高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量
高效液相色谱法测定虎杖提取物中白藜芦醇含量 (2)
高效液相色谱法测定虎杖提取物中白藜芦醇含量本文采用高效液相色谱法测定虎杖提取物中白藜芦醇含量。
测定条件: Hypersil ODS2-C18柱（4.6×250mm, 5μm）,流动相为甲醇：水( 40：60) ,检测波长: 303 nm，流速：1.0ml/min。
结果表明:白藜芦醇在0. 4~2. 0μg 范围内具良好的线性关系, 相关系数= 0. 9998,平均回收率为98. 19%（n=3）。
结论：本方法操作简便快速，结果准确可靠，适于虎杖提取物中自藜芦醇的测定。
标签：白藜芦醇；虎杖提取物；高效液相色谱法Determination Of resveratrol In Polygonum Cuspidatum ExtractBy High Performance Liquid ChromatographyLiu De-zhiZhejiang huisong Pharmaceutical Co. Ltd, Hangzhou 310018Abstract: In this paper, the determination of resveratrol in Polygonum cuspidatum extract by hplc. Determination of conditions: Hypersil ODS2-C18 column ( 4.6 × 250mm, 5 μ m ), mobile phase of methanol: water ( 40:60 ), the detection wavelength: 303nm, flow rate: 1.0ml·min. Results: resveratrol has good linear relationship in t he 0 4~2. 0 μg range, correlation coefficient = 0.9998, the average recovery rate was 98.19% ( n=3 ). Conclusion: the method is simple and rapid, accurate and reliable, and is suitable for determination of resveratrol from Polygonum cuspidatum extract.Key words: Resveratrol; Polygonum cuspidatum extract; High performance liquid chromatography虎杖提取物是由虎杖经一定的提取工艺提取而成。
HPLC法测定虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的含量[1][1].孔改doc
![HPLC法测定虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的含量[1][1].孔改doc](https://img.taocdn.com/s3/m/2aab8cd7700abb68a982fbd0.png)
HPLC法测定降酶片中白藜芦醇和虎杖苷的含量刘德茂1史德胜2（1大连公安医院，辽宁大连116011 2天津丹溪国药研究所天津300061）降酶片由虎杖、白花舌蛇草、柴胡、茵陈等中药组成，具有疏肝理气，清热利湿的功效，临床主治慢性肝炎及早期肝硬化。
虎杖为其主药之一，白藜芦醇和虎杖苷为其中的主要有效成分，因此可选择白藜芦醇和虎杖苷作为其质量控制的定量指标。
本研究建立了HPLC法测定其主要有效成分白藜芦醇和虎杖苷含量的方法。
1.仪器与试剂LC—10A型高效液相色谱仪；SPD—10A紫外检测器；Anastar色谱工作站；乙腈为色谱纯，水为蒸馏水，其他试剂为分析纯。
虎杖苷对照品（批号11575-200301），白藜芦醇对照品（批号111535-200301）由中国药品生物制品检定所提供。
降酶片由本院制剂室提供，批号060820、060821、060822。
2.方法与结果2.1色谱分析条件：Irregular C18 柱（4.6×250mm 5μ）；流动相：乙腈：水（25：75）；流速：1.0ml·min-1；柱温：35℃；检测波长：306nm；进样量：20μl；理论塔板数以虎杖苷峰计不低于3000，以白藜芦醇峰计不低于3000。
2.2对照品溶液的制备：精密称取虎杖苷对照品8.04mg、白藜芦醇对照品6.12mg，分别置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。
各精密量取3ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3供试品溶液的制备：取本品20片，研细，取50mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理30分钟，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.4线性关系考察：分别精密量取虎杖苷对照品储备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml置10ml量瓶中，白藜芦醇对照品储备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml 置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取20μl进样，记录峰面积。
不同地区虎杖中白藜芦醇苷及苷元的含量比较
甲醇 50 ml ,超声波 (50 Hz) 提取 30 min ,过滤 。取滤 液经 0145μm 滤膜滤过 ,供进样用 。按前述色谱条 件进样分析 。结果见表 1 。
215462 117878 210079 116847 115065 017571 017830 115783 018238
010030 010195 010385 010412 010139 010024 010099 010116 010054
014487 010768 012120 013024 012690 011053 011544 011671 012926
出版社 ,1998∶2800 3 中国科学院西北植物研究所 1 秦岭植物志 1 第一卷 1 第
二册 1 北京 :科学出版社 ,1974∶154155 4 周建军 1 汉中地区虎杖中白藜芦醇甙及甙元含量的测
定 1 中草药 ,2002 ,33 (5) ∶414 4 周建军 1 虎杖中二苯乙烯类化合物药理作用研究进展 1
关键词 虎杖 ;白藜芦醇苷 ;白藜芦醇 ; HPLC ;含量测定
虎杖是蓼科植物 Polygon u m cuspi dat u m Sieb1 et Zucc1 ,为多年生灌木状草本 。产于江苏 、浙江 、江 西 、福建 、山东 、河南 、陕西 、湖北 、云南 、四川 、贵州等
中药材第 28 卷第 1 期 2005 年 1 月
3 讨论 311 本方法采用气相色谱法对广藿香药材中的百 秋李醇和广藿香酮含量进行测定 ,通过对色谱条件 的优化 ,比较不同流速 、柱温等 ,确定了能有效分离 百秋李醇和广藿香酮的色谱条件 ,并选用正十八烷 为内标物 ,经过系列方法学研究 ,该方法符合含量测
高效液相色谱法测定虎杖有效成分白藜芦醇的含量
注： 与 模 型 组 比较 ： Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ； 与 脑 泰 方 高 剂量 组 比较 ： Ｐ＜ ０ ． ０ ５
［ ５ ］ Ｌ ｏ ｎ ｇ ａ Ｅ Ｚ ， Ｗｅ ｉ ｒ ｋ ｓ ｔ ｅ ｉ ｎ Ｐ Ｒ， Ｃ ａ ｒ ｌ ｓ ｏ ｎ Ｓ ， ｅ ｔ ａ １ ． Ｒ ｅ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｂ ｌ ｅ ｍ ｉ ｄ ｄ ｌ ｅ ｃ ｅ ｒ ｅ ｂ ｒ ａ ｌ ａ ｒ ｔ ｅ ｒ ｙ Ｏ Ｃ —
护血脑屏 障，以此减少脑水肿 的发生 。
参考 文献
［ １ ］ Ｃ ａ ｎ ｄ ｅ ｌ ａ ｒ ｉ ｏ － Ｊ ｌ ａ ｉ ｌ Ｅ， Ｔ ｈ ｏ ｍｐ ｓ ｏ ｎ Ｊ ， Ｔ ａ ｈ ｅ ｒ ｉ Ｓ Ｍ ａ ｔ ｒ ｉ ｘ Ｍｅ ｔ ａ ｌ ｌ ｏ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ ｓ Ａｒ ｅ Ａ ｓ ｓ ｏ ｃ ｉ —
ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎｗ ｉ ｔ ｈ ｏ ｕ ｔ ｃ ｒ ａ ｎ ｉ ｅ ｃ ｔ ｏ ｍｙｉ ｎ ｒ ａ ｔ ｓ ［ Ｊ ］ ． Ｓ ｔ ｒ ｏ ｋ ｅ ， １ ９ ８ ９ ， ２ ０ （ １ ） ： ８ ４ － ９ １ ．
３ 讨 论
［ ６ ］Ｇ ａ ｒ ｃ ｉ ａ Ｔ Ｈ． Ａ ｒ ｅ ｌ ｉ ａ ｂ ｌ ｅ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｔ Ｏ ｏ ｃ ｃ ｌ ｕ ｄ ｅ ａ ｍｉ ｄ ｄ ｌ ｅ ｃ ｅ ｒ ｅ ｂ ｒ ａ ｌ ｉ ｎ ｗ ｉ ｓ ｔ ｒ ａ ｒ ａ ｔ ｓ ［ Ｊ ］ ．
Ｓ ｔ ｒ ｏ ｋ ｅ ， １ ９ ９ ３， ２ ４ （ ９ ） ： １ ４ ２ ３ ．
最新研究提 出脑 缺血后 ＭＭＰ － ９ 、Ｐ Ａ 可通过各 自途
径增加血脑屏障的率 过滤 ，ＭＭＰ － ９ 破坏 内皮细胞间 的紧 密连接 ，增加微血管 的通 透性 ， Ｐ Ａ具 有神经 毒口 ］ ， 脑缺 血后 Ｐ Ａ的大量聚集 增 加 了出血倾 向 ］ ，使血 脑屏 障进 步受损 。 Ｔ Ｉ ＭＰ ｓ 的表达 增加 时可有效 的抑 制血 脑屏 障 的损伤 。因此 ，针对降低 ＭＭＰ － ９ 、ｔ Ｐ Ａ ，增加 Ｔ Ｉ ＭＰ ｓ
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定
虎 杖 中 自藜 芦醇 和 白藜 芦 醇 苷 的提 取及 含 量 测定
刘仁 旺， 滕增辉 ， 张邦乐， 宦梦蕾， 杨 茜， 周四元 （ 军医 第四 大学药学系 药理学教 研室， 西安 ７ ０３ 陕西 １ ３） ０
【 摘 要 】目的 ： 建立同时测定 白藜芦醇和 白藜芦 醇苷含量 的
Ｅｘ ｒ ｃｉ ｎ ｆｒ ｓ ｅ ａ ｒ ｌａ ｄ ｏ ｙ ａ ｉ ｔ ａ ｔｏ ｏ ｅ ｖ ｒ ｔ ｏ ｎ ｐ ｌｒ ｔｎ ｄ ｆ ｏ ｇ ａ ｋ ｔ ｅ ｒｍ ｉｎｔ ｎｏ ｗｅ ｄ ｒ ｉｏ ｅ ｎ ｉｓ ｈ ｚ ｍ ａ ｄ ｔ ｄ ｔ ｒ ｉ ｔｏ ｅ ｅ ｍ ｎａ ｉ ｎ
ｄ ｓ ｎ（ ａｔ ｄ ３ ｌ ｅ ） ｗ ｓｉ ｒ ｕｅ ｐｉｉ ｈ ｅｉ ４ ｆ ｏ ａ ｅ ｌ ｇ ｃｒ ｎ ｓ ｖ ｓ ａ ｎ ｏ ｃｄ ｔ ｏｔ ｚ ｔｅ ｔｄ ｏ ｍ ｅ
ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｆｅ ｔ ｃｉｎ． ｅ ｈ ｏｏ ｏ ｘ ａ ｔｏ ｙ ｒ ｔ ｅ ｔ ｔ ｏ ｔ ｎ ｆｒ ｓ ｅ ａｒ ｌａ ｄ Ｉ ｔ ｏａ ｃ ｎ ｅ ｔｏ ｅ ｖ ｒ ｔ ｌｈ ｌ ｏ ｎ ｐ ｌｄ ｔ ｓ ｔ ｅ ｅ ａ ｕ ｔ ｎ ｉ ｄ ｘ ＲＥＳ ｏｙ ａ ｉ ａ ｖ ｌ ａｉ ｎ ｅ ． ｎ ｈ ｏ ＵＬＴＳ：Ｕｎ ｅ ｈ ｐｉ ｄ ｒｔｅ ｏ ｔ — ｍｉ ｄ ｃ ｒ ｍａｏ ａ ｈ ｃ ｃ ｎ ｉ ｏ ｚ ｈ ｏ ｔｇ ｐ ｉ ｏ ｄｔ ｎ， ｔ ｅ ｒ ｔｎ ｉ ｆ ｒ ｓ ｅ ａｒ ｌ ｅ ｒ ｉ ｈ ｅｅ ｔ ｔ ｍｅ ｏ ｅ ｖ ｒｔｏ ｎ ｏｙ ａ ｉ ｗａ ６ ８ ｍｉ ． ｎ，ｒ ｓ ｅ ｔ ｅｙ，ａ ｄ ｔ ｅ ａ ｄ ｐ ｌｄ ｔ ｓ ． ｎ ａ ｄ ４ ７ ｍｉ ｎ ｎ ｅ ｐ ｃ ｉ ｌ ｎ ｈ ｙ ｖ ｃ ｕ ｄ ｂ ｅ ａ ａｅ ｅｌ ｗ ｔ ｎ ｅ ｅ ｅ ｃ ．Ｔ ｅ ｅ ａｉｎ ｏ ｉ ｅ ｒ ｏ ｌ ｅ ｓ ｐ ｒ ｔ ｄ ｗ ｌ ｉ ｈ ｉｔ ｒ ｒ ｎ ｅ ｈ ｑ ｔ ｆｌ ａ ｆ ｕ ｏ ｎ ｅ ｒ ｓ ｉ ｏ ｅｅ ｎｉ ｔ ｆ ｅ ｖ ｒ ｔ ｏｙ ａｉ ｗｅｅ Ｙ ｒｇ ｅ ｓ ｎ ｆｒｄ ｔ ｒａ ａｉｎ ｏ ｓ ｅ ａｒ ｌａ ｄ ｐ ｌｄ ｔ ｒ ＝ ｏ ｎ ｏ ｒ ｏ ｎ ｎ
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定一、本文概述本文旨在探讨虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取方法及其含量测定技术。
虎杖作为一种具有广泛药用价值的天然植物，其中含有的白藜芦醇和白藜芦醇苷是其主要活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
因此，研究虎杖中这两种成分的有效提取和准确测定方法对于深入理解虎杖的药理作用以及优化其临床应用具有重要意义。
本文将综述当前虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取技术，包括溶剂提取、超声波辅助提取、微波辅助提取等，并评价其优缺点。
本文还将介绍含量测定的常用方法，如高效液相色谱法、紫外可见分光光度法等，并探讨其准确性和可靠性。
通过本文的综述，旨在为虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的深入研究和应用提供有益的参考。
二、虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取方法虎杖，作为一种具有丰富生物活性的中草药，被广泛用于传统医学中。
其内含的白藜芦醇和白藜芦醇苷具有显著的抗氧化、抗炎和抗肿瘤等生物活性，因此，对这两种成分的提取和含量测定具有重要的意义。
以下将详细介绍虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取方法。
我们需要新鲜的虎杖根茎，确保其来源清洁、无污染。
随后，将虎杖根茎进行清洗、干燥和粉碎，以便后续的提取操作。
由于白藜芦醇和白藜芦醇苷均具有一定的极性，因此，我们常选用极性溶剂如甲醇、乙醇等进行提取。
这些溶剂能够有效地溶解并提取出虎杖中的目标成分。
常用的提取方法包括浸泡提取、回流提取和超声波辅助提取等。
考虑到效率和提取效果，我们通常采用回流提取法。
具体操作如下：将粉碎后的虎杖粉末与提取溶剂混合，置于回流装置中，加热回流一定时间，使溶剂充分与原料接触，从而充分提取出白藜芦醇和白藜芦醇苷。
提取完成后，需要对提取液进行处理，以去除其中的杂质，提高目标成分的纯度。
常用的处理方法包括过滤、浓缩和干燥等。
通过以上步骤，我们可以有效地从虎杖中提取出白藜芦醇和白藜芦醇苷。
这为后续的含量测定和进一步研究提供了基础。
HPLC法测定虎杖中白藜芦醇的含量
HPLC 法测定虎杖中白藜芦醇的含量朱鸿津(张家港市制药厂 215600)摘 要 本文采用高效液相色谱法测定虎杖白藜芦醇含量。
测定条件:ODS C 18柱,流动相为甲醇 水(35 65),检测波长:300nm 。
结果表明:白藜芦醇在0.4~2.0 g 范围内具良好的线性关系,相关系数 =0.9998,平均回收率为98.19%关键词 白藜芦醇;虎杖;HP LC虎杖为蓼科植物虎杖Polygonum cusp idatum Sieb.dt Zucc 的干燥根和根茎,主含蒽醌类和芪类化合物,其中芪类成分尤其是白藜芦醇(resveratrol)具有重要生理活性。
现代研究表明:白藜芦醇在癌的起始,促进和发展三个主要阶段均有化学抗癌活性,同时具有降血脂,抑制血小板凝聚及调节脂蛋白代谢等作用。
目前,有关虎杖中白藜芦醇含量测定方法的研究报告尚不多见,为此,本文对虎杖中白藜芦醇含量的HPLC 测定方法进行了研究。
1 仪器与试药岛津LC 6A 高效液相色谱仪,SPD 6AV 可见紫外检测器,CR 3A 数据处理机,色谱柱:ODSC 18(4.6 200mm )。
白藜芦对照品:自制。
经波谱和色谱鉴定为纯品。
虎杖购于安徽亳州药材市场。
2 方法与结果2.1 色谱分析条件:流动相:甲醇 水(35 65),色谱柱:ODSC 18柱(46 200mm ),流量:0.8ml/min,测定波长:300mm,进样量:20 l 。
2.2 溶液的配制白藜芦醇对照溶液:精密称取白藜芦醇对照品约5mg ,置25ml 容量瓶中,甲醇溶解并稀释到刻度,备用。
白藜芦醇HPLC 图谱见图1。
样品溶液:精密称取虎杖粉末(过40目筛)50g ,95%乙醇水浴回流提取三次,第一次用4倍量乙醇回流提3小时,第二、三次分别用3倍量乙醇回流提取各1小时,合并提取液,冷置,过滤,滤液减压浓缩至小体积,加蒸馏水200ml,水浴挥去残余乙醇,并保温15分钟,过滤,滤液上聚酰胺柱,大量水冲至无色后,用10%乙醇冲洗,色淡后用30%乙醇冲洗,收集30%乙醇冲洗液,减压浓缩并定容于100ml 容量瓶中,精密吸取上述溶液1ml,置10ml 容量瓶中,甲醇稀释至刻度。
虎杖中白藜芦醇的提取与分离工艺研究
虎杖中白藜芦醇的提取与分离工艺研究
更新日期： 06-04 作者：许汉林， 付宜和， 高鹏， 许承军
【关键词】 虎杖；,,,白藜芦醇；,,,大孔树脂；,,,硅胶柱层析
摘要：目的优选虎杖的白藜芦醇最佳提取工艺。方法①采用正交实验法，以白藜芦醇提取量为指标，高效液相色谱法（HPLC）测含量，优选提取工艺条件。②以大孔树脂富集及色谱法分离、纯化白藜芦醇。结果乙醇提取最佳工艺为10倍量的90%乙醇回流提取2次，1 h/次。经AB8树脂吸附富集，硅胶柱色谱纯化，可获得高纯度的白藜芦醇产品。结论该工艺可用于指导生产。
பைடு நூலகம்键词：虎杖； 白藜芦醇； 大孔树脂； 硅胶柱层析
Study on Extraction Process of Resveratrol in Polygonum cuspidatum
Abstract:ObjectiveTo study the optimum extraction process of resveratrol in Polygonum cuspidatum.Methods①The optimum extraction process was investigated by orthogonal design and the index of the method was the contents of resveratrol.②The technology of macroporous adsorptive resin and chromatography was used in the separation and purification of resveratrol by HPLC.ResultsThe optimum condition of ethanol extraction:10 times amount of 90% ethanol and extracted 2 times,1 hour one time.The purity of the product was gained by the technology of resin AB8 adsorption and silica column chromatography purification.ConclusionThe optimum extraction process can direct production.
虎杖中白藜芦醇测定方法的比较研究
叶秋雄,黄 苇3(华南农业大学食品学院,广东广州510642)摘 要:虎杖中有效成分白藜芦醇经提取、分离纯化后,用HP LC 法、一阶导数光谱法、紫外分光光度法测其含量。
结果表明:HP LC 法分离度好,测定结果稳定、准确,相对标准偏差小;样品未经分离纯化时,干扰组分较多,一阶导数光谱法、紫外分光光度法测定结果与HP LC 法相关性不显著,相对标准偏差较大;分离纯化可消除背景干扰,提高检测结果的准确性。
一阶导数光谱法操作简单,测定结果较紫外分光光度法准确;可替代HP LC 法用于白藜芦醇的测定。
关键词:白藜芦醇,超声波,HP LC 法,一阶导数光谱法,紫外分光光度法Com p a ra ti ve s tudy o n m e tho d s fo r de te r m i na ti o n o f re sve ra tr o l fr om po l ygo tnum cu sp i da tumY E Q i u -x i ong,HUANG W e i3(College of Food Science,South China Agricultural University ,Guangzhou 510642,China )Ab s trac t:Th re e a na lys is m e thod s w e re us e d i n th is s tud y to a na l yze the c on te n t of re s ve ra tro l a nd the e ffe c tive c om p one n tsi n p o lyg o tnumc usp id a tum ,name l y,HPLCm e thod,firs t -d e ri va ti vesp e c tra m e thoda ndUV -Sp e c trop ho tom e tric m e thod 1It i s s ug g e s te d tha t the HPLC m e thod ha d g ood s ep a ra tion e ffe c t a nd a c c u ra te m e a s u rem e n t 1The re s u lts s how e d tha t s om e i n te rfe ring c om p one n ts s e em e d p re s e n t i f the s am p le s ha d no t s ep a ra te d a ndp u rifie d 1B e c a us eofthes e ve reb ac kg roundi n te rfe re nc e,thete s t c ond uc te db ytheUV -Sp e c trop ho tom e tric m e thod s how e d a re s u lt h ig he r tha n the a c tua l va l ue 1The firs t -d e riva ti ve sp e c tra m e thod c ou ld e li m ina te the b a c kg round i n te rfe re nc e a nd a l s o ha d a n a d va n ta g e of s i m p lic ity a s w e ll a s a c c u ra c y 1Key wo rd s:re s ve ra tro l ;u ltra s on ic;HPLC m e thod;UV -sp e c trop ho tom e tric m e thod;firs t -d e riva tive sp e c tra m e thod中图分类号:TS20713 文献标识码:A 文章编号:1002-0306(2010)05-0359-04收稿日期:2009-05-15 3通讯联系人作者简介:叶秋雄(1983-),男,在读研究生,研究方向:食品加工、保藏与包装。
虎杖中白藜芦醇的含量TLCS法测定
虎杖中白藜芦醇的含量 TL CS 法测定
·515 ·
傅红 王金龙 安徽省合肥市第二人民医院 230011
摘 要 目的 :建立一种虎杖中白藜芦醇的含量测定方法 。方法 : TL CS 法测定 ,以石油醚 - 乙酸丁酯 - 甲醇 - 冰醋酸 (4 :1 :0. 7 :0. 02) 为展开剂 ,293mm 紫外光为扫描波长 ,超声震荡法提取白藜芦醇 。结果 :乙醇为白藜芦醇的最佳溶媒 ,白藜芦醇的标准 曲线为 : A = 2292. 2 C + 87. 768 ,γ= 0. 999 ,平均回收率 101. 6 % , RS D = 2. 66 % 。结论 :该方法简单易行 ,精确度和重视性良好 ,可 用于虎杖的质量控制 。 关键词 虎杖 ;白藜芦醇 ;含量测定 ,薄层扫描法
制备工艺
处方 :大 黄 100g , 黄芩 100g , 黄 柏 100g 。抢水 洗 净 ,于 80～90 ℃烘干 。将以上药材粉碎成细粉 ,过 6 号 筛 ,备用 。另取黄凡士林 700g ,经 150 ℃1h 干热灭菌 , 过滤 ,放冷至 100 ℃,投入粉碎好的药粉 ,混匀 ,不断搅 拌至凝固 。分装成 30g/ 盒即得 。
4 周建军 ,张宏杰 ,杨培君 ,等. 汉中地区虎杖中白藜芦醇苷及苷元 含量的测定. 中草药 ,2002 ,33 (5) :414
5 陈雷 ,杨福全 ,张天佑 ,等. 虎杖中白藜芦醇甙的调整塑流色谱分 离提纯及分析. 分析测试学报 ,2000 ,19 (4) :60 收稿日期 :2006 - 06 - 29
1. 3 扫描波长的确定 取硅胶 G 薄层板 ,105 ℃活化 1h ,点样对照品溶液 2μL ,以上述展开剂饱和 15min 后 展开 ,取出 、晾干 ,在紫外光下定位 ,在 200～370mm 范 围内分别进行样品及空白硅胶板光谱扫描 ,以样品扫 描结果减去空白吸收 ,发现白藜芦醇在 293nm 有最大 吸收 ,所以选择 293nm 为扫描波长 。
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定
虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定【摘要】目的：建立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷含量的高效液相色谱法，优化虎杖中有效成分白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取工艺. 方法：采用梯度法建立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷的高效液相色谱方法，以白藜芦醇和白藜芦醇苷总量为考察指标，设计以乙醇浓度、溶剂倍数及醇提温度等为影响因素的4因素3水平的正交实验，确定虎杖中上述有效成分的最佳提取工艺. 结果：在选定的色谱条件下，虎杖提取物中白藜芦醇和白藜芦醇苷可以达到基线分离. 检测白藜芦醇及其苷的线性回归方程分别为Y=0.0006X-0.183 （r=0.9996），Y=0.0011X-0.478（r=0.9993）；线性范围分别为0.48～38.4 mg/L和0.47～38.2 mg/L. 日内、日间精密度都小于5%，回收率在90%～105%之间，样品分析时间小于7 min. 虎杖中有效成分白藜芦醇和白藜芦醇苷的最佳提取工艺为乙醇浓度80％，溶剂倍数15，醇提温度70℃，提取时间2 h. 结论：建立了准确可靠、分析速度快可同时检测虎杖提取物中白藜芦醇和白藜芦醇苷的分析方法，优化了质量可控的提取工艺.【关键词】虎杖；白藜芦醇；白藜芦醇苷；高效液相色谱0引言虎杖(polygonum cuspidtum sieb)为蓼科蓼属多年生草本植物虎杖的干燥根茎，主要含有蒽醌类、二苯乙烯类、水溶性多糖和鞣质等成份［1］. 白藜芦醇(3，4′，5�踩�羟基�捕�苯乙烯)和白黎芦醇苷是虎杖的主要功效成分，具有保护心脏、抗血栓、降血脂［2］等药理作用. 白藜芦醇及白藜芦醇苷的药理作用相近，但其极性却相差较大. 本研究探讨一种兼顾白藜芦醇及白藜芦醇苷的提取工艺，并建立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷含量的高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC），旨在为虎杖的药理作用研究以及科学合理利用提供试验依据.1材料和方法1.1材料白藜芦醇苷和白藜芦醇的对照品均由中国药品生物制品检定所提供；虎杖的干药材购自西安市胡家庙药材市场. 2695型高效液相色谱仪，2996型二极管阵列检测器(美国Waters公司)；调温式电热套(北京科伟永兴仪器有限公司)；色谱纯乙腈，甲醇(美国TEDIA公司)，其他试剂均为国产分析纯.1.2方法1.2.1工作曲线的建立分别精密称取白藜芦醇苷及白藜芦醇对照品10 mg 置100 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成100 mg/L的白藜芦醇苷和白藜芦醇对照品混合储备液，备用. 分别精密吸取两对照品储备溶液0.05，0.2，1，2， 4 mL 配制成浓度为0.5，2，10，20， 40 mg/L的混合对照品的标准溶液，依次取20 μL进样. 色谱条件为：色谱分析柱：C18(250 mm×4.6 mm，5μm，美国Phenomenix公司)；流动相：乙腈和水，梯度洗脱如表1所示. 检测波长：315 nm；流速：1 mL/min；柱温为30℃. 按上述色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标，对照品浓度值为横坐标绘制工作曲线，应用Excel 软件采用最小二乘法计算回归方程.表1HPLC流动相梯度表时间(min)〖〗乙腈(％)〖〗水(％)〖〗流速(mL/min)〖〗梯度类型0〖〗28〖〗72〖〗1.0〖〗67〖〗72〖〗28〖〗1.0〖〗69〖〗72〖〗28〖〗1.0〖〗620〖〗28〖〗72〖〗1.0〖〗11.2.2精密度和准确度测定分别精密吸取白藜芦醇及白藜芦醇苷储备液0.1，0.5，3 mL，配成浓度为1，5，30 mg/L混合对照品的标准溶液. 每个浓度6个样本，连续测定3 d，与标准曲线的建立同时进行. 代入当日的回归方程计算标准溶液的浓度，将结果进行方差分析，即得到本方法的精密度. 将1，5，30 mg/L 三个浓度标准溶液的白藜芦醇和白藜芦醇苷的测定浓度值与标准溶液的标示浓度相比，即得方法回收率.1.2.3虎杖有效成分提取工艺的优化在本生产工艺研究中，根据药物有效成分、药理作用及理化性质特点，选择醇提法进行正交试验，以提取时间（A 1，2，3 h），乙醇浓度（B 70%，80%，90%），醇提温度（C 50，60，70 ℃）和溶剂倍数(D 10，15，20)作为考察因素，选择3个水平，综合评价提取工艺，选用L9(34)正交表，安排正交实验.取虎杖10 g，按L9(34)正交表设计的顺序，各加入设定的乙醇量，加热煎煮规定时间和次数，滤过，合并滤液，将滤液用甲醇稀释10倍后取样20 μL，用HPLC法测定白藜芦醇及白藜芦醇苷的峰面积，带入回归方程中，计算出白藜芦醇和白藜芦醇苷的总量.2结果2.1HPLC检测方法的特异性在本实验选定的洗脱及检测条件下，白藜芦醇和白藜芦醇苷的保留时间分别为6.8 min和4.7 min. 白藜芦醇及白藜芦醇苷峰和杂质峰能实现基线分离，样品峰的测定不受杂质峰的干扰（图1）.2.2白藜芦醇苷及白藜芦醇标准曲线回归方程以白藜芦醇和白藜芦醇苷的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标建立标准曲线. 应用Excel软件采用最小二乘法得到白藜芦醇和白藜芦醇苷的工作曲线回归方程： Y=0.0006X-0.183（r=0.9996），Y=0.0011X-0.478（r=0.9993）. 结果表明，白藜芦醇及其苷分别在0.48～38.4 mg/L和0.47～38.2 mg/L范围内呈良好的线性关系.2.3精密度和准确度测定1，5，30 mg/L浓度的白藜芦醇苷的日内精密度分别为4.0%，2.6%和2.0%；日间精密度分别为4.2%，4.3%和2.6%；方法回收率分别为（101±3.4）%，（94±2.3）%和（95±1.3）%.白藜芦醇的日内精密度分别为5.0%，3.0%和2.0%；日间精密度分别为4.8%，3.9%和1.1%；方法回收率分别为（96±5.1）%，（95±2.6）%和（95±1.6）%. 结果显示本方法准确、重复性好.2.4虎杖有效成分提取工艺的优化将测得值进行方差分析（表2），因素B差异具有统计学意义（P<0.01 ). 由表3中进行直观分析可知，A 因素中各水平试验结果的和比较为：K2>K1>K3，平均含量以第2水平为高；B 因素中各水平试验结果的和比较为：K1>K2>K3，平均含量以第1水平为高；C 因素中各水平试验结果的和比较为：K3>K1>K2，平均含量以第3水平为高；D 因素中各水平试验结果的和比较为：K2>K1>K3，平均含量以第2水平为高. 选择最佳的提取工艺为提取时间2 h，乙醇浓度为70%，醇提温度为70℃，溶剂倍数15.表2白藜芦醇及其苷含量方差分析结果3讨论近年来有较多关于虎杖有效成分白藜芦醇和白藜芦醇苷提取及含量研究的报道，多采用单因素、正交试验及大孔吸附树脂吸附法研究白藜芦醇的提取条件［3-4］；正交试验法及乙醇回流法优选白藜芦醇提取工艺［5-7］；以白藜芦醇苷为指标，研究虎杖的提取条件等［8］，这些方法均以白藜芦醇或白藜芦醇苷单个成分为指标. 由于虎杖中的活性成分白藜芦醇和白藜芦醇苷都具有保护心脏、抗血栓、降血脂等药理作用，因此我们在本实验中测定样品中的白藜芦醇和白藜芦醇苷的总量并以此作为评价指标是合理可行的. 我们的实验结果表明，正交试验及方差分析结果虎杖醇提取工艺最大影响因素为乙醇浓度B，其次为溶剂倍数D，再次为醇提温度C和提取时间A. 最佳工艺乙醇浓度为80％，溶剂倍数为15，醇提温度为70℃，提取时间为2 h.目前对虎杖中白藜芦醇或白藜芦醇苷的测定方法很多［9-10］，但是同时对白藜芦醇及其苷测定的报道较少［11］，主要存在诸如样品处理方法复杂、分析时间较长等问题. 本研究建立的同时测定虎杖中白藜芦醇及其苷的方法选用315 nm作为检测波长，使检测方法获得了较高的灵敏度. 采用乙腈和水作为流动相，白藜芦醇和白藜芦醇苷与其他化合物达到基线分离. 白藜芦醇和白藜芦醇苷分别在6.8 min和4.7 min出峰，快速有效地实现了分离检测.综上所述，本研究建立的虎杖提取液中白藜芦醇和白藜芦醇苷的HPLC检测方法具有灵敏、准确、迅速和工艺稳定、经济等特点，可用于虎杖提取液中白藜芦醇和白藜芦醇苷的含量测定以及有效成分提取的质量控制.【参考文献】［1］肖凯，宣利江，徐亚明，等. 虎杖的化学成分研究［J］. 中国药学杂志，2003，38(1):12-15.［2］黄永洪，史若飞. 虎杖的活性成分及其在心血管方面的研究进展［J］.牡丹江医学院学报，2006，27(1):58-60.［3］朱立贤金征宇.虎杖中白藜芦醇提取分离工艺的研究［J］. 安徽农业科学，2005，33(1):77-78.［4］许汉林，付宜和，高鹏，等. 虎杖中白藜芦醇的提取与分离工艺研究［J］. 时珍国医国药，2006，17(8):1424-1425.［5］余淑娴，郑湘娟，余祖兵，等. 正交实验法优选虎杖中自藜芦醇的提取工艺［J］. 时珍国医国药，2006，17(4):594-595.［6］江曙，朱蓉蓉，张芳，等.虎杖中白藜芦醇提取方法及工艺的优化［J］. 南京中医药大学学报， 2006，22(3):197-199.［7］耿艳辉，李梦青，刘桂敏，等. 从虎杖中提取白藜芦醇的工艺研究［J］. 应用化工，2005，34(11):708-710.［8］许汉林，孙芸，邵继征，等. 正交法优化虎杖中白藜芦醇苷提取工艺的研究［J］. 湖北中医学院学报，2006，8(2):29-30.［9］曾建国，候团章，张胜.高效液相色谱法测定虎杖提取物中白藜芦醇的含量［J］.中国中医药科技，2000，7(3):175-177.［10］朱鸿津. HPLC法测定虎杖中白藜芦醇的含量［J］.药学进展，2001，25(1):110.［11］周春山，向海燕，肖建波，等.高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇及其苷的含量［J］.药物分析杂志，2005，25(5):534-536.。
反相高效液相色谱法测定肝力保胶囊中虎杖苷、白藜芦醇和大黄素的含量-论文
［ Ｋ ｅ ｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ ］ ｈ ｉ ｇ ｈ — ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｕ ｒ ｅ ｌ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ ； ｐ ｏ ｌ ｙ ｄ ａ ｔ ｉ ｎ ； ｒ ｅ ｓ ｖ ｅ ｒ ａ ｔ ｒ ｏ ｌ ；ｅ ｍｏ ｄ ｉ ｎ ； Ｇ ａ ｎ ｌ ｉ ｂ ａ ｏ ｃ ａ ｐ ｓ ｕ ｌ ｅ Ｅ Ａ ｃ ａ ｄ Ｊ Ｓ ｅ ｃ Ｍｉ ｌ Ｍｅ ｄ Ｕｎ ｉ ｖ ， ２ ０ １ ３ ， ３ ４ （ １ ２ ） ： １ ３ ９ ０ １ ３ ９ ２ ］
ｃ ｏ ｎｔ ｅ ｎ ｔ ｓ ｉ ｎ Ｇａ ｎｌ ｉ ｂ ａ ｏ ｃ ａ ｐ ｓ ｕ ｌ ｅ
Ｗ Ａ ＮＧ Ｈ ｕｉ ， ＺＨ ＯＵ Ｙａ ｍ ｎｉ ， ＦＥＩ Ｙａ ｎ ｇ，ＬＯ Ｆａ ｎｇ， ＳＯＮ Ｇ Ｘｉ ｎ ｇ ｘｉ ｎ ｇ，ＺＨ Ａ Ｎ Ｇ Ｇｕｏ ｑｉ ｎｇ Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏｆ Ｐｈａ ｒ ｍａ ｃ ｙ， Ｅａ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ Ｈ ｅ ｐ ａｔ ｏｂｉ ｌ ｉ ａ ｒ ｙ Ｓｕ ｒ ｇ ｅ ｒ ｙ Ｈ ｏ ｓ ｐｉ ｔ ａ ｌ ， Ｓｅ ｃ ｏ ｎｖｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ， Ｓｈａ ｎ ｇｈａ ｉ ２ ００ ４３ ８， Ｃｈｉ ｎａ
匀， 精密称取 １ ． Ｏ ０ ｇ置 于 ２ ５ ｍＩ 的棕 色 量 瓶 中 ， 用 甲醇
２
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，
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１ ０ ｌ ２ ｌ ４ １ ６ １ ８ ２ Ｏ
１ ． ２ 试药 肝 力保 胶 囊 （ 批号： ２ Ｏ １ ２ ０ ３ ０ １ 、 ２ ０ １ ２ ０ ５ ０ １ 、
高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量
高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量摘要:采用高效液相色谱法测定了虎杖不同生长条件及不同部位的白藜芦醇含量｡建立了以色谱柱为Zorbax CB-C18(4.6×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-水(35∶65,V/V),流速为0.8 mL/min,检测波长为306 nm,柱温为室温,进样量为80 μL 的高效液相色谱方法｡结果表明,白藜芦醇浓度在2~100 μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.999 9);平均回收率为99.1%,RSD=1.2%(n=6)｡野生虎杖和组织培养虎杖白藜芦醇含量存在较大差异,虎杖不同部位白藜芦醇含量也存在较大差异,其中以野生虎杖根中白藜芦醇含量最高｡虽然在不同培养条件下,虎杖的不同部位都含有白藜芦醇,但与野生虎杖根相比含量差距较大,不能代替野生虎杖根的药用价值｡关键词:虎杖;白藜芦醇;高效液相色谱法Determination of Resveratrol in Polygonum cuspidatum by HPLCAbstract: The contents of resveratrol in different growing condition and different part of Polygonum cuspidatum were detected by HPLC. The separation was performed on Zorbax CB-C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) in methanol-water (V/V=35/65)with the flow rate of 0.8 mL/min and detected at 306 nm in room temper ature after injecting 80 μL sample. The linear range of resveratrol was 2~100 μg/mL with an average recovery of 99.1% (RSD=1.2%,n=6). The content of resveratrol in wild and tissue culture of Polygonum cuspidatum were different, and the contents of resveratrol in different parts of Polygonum cuspidatum also varied. The highest resveratrol in Polygonum cuspidatum was observed in wild plants. Though resveratrol of Polygonum cuspidatum differed in different culture conditions, the highest resveratrol content was detected in the roots of wild Polygonum cuspidatum, which indicated that the medical value of wild Polygonum cuspidatum was irreplaceable.Key words: Polygonum cuspidatum; resveratrol; HPLC白藜芦醇(Resveratrol)又称芪三酚,现代药理研究证明:白藜芦醇具有抗肿瘤､抗氧化､抗菌､抗炎､抗自由基､保护肝脏､保护心血管和抗心肌缺血､免疫调节､降血糖､降血脂等作用[1,2]｡另外白藜芦醇还有抗衰老､皮肤保健和美容功效[3,4]｡朱鸿津采用HPLC法测定虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)中白藜芦醇含量,测定结果表明,虎杖根中白藜芦醇含量可高达千分之一,可作为白藜芦醇的提取原料[5]｡然而,由于虎杖根的野生资源有限,大量采挖使野生资源日趋减少,近年来有一些利用组织培养快速繁殖虎杖的报道｡文涛等[6]测定发现虎杖愈伤组织中也含有白藜芦醇,并对虎杖不同部位白藜芦醇含量进行分析,结果发现虎杖根､茎､叶中均含有白藜芦醇,其中多年生根中含量最高[7]｡综上所述,虎杖不同生长条件､不同部位均含有白藜芦醇｡准确测定虎杖不同生长条件及不同部位白藜芦醇含量,将为虎杖资源进一步开发利用提供参考｡1材料与方法1.1仪器与材料高效液相色谱仪检测站(含Waters 1525二元泵､Waters 2487双通道紫外检测器､Breeze分析软件)(美国,沃特斯公司);Zorbax CB-C18(4.6×250 mm,5 μm)色谱柱(美国,安捷伦公司);Gzx-9146 MBE数显鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂);TGL-16G台式高速离心机(上海安亭科学仪器厂);W201D恒温水浴锅､申科R-205旋转蒸发器(上海申顺生物科技有限公司);SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州市上街华科仪器厂);FA2004N电子分析天平(上海精科天平仪器厂);JL-360DT型金利牌超声波清洗器(上海杰理科技有限公司)｡野生虎杖于2007年11月份采集于安徽科技学院中药种植园,由中药教研室时维静教授鉴定,为蓼科植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.);虎杖组织培养苗由安徽科技学院生物工程实验室提供,是由野生虎杖经组织培养而来｡白藜芦醇标准品(Sigma公司,纯度99.9%);乙酸乙酯(天津市北方天医化学试剂厂,分析纯);甲醇(TEDIA公司,色谱纯);去离子水;其余试剂均为分析纯｡1.2虎杖白藜芦醇的提取把待测虎杖于50 ℃干燥箱内过夜烘干,准确称取1.000 g样品,加1 g石英砂,于研钵中研碎,加10 mL乙酸乙酯,倒入50 mL具塞三角烧瓶中,再加10 mL乙酸乙酯冲洗研钵,一并倒入三角烧瓶中,室温避光提取12 h;然后将提取液以1 000 r/min 离心10 min,取上清于棕色试剂瓶中保存,残渣加15 mL乙酸乙酯继续提取12 h(共提取3次)｡将3次提取液与去离子水以1∶1(V/V)混合,抽提30 min,以1 000 r/min室温离心15 min,取有机相｡将提取液于50 ℃､80 r/min旋转减压挥干｡用色谱纯甲醇9 mL洗涤干燥瓶,倒入10 mL容量瓶中,用色谱纯甲醇定容至10 mL,再转入棕色试剂瓶中,待测｡1.3色谱分析条件流动相:甲醇-水(V/V=35/65);流速:0.8 mL/min;测定波长:306 nm;柱温:室温｡1.4标准溶液的配制准确称取白藜芦醇标准品10.0 mg,用色谱纯甲醇定容至10 mL,配制得1.0 mg/mL 标准白藜芦醇溶液,然后依次稀释为100 μg/mL､33.3 μg/mL､20 μg/mL､12.5 μg/mL 和2 μg/mL等5个不同浓度的工作溶液,待测｡2结果与分析2.1标准曲线的绘制将上述5个不同浓度的标准白藜芦醇溶液用0.45 μm滤膜过滤｡对过滤后的流动相进行超声脱气10~20 min,依次进样,每次进样80 μL｡以标准品不同浓度为横坐标,对应峰面积为纵坐标,绘制标准曲线｡由图1获得回归方程为:y=20 000 000x-22 343,其中R2=0.999 9｡2.2精密度试验按上述色谱条件,精密吸取质量浓度为20 μg/mL的对照品溶液,重复进样6次,每次80 μL,根据对照品峰面积积分值,计算RSD为1.35%(n=6)｡2.3HPLC法测定白藜芦醇含量用0.45 μm滤膜过滤样品｡对过滤后的流动相进行超声脱气10~20 min｡依次进样,进样量为80 μL,测定结果见图3和表1｡图3为野生虎杖茎(即表1中的A1B3)白藜芦醇含量色谱图｡根据白藜芦醇标准品曲线的回归方程y=20 000 000x-22 343,按外标峰面积法求得各样品的白藜芦醇含量｡实验测得的数据有两个影响因素,生长条件(A)和部位(B),即A因素有2个水平,B因素有3个水平,共有6个组合,每一组合有3个检测值,则一共有18个检测值｡测定结果见表1｡2.4资料的方差分析将表1资料用SPSS 13.0软件作方差分析,以固定模型作F测验｡由表2可知,生长条件的F=31.226,P<0.01,部位的F=41.547,P<0.01,生长条件与部位互作的F=31.743,P<0.01,表明生长条件､部位及生长条件与部位互作虎杖中白藜芦醇含量均有极显著差异,即虎杖在不同生长条件下,白藜芦醇含量存在极显著的差异;虎杖不同部位白藜芦醇含量存在着极显著的差异;虎杖不同生长条件及不同部位白藜芦醇含量存在着极显著的差异｡3小结与讨论从测定结果看,野生和组织培养虎杖不同部位白藜芦醇含量差异很大,经方差分析表明有极显著差异｡就部位而言,根部白藜芦醇含量显著高于叶和茎的白藜芦醇含量,而茎和叶白藜芦醇含量则无显著差异,这与张烜等研究的HPLC法测定花生不同部位白藜芦醇含量中花生根部白藜芦醇含量最高相符[8]｡所有样品中白藜芦醇含量最高的是野生根,野生根中白藜芦醇含量高达0.696 1 mg/g｡这主要因为虎杖是多年生草本植物,在其根部积累的白藜芦醇含量较高,这与传统的药用部位相符,而野生的叶和野生茎都是1年生,组织培养虎杖培养时间为1个月左右,所以虎杖中白藜芦醇含量较低｡另一方面,野生的生长条件对白藜芦醇的合成创造了良好的逆境条件｡利用组织培养手段获得的虎杖无菌组培苗虽然具有繁殖率高､生长速度快等优点[9],但由于生长条件相对单一而稳定,导致“逆境物质”白藜芦醇合成能力下降｡在虎杖组织培养时,我们可以从人工创造有利于白藜芦醇合成的生长条件方面研究,如调节光照､温度等条件,以提高虎杖中白藜芦醇含量｡参考文献:[1] 李旭波,谢人明. 白藜芦醇的药理作用研究进展[J]. 西部药学,2007,4(1):37-39.[2] 郜海燕,于震宇,陈杭君,等. 白藜芦醇功能和作用机理研究进展[J]. 中国食品学报,2006,6(1):411-416.[3] 韩晶晶,刘炜,毕玉平. 白黎芦醇的研究进展[J]. 生物工程学报,2008,24(11):1851-1859.[4] 李延华,王伟君,张兰威,等. 白藜芦醇的研究现状及应用前景[J]. 中国酿造,2008,184(7):10-12.[5] 朱鸿津. HPLC法测定虎杖中白藜芦醇含量[J]. 中国野生植物资源,2001,20(1):49-50.[6] 文涛,梁莉,曾杨,等. 不同光照强度对虎杖愈伤组织的影响[J]. 中国中药杂志,2007,32(13):1277-128[7] 夏海武,吕柳新. 虎杖不同部位白藜芦醇含量的分析[J]. 植物资源与环境学报,2005,14(3):55-56.[8] 张烜,胡君萍,韩玫,等. HPLC法测定花生不同部位中白藜芦醇的含量[J]. 新疆医科大学学报,2003,26(5):440-441.[9] 杨培君,李会宁,赵桦. 虎杖的组织培养与快速繁殖[J]. 西北植物学报,2003,23(12):2192-2195.。
高效液相色谱法测定虎杖注射液中白藜芦醇苷含量
高效液相色谱法测定虎杖注射液中白藜芦醇苷含量
林建海;焦文建;唐跃年
【期刊名称】《中国药房》
【年(卷),期】2001(012)008
【摘要】目的：建立虎杖注射液中白藜芦醇苷含量测定的方法。
方法：采用Hypersil ODS色谱柱，以甲醇－水（25∶ 75）为流动相，流速 1ml/min，检测波长 290nm。
结果：白藜芦醇苷对照品线性范围 0.145～2.32μ g/ml， r=0.9 999，加样回收率98.8％， RSD1.15％。
结论：用高效液相色谱法测定虎杖注射液中白藜芦醇苷含量，操作方便，结果准确，可供本品质量控制。
【总页数】2页(P493-494)
【作者】林建海;焦文建;唐跃年
【作者单位】上海第二医科大学附属新华医院,;山东省滨州医学院附属医院肾脏内科,;上海第二医科大学附属新华医院,
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
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高效液相色谱法测定虎杖提取物中白藜芦醇的含量_吴青
重庆医科大学学报2013年第38卷第7期（ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ2013．Ｖｏｌ．38Ｎｏ．７）进行，抗癌药物用药时间在口腔鳞状细胞癌细胞增殖水平最高（恶性程度相对较高）的休息相中期可能会获得更好的疗效，而手术时间在口腔鳞状细胞癌细胞增殖水平最低（恶性程度相对较低）和体积最小的活动相中期和晚期进行可能有利于降低肿瘤复发和减小手术创伤。
同时，该研究也为进一步对口腔鳞状细胞癌细胞体内生长的昼夜节律改变的分子机理研究提供了正确的方向和基础。
昼夜节律和肿瘤生长之间的关系和机理研究的深入，不仅能对恶性肿瘤的发生、发展带来新的认识，而且对设计新的分子治疗靶标、放疗和化疗、疗效的评价以及肿瘤手术边界的确定等诊治手段也将加入时间维度，从而催生肿瘤防治的新模式。
参考文献[1]Eismann E A ，Lush E ，Sephton S E.Circadian effects in cancer-rel －evant psychoneuroendocrine and immune pathways[J].Psychoneuroen －docrinology ，2010，35（7）：963-976.[2]Huang X L ，Fu C J ，Bu R F.Role of circadian clocks in the devel －opment and therapeutics of cancer[J].J Int Med Res ，2011，39（6）：2061-2066.[3]Jasser S A ，Blask D E ，Brainard G C.Light during darkness and can －cer ：relationships in circadian photoreception and tumor biology[J].Can －cer Causes Control ，2006，17（4）：515-523.[4]Fu L ，Lee C C.The circadian clock ：pacemaker and tumor suppres －sor[J].Nat Rev Cancer ，2003，3（5）：350-361.[5]Filipski E ，L évi F.Circadian disruption in experimental cancer pro －cesses[J].Integr Cancer Ther ，2009，8（4）：298-302.[6]童建.余弦分析法在生物节律研究中的应用[J].中国卫生统计，1991，8（1）：23-25.Tong J.Application of cosinor method to study of biological rhythms[J].Chinese Journal of Health Statistics ，1991，8（1）：23-25.[7]Innominato P F ，L évi F A ，Bjarnason G A.Chronotherapy and the molecular clock ：clinical implications in oncology[J].Adv Drug Deliv Rev ，2010，62（9-10）：979-1001.[8]L évi F ，Okyar A ，Dulong S ，et al.Circadian timing in cancer treat －ments[J].Annu Rev Pharmacol Toxicol ，2010，50：377-421.[9]L évi F.Chronotherapeutics ：the relevance of timing in cancer thera －py[J].Cancer Causes Control ，2006，17（4）：611-621.（责任编辑：唐秋姗）高效液相色谱法测定虎杖提取物中白藜芦醇的含量吴青1，罗先钦2，胡荣3（1.重庆医科大学附属儿童医院药剂科，重庆400014；2.重庆市中药研究院药理毒理研究所，重庆400065；3.重庆市中药研究院制剂所，重庆400013）【摘要】目的：建立虎杖提取物中白藜芦醇的含量测定方法。
反相高效液相色谱法测定虎杖根中白藜芦醇及其苷的含量
反相高效液相色谱法测定虎杖根中白藜芦醇及其苷的含量邹盛勤【摘要】建立反相高效液相色谱法同时测定不同根龄虎杖根中虎杖苷和白藜芦醇含量。
采用KromasilC18（4.6mm×250mm,5μm）色谱柱,流动相为甲醇-1.0%磷酸水溶液（50：50,v/v）,流速0.8mL/min,检测波长319nm,柱温为30℃。
虎杖苷和白藜芦醇的进样量分别在0.716~7.160μg（r=0.9996）和0.740~7.400μg（r=0.9998）范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率（n=6）分别为99.7%和98.5%。
本方法快速简便,重复性好,专属性强,可作为虎杖根的质量%A reserved-phase HPLC method for the content determination of erbascoside and resveratrol in root of Polygonum cuspidatum was established. The analytical was carried out with Kromasil C18 （4.6mm×250 mm, 5 μm） column and the mobile phase consisted of acet 【期刊名称】《生命科学仪器》【年(卷),期】2011(009)003【总页数】3页(P37-39)【关键词】虎杖苷;白藜芦醇;根龄;虎杖;反相高效液相色谱【作者】邹盛勤【作者单位】宜春学院化学与生物工程学院,江西省天然药物活性成分研究重点实验室,江西宜春336000【正文语种】中文【中图分类】O657.72虎杖( polygonum cuspidatum siobet Zucc.) 为蓼科属多年生草本植物的根或根茎，在我国大部分地区广泛分布。
虎杖性味微寒微苦，归肝、胆、肺经，具有活血定痛、清热利湿、止咳化痰作用。
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反相高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇的含量白祖海，文刚，张艳（长沙市疾病预防控制中心，长沙410001）摘要：采用HPLC法测定虎杖中白藜芦醇含量。
以聚酰胺柱对样品进行预处理，排除其它成分的干扰，获得较好分离度和高回收率。
选用自填装ODS-C18色谱柱(200 mm×4.6 mm，5μm)，以乙醇-水(2：3,v/v)作流动相，流速为0.6 ml/min，紫外光检测波长304nm，柱温为25℃。
白藜芦酵在0.05-0.40μg/mL 范围内具有良好的线性关系。
r=0.9996，平均回收率为98.51%(n=5)。
结论：该方法简便、准确可靠，适合于中药材虎杖中白藜芦醇含量的测定。
关键词：白藜芦醇；虎杖；反相高效液相色谱法Determination of Resveratrol in the Polygonum Cuspidatum byReversed-Phase HPLCBAI Zu-hai, WEN Gang, ZHANG Yan(Changsha Municipal Center for Prevention and Control of Diseases, Changsha 410001,China)Abstract：A simple and sensitive Reversed-Phase HPLC method for the determination of resveratrol in the roots of Polygonum cuspidatum was described，including the pretreatment of samples by poamide colutah. The separation was performed on an ODS column(200 mm×4.6 mm，5μm)，with the mobile phase of CH3CH2OH-H2O (2：3,v/v).The flow rate 0.6 ml/min and the detection wavelengthwas 304 nm，the temperature of the pillar is indoor temperature. Resveratrol have good linear relationship in the range of 0.05-0.40μg (r=0.9996).The average recoveries(n=5)of resveratrol were98.51%..A simple，accurate and sensitive method with good reproduciability to determine resveratrol simultaneously in Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.is established．Keywords：Resveratrol；Polygonum cuspidatum；Reversed-Phase HPLC.虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc)是蓼科蓼属植物，广泛分布于华东、中南、辽陕甘川滇等地。
虎杖根茎中主要含有蒽醌类和芪类化合物，其中芪类成收稿日期：2011-09-28修订日期：2012-07-20作者简介：白祖海（1978—），男，湖南岳阳人，长沙市疾病预防控制中心，主管检验师，硕士学位分白藜芦醇(resveratro1)和白藜芦醇苷(piceid)，具有活血定痛、清热利湿、止咳化痰作用[1]。
白藜芦醇具有抗氧化、抗癌、抗血小板凝聚、抗菌、调节脂类代谢、保护心血管系统和神经系统等多种功能[2]，被列为抗心血管病、抗癌最有前途的药物之一。
虎杖中白藜芦醇含量最高[3]。
目前对白藜芦醇的测定方法不少[4,5]，主要有分光光度法[6]、胶束薄层色谱法[7]、电化学发光法[8]、高速逆流色谱法[8-9]、高效液相色谱法[10-11]等。
建立准确可靠和简便的测定虎杖中白藜芦醇的含量方法对于虎杖资源的充分开发利用产生重要的实际意义，为其研究开发提供科学的依据。
本研究对虎杖样品进行初步处理，以乙醇-水为流动相，建立了测定虎杖中白藜芦醇的反相高效液相色谱方法，该测定方法操作简单，测定结果稳定可靠。
1 实验部分1.1 仪器与试剂HLPC Pump装柱机（BT3020，德国）；高效液相色谱仪（安捷伦，1200系列，美国），RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；WF-4000微波系统（上海屹尧分析仪器有限公司）；高频数控超声波发生器(KQ－80TDB型, 昆山市超声仪器有限公司), FA2104型电子天平。
乙醇(色谱纯，湖南师大试剂厂)；乙醇(化学纯，湖南师大试剂厂)；乙酸乙酯（分析纯，和氏璧化工）；白藜芦醇对照品(美国Sigma公司，纯度99％)；虎杖药材购自湖南九芝堂药材公司。
1.2 溶液的制备1.2.1 对照品溶液的配制称取白藜芦醇2.5 mg，置25ml容量瓶中，乙醇溶解，并稀释至刻度。
摇匀，得含白藜芦醇0.10 mg/ml 的混合对照品储备液，冷藏备用。
1.2.2 虎杖的预处理根据虎杖中自藜芦醇、白藜芦醇苷和大黄素的结构和性质的差异，采用乙醇溶液超声提取，利用极性适中的乙酸乙酯再提取，三种组分的回收率比较高。
提取结果表明：采用乙醇超声初提取和乙酸乙酯二次提取比单独采用乙醇浸提或回流提取的回收率高。
如最后采用氯仿提取，乳化现象较严重，且结果与乙酸乙酯提取相比较差。
可以同时测定白藜芦醇、白藜芦醇苷和大黄素的含量，并防止白藜芦醇苷水解。
1.2.3 样品溶液的制备本实验采用常规的加热回流方法提取白藜芦醇来建立标准曲线：虎杖粉末过4 0目筛，精密称取虎杖粉末5 0 g，用95%乙醇水浴回流提取三次，第一次用250ml乙醇回流提取3h，第二、三次分别用200ml乙醇回流提取各lh，合并提取液,冷却,过滤,滤液减压浓缩至月50ml后加蒸馏水200 ml，水浴挥发去残余乙醇，保温30min后过滤。
滤液上聚酰胺柱，大量蒸馏水冲至无色后，用l0%乙醇冲洗，待颜色冲淡后用3 0%乙醇冲洗，收集3 0%乙醇冲洗液，减压蒸馏浓缩并定容于100 ml容量瓶中，精密吸取上述溶液l ml，置10ml容量瓶中，乙醇稀释至刻度。
为了对比常规的加热回流方法提取白藜芦醇提取率的不同，本文还采用微波法来提取白藜芦醇：虎杖粉末预处理后过4 0目筛，精密称取虎杖粉末5 0 g，用95%乙醇浸泡1h后，在功率600W下微波处理5次，每次1min，间歇时间为2min，使提取温度不超过30o C。
微波处理后余下的步骤与加热回流方法一致。
图1 白藜芦醇对照品和样品液相色谱图Fig. 1 HPLC chromatograms for standard resveratrol and extractionsolution of Polygonum cuspidatum2 结果与讨论2.1 色谱条件色谱柱：选用ODS-C18色谱柱(200 mm×4.6 mm，5μm)；流动相：乙醇-水(2:3，v/v)；流速：0.6 ml·min-1；检测波长：304 nm；柱温为室温；进样量l0μl。
在此条件下，作白藜芦醇对照品色谱图。
样品溶液以相同条件进样，根据对照品白藜芦醇的保留时间初步确定样品溶液中白藜芦醇的特征峰。
白藜芦醇的出峰时间为3.05min，与其他组分的色谱峰可以达到基线分离。
此条件下白藜芦醇的理论塔板数均不低于3000。
对照品及样品液相色谱图见图1。
2.2 标准曲线的绘制精密吸取混合对照品储备液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，置10ml容量瓶中，乙醇稀释至刻度，制成不同浓度的混合对照品溶液。
按“2.2色谱条件”测定峰面积积分值，以峰面积积分值Y为纵坐标，对照品进样量X为横坐标绘制标准曲线，进行线性回归，计算回归方程。
白藜芦醇的线性回归方程及相关系数为：Y=9.464×10 -5X+ 0.225式中，X为白藜芦酸质量浓度，单位为μg/mL；Y为色谱峰面积，单位为mm2，线性回归系数r=0.9996，最小检出限为10ng/mL。
试验结果表明，白藜芦醇在0.05-0.40μg/ml 范围内呈良好的线性关系。
2.3 虎杖中白藜芦醇含量测定对同一批药材精密称取5份，按2.1溶液配制方法制备样品溶液。
将制备好的待测溶液按上述色谱条件进样，根据峰面积计算该样品溶液中白藜芦醇的含量。
计算公式为n=(a/b)×100%。
其中n为白藜芦醇的含量(g)；a为白藜芦醇质量(g)；b为虎杖粗粉的质量(g)。
计算平均值得到虎杖中白藜芦醇的含量为0.3500%（见表1）。
表1 虎杖中白藜芦醇含量的测定Tab. 1 Determination of Resveratrol in the Polygonum Cuspidatum序号加入量（g）白藜芦醇（%）1 20.0025 0.35012 20.0472 0.34963 20.0365 0.35024 19.9894 0.34985 20.0148 0.35042.4 加样加标回收试验依次配制白藜芦醇对照品溶液、样品溶液和样品加对照品溶液，按上述方法测定其含量。
将所得的5份供试品溶液按“色谱条件”项下进行测定，每份样品测定5次，计算加样回收率。
测得平均回收率为98.51%；相对误差（RSD）为0.2279%，回收效果很好(见表2)。
表2 回收率试验结果Tab. 2 Result of recovery ratio序号加入量（μg）测得量（μg）回收率（%）平均回收率相对误差1 3.20 3.16 98.7598.51% 0.2279%2 7.40 7.31 98.783 11.20 11.03 98.484 16.20 15.97 98.585 22.80 22.34 97.982.5 重复性试验精密称取样品5份，按上述方法制备样品溶液和做液相色谱检测，计算5个样品中虎杖中白藜芦醇的平均含量为0.3506%，相对误差RSD为2.56%。
实验结果见表3。
可以看出，检测结果表现出很好的重复性，实验误差在允许范围内。
据此认为可将此法用于实际样品分析。
表3 重复性试验结果Tab. 3 Results of repeatability test序号加入量（g）白藜芦醇（%）相对误差（RSD）1 20.0236 0.34852.560%2 20.0325 0.35483 19.9897 0.34934 20.0048 0.35095 20.0042 0.34952.6 稳定性试验及提取方法的影响2.6.1 对同一供试品溶液在8 h之内每隔1 h测定峰面积，试验结果表明。