葡萄籽原花青素含量检测方法
四种原花青素含量测定方法比较
四种原花青素含量测定方法比较一、本文概述原花青素（Procyanidins）是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物，因其强大的抗氧化和生物活性，近年来在营养学、食品科学、医药学等领域受到了广泛关注。
其中，四种主要的原花青素——儿茶素（Catechin）、表儿茶素（Epicatechin）、没食子儿茶素（Gallocatechin）和表没食子儿茶素（Epigallocatechin）的含量测定对于评估食品营养价值、研究药物作用机制以及监控产品质量具有重要意义。
本文旨在比较和分析目前常用的四种原花青素含量测定方法，包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外可见分光光度法（UV-Vis）、荧光光谱法（Fluorometry）和质谱法（MS），以期为相关领域的研究和实践提供有益的参考。
通过比较这些方法的准确性、灵敏度、操作简便性以及成本效益等方面的优劣，我们期望能为科研人员和企业选择最适合的原花青素含量测定方法提供指导。
二、方法概述原花青素（Procyanidins）是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物，具有强效的抗氧化性能，对多种疾病具有预防和治疗作用。
由于其生物活性的重要性，对原花青素含量的准确测定显得尤为重要。
目前，常用的原花青素含量测定方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外可见分光光度法、薄层色谱法（TLC）和毛细管电泳法（CE）。
这些方法各有优缺点，适用于不同的样品类型和实验条件。
高效液相色谱法（HPLC）具有高分辨率、高灵敏度、高重现性等优点，可以同时分离和测定多种原花青素。
但是，该方法需要昂贵的仪器设备和专业的操作人员，且样品处理过程繁琐，分析时间较长。
紫外可见分光光度法是一种简便、快速的测定方法，适用于大量样品的初步筛选。
然而，该方法只能测定总原花青素的含量，无法区分不同种类的原花青素，且易受样品中其他色素的干扰。
薄层色谱法（TLC）是一种基于原花青素在薄层板上的分离和显色进行测定的方法。
葡萄籽原花青素液相检测方法
原花青素原花青素原花青素原花青素HPLC初步方案初步方案初步方案初步方案一．实验目的：分析样品原花青素纯度，了解其中杂质成分。
二．实验方案：1. 方案一：Waters 公司高效液相色谱，C18柱(4.6 ×250 mm) , 检测波长为280 nm，进样量10μL ,柱温为室温。
待测液均经0.45μm 孔径的滤膜过滤。
流动相及流速见下表(A —10 %乙酸,B —重蒸水)：2. 方案二：（间接法定量）（原理类似铁盐催化比色法）(1) 标准曲线：称取前花青素标准品10mg 溶于10ml甲醇中,吸取该溶液0、0.1、0.25、0.5、1.0、1.5ml 置于10ml 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。
各取1ml 测定。
(2) 试样测定: 将正丁醇与盐酸按95 ：5的体积比混合后,取出6.0ml 置于具塞锥瓶中,再加入0.2ml硫酸铁铵[NH4Fe(SO4) 2·12H2O]溶液（用浓度为2mol/L 盐酸配成2%(w/v)的溶液）和1.0ml 经0.45μm滤膜过滤的试样溶液,混匀,置沸水浴回流,精确加热40min后,立即置冰水中冷却,待进行高效液相色谱分析。
(3)液相色谱参考分析条件: 色谱柱Shimadzu Shim –pak CLC –ODS 4.6 ×150mm;柱温35 ℃;检测器:紫外检测器,检测波长525nm流动相: 水:甲醇:异丙醇:10 %甲酸= 73 :13 :6 :8 流速0.9ml/min。
注：该方法使用的水解方法与我们当前使用的铁盐催化水解原花青素方法稍有差异，哪种效果更好，可进行预实验加以比较。
3．方案三：（反相高效液相色谱）标样：原花青素标准品色谱柱：Hypersi ODS-2 ，150 × 4.6mm 5μm；流动相：A：0 . 2%(V/V) 乙酸；B：乙腈；流量：1ml /min；进样量：5μl;柱温：30℃；检测波长：280nm.洗脱梯度：以乙腈的百分比浓度表示(B液溶于A液)0 ～5 % ，10min；5%～20%，10～20min；20%～40%，20～40min；40%～50%，40～50min；50%～5%，45～50min；5%～0，50～60min。
葡萄籽提取物中原花青素含量不同测定方法比较
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图 # 花色素反应 ()*+,%-. -/ 01-23+%.& +4*.%2%.
香草醛法的原理在于酸性条件下， 原花青素
［6］ ， 其上的间苯二酚或间苯 5 环的化学活性较高
三酚可与香草醛发生缩合， 产物在浓酸作用下形 成有色的正碳离子， 如图 7 所示。采用分光光度 法测其吸光度， 根据标准曲线即可得到样品中原 花青素含量。盐酸或硫酸均可作为反应过程的催
作者： 作者单位： 刊名： 英文刊名： 年，卷(期)： 被引用次数： 姚开， 何强， 吕远平， 石碧 四川大学轻工与食品工程学院,四川,成都,610065 化学研究与应用 CHEMICAL RESEARCH AND APPLICATION 2002，14(2) 54次
参考文献(5条) 1.石碧.狄莹 植物多酚 2000 2.Porter L.Hrstich L.Chan B 查看详情 1986 3.Deshpande S.Cherycm M 查看详情 1985 4.Foo Y.Porter L 查看详情 1986(06) 5.Deshpano S.Cheryan M 查看详情 1987(02)
第 35 卷
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测定方法 正丁醇7盐酸法 香草酸7盐酸法 香草酸7硫酸法 38 9 3: !3 9 5; 38 9 =4
相对标准偏差 （2） 3 9 <= = 9 8: ! 9 55
参考文献：
［3］ 石碧， 狄莹 > 植物多酚 ［ ?］ ， 北京： 科学出版社， !"""， 3!;—344> ［!］ ［ F］ ， @,(+&( A， B()+0C’ A， D’#1 E9 !"#$%&"’()*$+# #$%&， !’： !!4 G !4= 9 ［4］ ， H&)’I#1.& J， D’&(KC/ ?9 , 9 -%%. /&) ［ 9 F］ #$%’， ’"： :=6 G :3= 9 ［5］ ［ F］ ， （;） ： L,, M， @,(+&( A9 011)$2 #$%&， ($ 588 G 5<= 9 ［6］ ， （!） ： H&)’I#1, J， D’&(K#1 ?9 , 9 -%%. /&) ［ 9 F］ #$%)， ’! 44! G 445 9
比色法测定葡萄皮和葡萄籽中原花青素的含量
中国公共卫生 2003 年第 19 卷第 10 期 Chi n J Public Healt h 2003 V ol . 19 No. 10
文章编号 : 100120580 (2003) 1021228202 中图分类号 : R151 文献标识码 : A
【实验研究】
比色法测定葡萄皮和葡萄籽中原花青素的含量
作者单位 : 11 浙江省卫生监督所 ,杭州 310009 ; 21 浙江省疾病预防控制中心
作者简介 : 张法明 (1952 - ) ,男 ,浙江黄岩人 ,主管医师 ,大专 ,主要从 事食品卫生监督工作 。
件样品含量比较高 ,分别是猪肉样品 1 件 ,为 01468 mg/ kg ;猪 肝样品 2 件 ,分别为 01186 ,01341 mg/ kg ;猪肺样品 3 件 ,分别 为 01136 ,01470 ,01249 mg/ kg ;猪尿样品 2 件 ,分别为 01360 , 01161 mg/ kg ;猪饲料 1 件 ,为 01689 mg/ kg。(2) 不同监测点 样品盐酸克仑特罗检出阳性率 :屠宰场 、农贸市场及宾馆饭店 等饮食业采样 610 件 ,阳性 67 件 ,阳性率为 1110 % ;其中屠 宰场采样 469 件 ,阳性 50 件 ,阳性率为 1017 % ;农贸市场采 样 129 件 ,阳性 17 件 ,阳性率为 1312 % ;养猪场 (户) 采样 79 件 ,阳性 5 件 ,阳性率 613 % ;饮食业采样 12 件 ,未检出盐酸 克仑特罗 。(3) 不同地区盐酸克伦特罗阳性率比较 :4 个市共 送检样品 610 件 ,其中曾发生过盐酸克仑特罗食物中毒的 3 个市的阳性率分别为 2212 % ,1115 %和 219 % ;作为对照的另 一个市未检出阳性样品 。阳性率与各市发生中毒起数基本一 致。
葡萄籽提取物中原花青素含量的测定
标准物
表儿茶素 儿茶素
YS P 含量
/% 19.10 21.57
相对标准偏差
/% 1.83 0.79
线性范围
/μg.mL -1 10 ～ 100 10 ～ 150
原花青素是由不同数量的儿茶素或表儿 茶素单体及其聚合体构成的多酚化合物 , 聚 合体在酸的作用下易降解成儿茶素或表儿茶 素单体 。葡萄籽提取物中的原花青素主要以 儿茶素及其二聚体为主 , 故采用儿茶素作为
其中盐酸添加量为 6.0 m L 时的相对标准偏 差最低 , 如表 2 所示 。 这可能是由于反应环 境 pH 值的不同 , 导致反应生成的正碳离子 具有不同的稳定性 。
表 2 盐酸添加量对测定结果的影响
盐酸添加量/m L 5.0 原花青素含量/ % 19 .93 相对标 .57
0 .79
7.0 21 .04
0 .85
8.0 20 .88
0 .91
2.3 反应时间的确定 实验发现 , 随着反应时间的延长 , 儿茶素
或原花青素与香草醛形成的有色化合物会使
反应液颜色逐渐变深 , 但随后又逐渐减弱 , 吸 光值降低 , 这说明反应过程形成的有色物质 不稳定 , 其结构会发生一定程度的改变 。 图
参 考文献
1 石 碧 , 狄 莹 .植 物 多 酚 .北 京 :科 学 出 版 社 , 2000.126 ～ 133
2 Porter L , Hrstich L , Chan B .P hy tochemistry , 1986 , 25:223 ～ 230
3 Deshpande S , Chery cm M .J.Food Sci ., 1985, 50 :905 ～ 910
F &F I 政策 法规 标准
葡萄籽提取物中原花青素含量的最佳测定方法
葡萄籽提取物中原花青素含量的最佳测定方法葡萄籽提取物-原花青素被誉为“最强效的自由基清除剂”，其抗氧化能力是VC的20倍，VE的50倍。
也是唯一能透过血脑屏障的抗氧化剂，因此在促进皮肤新陈代谢，分解黑色素，以及提高机体免疫力，延缓衰老方面的应用极为广泛。
葡萄籽提取物由原花青素、儿茶素、表儿茶素、没食子酸等多酚类物质组成的，由于原花青素的成分极其复杂，目前的研究实验中还无法提供原花青素的标准品，因此Bate-Smith 和Porter法只能测定葡萄籽提取物中原花青素的相对含量。
一、Bate-Smith法、Porter法测定葡萄籽原花青素含量西安源森生物实验室对Bate-Smith法和Porter法测定原花青素相对含量实验进行了研究：（一）Bate-Smith法测定葡萄籽原花青素含量【实验目的】由于目前没有原花青素的标准品，因此此方法测定的只是葡萄籽提取物中原花青素的相对值，其含量用原花青素指数(procyanidolic index)来表示。
【Bate-Smith法原理】原花青素在酸性条件下加热转化为红色的花青素(图1)。
【实验步骤】称取适量的葡萄籽提取物(约15～40mg)用甲醇溶解，最后定溶于100ml。
从中取1ml样品溶液加到10ml比色管中，然后再加入6ml盐酸-正丁醇溶液(5/95,V/V)，在97℃±1下反应40min后，取出迅速冷却，在550nm处测定其吸光度，以甲醇代替提取物溶液作为空白。
原花青素指数=A×7.0/WW:样品质量(g)；A:吸光度【实验结果】由于用Bate-Smith法测得的葡萄籽提取物中原花青素指数一般在80～100之间，有时也可能大于100。
因此，目前很多植物提取物生产厂家使用原花青素指数来表示葡萄籽提取物中原花青素的百分含量，是不正确的。
（二）Porter法测定葡萄籽原花青素含量【实验概述】由于Bate-Smith法测定的结果重现性很差,并且原花青素在此条件下反应不是很彻底。
葡萄籽提取物原花青素95%执行标准
葡萄籽提取物原花青素95%执行标准
葡萄籽提取物原花青素95%的执行标准主要包括以下内容：
1. 提取方法：采用超声波辅助萃取、回流萃取等方法，从葡萄籽中提取目标成分。
2. 成分含量：葡萄籽提取物原花青素的含量应达到95%以上。
3. 鉴定方法：应运用高效液相色谱（HPLC）或者紫外分光光度法等可靠的分析方法对葡萄籽提取物原花青素进行鉴定和分析。
4. 检测限值：确定葡萄籽提取物原花青素的检测限值，保证提取物的质量符合要求。
5. 外观特征：葡萄籽提取物原花青素应为深紫色至红棕色粉末，无异味。
6. 残留溶剂：葡萄籽提取物原花青素中不得含有明显的溶剂残留。
7. 重金属限量：葡萄籽提取物原花青素应符合国家或地区规定的重金属限量标准，确保产品安全。
需要注意的是，具体的执行标准可能会因国家、地区以及生产厂家的要求而有所不同，以上内容仅为常见的执行标准举例，具体要求还需参考相关标准文件。
葡萄中原花青素的提取
葡萄中原花青素的提取摘要原花青素是抗氧化、清除自由基能力很强的物质，它能有效清除人体内多余的自由基，具有超强的延缓衰老和增强免疫力的作用。
原花青素是一大类多酚化合物的总称，最简单的原花青素是儿茶素、表儿茶素或儿茶素与表儿茶素形成的二聚体。
本题我们通过标准曲线法对葡萄中原花青素含量进行定量分析；二我们利用超声波破碎提取法分别得出葡萄皮和葡萄籽中原花青素的得率。
关键词原花青素标准曲线法定量超声破碎提取法得率前言原花青素，是一种有着特殊分子结构的生物类黄酮，是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天然抗氧化剂。
一般为红棕色粉末，气微、味涩，溶于水和大多有机溶剂。
一般为葡萄籽提取物或法国海岸松树皮提取物。
原花青素（葡萄籽提取物）是一种新型高效抗氧化剂，是目前为止所发现的最强效的自由基清除剂，具有非常强的体内活性。
实验证明，OPC的抗自由基氧化能力是维生素E的50倍，维生素C的20倍，并吸收迅速完全，口服20分钟即可达到最高血液浓度，代谢半衰期达7小时之久。
葡萄籽原花青素是清除自由基最强的抗氧化剂。
在人体内的抗氧化和清除自由基的能力是维生E的50倍，是维生素C的20倍。
其作用机理主要是原花青素能够自由基交换一个氢原子或电子，与欲清除的自由基有近似的氧化还原电位，生成的自由基通过离域化而稳定由于原花青素分子结构上有多个酚羟基，它们可以与暂存性自由基结合，生成稳定的自由基，螯合启动脂质过氧化的金属离子，参与抗氧化的协同作用。
通过终止自由基链式反应，螯合金属离子，清除活性氧（与封闭系统中的氧反应），原花青素可以减少或消除氧自由基对机体组织和器官的损害作用。
原花青素能够通过制造弹性蛋白和胶原纤维加固毛细血管壁，从而进一步防御自由基的侵蚀。
高品质的低聚原花青素由于在水中和醇中具有良好的溶解性，加上色泽亮丽，资源丰富，疗效显著，副作用微小的特点，被广泛应用到药物、化妆品和功能性食品等领域。
同时其既可作为营养强化剂，又可作为防腐剂替代合成防腐剂（如苯甲酸等），符合人们回归自然的要求，提高了其应用的安全性。
葡萄籽原花青素的提取和检测方法
葡萄籽原花青素的提取和检测方法摘要:对原花青素的概念、测定方法及其存在的问题进行了分析，综述了原花青素的性质，安全性和提取、检测方法，并对统一的原花青素检测方法进行了展望。
关键词:葡萄籽原花青素提取检测EXTRACTION AND DETERMINA TION METHODS OF PROANTHOCYANIDIN FROM GRAPE SEEDAbstract:The definition, determination methods of proanthocyanidin from grape seed and their problems were analyzed. The character, safety, extraction methods of proanthocyanidin were also introduced in this paper. Besides, the development foreground of uniform determination method of proanthocyanidin was illustrated.Key words:grape seed ; proanthocyanidins ; extraction; determination20世纪70年代，法国科学家J．Masqulier发现了比松树皮更好的原花青素资源——葡萄籽。
“地中海地区膳食”健康效果揭示了酚类化合物和不饱和脂肪酸的神奇功效Ⅲ；“法国悖论”现象更是揭示了葡萄籽的多酚神奇功能。
葡萄籽中含有丰富的亚油酸、蛋白质、原花青素等成分，但研究最多的还是原花青素成分，现已被证明具有显著的抗氧化和清除自由基的活性，具有极大的开发前景。
同时由于葡萄籽原花青素成分的复杂性，原花青素概念认识的不一致，还没有统一的检测方法。
因此，迫切需要建立葡萄籽原花青素含量的统一分析方法，以便对葡萄籽原料及其产品中的原花青素准确定量。
以原花青素B2标定葡萄籽提取物中原花青素含量
以原花青素B2标定葡萄籽提取物中原花青素含量吴巍，程秀凤，王春辉，崔文熹，傅荧荧（天津市尖峰天然产物研究开发有限公司，天津300457）摘要：目的：建立以原花青素B2为标准品测定葡萄籽提取物中原花青素含量的方法。
方法：以含量≥99%的原花青素B2（HPLC标定）做标准品，参照Bate-Smith法，在546 nm处测定吸光度，来标定葡萄籽提取物中原花青素含量。
结果：原花青素B2通过Bate-Smith法反应后的吸收度与浓度成良好线性关系，其线性范围为22.89μg.mL-1～ 114.5μg.mL-1，r=0.99902（n=5）。
回收率：97.99%，RSD：1.02%(n=6)。
结论：该法以通过HPLC标定的原花青素单一成分B2做为标准品，解决了过去以原花青素混合物做标准品其原花青素含量标准不统一，无法让人信服的问题，其测定结果能准确反映葡萄籽提取物中的原花青素的真实含量，可用作质控方法。
关键词：原花青素B2; 原花青素;葡萄籽提取物Determine proanthocyanidins in grape seed extract with proanthocyanidin B2 standardWU Wei ，CHENG Xiu-feng，W ANG Chun-hui，CUI Wen-xi，FU Ying-ying（Tianjin Jianfeng Natural product R&D Co.，Ltd.，Tianjin 300457，China）Abstract: Objective: To establish a method for detecting proanthocyanidins in grape seed extract with proanthocyanidin B2 standard. Methods: Refer to the Bate-Smith method, using proanthocyanidin B2（≥99%;HPLC）to calibrate proanthocyanidins in grape seed extract at 546nm. Results: Linear range of proanthocyanidins is 22.89μg.mL-1～114.5μg.mL-1 (r=0.99902, n=5) ,Recovery: 97.99%, RSD: 1.02%( n=6 ). Conclusion: Using single ingredient proanthocyanidin B2 standard calibrated by HPLC to calibrate proanthocyanidins, resolving the problem that the standard content is not identical and can not convince when using proanthocyanidin compound standard. The method have better linearity and repeatability , can detect grape seed extract’s proanthocyanidins exactly.Key Words: proanthocyanidin B2; proanthocyanidin; grape seed extract原花青素是一类物质，它们是由儿茶素、表儿茶素及其没食子酸酯通过C4-C6或C4-C8键共价相连组成的多聚体，葡萄籽提取物中的最主要成分就是原花青素，各种1聚合程度的原花青素在其中混合存在着，测定其中总原花青素的含量是衡量其质量好坏的主要指标之一。
硫酸_香草醛法测定葡萄籽原花青素含量
硫酸-香草醛法测定葡萄籽原花青素含量孙 芸 谷文英(江南大学食品学院,无锡,214036)摘 要 以硫酸作为香草醛法的酸性介质,测定葡萄籽提取物水溶液中原花青素含量,对硫酸浓度、香草醛浓度、反应温度及时间等影响比色反应的因素进行了研究,选择出较适宜的反应条件。
关键词 葡萄籽,原花青素,硫酸-香草醛法第一作者:博士研究生(谷文英为通讯作者)。
收稿时间:2003-04-17,改回时间:2003-09-03原花青素是一类由黄烷-3-醇缩合而成的聚多酚类物质,具有很强的生物活性,作为防癌、抗突变、防治心血管疾病药物的有效成分和用作安全无毒的新型天然抗氧化剂,在医药、保健食品等领域具有广泛的用途。
原花青素的定量测定方法,除比较经典的H PLC 法外,更多的是比色测定方法,包括Folin -Ciocateau (FC )法[1]、酸化香草醛(Vanillin)法[2,3]、盐酸-正丁醇(BuOH -H Cl)法[4]及紫外吸收法[5],其中FC 法测定的是总酚含量,对原花青素缺乏专一性,Vanillin 法可同时测定原花青素单体及聚合体的总含量,BuOH -H Cl 法只测定聚合原花青素含量,儿茶素单体不反应,但与香草醛法相比,反应中易形成副产物,且受结构影响较大,同时比色测定法反应的条件要求较高,重复性较差,原花青素的紫外吸收法一般用于经HPLC 纯化分离后组分的定性及定量检测(270~280nm)。
从测定方法的灵敏度、专一性及简便性来讲,目前应用比较多的是酸化香草醛法。
盐酸及硫酸均可作为其酸性介质,但在不同含量的葡萄籽原花青素含量测定过程中发现,传统的以盐酸为酸性介质的香草醛法在测定原花青素含量较低的葡萄籽提取物水溶液时,体系透明度较低,干扰较大。
而据报道[6],在测定甲醇溶液中原花青素含量的香草醛反应体系中,以硫酸催化的反应灵敏度高于盐酸。
据此,本实验以硫酸作为香草醛法的酸性介质,探索出了测定葡萄籽提取物水溶液中原花青素含量的硫酸-香草醛比色法。
硫酸香草醛法测定葡萄籽原花青素含量
硫酸香草醛法测定葡萄籽原花青素含量一、本文概述本文旨在探讨硫酸香草醛法在测定葡萄籽原花青素含量中的应用。
原花青素作为一种重要的天然抗氧化剂，在葡萄籽等植物中含量丰富，具有显著的生物活性，对人体健康具有积极作用。
因此，准确测定葡萄籽中原花青素的含量对于评估其营养价值和开发相关健康产品具有重要意义。
硫酸香草醛法作为一种常用的原花青素测定方法，具有操作简便、灵敏度高、重现性好等优点，在食品、药品等领域得到了广泛应用。
本文将详细介绍硫酸香草醛法的原理、操作步骤、影响因素及注意事项，并通过实验验证该方法的准确性和可靠性，为葡萄籽原花青素含量的测定提供科学依据。
二、材料与方法硫酸香草醛、葡萄籽提取物、原花青素标准品（纯度≥98%）、甲醇、乙醇、丙酮、盐酸等均为分析纯，购自国内外知名试剂公司。
紫外可见分光光度计、电子天平、恒温水浴锅、离心机、超声波清洗器等。
准确称取葡萄籽粉末适量，加入一定比例的甲醇-水-盐酸混合溶液，置于恒温水浴锅中进行回流提取。
提取液经过离心、过滤后，得到原花青素提取液。
精确称取原花青素标准品，用甲醇溶解并定容，得到不同浓度的标准溶液。
分别取各浓度标准溶液，加入硫酸香草醛试剂，摇匀后在一定温度下反应一定时间，测定其吸光度。
以吸光度为纵坐标，原花青素浓度为横坐标，绘制标准曲线。
取适量葡萄籽原花青素提取液，加入硫酸香草醛试剂，摇匀后在相同条件下进行反应，测定其吸光度。
根据标准曲线计算样品中原花青素的含量。
所有数据均以平均值±标准差表示，采用SPSS等统计软件进行数据分析，采用单因素方差分析（ANOVA）比较不同处理组之间的差异，显著性水平设为P<05。
通过以上方法和步骤，可以准确测定葡萄籽中原花青素的含量，为进一步研究葡萄籽的营养价值和开发利用提供依据。
三、实验结果与分析在本次研究中，我们采用硫酸香草醛法测定了葡萄籽原花青素含量。
此方法基于原花青素在特定条件下与硫酸香草醛发生显色反应，通过测定反应后溶液的光密度值，可推算出原花青素含量。
葡萄籽原花青素的提取和检测方法
葡萄籽原花青素的提取和检测方法
葡萄籽原花青素的提取和检测方法有多种，其中一种常用的方法是索氏提取法和固相萃取法相结合，具体步骤如下：
1. 将葡萄籽进行干燥、粉碎、过筛、脱脂，得到葡萄籽粉末。
2. 将葡萄籽粉末进行提取、过滤、浓缩，再溶解，最后进行固相萃取，得到精制原花青素。
3. 精制原花青素过微孔滤膜后进入高效液相色谱进行检测。
另外，也可以使用Bate-Smith法和Porter法来检测葡萄籽中原花青素的
含量。
Bate-Smith法是先称取适量的葡萄籽提取物用甲醇溶解，然后加入
盐酸-正丁醇溶液在特定温度下反应一定时间后迅速冷却，在特定波长下测
定其吸光度，以甲醇代替提取物溶液作为空白。
而Porter法是对Bate-Smith法进行了改进，主要是在试剂中添加了Fe3+以提高反应的程度和颜
色的稳定性。
请注意，不同方法提取和检测葡萄籽原花青素的步骤和条件可能会有所不同，具体的操作方法和参数需要根据实际情况和实验条件进行调整。
同时，由于提取和检测过程中可能会涉及到化学试剂的使用，因此也需要注意安全问题。
葡萄籽中提取原花青素方案
葡萄籽中提取原花青素------10级生物制药二班方案1原花青素介绍2药理作用3前景4提取方法及实验操作5发现问题6共同讨论葡萄籽提取物[中文名称]：葡萄籽提取物[English name]：Grape Seed P.E[拉丁文学名]：Vitis vinifera L.[来源]：葡萄科植物葡萄( Vitis vinifera L.)的种子。
[性状]：红棕色粉末，气微、味涩。
作为健康食品的原料直接制成胶囊等剂型，为目前美国天然植物十大畅销品种之一。
高品质的OPC由于其中在水和醇中良好的溶解性，加上其色泽亮丽，疗效显著，被广泛加入到饮料和酒中。
作为具有极强抗氧化性的天然功能性成分，在欧美被广泛加入到各种普通食品如蛋糕、奶酪中，既作为营养强化剂，又作为天然防腐剂来代替合成防腐剂（如苯甲酸等），符合人们回归自然的要求，提高了食品的安全性。
葡萄籽提取物是从天然葡萄籽中提取的有效活性营养成份配以维生素E等主要原料精制而成的营养食品。
葡萄籽提取物是从葡萄籽中提取的一种人体内不能合成的新型高效天然抗氧化剂物质。
它是目前自然界中发现的抗氧化、清除自由基能力最强的物质，其抗氧化活性为维素E的50倍、维生素C的20倍，它能有效清除人体内多余的自由基，具有超强的延缓衰老和增强免疫力的作用。
抗氧化、抗过敏、抗疲劳增强体质、改善亚健康状态延缓衰老、改善烦躁易怒、头昏乏力、记忆力减退等症状。
适宜人群常疲劳、易感冒、易过敏；烦躁易怒，头昏乏力，记忆力减退；体质虚弱等亚健康人群。
原花青素≥95％低聚原花青素≥85％多酚Polyphenol ≥90％多酚≥95％多酚/低聚原花青素≥95％/60％原花青素/低聚原花青素≥95％/60％原花青素①原花青素是一种新型高效抗氧化剂，是目前为止所发现的最强效的自由基清除剂致意，具有非常强的体内活性，并且吸收迅速完全。
实验证明，OPC的抗自由基眼花缭乱能力是维生素E的50倍，维生素C的20倍。
葡萄籽原花青素检测方法的比较
葡萄籽原花青素检测方法的比较张晶莹;胡文效;高德艳;李彦奎;蒋锡龙【摘要】本研究通过对原花青素的结构分析，选取香草醛法、铁盐催化比色法两种方法对葡萄籽中的原花青素进行了检测对比。
结果表明，两种方法均能稳定、有效地对原花青素进行检测。
香草醛法的检测结果数值较低，且线性范围较窄，适宜用于检测黄烷-3-醇单体、低聚体酚类化合物含量；铁盐催化比色法线性范围较宽，适宜用于黄烷-3-醇不同聚合度范围的酚类化合物总量检测。
%The vanillin assay method and ferric ion catalytic colorimetric method had been chosen to detect the procyanidins content on grape seed. The results showed that both of the detection methods were stable and effective. The datum from Vanillin method indicated lower values and narrower linear range than from the ferric ion catalytic colorimetric method. Vanillin method suited to detect the content of flavan-3-alcohol monomer and oligomeric phenolic compounds;The Ferric ion catalytic colorimetric method had a wider linear range, and was suitable for the detection of the total content of flavan-3-alcohol which has a different polymerization degree.【期刊名称】《中外葡萄与葡萄酒》【年(卷),期】2013(000)006【总页数】3页(P18-20)【关键词】葡萄籽;原花青素;香草醛法;铁盐催化比色法【作者】张晶莹;胡文效;高德艳;李彦奎;蒋锡龙【作者单位】山东省葡萄研究院，济南 250100;山东省葡萄研究院，济南 250100;齐鲁工业大学，济南 250353;山东省葡萄研究院，济南 250100;山东省葡萄研究院，济南 250100【正文语种】中文【中图分类】R284.1葡萄籽中含有丰富的亚油酸、蛋白质、原花青素等成分，其中原花青素现已被证明具有显著的抗氧化和清除自由基的活性，具有广阔的开发前景。
葡萄籽原花青素含量测定
（ １ ） 配制样品溶液 称取一定量的原花青素标准
品，用蒸馏水定容至一定体积，配成浓度为 ０ ． ０ １ —
０ ． ５ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ的原花青素标准品水溶液。 （ ２ ） 配制显色剂 试剂 Ａ （ 香草醛 一甲醇溶液） ： 称取一定量的香草醛，分别用甲醇定容至一定体积， 配成浓度为 ０ ． ５ ％ 、 １ ％ 、 ２ ％ 、 ３ ％ 、 ４ ％ 、 ５ ％ （ ｗ ／ 的香草醛一
０ ． Ｏ ｌ —Ｏ ． １ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ 之间时， 实验数据具有 良好的线性
相对误差
０ ． ４ ４
～ １ ． ３ ０
０ ． ４ ４
０ ． ４ ４
Ａ ￣ Ｃ １ ）
相对误差
０ ． ２ ４ ６
一 ５ ． ４
０ ． ２ ４ ５
— ５ ． ４
仉２ ９ ９
敏度增加： 当浓度过高时， 会导致香草醛 自 缩合 ． 其产
物影响体系的吸光度 。 在保证不导致副反应发生的前 提下， 应选择较高的硫酸浓度 。本实验最终确定硫酸 浓度为 ３ ０ ％ 。最佳 比色条件为：浓硫酸 ３ ０ ％ ，香草醛 ４ ％ ， 反应温度 ３ ０℃， 反应时间 １ ５ ｍ ｉ ｎ 。
河 北 化 工
第 １期
裹 ４ 香草醛硫酸法与ห้องสมุดไป่ตู้草醛盐酸法重复性实验
序号
Ａ ｍ
ｉ
０ ． ２ ２ ６
２
０ ． ２ ２ ２
３
０ ． ２ ２ ６
４
０ ． ２ ２ ６
在最佳比色条件下。 分别测定原花青与儿茶素的 标准 曲线， 结果见图 ４ 。由图 ４ 知， 当标准品浓度在
［ 作者简介】 赵
以原花青素B2标定葡萄籽提取物中原花青素含量
ｓａ ｄ ｒ． ｅｅ ｔｔｅ ｔ－ ｍｉ ｔｎ ａｄ Ｒ ｆｒｏ ｈ Ｂａｅ Ｓ ｔ ｔｏ ，ｓｎ ｐｏ ｎｈ ｃ ａ ｉｉ ２ ≥９ ： Ｌ ｔｃ ｌ ｒｔ ｐ ｏｎｈ ｃ ａ ｉｉｓ ｈｍｅｈ ｄｕ ｉｇ ｒａ ｔｏ ｙ ｎｄｎＢ （ ９ ＨＰ Ｃ）ｏ ａｉ ａｅ ｒａ ｔｏ ｙ ｎｄｎ ｂ
以原花青素混合物做标准品其原花青素含量标 准不统 一， 无法让人信服的 问题 ， 测定结果能准确反 映葡萄籽提取 其
物 中的原 花青素的真 实含量 ， 可用作质控 方法 。 关键词 ： 原花青素 Ｂ ； ２ 原花青素 ； 萄籽提取物 葡
Ｄｅｅ ｍｉ ｏ ｎｔ ｃ ａ ｉ ｎ ｎ Ｇｒ ｐ ｅ ｔ ａ ｔｗｉｈ ｏ ｎ ｈ ｃ ａ ｄ ｎ Ｂ２ Ｓ ａ ａ ｄ ｔ ｒ ｎｅＰｒ ａ ｈｏ ｙ ｎ ｄｉｓｉ ａ ｅＳｅ ｄ Ｅｘ ｒ ｃ ｔ Ｐｒ ａ ｔ ｏ ｙ ｎｉ ｉ ｔ ｎｄ ｒ Ｗ Ｕ ｅ ，ＣＨＥＮＧ ｕ ｆ ｎ Ｗ ｉ Ｘｉ－ ｅ ｇ，ＷＡＮＧ ｕ — ｕｉ Ｃｈ ｎ ｈ ，ＣＵＩＷ ｅ —ｘ ，ＦＵ ｎ — ｉ ｇ ｎ ｉ Ｙｉ ｇ ｙｎ
（ ｉ ｊ ａｆ ｇ ａ ｒｌ ｒｄ ｃ Ｒ ＤＣ ． ｔ． ｉ ｊ ０ ４ ７ Ｃ ｉａ Ｔａ ｉ Ｊ ｎｅ ｔ ａ ｐｏ ｕｔ ＆ ｏ， ｄ， ａ ｉ ３ ０ ５ ， ｈｎ ） ｎｎｉ ｎ Ｎ ｕ Ｌ Ｔ ｎｎ
Ａｂｓｒ ｃ ： ｓａ ｌｓ ｔｏ ｒｄ ｔｃｉ ｇｐ ｏ ｎｈ ｅ ａ ｉ ｉｓｉ ｒｐｅｓ ｅ ｘｒ ｃ ｔ ｒ ａ ｔ ｏ ｙ ｎ ｄｎ Ｂ２ ｔ ａ ｔ Ｔｏｅ ｔｂ ｉｈａｍｅ ｈ ｄｆ ｅｅ ｔ ｒ ａ ｔ ｏ ｙ ｎ ｄｎ ｎｇ ａ ｅ ｄ ｅ ｔａ ｔ ｈｐ ｏ ｎｈ ｃ ａ ｉ ｉ ｏ ｎ ｗｉ
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葡萄籽中原花色素的含量测定方法简述
葡萄籽中原花色素的含量测定方法简述摘要：葡萄籽中的原花色素具有很多的生物活性，其含量的测定对于研究葡萄籽的生物活性以及开发葡萄籽的药用价值具有很大的意义。
本文介绍了葡萄籽中原花色素的含量测定方法，包括提取、纯化、检测等步骤，为研究葡萄籽的生物活性以及开发葡萄籽的药用价值提供了一定的参考。
关键词：葡萄籽；原花色素；含量测定；生物活性；药用价值一、引言葡萄籽是葡萄的种子，富含原花色素、多酚类物质、黄酮类物质等多种生物活性成分。
其中，原花色素是一种天然的生物活性成分，具有很多的生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。
因此，研究葡萄籽中原花色素的含量及其生物活性具有很大的意义。
二、葡萄籽中原花色素的提取葡萄籽中原花色素的提取可采用乙醇提取法、水提取法、超声波提取法、微波辅助提取法等多种方法。
其中，乙醇提取法是一种常用的提取方法，其步骤如下：1、取适量的葡萄籽，粉碎成细粉。
2、将葡萄籽粉末加入适量的乙醇中，并加入一定量的氢氧化钠。
3、在室温下振荡提取2-3小时。
4、离心沉淀，取上清液。
5、重复以上步骤，直至提取液无色。
6、将提取液浓缩至一定体积，得到葡萄籽中原花色素的提取物。
三、葡萄籽中原花色素的纯化葡萄籽中原花色素的提取物中含有其他的杂质，需要进行纯化。
纯化方法可以采用硅胶柱层析法、逆流色谱法、高效液相色谱法等多种方法。
其中，高效液相色谱法是一种常用的纯化方法，其步骤如下：1、将葡萄籽中原花色素的提取物溶解在适量的溶剂中。
2、用C18柱进行分离，选择合适的流动相，进行梯度洗脱。
3、将纯化后的葡萄籽中原花色素的溶液收集起来，用氮气吹干。
4、将干燥后的纯化产物溶解在适量的溶剂中，得到纯化后的葡萄籽中原花色素。
四、葡萄籽中原花色素的检测葡萄籽中原花色素的检测可以采用紫外分光光度法、高效液相色谱法、质谱法等多种方法。
其中，高效液相色谱法是一种常用的检测方法，其步骤如下：1、将纯化后的葡萄籽中原花色素溶解在适量的溶剂中。
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杭州尼诺生物科技有限公司
葡萄籽原花青素
一目的：建立葡萄籽原花青素含量测定法。
二仪器：紫外可见分光光度UV—UNIC7200。
三责任者：QC检验员。
四原理：
原花青素在酸性条件下加热水解产生色素，产生色素的过程是定量反应。
通过检测水解产物的最大吸收波长下的吸光度对原花青素进行定量。
在吸光度0.2-0.7纳米范围内浓度和吸光度呈线性关系。
五试剂和对照品：
甲醇（分析纯）正丁醇（分析纯）
盐酸（分析纯）硫酸铁铵（分析纯）
葡萄籽对照品（公司自制）
六试剂配制及溶液配制：
1 试剂配制：
50%甲醇溶液：量取50毫升甲醇溶于50毫升纯化水中。
盐酸正丁醇溶液：量取5毫升盐酸溶于95毫升正丁醇，置阴凉处避光保存。
硫酸铁铵盐酸溶液：称取2克，NH4F e (SO4)212H2O溶于100毫升2摩尔/升的盐酸水溶液中。
2 溶液配制：
对照品溶液：称取10毫克葡萄籽对照品，精密称定，用50%甲醇溶解并定容到100毫升容量瓶中。
供试品溶液：称取10毫克葡萄籽供试品，精密称定，用50%甲醇溶解并定容到100毫升容量瓶中。
七测定步骤：
在一系列10毫升具塞硼硅酸玻璃刻度试管中，各加0.2毫升硫酸铁铵盐酸溶液，6毫升正丁醇盐酸溶液，再逐个加1毫升待测样品溶液，1毫升对照品溶液，1毫升甲醇（空白），记录试管体积V A。
加塞，振荡混匀。
于98。
C沸水浴中反应45分钟，取出试管于冰水中迅速冷却，记录试管的体积V B。
在546纳米处用紫外分光光度计检测相对于空白的吸光度。
八计算：
此方法受环境因素影响，操作中用对照品来定量待测样，其计算公式如下：
原花青素%=K×A1×M2×V1/（A2×M1×V2）
式中：
A1 为供试品吸收度
A2 为对照液吸收度
M1 为供试品称样量
M2 为对照品称样量
V1 为供试品最终体积V A-V B
V2 为对照品液最终体积
K 为对照品的含量。