Beer 定律
紫外-可见分光光度法是
紫外可见分光光度法以200~780nm的光谱区域为分析范围，其中可见分光光度法范围为400~780nm，而紫外分光光度法范围则为200~400nm。
该分析方法通过测量样品吸收或透过不同波长的可见或紫外光来定量分析样品中的某种分析物质。
在此光谱范围内，物质分子的电子跃迁和振动会引起吸收，产生独特的光谱特征。
因此，通过测量样品吸收或透过的光强度，并与标准曲线进行比较，可确定分析物质的浓度。
紫外可见分光光度法广泛应用于食品、药品、环境、化学和生物等领域，在检测和分析研究中发挥着重要作用。
许多物质具有不同的颜色，例如MnO4-呈现出紫色，Fe3+和SCN-结合后形成的Fe(SCN)3可呈现出红色。
若含有这些物质的溶液浓度发生改变，溶液颜色的深浅度也会相应地改变。
当溶液浓度较高时，颜色会更加深沉；当溶液浓度较低时，颜色则会变得浅淡。
因此，可以运用比较不同溶液颜色深浅的方法来测定溶液中有色物质的含量，这种方法被称为比色分析法。
初期，人们观察到溶液随着浓度的增加而颜色加深，因此产生了“目视比色法”。
之后人们认识到溶液颜色的产生源于其对光的选择性吸收，于是出现了“光电比色法”，人们借助滤光片及光电池等工具客观地测量溶液浓度。
进而随着测试仪器的不断发展，分光光度计取代了比色计，衍生出了分光光度法。
紫外可见分光光度法是一种应用广泛的仪器分析方法，具有以下特点：1. 灵敏度高：该方法适用于测定试样中1%~0.001%的微量成分，甚至可测定低至10-6~10-7的痕量成分。
2. 准确度较高：测定的相对误差为2%~5%，采用精密的分光光度计测量，相对误差可减少至1%~2%。
分光光度法特别适用于低含量和微量组分的测定，对于常量组分的测定准确度不及重量法和滴定法。
3. 适用范围广：几乎所有的无机离子和许多有机化合物都可以直接或间接地用吸光光度法测定。
4. 操作简单、快速，仪器价格不高，因此被广泛应用。
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及其增敏规律有了更深刻的认识。
（3）多元显色体系。
这类方法中，增效试剂以阳离子表面活性剂用得最多。
但多数情况下是在二元体系中加入不同的表面活性剂。
（4）动力学光度法。
近年来，该方法的研究文献快速增长。
金属离子催化氧化染料褪色仍然为主要研究内容。
（5）导数分光光度法。
导数分光光度法具有提高狭窄谱带吸收强度的特点，可克服通常的显色反应对某些组分难以进行测定的困难。
不少研究工作者将其与别的测定方法相结合以充分发挥其作用。
（6）双波长分光光度法。
该领域可供研究的课题很多。
利用常规显色反应双波长测定，能明显提高方法的灵敏度和选择性。
利用双波长对性质相近的元素进行测定，效果十分令人满意。
双波长结合多波长线性回归法测多种共存组分，体现出明显的优越性。
双波长标准加入法应用研究也有新的突破。
（7）萃取分光光度法。
经典的萃取分光光度法仍有较高的实用价值，此外诸如茜素配合剂-La(Ⅲ)二甲苯胺法测氟、邻苯二甲胺法测硒等颇具新颖的萃取分光光度法的出现，丰富和充实了萃取光度法的内容。
（8）流动注射分光光度法。
该法因在分析领域的广泛应用而获得迅速发展。
它与其它多种分析技术相结合使过去许多难以进行定量分析的化学反应中间体或不稳定产物的测定成为现实，拓宽了光度分析的应用范围。
二、紫外-可见分光光度计的类型及发展趋势
1918年，美国国家标准局制成了第一台紫外可见分光光度计。
此后经不断改进，出现了自动记录、自动打印、数字显示、微机控制等各种类型的仪器，灵敏度和准确度不断提高，应用范围也不断扩大。
紫外-可见光分光光度计可分为单波长和双波长分光光度计两类。
单波长分光光度计又分为单光束和双光束分光光度计（附：双光束分光光度计的工作原理动画）。
分光光度计的发展趋势可以从下列两个方面来看：(1)分光光度计的组件(如单色器、检测器、显示或记录系统、光源等)的改善与发展(2)分光光度计的结构(如单波长，双波长快速扫描、微处理机控制等)的发展。
现分述如下。
(一)从分光光度计的组件看发展
1．全息光栅正在迅速取代机刻光栅。
早期的分光光度计几乎都采用各种棱镜作为色散元件，随着光栅制造技术，尤其是复制光栅的不断提高，成本不断降低，近几年来绝大多数分光光度计都改用光栅。
最近，随着全息光栅技术的发展与商品化，全息闪耀光栅正在迅速取代一般的闪耀光栅。
2．电视式显示和电子计算机绘图初露锋芒。
近年来随着微型计算机技术的迅速发展与价格日益便宜，因此和其他类型的分析仪器一样，分光光度计亦已经配用电视式显示和计算机绘图装置。
3．检测器的改进。
目前科学工作者正在研究和应用各种可在全波长同时记录的检测器，如：硅光二极管阵列、光敏硅片、电荷耦合器件以及在不同波长处2种或3种检测器的联用。
(二)从分光光度计的构型看发展
1．电子计算机控制的分光光度计日见增多。
随着电子计算机技术的迅速发展，微处理机控制的分光光度计正方兴末艾，它不仅促使分光光度计进一步自动化，而且可大大改善仪器的性能，例如使分光光度计具有获得多级导数的能力，具有光谱累积和平均的特性从而大大提高信噪比的能力。
2．双波长分光光度计迅速发展。
3．快速扫描分光光度计陆续问世。
三、化学家小传
（一）光谱仪发明者－本生和基尔霍夫
本生（Robert Wilhelm Bunsen，1811～1899年），德国化学家和物理学家。
他17岁大学毕业，19岁获得博士学位。
1830～1833年期间在欧洲一些国家的著名实验室和工厂里工作，1838～1851年任马尔堡大学化学教授，1852～1889年任海德堡大学教授，创建了一个著名的化学学派。
基尔霍夫（Gustav Rober Kirehhoff，1824～1887年），德国物理学家。
早年就读于柯尼斯堡大学。
1847年毕业后至柏林大学任教。
1854年经本生推荐任海德堡大学教授。
1875年到柏林大学任物理学教授。
本生在科学上的杰出贡献，是和基尔霍夫共同开辟出光谱分析领域。
1859年，他和基尔霍夫合作设计了世界上第一台光谱仪，并利用这台仪器系统地研究各物质产生的光谱，创建了光谱分析法。
1860年他们用这种方法在狄克海姆矿泉水中发现了新元素铯，1861年又用此仪器发现了新元素铷。
从此光谱分析不仅成为化学家手中的重要检测手段，同时也是物理学家、天文学家开展科学研究的重要武器。
本生还研制出了本生灯、本生光度计、量热器以及本生电池等。
除上面提到的与本生的共同发明、创造外，基尔霍夫在电学理论上也做出了杰出贡献。
1845年，他提出了计算稳恒电路网络中电流、电压、电阻关系的基尔霍夫电路定律。
另外基尔霍夫研究了太阳光谱的夫琅和费线，在研究过程中得出了关于热辐射的基尔霍夫定律。
1862年他又进一步提出了绝对黑体的概念。
他的工作为以后量子论的出现奠定了基础。
（二）伍德沃德与“伍氏规则”
伍德沃德，R.B.(Woodward，Robert Burns. 1917～1979年)。
伍德沃德从童年时代就对化学非常有兴趣，常在家中的地下室里进行化学实验。
16岁时进入麻省理工学院读书，三年后获学士学位，一年后又得到博士学位，年仅20岁。
伍德沃德是当代公认为最杰出的有机化学家之一。
他一生发表了200余篇论文，获得了多个名誉博士学位，都是世界上许多著名大学授予的。
他还接受过24次各国最高的奖状和奖金。
伍德沃德以合成复杂天然有机化合物闻名于世，达到了当代有机合成的顶峰。
他的化学知识是百科全书式的，对细节过目不忘。
他的过人之处在于能博览群书，而又融会贯通，将别人琐碎的研究成果整合成完整的知识来解决具体问题。
他的工作业绩大致可分为三类：一是提倡仪器方法的使用；二是重要理论及方法的创建；三是复杂天然有机化合物结构的测定及合成。
在提倡仪器方法的使用上，伍德沃德不仅是对某几项工作做出成果，而是强调这个方法的重要，并预见到它将在整个化学领域起到非常重要的作用。
例如，紫外光谱已有很久的历史，但直到20世纪40年代，才逐渐在有机化学领域中得到普遍使用。
伍德沃德是这一方法的积极倡仪者和开拓者，他预见到仪器分析法将发挥无可比拟的威力。
在研究萜类天然产物的结构时，他通过观察烷基和羰基取代在共轭体系中紫外吸收变化的规则，得到了一系列经验规律，对紫外吸收的应用做出了重要贡献，发现了众所周知的“伍氏规则”。
至今人们还在利用这一规则推测共轭二烯烃、多烯烃及共轭烯酮类化合物的最大吸收波长。