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•O/F（氧化、发酵）不同细菌对不同的糖分解能力 及代谢产物不同，这种能力因是否有氧气的存在而 异。细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参 与的，称为氧化型，氧化型细菌在无氧环境中不能 分解葡萄糖。细菌在分解葡萄糖的过程中，可以进 行无氧降解的，称为发酵型，发酵型细菌在有氧或 无氧的环境中都能分解葡萄糖。不分解葡萄糖的细 菌称为产碱型。利用此实验可以区分细菌的代谢类 型。主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别，前 者均为发酵型，而后者通常为氧化型或产碱型。
盐，使培养基变碱，指示剂溴麝香草酚蓝由绿色变为深蓝色，为枸橼酸盐
利用实验阳性。若细菌不能利用枸橼酸盐为碳源，则细菌不能生长，培养
基不变色。
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•KIA（克氏双糖铁）克氏双糖铁斜面培养基，用酚
红作指示剂，在酸性时呈黄色，碱性时呈红色，培
养基中的葡萄糖含量仅为乳糖或蔗糖的1/10，若细
斜面与底层均呈黄色，且有气泡。细菌产生硫化氢
时与培养基中的硫酸亚铁作用，形成黑色的硫化铁。
主要用于鉴别肠杆菌科细菌。
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2019/9/7
wk.baidu.com15
•MIU（动力、吲哚、尿酶）培养基为尿素、蛋白胨 成分的半固体培养基，指示剂为酚红。具有色氨酸 酶的细菌能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚，加入 吲哚试剂后，培养基上层的吲哚试剂会变红；具有 尿酶的细菌能分解尿素产氨，使整个培养基变碱呈 红色；有动力的细菌沿穿刺线扩散生长。
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•革兰染色：挑取可疑菌落涂在干净的玻片上 自然晾干，用结晶紫（1液）覆盖细菌初染 1min，清水冲洗干净玻片再滴加革兰染液（2 液）媒染1min，清水冲去表面的染液，用95﹪ 乙醇（3液）脱洗约30s（以乙醇不再有颜色为 好），最后用稀释的复红（4液）复染30s。自 然晾干后在显微镜下观察形态。 •荚膜染色
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制片
1.载玻片准备：玻片先在95％乙醇中去除油污，再在火 焰上烧去粘附的乙醇，待冷，做好标记。 2.涂片：在洁净无油腻的玻片中央放一小滴蒸馏水（或 用接种环挑1-2滴水），用无菌的接种环挑取少量菌种与 水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜，涂布面积约1cm2 。 3.干燥：涂片在室温下使其自然干燥，也可以小心地在 酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰 或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。 4.固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过微火 三次（手指触摸反面不烫手为宜），待玻片冷却后再进 行染色。
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•I（吲哚）：有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚，
与对甲基氨基苯甲醛结合，生成红色化合物玫瑰吲哚。主要用于肠杆菌科
细菌的鉴定。
•M（甲基红）：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一步分解为
甲酸、乙酸等酸性物质，不再继续分解，故培养基pH在4.5以下，加入甲基
•接种：在镜下观察细菌的大致形态及其数 量，直接将标本用接种环蘸取后接种在血平 板、MAC（EMB、SS、XLD）上，进行培养。
•温育：37 ℃ 孵育18-24小时。
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•观察菌落形态：血平板上形成圆形、凸起、 灰白色、不溶血、光亮的大菌落，相邻菌落易 于融合，粘液状，若用接种针蘸取呈长丝状拽 起；MAC上形成乳糖发酵产酸的菌落，即红色 或粉红色、较大、浑浊、凸起、有光泽的粘液 型菌落（EMB上是大、粘稠、红色、易溶于一 片的菌落，SS上是红色或粉红色、或具有粉红 中心的无色菌落，XLD上呈不透明黄色的菌 落）。
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1.染色：玻片置于玻片搁架上，加适量（以盖满菌 膜为度）草酸铵结晶紫（或石炭酸复红染液）于菌 膜部位，染色1-2min。 2.水洗：斜置载玻片，在自来水龙头（或洗瓶）下 用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为 止。 3.干燥：自然干燥或用吸水纸吸去涂片上的水，用 吸水纸时切勿将菌体擦掉。 4.镜检：用高倍镜和油镜观察并绘细菌形态并绘图 于记录表中。
红指示剂后呈紫红色（阳性）。有些细菌将分解葡萄糖产生的酸进一步转
化为醇酮等非酸性物质，使培养基pH在6.2以上，加入甲基红试剂成橘黄色
（阴性）。一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。
•Vi：某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸，丙酮酸可进一步脱羧生成乙酰甲基
甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境下被氧化成二乙酰，后者与蛋白胨中的精
氨酸所含的胍基起作用，生成红色胍缩二乙酰，为VP试验阳性。若培养基
中胍基含量少，加入少量含胍基的化合物如肌酸肌酐，可加速其反应。一
般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。
•C（枸橼酸盐）枸橼酸盐培养基中不含任何糖类，枸橼酸盐为唯一碳源，
磷酸二氢铵为唯一氮源。如果细菌能利用铵盐作为唯一氮源，并能利用枸
橼酸盐作为唯一碳源，在枸橼酸盐培养基上生长，并分解枸橼酸盐为碳酸
O/F（F）、鸟氨酸脱羧酶试验（-） •定种：吲哚（-） •编码鉴定 •血清学鉴定
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•氧化酶试验：氧化酶（细胞色素氧化酶）是 细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。具有氧化 酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化 型细胞色素C将盐酸二甲基对苯二胺或盐酸四 甲基对苯二胺氧化成红色或蓝色的醌类化合物。 主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别，前 者为阴性，后者为阳性。奈瑟菌属、莫拉菌属 细菌也呈阳性反应。
菌只分解葡萄糖而不分解乳糖，分解葡萄糖产酸使
ph降低，因此斜面和底层均先呈黄色，但因葡萄糖
含量较少，所以生成的少量酸可因接触空气而氧化，
并因细菌生长繁殖利用含氮物质而生成碱性化合物
中和，使斜面部分又变成红色；底层由于处于缺氧
状态，细菌分解葡萄糖所生成的酸类一时不被氧化
而仍保持黄色。若细菌分解葡萄糖、乳糖产酸产气，
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标本：尿 培养基：血平板、MAC（EMB、SS、XLD）
KIA、MIU、葡萄糖蛋白胨水、 枸橼酸盐培养基、 鸟氨酸脱羧酶培养基及对照管
试剂：革兰染液、荚膜染液、V-P试剂、
吲哚试剂、95%乙醇溶液
器材：孵育箱、接种环、酒精灯、显微镜
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基本特性
•直接涂片，镜下观察。
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•镜下形态：G-杆菌，卵圆形或球杆状细菌，长 成双排列，有荚膜，无鞭毛。（如有需要，可 进行荚膜染色，染色后菌体呈卵圆形或球杆状， 成双排列，菌体外绕以明显的荚膜长较菌体宽 2-3倍。）
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生化鉴别
•定科：氧化酶试验（-）、IMViC（- - ++） •定属：KIA（AA+ -）、MIU（- - +）、
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•O/F（氧化、发酵）不同细菌对不同的糖分解能力 及代谢产物不同，这种能力因是否有氧气的存在而 异。细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参 与的，称为氧化型，氧化型细菌在无氧环境中不能 分解葡萄糖。细菌在分解葡萄糖的过程中，可以进 行无氧降解的，称为发酵型，发酵型细菌在有氧或 无氧的环境中都能分解葡萄糖。不分解葡萄糖的细 菌称为产碱型。利用此实验可以区分细菌的代谢类 型。主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别，前 者均为发酵型，而后者通常为氧化型或产碱型。
盐，使培养基变碱，指示剂溴麝香草酚蓝由绿色变为深蓝色，为枸橼酸盐
利用实验阳性。若细菌不能利用枸橼酸盐为碳源，则细菌不能生长，培养
基不变色。
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•KIA（克氏双糖铁）克氏双糖铁斜面培养基，用酚
红作指示剂，在酸性时呈黄色，碱性时呈红色，培
养基中的葡萄糖含量仅为乳糖或蔗糖的1/10，若细
斜面与底层均呈黄色，且有气泡。细菌产生硫化氢
时与培养基中的硫酸亚铁作用，形成黑色的硫化铁。
主要用于鉴别肠杆菌科细菌。
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•MIU（动力、吲哚、尿酶）培养基为尿素、蛋白胨 成分的半固体培养基，指示剂为酚红。具有色氨酸 酶的细菌能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚，加入 吲哚试剂后，培养基上层的吲哚试剂会变红；具有 尿酶的细菌能分解尿素产氨，使整个培养基变碱呈 红色；有动力的细菌沿穿刺线扩散生长。
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•革兰染色：挑取可疑菌落涂在干净的玻片上 自然晾干，用结晶紫（1液）覆盖细菌初染 1min，清水冲洗干净玻片再滴加革兰染液（2 液）媒染1min，清水冲去表面的染液，用95﹪ 乙醇（3液）脱洗约30s（以乙醇不再有颜色为 好），最后用稀释的复红（4液）复染30s。自 然晾干后在显微镜下观察形态。 •荚膜染色
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制片
1.载玻片准备：玻片先在95％乙醇中去除油污，再在火 焰上烧去粘附的乙醇，待冷，做好标记。 2.涂片：在洁净无油腻的玻片中央放一小滴蒸馏水（或 用接种环挑1-2滴水），用无菌的接种环挑取少量菌种与 水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜，涂布面积约1cm2 。 3.干燥：涂片在室温下使其自然干燥，也可以小心地在 酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰 或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。 4.固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过微火 三次（手指触摸反面不烫手为宜），待玻片冷却后再进 行染色。
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•I（吲哚）：有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚，
与对甲基氨基苯甲醛结合，生成红色化合物玫瑰吲哚。主要用于肠杆菌科
细菌的鉴定。
•M（甲基红）：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一步分解为
甲酸、乙酸等酸性物质，不再继续分解，故培养基pH在4.5以下，加入甲基
•接种：在镜下观察细菌的大致形态及其数 量，直接将标本用接种环蘸取后接种在血平 板、MAC（EMB、SS、XLD）上，进行培养。
•温育：37 ℃ 孵育18-24小时。
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•观察菌落形态：血平板上形成圆形、凸起、 灰白色、不溶血、光亮的大菌落，相邻菌落易 于融合，粘液状，若用接种针蘸取呈长丝状拽 起；MAC上形成乳糖发酵产酸的菌落，即红色 或粉红色、较大、浑浊、凸起、有光泽的粘液 型菌落（EMB上是大、粘稠、红色、易溶于一 片的菌落，SS上是红色或粉红色、或具有粉红 中心的无色菌落，XLD上呈不透明黄色的菌 落）。
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1.染色：玻片置于玻片搁架上，加适量（以盖满菌 膜为度）草酸铵结晶紫（或石炭酸复红染液）于菌 膜部位，染色1-2min。 2.水洗：斜置载玻片，在自来水龙头（或洗瓶）下 用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为 止。 3.干燥：自然干燥或用吸水纸吸去涂片上的水，用 吸水纸时切勿将菌体擦掉。 4.镜检：用高倍镜和油镜观察并绘细菌形态并绘图 于记录表中。
红指示剂后呈紫红色（阳性）。有些细菌将分解葡萄糖产生的酸进一步转
化为醇酮等非酸性物质，使培养基pH在6.2以上，加入甲基红试剂成橘黄色
（阴性）。一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。
•Vi：某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸，丙酮酸可进一步脱羧生成乙酰甲基
甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境下被氧化成二乙酰，后者与蛋白胨中的精
氨酸所含的胍基起作用，生成红色胍缩二乙酰，为VP试验阳性。若培养基
中胍基含量少，加入少量含胍基的化合物如肌酸肌酐，可加速其反应。一
般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。
•C（枸橼酸盐）枸橼酸盐培养基中不含任何糖类，枸橼酸盐为唯一碳源，
磷酸二氢铵为唯一氮源。如果细菌能利用铵盐作为唯一氮源，并能利用枸
橼酸盐作为唯一碳源，在枸橼酸盐培养基上生长，并分解枸橼酸盐为碳酸
O/F（F）、鸟氨酸脱羧酶试验（-） •定种：吲哚（-） •编码鉴定 •血清学鉴定
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•氧化酶试验：氧化酶（细胞色素氧化酶）是 细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。具有氧化 酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化 型细胞色素C将盐酸二甲基对苯二胺或盐酸四 甲基对苯二胺氧化成红色或蓝色的醌类化合物。 主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别，前 者为阴性，后者为阳性。奈瑟菌属、莫拉菌属 细菌也呈阳性反应。
菌只分解葡萄糖而不分解乳糖，分解葡萄糖产酸使
ph降低，因此斜面和底层均先呈黄色，但因葡萄糖
含量较少，所以生成的少量酸可因接触空气而氧化，
并因细菌生长繁殖利用含氮物质而生成碱性化合物
中和，使斜面部分又变成红色；底层由于处于缺氧
状态，细菌分解葡萄糖所生成的酸类一时不被氧化
而仍保持黄色。若细菌分解葡萄糖、乳糖产酸产气，
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标本：尿 培养基：血平板、MAC（EMB、SS、XLD）
KIA、MIU、葡萄糖蛋白胨水、 枸橼酸盐培养基、 鸟氨酸脱羧酶培养基及对照管
试剂：革兰染液、荚膜染液、V-P试剂、
吲哚试剂、95%乙醇溶液
器材：孵育箱、接种环、酒精灯、显微镜
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基本特性
•直接涂片，镜下观察。
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•镜下形态：G-杆菌，卵圆形或球杆状细菌，长 成双排列，有荚膜，无鞭毛。（如有需要，可 进行荚膜染色，染色后菌体呈卵圆形或球杆状， 成双排列，菌体外绕以明显的荚膜长较菌体宽 2-3倍。）
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生化鉴别
•定科：氧化酶试验（-）、IMViC（- - ++） •定属：KIA（AA+ -）、MIU（- - +）、