植物生理学研究法

《植物生理学研究法》

(课程实习)

论文题目：秋海棠和一串红对水分胁迫下的生理响应

目录

一、实验设计方案 ---------------------------3

二、实验预习报告----------------------------------4

实验一植物组织中过氧化氢含量的测定

实验二蒽酮法法测定可溶性糖

实验三植物细胞膜透性的测定（电导仪法）

实验四植物叶片水势测定

实验五植物组织游离脯氨酸含量的测定

实验六叶绿体色素的定量测定

实验七植物组织含水量的测定

三、测定数据记录及计算--------------------------12

四、课程论文------------------------------------14

一、《植物生理学研究法》实验设计方案（10分）

3.预习报告

实验1 植物组织中过氧化氢含量的测定

（一）原理

植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以清除H2O2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此，植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。本实验用分光光度法测定过氧化氢含量。

H2O2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被H２SO4溶解后，在415nm 波长下比色测定。在一定范围内，其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。

（二）植物材料：

一串红叶片和秋海棠叶片

（三）仪器设备

研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；10mL试管30只；离心机；分光光度计。

（四）试剂配制

100μmol/L H2O2丙酮试剂：取30%分析纯H2O257μl，溶于100ml，再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（W/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。

（五）实验步骤及注意事项

1.制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表40-1加入试剂。

待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用丙酮少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml刻度，415nm波长下比色。

2.样品提取和测定：(1)秋海棠每个灌水梯度称取0.5g叶片，一串红每个梯度称取0.3g叶片。按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后，置于冰箱冷藏室中浸提2h，上清液即为样品提取液。(2)用移液管吸取样品提取液2ml，按表35-1加入0.2mL5%硫酸钛和0.4mL 浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心10min，弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol/L硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。

（六）结果计算公式：

植物组织中H2O2含量(μmol/g Fw)=

C Vt FW V

⨯

⨯1

式中C—标准曲线上查得样品中H2O2浓度（μmol）；

V t—样品提取液总体积（ml）；

V1—测定时用样品提取液体积（ml）；

FW—植物组织鲜重（g）。

（七）参考文献

【1】邹琦.植物生理学实验指导.中国农业出版社，2010-1，(7),166-167

实验2 蒽酮法法测定可溶性糖

(一)原理

糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糖醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比。糖类与蒽酮反应生成的有色物质，在可见光区的吸收峰为630nm，可在此波长下进行比色，故可用于糖的定量。

(二)植物材料

一串红叶片和秋海棠叶片

(三)仪器设备

分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。

(四)试剂配制

1、硫酸-蒽酮溶液：24ml去离子水+76ml浓硫酸，冷却后，加入0.1g蒽酮

2、浓硫酸（比重1.84）。

3、1%蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。加少量水溶解，移入100mL 容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。

4、100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1%蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。

（五）实验步骤及注意事项

1．标准曲线的制作:取20mL刻度试管6支，从0－5分别编号，按下表加入溶液、水和硫酸-蒽酮，沸水浴10min，冷却后。然后以空白为参比，在630nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。

各试管加溶液和水的量

2．可溶性糖的提取:取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.30g秋海棠叶片、0.20g一串红叶片，各3份，分别放入6支刻度试管中，加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入20mL试管中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。

3．直接吸取样液1ml到20ml具刻度试管，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入4mL蒽酮硫酸溶液，沸水浴10min、显色并测定光密度（630nm）。由标准线性方程求出糖的量。

（六）结果计算公式：

按下面式子计算测试样品中糖含量

可溶性糖含量（%）=（C×V／a×n)／(W×106)

式中 C---------标准方程求得糖量（ug）

a----------吸取样品液体积（ml）

V---------提取液量（ml）

n-----------稀释倍数

W----------组织重量（g）

（七）参考文献

【1】邹琦.植物生理学实验指导.中国农业出版社，2010-1，(7),110-113.

实验3 植物细胞膜透性的测定（电导仪法）

（一）原理：

植物组织受到逆境伤害时，由于膜的功能受损或结构破坏，而使其透性增大，细胞内各种水溶性物质包括电解质将有不同程度的外渗，将组织浸入无离子水中，水的电导仪将因电解质的外渗而加大，伤害愈重，外渗愈多，电导度的增加也愈大。故可以用电导仪测定外液的电导度增加值而得知伤害程度。

（二）植物材料：

一串红和海棠叶片

（三）仪器设备：

1. 电导仪1台；

2.真空泵(附真空干燥器)1套；

3.恒温水浴箱1个；

4.30个三角瓶；

5.30张封口膜；

6.打孔器1把；

7.10ml移液管(或定量加液器)2支； 8.镊子1把；

以及记号笔、去离子水、滤纸、保鲜膜、玻璃棒、吸球、洗瓶等。

（四）试剂配制：