阿克他利大鼠在体肠吸收动力学
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5 m ); 保护柱 C18柱 ( 4 6 mm ∃ 10 mm, 5 m ) ; 流 动相: 甲醇 水 冰醋酸 ( 体积比 400%600%5) ; 柱温: 30 ∀ ; 检测波长: 254 nm; 流速: 1 0 mL!m in- 1; 进 样量: 20 L。 2 3 2 方法学验证
标准曲线 的制备: 称取 阿克他利对 照品 100 m g, 精密称定。置于 1 000 m L 量瓶中, 以空 白灌流液定容配成质量浓度为 100 m g! L- 1的阿 克他利标准储备液。以空白灌流液定容配成质量 浓 度 分 别 为 0 5、1 0、 3 0、5 0、8 0、 10 0、 12 0 m g! L- 1 的阿克他 利系列标准溶液, 进样测 定, 色谱图见图 1。结果表明, 空白灌流液不干扰 药物测定, 阿克他利的保留时间约 6 2 m in。以质 量浓度 ( ) 对峰面积 ( A ) 进行线性回归, 得标准曲 线方程 = 3 ∃ 10- 5A - 4 14 ∃ 10- 2, r2 = 0 999 9。
收稿日期: 2010 03 15 作者简介: 范景新 ( 1981 ) , 男 (汉 族 ), 吉 林四平 人, 硕士研 究生, E m ail jingx in fan@ gm ai.l com; 潘卫三 ( 1958 ), 男 (汉族 ), 江苏扬州人, 教授, 博士, 主要从事药物新剂型的研究与开发, T el. 024 23986313, E mail ppww ss@ 163. com。
定 1 次, 连续测定 5 d, 计算日间精密度。低、中、 溶液中阿克他利含量。结果阿克他利在 24 h内
高 3 个 质 量 浓度 的 日 内 RSD 分 别 为 1 33% 、 的 RSD小于 2 0% , 可见循环液中药物在 37 ∀ 下
1 21% 、1 25% , 日 间 RSD 分 别 为 1 87% 、 24 h内稳定。
第 2期
范景新等 : 阿克他利大鼠在体肠吸收动力学
1 45
供试液的小瓶以一定流速进行灌流, 在出液口用
另一已知质量的小瓶收集, 每隔 15 m in迅速更换
一次供试液小瓶和收集 液小瓶, 并称质量, 持续
105 m in。实验结束后处死大鼠, 剪下被考察的肠
段, 测量其长度和内径。肠段各区间如下: 十二指
1 仪器与材料
L 7110高效液相色谱仪, 包括 L 7110检测器 ( 日本 H ITACH I公司 ) ; BT 00 100M 恒流泵 ( 保定 兰格恒 流泵有 限公司 ) ; KQ 100DB 数 控超声 仪 ( 昆山超声仪器有限公司 ); HH S 恒温水浴锅 ( 河 南巩义英峪予华仪器厂 )。
清洁级雄性 W istar大鼠, 体质量 200~ 250 g, 由沈阳药科大学动物实验中心提供, 合格证号 辽 实合字 033号。
2 方法与结果
2 1 大鼠在体肠单向灌流法 实验前用供试液将管道冲洗至出液口药物浓
度与供试液浓度相同, 以消除实验过程中管路对 药物吸附的影响。取禁食 12 h( 可自由饮水 ) 的 大鼠, 腹腔注射 质量分数 为 20% 的乌来糖 麻醉 ( 剂量 1 0 g! kg- 1 ) , 固定并维持体温。沿腹中线 打开腹腔, 分离出待考察肠 段 ( 十二指肠、空肠、 回肠、结肠 ) , 取约 10 cm 于两 端切口, 插 管后结 扎。用预热至 37 ∀ 的生理盐水冲洗干净后, 用 K 氏液灌流。伤口处用浸有生理盐水的脱脂棉覆盖 保湿, 红外灯下保温。进口处用已知质量的装有
肠段为自幽门 下 1 cm 处开始; 空肠段为 自幽门
15 cm 处开始; 回肠段为自盲肠上行 20 cm 处开
始; 结肠段为紧邻盲肠至直肠 [ 7] 。
2 2 数据分析
2 2 1 吸 收 速 率 常 数 ( ka ) 和 表 观 吸 收 系 数
( P app )的计算方法 采用质量法, 按下式计算药物吸收速率常数
阿克他利原料药及对照品 ( 江苏苏中药业集 团股份有限公司, 含量质 量分数 > 99 5% , 批号
060602), 甲 醇 ( 色 谱 纯, 江 苏 汉 邦 科技 有 限 公 司 ) , 乌来糖 ( 天津基准化学试剂有限公司 ) , 冰醋 酸 ( 分析纯, 天津恒兴 化学试剂制造有限公司 ), N aC 、l M gC l2、N aH CO3、葡萄糖 (天津博迪化工有限 公司 ) , KC l、N aH 2 PO4 ( 西陇化工有限公司 ) , CaC l2 ( 天津科密欧化学试剂研发中心 ) 。K rebs R inger 营养液 ( mm o l! L- 1 ) : N aC l 133 5、KC l 4 7、CaC l2 3 3、N aH2 PO4 2 67、M gC l2 0 21、N aHCO3 16 3、葡 萄糖 7 8, pH 7 4。
qv ( perfus ion) / ( mL! m in- 1 )
02 06 10
k a ∃ 102 / m in- 1
2 08 # 0 06 6 02 # 0 54 10 45 # 0 38
P app ∃ 103 / ( cm! m in- 1 )
6 65 # 0 34 18 87 # 2 63 33 41 # 2 10
Table 2 E ffect of ac tarit concentration in th e perfu sion
on the absorp tion param eters( !x # s, n = 6)
/( m g! L- 1 )
10 50 10 0
k a ∃ 102 / m in- 1
2 05 # 0 12 2 08 # 0 06 2 20 # 0 08
以十二指肠为灌流部位, 供试药液质量浓度 为 5 0 m g! L- 1, 灌 流 速 度 分 别 为 0 2、0 6、 1 0 mL!m in- 1, 根据实验所得数据计算相应的 ka
14 6
沈阳药科大学学报
第 28卷
和 P app, 结果见表 1。
Table 1 E ffect of perfu sion f low rate on the ab sorpt ion parame ters( !x # s, n = 6)
P app ∃ 103 / ( cm! m in- 1 )
6 47 # 0 67 6 65 # 0 34 7 35 # 0 53
结果表 明, 药物浓 度在一定范围 内对 ka 和 P app无显著性影响 ( P > 0 05) 。 2 4 3 最佳吸收部位考察
要在小肠, 在结肠段的吸收相对较差。
关键词: 阿克他利; 单向灌流法; 在体肠吸收; 吸收速率常数 ( k a ); 表观吸收系数 (P app )
中图分类号: R 971
文献标志码: A
阿克他 利 ( actarit) 由 日本三菱 化学公 司开 发, 并于 1994年在日本上市 [ 1] 。它是一种新型的 抗类风湿药物, 因其作用机理新颖, 可通过控制类 风湿性关节炎的免疫病理进程, 以达到从根本上 治疗类风湿性关节炎的目的, 克服了以往治疗类 风湿性关节炎所用的非甾体药物那种治标不治本 的弊端 [ 2- 6] 。这类药物是近年国际上治疗类风湿 性关节炎这一领域研究的热点。阿克他利具有毒 性低、不良反应小等优点, 所以它是一种较为安全 的、非常有临床应用前景的抗风湿药物, 目前临床 上只有阿 克 他利 的 普通 片 剂, 商 品名 为 安 吉 欣 , 尚无缓控释制剂。关于其肠道吸收情况, 经 检索尚未见国内有相关报道, 故作者采用在体单 向灌流质量法, 对阿克他利进行大鼠在体肠吸收 动力学研究, 以期为阿克他利缓控释制剂的研究 提供生物学依据。
得质量计算体积 ); qv 为灌流速度 ( L! m in- 1 ) ; in
和 ou t分别为进口和出口处缓冲液中的药物质量 浓度 ( m g!L- 1 ) ; V 为灌流肠段的体积 ( cm3 ) ; l 和
r 分别为被灌 流肠段的长度 ( cm ) 和横截 面半径
( cm ) 。 2 2 2 统计学方法
采用 SPSS 13 0 软件对数据进行单因素方差 分析 ( ANOVA) , 当 P < 0 05 时判定具有 显著性 差异。结果以 ( x # s)表示, 组间差异的比较采用 t 检验。
2 3 阿克他利的 HPLC测定 2 3 1 色谱条件
色谱柱: 美国 CEC C18柱 ( 4 6 mm ∃ 200 mm,
精密度试验: 用空白 灌流液配制 1 0、5 0、 10 0 m g!L- 1 3个质量浓度的阿克他利对照溶液, 于 1 d 内重复测定 5 次, 计算日内精密度; 每日测
稳 定 性 试 验: 用 空 白 肠 灌 流 液 配 制 5 0 m g!L- 1的阿克他利溶液, 37 ∀ 恒温水浴中孵 育 24 h, 分别于 1、2、4、6、8、12、16、20、24 h测定
第 28卷 第 2期 2 0 1 1年 2月
沈阳药科大学学报 Journa l o f Sheny ang Pharm aceutica lU nive rsity
文章编号: 1006 2858( 2011) 02 0144 04
Vo l 28 N o 2 F eb. 2011 p 144
阿克他利大鼠在体肠吸收动力学
( ka )和表观吸收系数 ( P app ) [ 8 ] 。
ka = ( 1-
ou t ! Vou t Biblioteka Baidu ! qv;
V in
in
V
- qv! ln( out ! Vout )
P app =
in
2 rl
V in 。
式中: V in和 V ou t分别为灌入和收集的供试液 体积 ( L, 假定供试液密度为 1 000 g! L- 1, 根据测
结果表明, 不同灌流速度下的 ka 和 P app有极 显著性差异 ( P < 0 01) , 随灌流速度的加快, ka 和 P app呈线性增大 ( r > 0 99)。 2 4 2 药物质量浓度对药物肠吸收的影响
将阿克 他利 配 置 成 质 量 浓度 分 别 为 1 0、 5 0、10 0 m g!L- 1的灌流液。以十二指肠为灌流 部位, 灌流速度为 0 2 mL!m in- 1, 根据实验所得 数据计算相应的 ka 和 P app, 结果见表 2。
范景新, 张文骥, 颜廷旭, 惠 颖, 聂淑芳, 潘卫三
(沈阳药科大学 药学院, 辽宁 沈阳 110016)
摘要: 目的 研究阿克他利大鼠在体肠吸收动力学特征。方法 采 用大鼠在 体单向灌流 法进行肠吸
收实验, 以吸收速率常数 ( ka )和 表观 吸收 系数 ( P app ) 为 指标, 从 灌流 速度、药 物浓 度和 吸收 部位
1 53% 、1 74% ( n = 5), 表明仪器精密度良好。
2 4 药物肠吸收影响因素考察
回收率试验: 用 K 氏液配制不同质量浓度的 2 4 1 灌流速度对药物肠吸收的影响
阿克他利溶液, 然后对其进行 H PLC 分析, 再计算 回收率。低、中、高 3个质量浓度的回收率分别为 99 23% 、100 57% 、98 71% ( n = 5) 。
A & B lank in testina l perfusion so lution; B& A cta rit in intestina l perfus ion sam ples; 1& A cta rit
Fig. 1 H PLC chrom atogram of actar it in rat∋s in testin e p er fusion so lu tion
3个方面对阿克他利肠吸收动力学特征进行考 察。结果 不 同灌流 速度下 的 k a 和 P app有 极其显著 性差异 ( P < 0 01); 药物 浓度在一定范围内对 k a 和 P app无显 著性影 响 ( P > 0 05) ; 小 肠各段 (十二
指肠、空肠、回肠 ) 的 k a 和 P app无显 著性 差异 ( P > 0 05) ; 小肠 与结 肠的 k a 存 在极 其显 著性 差异 ( P < 0 01), Papp存在显著性差异 (P < 0 05)。结 论 阿克他 利在整 个肠道 吸收 良好, 但吸 收窗主
标准曲线 的制备: 称取 阿克他利对 照品 100 m g, 精密称定。置于 1 000 m L 量瓶中, 以空 白灌流液定容配成质量浓度为 100 m g! L- 1的阿 克他利标准储备液。以空白灌流液定容配成质量 浓 度 分 别 为 0 5、1 0、 3 0、5 0、8 0、 10 0、 12 0 m g! L- 1 的阿克他 利系列标准溶液, 进样测 定, 色谱图见图 1。结果表明, 空白灌流液不干扰 药物测定, 阿克他利的保留时间约 6 2 m in。以质 量浓度 ( ) 对峰面积 ( A ) 进行线性回归, 得标准曲 线方程 = 3 ∃ 10- 5A - 4 14 ∃ 10- 2, r2 = 0 999 9。
收稿日期: 2010 03 15 作者简介: 范景新 ( 1981 ) , 男 (汉 族 ), 吉 林四平 人, 硕士研 究生, E m ail jingx in fan@ gm ai.l com; 潘卫三 ( 1958 ), 男 (汉族 ), 江苏扬州人, 教授, 博士, 主要从事药物新剂型的研究与开发, T el. 024 23986313, E mail ppww ss@ 163. com。
定 1 次, 连续测定 5 d, 计算日间精密度。低、中、 溶液中阿克他利含量。结果阿克他利在 24 h内
高 3 个 质 量 浓度 的 日 内 RSD 分 别 为 1 33% 、 的 RSD小于 2 0% , 可见循环液中药物在 37 ∀ 下
1 21% 、1 25% , 日 间 RSD 分 别 为 1 87% 、 24 h内稳定。
第 2期
范景新等 : 阿克他利大鼠在体肠吸收动力学
1 45
供试液的小瓶以一定流速进行灌流, 在出液口用
另一已知质量的小瓶收集, 每隔 15 m in迅速更换
一次供试液小瓶和收集 液小瓶, 并称质量, 持续
105 m in。实验结束后处死大鼠, 剪下被考察的肠
段, 测量其长度和内径。肠段各区间如下: 十二指
1 仪器与材料
L 7110高效液相色谱仪, 包括 L 7110检测器 ( 日本 H ITACH I公司 ) ; BT 00 100M 恒流泵 ( 保定 兰格恒 流泵有 限公司 ) ; KQ 100DB 数 控超声 仪 ( 昆山超声仪器有限公司 ); HH S 恒温水浴锅 ( 河 南巩义英峪予华仪器厂 )。
清洁级雄性 W istar大鼠, 体质量 200~ 250 g, 由沈阳药科大学动物实验中心提供, 合格证号 辽 实合字 033号。
2 方法与结果
2 1 大鼠在体肠单向灌流法 实验前用供试液将管道冲洗至出液口药物浓
度与供试液浓度相同, 以消除实验过程中管路对 药物吸附的影响。取禁食 12 h( 可自由饮水 ) 的 大鼠, 腹腔注射 质量分数 为 20% 的乌来糖 麻醉 ( 剂量 1 0 g! kg- 1 ) , 固定并维持体温。沿腹中线 打开腹腔, 分离出待考察肠 段 ( 十二指肠、空肠、 回肠、结肠 ) , 取约 10 cm 于两 端切口, 插 管后结 扎。用预热至 37 ∀ 的生理盐水冲洗干净后, 用 K 氏液灌流。伤口处用浸有生理盐水的脱脂棉覆盖 保湿, 红外灯下保温。进口处用已知质量的装有
肠段为自幽门 下 1 cm 处开始; 空肠段为 自幽门
15 cm 处开始; 回肠段为自盲肠上行 20 cm 处开
始; 结肠段为紧邻盲肠至直肠 [ 7] 。
2 2 数据分析
2 2 1 吸 收 速 率 常 数 ( ka ) 和 表 观 吸 收 系 数
( P app )的计算方法 采用质量法, 按下式计算药物吸收速率常数
阿克他利原料药及对照品 ( 江苏苏中药业集 团股份有限公司, 含量质 量分数 > 99 5% , 批号
060602), 甲 醇 ( 色 谱 纯, 江 苏 汉 邦 科技 有 限 公 司 ) , 乌来糖 ( 天津基准化学试剂有限公司 ) , 冰醋 酸 ( 分析纯, 天津恒兴 化学试剂制造有限公司 ), N aC 、l M gC l2、N aH CO3、葡萄糖 (天津博迪化工有限 公司 ) , KC l、N aH 2 PO4 ( 西陇化工有限公司 ) , CaC l2 ( 天津科密欧化学试剂研发中心 ) 。K rebs R inger 营养液 ( mm o l! L- 1 ) : N aC l 133 5、KC l 4 7、CaC l2 3 3、N aH2 PO4 2 67、M gC l2 0 21、N aHCO3 16 3、葡 萄糖 7 8, pH 7 4。
qv ( perfus ion) / ( mL! m in- 1 )
02 06 10
k a ∃ 102 / m in- 1
2 08 # 0 06 6 02 # 0 54 10 45 # 0 38
P app ∃ 103 / ( cm! m in- 1 )
6 65 # 0 34 18 87 # 2 63 33 41 # 2 10
Table 2 E ffect of ac tarit concentration in th e perfu sion
on the absorp tion param eters( !x # s, n = 6)
/( m g! L- 1 )
10 50 10 0
k a ∃ 102 / m in- 1
2 05 # 0 12 2 08 # 0 06 2 20 # 0 08
以十二指肠为灌流部位, 供试药液质量浓度 为 5 0 m g! L- 1, 灌 流 速 度 分 别 为 0 2、0 6、 1 0 mL!m in- 1, 根据实验所得数据计算相应的 ka
14 6
沈阳药科大学学报
第 28卷
和 P app, 结果见表 1。
Table 1 E ffect of perfu sion f low rate on the ab sorpt ion parame ters( !x # s, n = 6)
P app ∃ 103 / ( cm! m in- 1 )
6 47 # 0 67 6 65 # 0 34 7 35 # 0 53
结果表 明, 药物浓 度在一定范围 内对 ka 和 P app无显著性影响 ( P > 0 05) 。 2 4 3 最佳吸收部位考察
要在小肠, 在结肠段的吸收相对较差。
关键词: 阿克他利; 单向灌流法; 在体肠吸收; 吸收速率常数 ( k a ); 表观吸收系数 (P app )
中图分类号: R 971
文献标志码: A
阿克他 利 ( actarit) 由 日本三菱 化学公 司开 发, 并于 1994年在日本上市 [ 1] 。它是一种新型的 抗类风湿药物, 因其作用机理新颖, 可通过控制类 风湿性关节炎的免疫病理进程, 以达到从根本上 治疗类风湿性关节炎的目的, 克服了以往治疗类 风湿性关节炎所用的非甾体药物那种治标不治本 的弊端 [ 2- 6] 。这类药物是近年国际上治疗类风湿 性关节炎这一领域研究的热点。阿克他利具有毒 性低、不良反应小等优点, 所以它是一种较为安全 的、非常有临床应用前景的抗风湿药物, 目前临床 上只有阿 克 他利 的 普通 片 剂, 商 品名 为 安 吉 欣 , 尚无缓控释制剂。关于其肠道吸收情况, 经 检索尚未见国内有相关报道, 故作者采用在体单 向灌流质量法, 对阿克他利进行大鼠在体肠吸收 动力学研究, 以期为阿克他利缓控释制剂的研究 提供生物学依据。
得质量计算体积 ); qv 为灌流速度 ( L! m in- 1 ) ; in
和 ou t分别为进口和出口处缓冲液中的药物质量 浓度 ( m g!L- 1 ) ; V 为灌流肠段的体积 ( cm3 ) ; l 和
r 分别为被灌 流肠段的长度 ( cm ) 和横截 面半径
( cm ) 。 2 2 2 统计学方法
采用 SPSS 13 0 软件对数据进行单因素方差 分析 ( ANOVA) , 当 P < 0 05 时判定具有 显著性 差异。结果以 ( x # s)表示, 组间差异的比较采用 t 检验。
2 3 阿克他利的 HPLC测定 2 3 1 色谱条件
色谱柱: 美国 CEC C18柱 ( 4 6 mm ∃ 200 mm,
精密度试验: 用空白 灌流液配制 1 0、5 0、 10 0 m g!L- 1 3个质量浓度的阿克他利对照溶液, 于 1 d 内重复测定 5 次, 计算日内精密度; 每日测
稳 定 性 试 验: 用 空 白 肠 灌 流 液 配 制 5 0 m g!L- 1的阿克他利溶液, 37 ∀ 恒温水浴中孵 育 24 h, 分别于 1、2、4、6、8、12、16、20、24 h测定
第 28卷 第 2期 2 0 1 1年 2月
沈阳药科大学学报 Journa l o f Sheny ang Pharm aceutica lU nive rsity
文章编号: 1006 2858( 2011) 02 0144 04
Vo l 28 N o 2 F eb. 2011 p 144
阿克他利大鼠在体肠吸收动力学
( ka )和表观吸收系数 ( P app ) [ 8 ] 。
ka = ( 1-
ou t ! Vou t Biblioteka Baidu ! qv;
V in
in
V
- qv! ln( out ! Vout )
P app =
in
2 rl
V in 。
式中: V in和 V ou t分别为灌入和收集的供试液 体积 ( L, 假定供试液密度为 1 000 g! L- 1, 根据测
结果表明, 不同灌流速度下的 ka 和 P app有极 显著性差异 ( P < 0 01) , 随灌流速度的加快, ka 和 P app呈线性增大 ( r > 0 99)。 2 4 2 药物质量浓度对药物肠吸收的影响
将阿克 他利 配 置 成 质 量 浓度 分 别 为 1 0、 5 0、10 0 m g!L- 1的灌流液。以十二指肠为灌流 部位, 灌流速度为 0 2 mL!m in- 1, 根据实验所得 数据计算相应的 ka 和 P app, 结果见表 2。
范景新, 张文骥, 颜廷旭, 惠 颖, 聂淑芳, 潘卫三
(沈阳药科大学 药学院, 辽宁 沈阳 110016)
摘要: 目的 研究阿克他利大鼠在体肠吸收动力学特征。方法 采 用大鼠在 体单向灌流 法进行肠吸
收实验, 以吸收速率常数 ( ka )和 表观 吸收 系数 ( P app ) 为 指标, 从 灌流 速度、药 物浓 度和 吸收 部位
1 53% 、1 74% ( n = 5), 表明仪器精密度良好。
2 4 药物肠吸收影响因素考察
回收率试验: 用 K 氏液配制不同质量浓度的 2 4 1 灌流速度对药物肠吸收的影响
阿克他利溶液, 然后对其进行 H PLC 分析, 再计算 回收率。低、中、高 3个质量浓度的回收率分别为 99 23% 、100 57% 、98 71% ( n = 5) 。
A & B lank in testina l perfusion so lution; B& A cta rit in intestina l perfus ion sam ples; 1& A cta rit
Fig. 1 H PLC chrom atogram of actar it in rat∋s in testin e p er fusion so lu tion
3个方面对阿克他利肠吸收动力学特征进行考 察。结果 不 同灌流 速度下 的 k a 和 P app有 极其显著 性差异 ( P < 0 01); 药物 浓度在一定范围内对 k a 和 P app无显 著性影 响 ( P > 0 05) ; 小 肠各段 (十二
指肠、空肠、回肠 ) 的 k a 和 P app无显 著性 差异 ( P > 0 05) ; 小肠 与结 肠的 k a 存 在极 其显 著性 差异 ( P < 0 01), Papp存在显著性差异 (P < 0 05)。结 论 阿克他 利在整 个肠道 吸收 良好, 但吸 收窗主