实验五酵母菌的形态观察、死活细胞的鉴别及显微镜直接计数法

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实验酵母菌形态学观察与显微镜直接计数技术1剖析

四、实验方法
四）插片接种法
融化高氏1号培养基，倾倒平板。冷凝。将浸泡于酒精中的盖玻片用酒精燃烧法灭菌、
冷却，45度倾角插入培养基。接种环取放线菌孢子，沿插片接缝处划线接种。每人练习1片，共用培养基。每2组共用一平板。每板插片4片一半同学接种天蓝色放线菌，另一半同学接种
白色放线菌
酵母菌的有性生殖方式,是指邻近两个”性别”不同的细胞,相互接触,局部融合,再通过质配, 核配和减数分裂,形成4个单倍体子核,每一个子核与其附近的原生质一起,在其表面形成一层孢子壁后,就形成了一个子囊孢子,而原有营养细胞就成了子囊
BW
3.酵母菌的形态有何特点？
大多数酵母菌为单细胞，形状因种而异。基本形态为球形、卵圆形、圆柱形或香肠形。有些酵母菌(热带假丝酵母，Candida tropicalis) 进行一连串的芽殖后，长大的子细胞与母细胞并不立即分离，其间仅以狭小的接触面相连，这种藕节状的细胞串称为“假菌丝” (图)。（如果细胞相连，且其间的横截面积与细胞直径一致，这种竹节状的细胞串称真菌丝。如霉菌菌丝等）。
显微镜计数技术
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成 3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区（图5-2）。
显微镜计数技术
计数区的刻度有两种：一种是计数区分9个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成16个中方格；另一种是一个计数区分成 25个中方格（大方格之间用双线分开）。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
（3）假丝酵母假菌丝的观察：用水浸片观察假丝酵母的假菌丝。

酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定_百替生物

实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

2.学习鉴别死活细胞的实验方法。

二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。

酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。

芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。

本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。

美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。

三、实验器材1.材料：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。

2.试剂：O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。

3.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。

四、实验步骤1.美蓝浸片观察（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑去少量酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。

注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。

（2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。

注：盖玻片不宜平着放，以免产生气泡。

（3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

（4）染色约0.5h后再次观察，注意死细胞数量是否增加。

2.水-碘浸片观察在载玻片中央滴一滴碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。

酵母菌死活鉴定和显微镜检测

实验二酵母菌的死活鉴定和显微镜计数一、实验目的学习血球计数板使用的原理与方法，学习区别死活酵母的方法。

二、原理测定微生物数量方法很多，通常采用的有显微直接计数和平板计数法。

镜检计数法适用于各种单细胞菌体的纯培养悬浮液，菌体较大的酵母或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌采用彼得罗夫•霍泽细菌计数板，两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察，而血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。

血球计数板的构造血球计数板是一块特制厚玻片。

玻片上由四道槽构成三个平台，中间的平台分成两半，其上各刻一个相同而有一定面积的小方格网。

方格的刻度有两种规格。

一种是25×16，称为希里格式血球计数板，分为25大格，每大格又分为16小格；另一种是16×25，称为麦氏血球计数板，分16大格，每大格分为25小格。

总数都是400小格（如图所示）。

每个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，每个小方格的面积为1/400mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与计数室底部之间的高度为0.1mm，所以每个计数室（大方格）的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3，使用血球计数板直接计数时，先要测定每个小方格（或中方格）中微生物的数量，再换算成每毫升（或每克样品）中微生物细菌的数量。

三、实验材料1、菌种：酵母菌2、仪器：显微镜、血球计数板3、材料：盖玻片、吸水纸、滴管4、染料：美蓝染液四、实验步骤和内容1、视待测菌液浓度，加无菌水做适当稀释，以每小格菌数5-10个为宜，准确计算稀释倍数。

2、取清洁干燥的血球计数板，加盖玻片盖住网格和两边的槽。

3、将待测菌液充分摇匀后，用无菌吸管吸少许，由盖玻片边缘或槽内加入计数板来回推压盖玻片，使其紧贴在计数板上，计数室内不能有气泡。

静置5-10分钟。

4、在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数，上下调动细螺旋，以便看到小室内不同深度的菌体。

实验五、酵母的活菌观察及活细胞计数

实验五、酵母的活菌观察及活细胞计数一、实验目的1、认识酿酒酵母的形态特征。

2、了解微生物细胞活体染色的原理，能辨别酿酒酵母的死活。

3、学校血细胞计数法的原理和方法。

二、实验原理1、血细胞计数板计数的原理：将经过适当稀释的微生物细胞或孢子悬液，加至血细胞计数板的技数室中，在显微镜下逐格计数。

由于计数室的容积是固定的（0.1mm3），故可将在显微镜下计得的菌体细胞数（或孢子数）换算成单位体积试样中的含菌量。

此法计得的数值为样品中的死菌数和活菌数的总和，故称其为总菌计数法。

2、血细胞计数板：是一块特制的精密载玻片，在载玻片上有四条长槽，将玻片中央区域分隔成3个平台，中间平台比两边的平台低0.1mm，此平台中间又有一条短槽将其分隔成2个短平台，在2个平台上各有一个相同的方格网。

它被划分为9个大格，其中央大格即为计数室。

该计数室又被精密地划分为400个小格，但计数室还有25个中格（为16小格/每中格）或16个中格（为25小格/每中格）两种，每中格的四周均有双线界限标志，以便在显微镜下区分。

因此两种中格类型计数室的总体积是一样的。

即计数室大方格的边长为1mm，故面积为1mm2,j计数室与盖玻片间的深度为0.1mm，所以计数室的体积为0.1mm3。

计数时，先计得若干中格（一般为5个）中格内的含菌数，再求得每中格菌数的平均值，然后乘上中格数（16或25），就可得出1大方格（0.1mm3）计数室中的总菌数，若再乘上104（换算成每mL的含菌量）及菌液的稀释倍数，即可算出每mL原菌液中的总菌数值。

算术计算法：菌数（个/mL）=(x1+x2+x3+x4+x5)/5 ×25(或16)×104×稀释倍数3、活体染色法：活体染色法就是用对微生物无毒性的染料（如美兰、刚果红、中性红等染料）配成一定的浓度，，再与一定量的菌液混合，经一段时间后死菌和活菌会呈现不同的颜色，这样便可以在显微镜下区分活菌数和死菌数。

实验7_酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别

二、基本原理——美蓝染色液基本原理——美蓝染色液
美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，而还原型为无用它对酵母菌染色时，色。用它对酵母菌染色时，由于活细胞的新陈代谢作使细胞内具有较强的还原能力，用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色；的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色；对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。区分死、活细胞。
四、操作步骤——美兰染色操作步骤——美兰染色
在载玻片中央加一滴0.05%吕氏碱性美蓝染色液，在载玻片中央加一滴0.05%吕氏碱性美蓝染色液，用接种环 0.05%吕氏碱性美蓝染色液染液不宜过多或过少）挑取少量酵母菌苔，混合均匀；挑取少量酵母菌苔，混合均匀；（注：染液不宜过多或过少）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上；盖玻片不宜平着放下）玻片放下使其盖在菌液上；（注：盖玻片不宜平着放下）
二、基本原理——酵母菌形态基本原理——酵母菌形态
酵母菌为单细胞真核微生物，菌体比细菌大。酵母菌为单细胞真核微生物，菌体比细菌大。无性繁殖主要是出芽生殖出芽生殖，性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用美蓝染色浸片美蓝染色浸片来观察生活的酵母形本实验通过用美蓝染色浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。态和出芽生殖方式。

实验五___放线菌、霉菌及真菌的形态观察

呈菌线体形态，但霉菌的菌霉菌：也呈菌线体形态，丝和孢子比放线菌的粗得多。丝和孢子比放线菌的粗得多。霉菌的菌落形态较大，质地蔬松，外观干燥，落形态较大，质地蔬松，外观干燥，不透明，菌落与培养基间连接紧密，透明，菌落与培养基间连接紧密，不易挑取，菌落正反面，边缘与中心的颜色、挑取，菌落正反面，边缘与中心的颜色、构造通常不一致，有霉味。构造通常不一致，有霉味。菌丝的孢子较大，较大，在低倍镜下即可清晰观察到有隔或无隔菌丝和孢子及巨大的孢子囊。或无隔菌丝和孢子及巨大的孢子囊。
a.形态观察：酵母是不运动的单细胞真核生物，形态观察：酵母是不运动的单细胞真核生物，形态观察通常比常见细胞大几倍甚至十几倍。通常比常见细胞大几倍甚至十几倍。大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。殖；有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。 b.死活鉴定：美蓝是一种无毒的染料，它的氧 b.死活鉴定：美蓝是一种无毒的染料，死活鉴定化型呈蓝色，还原型呈无色。化型呈蓝色，还原型呈无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。
实验五
放线菌、放线菌、霉菌及酵母菌的形态观察
一．实验目的
学习并掌握观察放线菌、学习并掌握观察放线菌、霉菌及酵母菌形态的基本方法；形态的基本方法；初步了解放线菌、霉菌及酵母菌的形态初步了解放线菌、特征。特征。

微生物实验思考题参考答案及知识要点

微生物实验思考题参考答案及知识要点一．酵母菌形态观察及死活细胞鉴别1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因。

美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成为无色的还原型。

因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。

美蓝浓度高了，代谢不太活跃的活细胞也会被染色，从而使观察到的死细胞较多，活细胞较少；反之，则代谢微弱的细胞也能还原美蓝，不被染色，从而使观察到的死细胞较少，活细胞较多。

二. 细菌的简单染色和革兰氏染色1. 革兰氏染色中那一步是关键?为什么？你是如何操作的？革兰氏染色的关键步骤是：乙醇脱色（是脱色时间）。

如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。

脱色时间的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是应当控制速度，脱色时间一般为20—30s）。

2. 固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同？自然死亡的菌体本身已经部分自溶，结构已经改变。

固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。

3. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？能。

在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。

最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。

4. 涂片为什么要固定，固定适应注意什么问题？a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上；b 增加其对染料的亲和力。

固定时应注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜），固定时应尽可能维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。

三. 霉菌、放线菌的形态观察1. 镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。

实验四：酵母菌形态观察及计数

（2）倾斜缓慢放置盖玻片；
（3）放置3min后镜检；
（4）染色半小时后再次进行观察，注意死
活细胞数量是否增加；
(5) 用0.05％吕氏碱性美蓝染液重复上述操作。
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细菌形态观察
3.血球计数实验操作
（1）镜检计数室：去污，清洗，吹干；（2）加样品：盖上盖玻片，菌悬液于边缘滴一小滴，
渗入，使充满菌液；（3）显微镜计数：加样后静止5min，每个小格内5
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3.直接计数法
细菌形态观察
直接计数法是利用血球计数板在显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。
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4.血球计数板的构造
细菌形态观察
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细菌形态观察
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区（图21-1），计数区的刻度有两种：一种是计数区分为 16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
细菌形态观察
一．1.配制培养基、灭菌、接种培养
二．每台配制100ml马丁氏液体培养基（不加琼脂），分装到8支试管中，121℃，30min灭菌，灭菌后每一小组分得2支试管，液体接种酵母菌，30℃恒温摇床培养

酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别-学时

实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别活细胞数目比例有什么影响？4. 如何测定酵母菌死亡率？简述其原理。

5. 标本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它?一、实验目的与要求1. 了解普通光学显微镜的构造及原理，正确掌握使用显微镜的方法；2. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式；3. 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；4. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。

二、实验原理1. 酵母菌酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。

但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。

大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。

本实验通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式，并对酵母细胞进行死活染色鉴别。

2. 美蓝染液图1：酵母菌美蓝浸片观察3min（10×40）图2：酵母菌美蓝浸片观察30min（10×40）三、实验设备及材料1. 菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2 天左右的豆芽汁液体培养物(需稀释)。

2. 溶液或试剂：0.1%和0.05%吕氏碱性美蓝溶液(或0.01%美蓝水溶液)，革兰氏染色用碘液等。

3．器材：显微镜，擦镜纸，吸水纸，盖玻片、酒精灯、接种环、镊子、胶头滴管、小烧杯、洗瓶等等。

四、实验步骤与内容1．美蓝浸片的观察（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌放在染液中，并用接种环将其混合均匀，酒精灯上灼烧清洗接种环。

注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。

用接种环将菌体与染液混合时，不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。

水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。

实验五酵母菌形态的观察和显微镜下细胞测量和计数

实验五酵母菌形态的观察和显微镜下细胞测量和计数刘洋生物101 1002040120一、实验目的1、观察酵母菌的形态，掌握区分酵母菌死活细胞的染色方法。

2、掌握利用显微测微尺测量酵母菌大小的方法。

3、学习利用血球计数板测定微生物细胞数量的原理和方法。

二、实验原理（一）酵母菌的形态观察酵母菌是单细胞真核微生物，细胞呈圆形、椭圆形或柱状。

酵母的细胞比细菌大得多，经过特殊的染色，在高倍镜下就可以观察到。

酵母菌既可无性繁殖，又可有性繁殖。

无性繁殖有芽殖和裂殖两种，芽殖又有单出、双出和多出之分。

酵母菌的有性生殖一般能形成4~8个子囊孢子。

在一定条件下，有的酵母菌进行芽殖后，长大的子细胞不与母细胞立即分离，并继续出芽，细胞成串排列，这种菌丝状的细胞串就称为假菌丝。

假菌丝的各细胞间仅以狭小的面积相连，呈藕节状。

酵母菌的死活细胞可以通过美兰染色加以区分。

美兰是一种无毒性染色剂，其氧化型为蓝色，还原型为无色。

由于活细胞具有较强的还原能力，可以使美兰由蓝色的氧化型转变为无色的还原型。

处于代谢旺盛的细胞还原美兰的能力强，细胞为无色，为代谢缓慢的老细胞、幼嫩芽体为浅蓝色，死细胞为深蓝色。

（二）显微镜下的细胞计数本次实验采用血球计数法测定微生物细胞数。

方法是将经过适当稀释的菌体细胞或孢子悬液，加到血球计数板的计数室内，在显微镜下逐格计数。

因为计数室的容积是固定的（0.1mm3），所以可以将在显微镜下计得的菌数换算成单位体积试样中的菌数。

血球计数板使一块特制的载玻片，中部有H形的沟槽将中部分成上下两个计数室。

计数室方格的边长为3mm，每个方格分为9个大方格，正中央的大方格被分为25个中方格，而每个中方格又被分为16个小方格。

这样正中央的大方格总共分成400个小方格，每个小方格的体积为1/4000 mm3（计数室的高度为0.1mm）。

由此得到如下公式：每毫升的菌数(个)=平均每个中方格内的菌数16×稀释倍数×4000×1000（三）显微镜下细胞大小的测量用来测量微生物大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。

实验七酵母菌的形态观察及微生物的显微直接计数法

美蓝是一种无毒的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色，借此即可对酵母菌的死活细胞进行鉴别。
（二）微生物显微镜直接计数
1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释到 10-2，每个小方格5－10个菌体为宜），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将酵母菌悬液摇匀，用滴管或毛细吸管吸取少许，由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，使计数室充满菌液。
实验六酵母菌的形态观察及微生物的显微直接计数法
一、实验目的
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学习并掌握形态观察及死活细胞的鉴别方法。
了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下微生
物直接计数的方法。二、实验原理 1 酵母菌形态观察及死活细胞的鉴别酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比细菌大几十倍甚至十几倍。大多数以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片或水—碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式。
2、美蓝镜片的观察 1 ）在载玻片中央加一滴 0.1%吕氏碱性美蓝染色掖，然后按无菌操作
用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。
2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。
3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形
态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。 4）染色约0.5h后再次进行观察，注意死活细胞数量是否增加。

酵母菌的形态观察及死活鉴别与显微直接计数法

酵母菌的形态观察及死活鉴别与显微直接计数法酵母菌的形态观察及死活鉴别与显微镜直接计数法I 酵母菌的形态观察及死活鉴别一、目的要求观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。

二、基本原理酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。

繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。

本实验通过用美蓝染色制成水浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。

美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的。

用它采对酵母细胞进行染色。

活细胞内由于新陈代谢作用而具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母活细胞染色后无色。

而死细胞或代谢缓慢的老细胞因无还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。

三、器材酿酒酵母（Saccharomyces cerevissiae）；0.1％吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用的碘液；显微镜，载玻片，盖玻片等。

四、操作步骤（美蓝浸片观察）(1)在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。

然后按无菌操作法取在豆芽汁琼脂斜面上培养48小时的酿酒酵母少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。

(2)用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。

盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触；然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。

(3)将制好的水浸片放置3分钟后镜检。

先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。

五、实验报告(1) 绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。

II 显微镜直接计数法一、目的要求1．明确显微镜计数的原理。

2．学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。

酵母形态观察

三、实验材料
1.菌种： Saccharomyces cerevisiae 酿酒酵母 1.菌种：菌种 2.染色液：0.1%吕氏碱性美蓝 2.染色液：0.1%吕氏碱性美蓝染色液 3.器材：载玻片，显微镜、盖玻片、吸水 3.器材：载玻片，显微镜、器材滴管、擦镜纸。纸、滴管、擦镜纸。
四、内容及方法
五、实验结果
1.酵母个体形态，芽体（绘图） 1.酵母个体形态，芽体（绘图）酵母个体形态 2.计算死活细胞的比率，说明吕氏碱性美蓝 2.计算死活细胞的比率，说明吕氏碱性美蓝计算死活细胞的比率染液浓度和作用时间对死活细胞数的影响
酵母个体形态
六、思考题
1.在显微镜下， 1.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别在显微镜下于一般的细菌？于一般的细菌？ 2.用美蓝染色法对酵母细胞进行死活鉴别时为 2.用美蓝染色法对酵母细胞进行死活鉴别时为什么要控制染液的浓度和染色时间？什么要控制染液的浓度和染色时间？
酵母菌死活细胞的鉴别酵母菌死活细胞的鉴别用美兰液浸片法进行酿酒酵母死活细胞鉴别用美兰液浸片法进行酿酒酵母死活细胞鉴别1在载玻片上各滴加一滴染色液和酵母菌培养液盖上盖玻片勿使产生气泡且不要再移动盖玻片2将制好的水浸片放置3分钟后镜检
实验五
酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别
一、目的要求
1.学习自制水浸片法观察酵母菌 1.学习自制水浸片法观察酵母菌 2.观察酵母菌形态和出芽生殖方 2.观察酵母菌形态和出芽生殖方式 3.学习并掌握区分酵母菌死活细胞的染色方法 3.学习并掌握区分酵母菌死活细胞的染色方法
二、实验原理
1.酵母菌是不运动的单细胞真核微生物， 1.酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比酵母菌是不运动的单细胞真核微生物常见的细菌大几倍甚至几十倍，因此，不必染色即可用常见的细菌大几倍甚至几十倍，因此，显微镜观察其形态。显微镜观察其形态。大多数酵母以出芽方式进行无性繁有的二分裂殖；子囊菌纲中的酵母菌在一定条件下，殖，有的二分裂殖；子囊菌纲中的酵母菌在一定条件下，可产生子囊孢子的方式进行有性生殖。可产生子囊孢子的方式进行有性生殖。酵母菌假菌丝的生成与培养基的种类、培养条件等因素有关。生成与培养基的种类、培养条件等因素有关。 2.美蓝是一种弱氧化剂氧化态呈蓝色，还原态呈无色。美蓝是一种弱氧化剂， 2.美蓝是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。用美蓝对酵母细胞进行染色时，用美蓝对酵母细胞进行染色时，活细胞由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能将美蓝由兰色的氧化态转变为无色的还原态型，从而细胞呈无色；色的氧化态转变为无色的还原态型，从而细胞呈无色；而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则由于细胞内还原力较弱而不具备这种能力，从而细胞呈蓝色，力较弱而不具备这种能力，从而细胞呈蓝色，据此可对酵母菌的细胞死活进行鉴别。酵母菌的细胞死活进行鉴别。

04 酵母菌的形态观察和显微直接计数法

04 酵母菌的形态观察和显微直接计数法酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然界中，包括空气、水、土壤和植物等环境中。

在工业和实验室中，酵母菌也是一类重要的微生物。

鉴于其在生产中的应用前景以及其在生命科学领域中的重要性，因此对酵母菌的形态观察和显微直接计数法的研究十分重要。

一、酵母菌的形态观察酵母菌是一类具有球形、卵圆形或椭圆形形态的单细胞真菌，其直径一般在1-10微米之间。

酵母菌在显微镜下给人的第一印象就是它们的球状形态。

但实际上，许多酵母菌在生长过程中也可能采取非球形态的姿态，例如在温度、营养和压力等条件下，酵母菌可能会出现多样化的形态。

1. 酵母菌的球状形态对于一些常见的酵母菌，例如酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)、麦皮酵母(Pichia pastoris)和白令酵母(Candida albicans)等，它们的形态比较规则，通常呈球状，直径一般为2-5微米。

例如酿酒酵母菌的形态，从其典型的酵母球形态到在特定生长条件下，其分裂成为不同大小和形状的不规则光环，这些光环可折叠在自身内部或分散成为单个质体。

这种形态变化对于酿酒酵母菌的生长和繁殖都具有重要意义。

尽管酵母菌的球状形态已经被广泛认识，但实际上酵母菌在生长过程中也可能出现其他形态，如细胞伸长、延长和变形等。

在某些特定的生长条件下，酵母菌的形态可以发生明显的改变。

例如在氨氮限制下，麦皮酵母的形态会发生明显的改变，从而出现茎状异形态，这种形态类似于真菌的菌丝形态，从而增强了其在生产中的应用价值。

二、显微直接计数法1. 概述显微直接计数法是一种常用的酵母菌计数方法，其基本原理是在显微镜下对酵母菌细胞逐一计数。

该方法适用于酵母菌数量少且分散的样品，例如发酵液中的酵母菌计数等。

2. 实验步骤(1)样品处理：将待测样品以适当方式处理，确保酵母菌细胞均匀分布，避免死亡细胞的影响。

(2)制作移液片：取一块尺寸约1.2×1.2厘米的玻片，在玻片的一个角落制作一条长度为1cm、宽度大约为0.5mm的窄条形凹槽。

03 酵母菌的形态观察和显微直接计数法

16×25计数板的计算 1mL菌液中的总菌数=A/4×16×104×B=40000A· B（个） A－－表示四个中方格中的总菌数； B－－表示菌液稀释倍数。
（一）、实验目的
明确血球计数板计数的原理，掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法。
（二）、实验材料和用具

菌种：稀释10倍的啤酒酵母培养液（美蓝染色）其他：显微镜、血球计数板、盖玻片、毛细管、吸水纸、擦镜纸等。
位于中方格双格线上的酵母细胞一般只计上线及左线上的细胞。凡酵母菌的芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数。
5. 清洗计数板用毕后先用自来水冲洗（切勿用硬物洗刷），吸水纸吸干，再用擦镜纸擦净。显微镜检查无污物后放回包装盒内。
（四）实验结果
填表并计算
1mL菌液中的总菌数=A/5×25×104×B=50000A· B（个）
实验四酵母菌的形态观察和显微直接计数法
一、酵母菌的形态观察

酵母菌的形态通常有球状、卵园状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。
Sacchar用美蓝染色制成水浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式，区分死、活细胞。

美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的。用美蓝对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色。对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。
A－－表示五个中方格中的总菌数； B－－表示菌液稀释倍数。
各中格中菌数左上第一室左下右上右下中央

实验五实验六酵母菌形态观察显微计数法-PPT文档资料

A：5个中方格中的酵母菌数 B：稀释倍数
三、实验材料
1.菌种：啤酒酵母 2.染色液：0.1%吕氏碱性美蓝 3.器材：载玻片，显微镜、血球计数板、
盖玻片、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸。
四、内容及方法
（一）.酵母菌个体形态观察
用美兰浸片法观察啤酒酵母个体形态及死活细胞区别
1、在载玻片上各滴加一滴染色液和酵母菌培养液，
盖上盖玻片，（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻
片） 2、将制好的水浸片放置2分钟后镜检。先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。 3、染色半小时后，再观察一下死细胞数是否增加。 4、染色一小时后，再观察一下死细胞数是否增加。
（二）、显微镜直接计数法
1.镜检计数室，熟悉计数器的使用方法 2.对稀释5倍的啤酒酵母悬液进行计数 3.注意：（1）血球计数板必须洗干净，勿刷（2）注意勿损坏计数器
计数原则： 1、稀释浓度要合适，每个小方格5-10个
酵母菌 2、压线的酵母菌，一般计上和右 3、对于出芽的菌体，如果芽体超过母体的
一半，算2个菌
五、实验结果
2.美兰是一种无毒性染液，有两种形态还原型：无色氧化性：蓝色活细胞因新陈代谢而有强还原力使美兰从氧化型变为还原型；死细胞无此能力，而被美兰染成蓝色。以此可以区分死活细胞。
3.测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽构成3个平台. 中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。
血球计数板
计数区的刻度有两种：
一种是25×16：计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；

实验四、酵母菌的形态观察与微生物大小的测定、显微镜直接计数法

美蓝是一种无毒性染料.氧化型呈现蓝色, 还原型呈现无色.用美蓝对酵母的活细胞进行染色,代谢活力强的细胞具有较强的还原能力, 能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型. 因此,具有还原能力的酵母活细胞为无色,死细胞或代谢能力弱的衰老细胞为蓝色.
实验器材
➢ 菌种酒曲中分离纯化的酵母
➢ 溶液或试剂 0.1%吕氏碱性美蓝染色液
➢ 仪器或其他用具显微镜，盖玻片，载玻片，滤纸，擦镜纸。
实验步骤
制片
观察 ➢ 用高倍镜观察酵母的形态和出芽生殖 ➢ 根据颜色鉴别死活细胞
活细胞：无色；死细胞：蓝色
实验结果
绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征及出芽生殖方式。
记录染色时间对酵母菌死活细胞数量的影响。
思考题
吕氏碱性美蓝染色液作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。
➢ 在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大小时，其测定结果是否相同？为什么？
➢ 结合你的实验体会，总结哪些因素会造成血细胞计数板的计数误差，应如何避免？
实验步骤
安装目镜测微尺
校正目镜测微尺
➢ 将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。
➢ 分别在低、高倍镜、油镜下用镜台测微尺校正目镜测微尺
计算
➢ 镜台测微尺：将1mm等分为100小格，每小格长 0.01mm（即10μm）。
➢ 目镜测微尺每格长度（μm）=（两重合线间镜台测微尺格数×10）/两重合线间目镜测微尺格数
基本原理
血球计数板的构造
➢ 血球计数板是一块特制的载玻片，其上由4条槽构成3个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各有一个方格网。每个方格网共分9个大方格，中间的大方格即为计数室。