CQ11逆转多药耐药人胃癌细胞株对多柔比星的耐药
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CQ11逆转多药耐药人胃癌细胞株对多柔比
星的耐药
作者:吴达龙睢凤英张成文吕焕章
【摘要】目的: 探讨氯喹衍生物CQ11对耐长春新碱(vincristine, VCR)人胃癌多药耐药(multidrug resistance, MDR) 细胞株SGC7901/VCR的耐药逆转作用。方法:将SGC7901和SGC7901/VCR细胞分别与各种浓度的多柔比星(doxorubicin, DOX)和/或CQ11在体外共同培养,采用MTT法检测其细胞毒作用;采用荧光分光光度计测定细胞内DOX蓄积量。结果:SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药程度是SGC7901细胞的37.5倍。1.0、2.5 和 5.0 mol/L的CQ11分别使DOX对SGC7901/VCR细胞的敏感性分别增加到 2.2倍(P<0.01)、5.5倍(P<0.01) 和14倍(P< 0.01)。DOX蓄积实验表明,CQ11能显著增加SGC7901/VCR细胞内DOX蓄积,而对SGC7901细胞内DOX蓄积无明显影响。结论:通过增加细胞内DOX蓄积量,CQ11在体外能有效逆转SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药性
【关键词】多药耐药; 氯喹; 胃癌; 逆转剂
肿瘤多药耐药(multidrug resistance, MDR)指肿瘤细胞一旦对某种化疗药物产生耐药性,同时对其它结构上无关、作用机理各异的抗肿瘤药物也产生交叉耐药性[1]。MDR是一种独特的广谱耐药现象,
是导致化疗失败的重要原因,许多天然来源的抗肿瘤药物如长春新碱(vincristine, VCR)、紫杉醇等及蒽环类抗癌抗生素如多柔比星(doxorubicin, DOX)、柔红霉素都极易发生MDR[1~3]。MDR主要的耐药机理为多药耐药基因mdr1扩增及其蛋白产物P-糖蛋白(permeability glycoprotein, Pgp)过表达。作为一个ATP依赖性的药物转运泵,Pgp能主动将疏水性抗肿瘤药物泵出胞外, 从而减少细胞内药物蓄积, 增加药物外排[3]。MDR逆转剂,如维拉帕米和环孢菌素A,能与Pgp结合,抑制Pgp的药物外排功能,增加耐药细胞内抗肿瘤药蓄积,从而恢复细胞对抗肿瘤药的敏感性。然而,大量的临床研究结果表明,上述肿瘤MDR逆转剂由于体内毒性大,体内难以达到有效逆转浓度[3]。因此积极寻找高效低毒的新型MDR逆转剂,已成为肿瘤MDR研究的热点。
氯喹 CQ11
图1 氯喹和氯喹衍生物CQ11的化学结构
CQ11是以抗疟药氯喹的结构母核为基础, 经侧链改造而获得的新化合物(化学结构见图1),由本课题组合成。本研究以耐VCR人胃癌MDR细胞株SGC7901/VCR为体外模型,研究CQ11对SGC7901/VCR 细胞的体外MDR逆转效应。
1 材料与方法
1.1 药物和试剂
CQ11由本课题组自行合成, 以二甲亚砜(dimethylsulfoxide , DMSO) 溶解。MTT和DOX购自Sigma公司。
1.2 细胞培养
SGC7901细胞和SGC7901/VCR细胞(将SGC7901细胞在含浓度不断递增的VCR的培养基中连续培养所获得的耐药细胞株)均由本室保存[4],细胞均用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基,在37℃、5% CO2孵箱中培养。 SGC7901/VCR在含0.80 mol/L VCR培养液中稳定生长, 在正式实验前2周撤去VCR。
1.3 细胞存活率测定
采用MTT法测定细胞毒作用[4]。取生长旺盛SGC7901和SGC7901/VCR细胞,稀释后接种于96孔平底培养板中(每孔含4.0×103 细胞),置CO2培养箱中培养。接种24 h 后分别加入不同浓度的DOX 和/或 CQ11,使液体总量达到每孔200μL; 继续培养72 h,弃去培养液,每孔加MTT10μL (5.0 g/L in PBS), 培养4 h, 弃去