细胞转染 步骤

细胞转染汉恒生物HANBIO

实验前一天铺板293T细胞准备转染；实验当天从细胞培养箱中取出前一天的细胞于显微镜下观察细胞密度，达到70%~80%的汇合率即可进行转染

①转染前，吸去细胞原有培养基，加入新鲜的完全培养基，轻轻八字混匀后放入培养箱中，待转染

以100mm培养皿为例，

②转染时取2个EP管，各加入500μl无血清培养基，然后一份加入常温溶解好的质粒，另一份加入本公司转染试剂lipofiter TM

③加好后轻轻振荡EP管，使之混匀，静置室温孵育5min

④5min后，将两个EP管中的液体混合，吹匀后静置室温孵育20min

⑤20min后，取出培养箱中的培养皿，加入EP管中混好的脂质体，8字摇晃后，放入培养箱培养6h

⑥6h后，取出培养箱中的培养皿，吸去旧的培养基，加入10ml完全培养基后放入培养箱，继续于37℃培养箱培养24h

⑦24h后取出培养皿，荧光显微镜观察转染效果